LAMPIRAN. Isolat Bakteri. Karakterisasi Bakteri. Imobilisasi Bakteri. Uji Viabilitas Bakteri

Transkripsi

1 48 LAMPIRAN Lampiran 1. Diagram Alir Penelitian Isolat Bakteri Karakterisasi Bakteri Imobilisasi Bakteri Imobilisasi Dengan Alginat Imobilisasi dengan Polyurethane Uji Viabilitas Bakteri Uji Kemampuan Bakteri Terenkapsulasi Dalam Mendegradasi Pestisida Pengamatan Penempelan Bakteri pada Matriks Pembawa dengan Scanning Electron Microscope (SEM) Hasil

2 49 Lampiran 2. Persiapan Kultur Bakteri dan Pemeriksaan Kemurnian Kultur Isolat Bakteri Ditumbuhkan pada media NA (Nutrient Agar) Diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu o C Hasil Hasil Diinokulasikan ke dalam media NB (Nutrient Broth) Diinkubasi 2 x 24 jam pada incubator shaker padadengan kecepatan 120 rpm pada suhu ambient Karakterisasi Morfologi Pewarnaan Gram Bentuk Koloni Warna koloni Tepi Koloni Elevasi Koloni Bentuk Sel Penataan Sel Hasil

3 50 Lampiran 3. Pembuatan Suspensi Sel Bakteri Isolat Bakteri Ditumbuhkan pada media NB (Nutrient Broth) Diinkubasi selama 2 x 24 jam pada incubator shaker, 120 rpm Disentrifuse dengan kecepatan 6000 x g selama 20 menit, suhu 4 o C Pellet Supernatan Dilarutkan dengan PBS (absorbansi 1 pada panjang gelombang 600 nm setara 10 9 CFU/ ml) Suspensi Sel (10 9 CFU/ml) Lampiran 4. Imobilisasi dengan Menggunakan PolyurethaneFoam(PUF) Polyurhetane A Dicampur dengan larutan Polyurhetane B 1 : 1 Dihomogenkan dengan cara mengaduk hingga berbentuk busa Didiamkan selama 15 menit hingga mengembang dan mengeras PUF Dipotong membentuk kubus dengan ukuran 0,5 cm x 05 cm x 0,5 cm Ditimbang seberat 2 gram Dimasukkan ke dalam erlemneyer 250 ml Disterilisasi menggunakan autoclaft Ditambahkan 100 ml suspensi bakteri (10 9 CFU/ml) Di guncang pada orbital shaker selama 6 jam Disaring PUF + Bakteri

4 51 Lampiran 5. Imobilisasi dengan Menggunakan Alginat SuspensiBakteri Dicampurkan dengan 50 ml alginat 3% (b/v)dengan perbandingan 1 : 1 Diteteskan pada CaCl 2 0,1 M menggunakan syringe sambil dilakukan pengadukan dengan kecepatan putaran rpm Disaring dengan menggunakan kertas saring steril Beads Alginat + Bakteri DibilasdenganmenggunakanNaCl 0,85 % Disaring dengan menggunakan kertas saring steril Dicuci dengan menggunakan air destilasi streril Beads Alginat + Bakteri Lampiran 6. Uji Viabilitas Bakteri Setelah Imobilisasi

5 52 Lampiran 7. Uji AktifitasBiosurfaktanMetodeDrop Collapsing Test (Jain et al., 1991) yang Dimodifikasi

6 53 Lampiran 8. Uji Kemampuan Bakteri Terimobilisasi Dalam Mendegradasi Pestisida Secara In Vitro

7 54 Lampiran 9. Pengamatan Penempelan Bakteri Pada Bahan Penyalut Foam Polyurethane + Bakteri Beads Alginat + Bakteri dibersihkan dengan cara merendam sampel dalam larutan caccodylate buffer kurang lebih 2 jam, diagitasi dalam ultrasonic cleaner selama 5 menit diprefiksasi dengan merendam dalam larutan glutaraldehyde 2,5% selama 2 hari difiksasi dalam tannic acid 2% selama 6 jam. Setalah itu cuci dengan caccodylate buffer selama 5 menit sebanyak 4 kali ulangan dalah dehidrasi dengan perendaman pada alkohol 50% selama 5 menit 4 kali pengulangan, 70% selama 20 menit, 80% selama 20 menit dikeringkan alkohol dengan 95% selama merendam 20 menit dalam dan tert terakhir butanol pada selama alkohol 10 menit sebanyak 2 kali pengulangan dibekukan dalam freezer sampai beku divakum dalam vacum drier hingga mengering dicoating Diamati dengan Scanning Electron Microscope (SEM) Hasil

8 55 Lampiran 10. Konsentrasi Residu Karbofuran Selama 15 Hari Masa Inkubasi No. Perlakuan Konsentrasi Residu (mg/kg) Hari ke-0 Hari ke-5 Hari ke-10 Hari ke Kontol (-) 41,86 39,31 37,46 18,71 2. P.aeruginosa 41,86 1,46 1,14 0,00 (Kontrol +) 3. P.aeruginosa Strain 41,86 1,67 1,30 0,00 M111 (Kontrol +) 4. P.aeruginosa 41,86 0,00 0,00 0,00 (Alginat) 5. P.aeruginosa Strain 41,86 0,00 0,00 0,00 M111 (Alginat) 6. P.aeruginosa (PUF) 41,86 1,53 1,53 1,17 7. P.aeruginosa Strain M111 (PUF) 41,86 1,19 1,19 0,00

9 56 Lampiran 11 Lembaran Hasil Uji Residu Pestisida

10 57

11 58

12 59

13 60

14 61

15 62

16 63

17 64

18 65

19 66

20 67

21 68

22 69

23 70

24 71

25 72

26 73