Ekstrak salam Uji Bogor Sukabumi Cianjur Alkaloid Saponin Flavonoid Fenolik hidrokuinon Triterpenoid + + +

Transkripsi

1 ml larutan uji. Campuran kontrol tanpa perlakuan dibuat sama seperti campuran sampel tetapi 1 ml larutan uji diganti dengan 1 ml air bebas ion. Campuran pembanding yang dibuat terdiri atas ml bufer fosfat.1 M ph 7, ml asam linoleat 5 mm dalam etanol 99.% yang mengandung α-tokoferol (vitamin E ), dan 1 ml air bebas ion. Semua campuran tersebut diinkubasi dalam penangas air yang bersuhu ºC dengan lama inkubasi berdasarkan hasil pengukuran hidroperoksida dari asam linoleat. Campuran reaksi tersebut diuji potensi nya setelah satu atau beberapa hari dari puncak absorbansi asam linoleat. Masing-masing campuran reaksi diambil 1 ml lalu ditambahkan ml TCA % dan ml larutan TBA 1% (b/v) dalam asam asetat 5%. Kemudian campuran reaksi tersebut ditempatkan pada penangas air yang bersuhu 1 ºC selama 1 menit. Setelah itu didinginkan dan dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 3 rpm selama 15 menit, selanjutnya diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 53 nm. Sebagai kurva standar, larutan stok pereaksi 1,1,3,3-tetrametoksipropana (TMP) konsentrasi M dibuat menjadi 1.5, 3,, 9, 1, 15, dan 1 µm. Masing-masing konsentrasi dipipet sebanyak 1 ml lalu ditambahkan ml TCA % dan ml TBA 1%(b/v) dalam asam asetat 5% (v/v). Kemudian semua tabung diinkubasi pada suhu 1 ºC selama 1 menit dan didinginkan pada suhu kamar. Setelah dingin dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 3 rpm selam 15 menit selanjutnya diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 53 nm. HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi Daun salam yang diekstraksi diperoleh dalam bentuk simplisia berupa serbuk yang berwarna coklat. Daun salam yang digunakan berasal dari kota Bogor, Sukabumi, dan Cianjur. Ekstraksi daun salam tersebut dilakukan pengulangan sebanyak dua kali. Daun salam yang berasal dari ketiga kota tersebut diekstraksi sebanyak tiga kali selama jam menggunakan pelarut etanol teknis 7% dengan metode refluks. Penggunaan etanol sebagai pelarut untuk ekstraksi bertujuan untuk mengekstrak senyawa-senyawa bioaktif yang bersifat polar dan semi-polar. Ekstrak yang diperoleh berwarna coklat tua dengan aroma khas salam. Rendemen yang diperoleh dari salam kota Bogor, Sukabumi, dan Cianjur berturut-turut sebesar 1.5%, 11.55%, dan.%. Nilai rendemen yang diperoleh ini jauh lebih rendah dibandingkan dengan nilai rendemen ekstrak daun dewa yaitu 5.71% (Eridani ). Perbedaan ini dapat disebabkan hasil ekstrak daun salam berupa serbuk sehingga bobot yang diperoleh menjadi lebih ringan. Berdasarkan hasil ekstraksi dapat diketahui bahwa rendemen daun salam kota Bogor lebih tinggi daripada salam kota Sukabumi dan Cianjur. Hal ini dikarenakan lingkungan agrobiofisik kota Bogor sesuai dengan persyaratan tumbuh tanaman salam. Persyaratan tersebut meliputi iklim dengan bulan basah antara - bulan, ketinggian tempat - meter di atas ppermukaan laut, tekstur tanah yang lempung, keadaan lereng 15%, dan ketersediaan hara tinggi. Keadaan ini sesuai dengan laporan penelitian PSB () yang menyatakan lahan kota bogor termasuk kategori sesuai untuk tanaman salam, sedangkan kota Sukabumi dan Cianjur termasuk dalam kategori agak sesuai untuk tanaman salam. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Hanan (1999) yang menyatakan bahwa aroma dari satu jenis tumbuhan yang sama bisa berbeda karena dipengaruhi iklim, keadaan tanah, sinar matahari dan cara pengolahan. Perbedaan rendemen ekstraksi dapat menunjukkan kandungan senyawa-senyawa metabolit sekunder daun salam ketiga kota tersebut berbeda-beda. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian sebelumnya bahwa daun salam kota Sukabumi memiliki kandungan kuersetin sebesar.3% dan kota Cianjur sebesar.75% (PSB ). Analisis Fitokimia Ekstrak Sampel Hasil analisis fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak daun salam ketiga kota tersebut mengandung alkaloid, saponin, flavonoid, fenolik hidrokuinon, triterpenoid, dan tanin. Namun ekstrak tersebut tidak mengandung steroid. Kandungan senyawa yang paling dominan dari ekstrak salam ketiga kota tersebut ialah saponin dan tanin (Tabel ). Keberadaan tanin ditandai dengan terbentuknya warna hitam kehijauan yang pekat. Sedangkan keberadaan saponin dari ekstrak salam ketiga kota berbeda dalam hal kuantitatif, kandungan saponin ekstrak salam kota bogor lebih banyak daripada kota Sukabumi dan Cianjur. Hal ini ditunjukkan

2 dengan banyaknya busa yang terbentuk saat pengocokan. Keberadaan senyawa flavonoid pada ekstrak salam ketiga kota tersebut sesuai dengan penelitian Sayekti et al. (199) yang menyatakan bahwa ekstrak daun salam diduga mengandung saponin, triterpenoid, steroid, flavonoid dan tanin. Ketidakberadaan steroid pada ekstrak salam ketiga kota dapat disebabkan jumlah bahan yang diuji terlalu sedikit yaitu.1 gram sehingga senyawa steroid tidak terdeteksi. Perbedaan kandungan metabolit sekunder pada jenis tanaman yang sama seringkali terjadi dikarenakan adanya pengaruh lingkungan sekitar. Kandungan metabolit yang disekresikan oleh tanaman tergantung pada variasi genetik individual dan kondisi geografis tempat tumbuh (Kardono 3). Tabel Hasil uji fitokimia ekstrak salam Uji Bogor Sukabumi Cianjur Alkaloid Saponin Flavonoid Fenolik hidrokuinon Triterpenoid Steroid Tanin Sistem Oksidasi Asam Linoleat Tujuan dari sistem oksidasi asam linoleat ini adalah untuk menentukan waktu inkubasi maksimum konsentrasi MDA dengan metode diena terkonjugasi. Berdasarkan oksidasi asam linoleat yang dilakukan selama 7 hari diperoleh hasil bahwa pada hari ke-3 pembentukan hidroperoksida telah mencapai maksimum (Gambar ). Oleh karena itu pengukuran konsentrasi malondialdehida (MDA) dilakukan setelah hari ke-3 yaitu hari ke-5, ketika hidroperoksida telah mengalami dekomposisi membentuk MDA hari ke- Gambar Nilai absorbansi hidroperoksida maksimum terhadap waktu. Oksidasi Asam Linoleat Metode TBA Pengukuran hasil oksidasi asam linoleat dilakukan setelah hari ke-3 yaitu pada hari ke- 5 ketika semua hidroperoksida telah mengalami dekomposisi membentuk MDA. Hasil oksidasi asam linoleat ini diukur dengan menggunakan metode TBA yang membentuk kompleks warna TBARS. Oksidasi asam linoleat ini akan dihambat oleh senyawa yang telah teruji yaitu vitamin E. Penambahan vitamin E sebesar mampu menghambat proses oksidasi asam linoleat sebesar 71.% dengan menekan pembentukan MDA hingga seperlimanya (Gambar 7). Secara statistik konsentrasi MDA pada asam linoleat dengan penambahan vitamin E berbeda nyata terhadap asam linoleat tanpa dengan p=.5. Hal ini sesuai dengan pernyataan bahwa penambahan vitamin E dalam makanan dapat meningkatkan kandungan vitamin E dalam LDL serta meningkatkan perlindungan terhadap proses oksidasi (Karyadi 1997). beberapa ahli kesehatan mengkhawatirkan kadar vitamin E yang berlebih dalam tubuh dapat menyebabkan darah sulit membeku ketika terjadi luka, karena vitamin E berperan sebagai antikoagulan (Tambunan 5) , ±,13,5 ±,511 =71.% Asam linoleat tanpa + Vitamin E Gambar 7 Konsentrasi MDA vitamin E. Potensi Antioksidasi Ekstrak Daun Salam Bogor, Sukabumi, dan Cianjur Pengukuran potensi antioksidasi ekstrak daun salam ketiga kota tersebut akan dibandingkan dengan vitamin E pada konsentrasi yang sama yaitu. Dalam hal ini vitamin E digunakan sebagai pembanding karena vitamin E dipercaya sebagai sumber yang mampu menghambat peroksidasi lipid dari asam lemak tak jenuh dalam membran dan mempertahankan kesuburan (Sofia ).

3 Hasil inkubasi asam linoleat tanpa penambahan ekstrak menghasilkan MDA sebesar 13.1 µm. Asam linoleat dengan penambahan vitamin E sebesar menghasilkan MDA sebesar 3.3 µm. Asam linoleat dengan penambahan ekstrak daun salam Bogor, Sukabumi, dan Cianjur sebesar menghasilkan MDA yang tidak berbeda secara signifikan (Gambar ). Konsentrasi MDA ekstrak daun salam ketiga kota lebih tinggi dibandingkan dengan vitamin E. Berdasarkan konsentrasi MDA yang dihasilkan dari lima jenis perlakuan tersebut maka dapat diketahui potensi antioksidasinya. Potensi antioksidasi vitamin E dengan konsentrasi mampu menghambat proses oksidasi sebesar 7.9%. Ekstrak daun salam Bogor, Sukabumi, dan Cianjur pada konsentrasi tidak menunjukkan sifat antioksidasi. Senyawa bahan alam lain seperti ekstrak mahkota dewa konsentrasi telah mampu menghambat proses oksidasi asam linoleat sebesar 5.75% (Eridani ). Oleh karena itu perlu dilakukan uji lebih lanjut untuk mengetahui konsentrasi optimum ekstrak daun salam sebagai ,177 ±,33 Asam linoleat tanpa 3,3 ±, 13,19 ±,3 13,3 ±,5 13,5 ±, =7.9% = -.3% = -.% = -.1% + Vitamin E + Bogor + Sukabumi + Cianjur Gambar Konsentrasi MDA ekstrak daun salam ketiga kota dan = daya hambat oksidasi asam linoleat. Penentuan Konsentrasi Optimum Potensi Antioksidasi Konsentrasi MDA yang dihasilkan asam linoleat tanpa (kontrol negatif) sebesar 13.3 µm. Berdasarkan konsentrasi MDA yang dihasilkan, asam linoleat dengan penambahan ekstrak salam 1 mampu menghambat pembentukan MDA hingga sepertiga dari konsentrasi MDA asam linoleat tanpa (Gambar 9). Pada penambahan ekstrak salam konsentrasi tidak menunjukan potensi antioksidasinya. Hal ini sesuai dengan uji potensi antioksidasi ekstrak daun salam ketiga kota konsentrasi. Konsentrasi MDA yang dihasilkan pada kisaran konsentrasi 5 1 dapat menunjukkan potensi antioksidasinya. Daya hambat oksidasi asam linoleat tertinggi ditunjukkan pada konsentrasi 1 yaitu sebesar 5.5%. Oleh karena itu untuk lebih meyakinkan dilakukan penentuan konsentrasi optimum potensi antioksidasi pada konsentrasi diatas 1 yaitu kisaran konsentrasi 5. Intensitas warna yang berbeda-beda dari setiap sampel yang diukur dapat menunjukkan konsentrasi MDA dan potensi antioksidasi. Asam linoleat dengan penambahan vitamin E memiliki konsentrasi MDA jauh lebih rendah dibanding asam linoleat tanpa dan penambahan ekstrak daun salam. Ekstrak daun salam 1 mampu menghambat oksidasi asam linoleat paling tinggi dibanding ekstrak daun salam 5, 15, dan (Gambar 1). Potensi antioksidasi ekstrak daun salam terlihat pada semua seri konsentrasi dengan mampu menghambat proses oksidasi asam linoleat. Meskipun demikian kemampuan menghambat pembentukan MDA yang terbesar terlihat pada konsentrasi ekstrak 1

4 yaitu.%. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian konsentrasi ekstrak daun salam diatas 1 menurunkan potensi antioksidasinya. Oleh karena itu untuk membandingkan potensi antioksidasi daun salam dari ketiga kota tersebut menggunakan konsentrasi ,319 ±,11 1,1 ±,3 Asam linoleat tanpa 5 9,73 ± 3, 1 13,917 ±,599, ±,5 5,57 ±,1 =.7% =.% = -.9% =35.% =5.5% 1 Gambar 9 Konsentrasi MDA ekstrak salam pada penentuan konsentrasi optimum I dan = daya hambat oksidasi asam linoleat ,9 ±,1 Asam linoleat tanpa,373 ±,19 =73.1% + Vitamin E,1 ±,5 =.1% 5,15 ±,33, ±,3 5,1 ±,3 =% 1 =.% 15 =1.79% Gambar 1 Konsentrasi MDA ekstrak salam pada penentuan konsentrasi optimum II dan = daya hambat oksidasi asam linoleat. Potensi Antioksidasi Ekstrak Daun Salam Bogor, Sukabumi, dan Cianjur 1 Potensi antioksidasi ekstrak daun salam diukur dengan menggunakan metode TBA yang akan menghasilkan kompleks MDA- TBA berwarna merah muda. Potensi antioksidasi dapat terlihat melalui intensitas warna yang dihasilkan. Semakin pekat warna yang dihasilkan menunjukkan semakin tinggi kadar MDA maka semakin rendah potensi antioksidasinya. Semakin pudar warna merah muda yang dihasilkan menunjukkan semakin rendah kadar MDA maka semakin tinggi potensi antioksidasinya (Gambar 11). Pada pengukuran potensi antioksidasi ini, sampel percobaan dibagi menjadi empat kelompok perlakuan. Asam linoleat yang tidak diberi diketahui memiliki konsentrasi MDA sebesar 1.7 µm. Hal ini menunjukkan tidak adanya penghambatan proses oksidasi asam linoleat. Pemberian ekstrak daun salam dari kota Bogor, Sukabumi, dan Cianjur sebesar 1

5 menunjukkan konsentrasi MDA yang tidak jauh berbeda (Gambar 1). Pada konsentrasi 1 ekstrak daun salam Cianjur memiliki potensi antioksidasi paling tinggi dari ekstrak daun salam kota Bogor dan Cianjur yaitu sebesar.%. Meskipun demikian perbedaan potensi antioksidasi ketiga macam ekstrak tersebut tidak terlalu besar. Gambar 11 Uji potensi antioksidasi (1) Kontrol negatif dengan air; () Kontrol positif dengan vitamin E; (3) Ekstrak daun salam Bogor 1 ; () Ekstrak daun salam Sukabumi 1 ; (5) Ekstrak daun salam Cianjur 1.) , ±,13 Asam linoleat tanpa 5, ±,1 5,39 ±,9 5,71 ±, =7.1% =.59% =.% + Bogor 1 + Sukabumi 1 + Cianjur 1 Gambar 1 Potensi antioksidasi ekstrak daun salam ketiga kota 1 dan = daya hambat oksidasi asam linoleat. Berdasarkan uji Duncan diketahui potensi antioksidasi antara ekstrak daun salam kota Bogor, Sukabumi, dan Cianjur tidak jauh berbeda, sehingga secara statistik potensi antioksidasi ekstrak salam ketiga kota tidak berbeda nyata dengan p=.5. Oleh karena itu dapat dikatakan bahwa ekstrak daun salam yang berasal dari tiga daerah tersebut memiliki potensi antioksidasi yang sama. Hal ini dapat disebabkan lingkungan agrobiofisik dari kota Bogor, Sukabumi, dan Cianjur tidak terlalu jauh berbeda baik suhu, jenis tanah, iklim, dan daerah topografinya. Sedangkan potensi antioksidasi antara ekstrak daun salam ketiga daerah lebih rendah dibanding dengan vitamin E. Penggunaan ekstrak daun salam sebagai mampu memberikan hasil yang maksimum pada konsentrasi 1. Dibandingkan dengan vitamin E, penggunaan ekstrak daun salam sebagai lima kali lebih besar dari vitamin E. Potensi antioksidasi ekstrak daun salam ketiga kota tersebut disebabkan oleh adanya senyawa-senyawa fitokimia yang terkandung dalam daun salam. Senyawa fitokimia yang dimiliki ekstrak daun salam ketiga kota tersebut sama yaitu mengandung alkaloid, saponin, flavonoid, fenolik hidrokuinon, triterpenoid dan tanin. Seperti yang telah diketahui bahwa senyawa-senyawa fitokimia tersebut memiliki

6 potensi antioksidasi. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan Arini et al (3) menyatakan semakin tinggi kadar flavonoid maka semakin tinggi pula potensi antioksidasinya. Beberapa penelitian membuktikan bahwa alkaloid bersifat sebagai dan mampu menekan kejadian kanker. Tanaman cincau yang mengandung alkaliod, polifenol, dan flavonoid mampu menghambat peroksidasi lipid secara nonenzimatik (Chalid 3). Flavonoid yang terkandung pada herba benalu mangga menghambat pertumbuhan kanker pada mencit yang diinduksi benzopirena (Sukardiman et al 1999). Senyawa saponin dalam tumbuhan telah banyak dimanfaatkan untuk pengobatan, terutama saponin dari turunan glikosida dapat menurunkan kolesterol dan menghambat penyakit kanker (Hernani & Rahardjo 5). Hal ini terbukti dari saponin yang terkandung pada tanaman ciplukan berkhasiat sebagai antitumor dan mampu menghambat pertumbuhan kanker usus besar (Mangan 3). Selain itu saponin yang terkandung pada akar kuning dan temulawak mampu menghambat peningkatan konsentrasi lipid peroksida (Adji ). Tanin merupakan merupakan golongan senyawa polifenol yang banyak terkandung dalam teh. Tanin yang terkandung dalam teh hijau berperan sebagai pelindung terhadap serangan kanker dan dapat meningkatkan kerja insulin dalam tubuh (Kumalaningsih ). Berdasarkan hasil uji fitokimia dan potensi antiokidasi ekstrak daun salam ketiga kota tersebut, ada tidaknya kandungan senyawa fitokimia pada ekstrak berpengaruh terhadap tinggi rendahnya potensi antioksidasi. Hal ini dikarenakan adanya kemungkinan senyawa fitokimia tersebut bekerja secara sinergis dalam menghambat proses oksidasi. SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Ekstrak daun salam (Eugenia polyantha Wight.) yang berasal dari lingkungan agrobiofisik berbeda yaitu kota Bogor, Sukabumi, dan Cianjur berpotensi sebagai optimum secara in vitro pada konsentrasi 1. Potensi antioksidasi ekstrak daun salam kota Bogor, Sukabumi, dan Cianjur berturut-turut sebesar 7.1%,.59%, dan.%. Berdasarkan hasil tersebut dapat diketahui potensi antioksidasi ekstrak daun salam cianjur lebih tinggi dari dua kota lainnya. Meskipun demikian dapat disimpulkan bahwa potensi antioksidasi ekstrak daun salam ketiga kota tersebut tidak berbeda nyata. Oleh karena itu ekstrak daun salam tidak terlalu berpotensi sebagai. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang potensi antioksidasi pada daerah yang memliki lingkungan agrobiofisik lebih ekstrim. Serta perlu juga dilakukan penelitian lanjutan untuk pemurnian ekstrak kasar, sehingga dapat diketahui secara pasti senyawa bioaktif yang berperan sebagai. DAFTAR PUSTAKA Adji P.. Daya antiooksidasi saponin akar kuning (Archangelisia flava (L) Merr) sebagai mekanisme hepatoproteksi pada tikus yang diberi parasetamol [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Arini S, Nurmawan D, Alfiani F, Hertiani T. 3. Daya dan kadar flavonoid hasil ekstraksi etanol-air daging buah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa (Sceheff.) Boerl.). Buletin Penalaran Mahasiswa UGM 1:-. Chalid SY. 3. Pengaruh ekstrak daun cincau hijau Cyclea barbatai L. Miers dan Premna oblongifolia Merr terhadap aktivitas enzim dan pertumbuhan tumor kelenjar susu mencit C3H [tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Cornwell DG, Morisaki N. 19. Free Radicals in Biology. Louisiana: Academic Pr. Dalimartha S.. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid. Jakarta: Trubus Agriwidya. Hanan A Etnobotani salam di daerah Cirebon: pemanfaatan sebagai bahan penyedap alami. Warta tumbuhan Obat Indonesia 5: 7-. Harborne JB Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Ed ke-. Penerjemah Padmawinata K. Bandung: ITB.