UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETIL ASETAT TERAKTIF DAUN DANDANG GENDIS (Clinacanthus nutans) MENGGUNAKAN UJI LETALITAS LARVA UDANG DWI CAHYA AGUSTINA

Transkripsi

1 UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETIL ASETAT TERAKTIF DAUN DANDANG GENDIS (Clinacanthus nutans) MENGGUNAKAN UJI LETALITAS LARVA UDANG DWI CAHYA AGUSTINA DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2012

2 ABSTRAK DWI CAHYA AGUSTINA. Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang Gendis (Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang. Dibimbing oleh DUDI TOHIR dan GUSTINI SYAHBIRIN. Dandang gendis (Clinacanthus nutans) merupakan tumbuhan obat yang biasa digunakan masyarakat sebagai obat tradisional untuk antimalaria dan antidiabetes. Penelitian diawali dengan maserasi serbuk daun dandang gendis menggunakan etanol, kemudian ekstrak kasar etanol dipartisi menggunakan n-heksana. Fraksi etanol bebas senyawa nonpolar kemudian dipartisi menggunakan etil asetat. Uji toksisitas menggunakan uji letalitas larva udang terhadap ekstrak kasar etanol, fraksi n-heksana, dan fraksi etil asetat. Fraksi etil asetat memiliki aktivitas paling tinggi dengan konsentrasi mematikan 50% sebesar mg/l. Ekstraksi kembali fraksi etanol bebas senyawa nonpolar menggunakan pelarut etil asetat dengan kondisi waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2 menghasilkan nilai LC 50 sebesar mg/l. Hasil uji fitokimia positif saponin, alkaloid, steroid, dan flavonoid. Kandungan flavonoid ekstrak etil asetat re-ekstraksi lebih besar dibandingkan kandungan flavonoid ekstrak etil asetat pada ekstraksi awal. ABSTRACT DWI CAHYA AGUSTINA. Toxicity Assay of The Most Active Ethyl Acetate Extract from Clinacanthus nutans Leaves by Using Brine Shrimp Lethality Test. Supervised by DUDI TOHIR and GUSTINI SYAHBIRIN. Dandang gendis (Clinacanthus nutans) is a medical herb commonly used as a traditional medicine as antimalarial and antidiabetic. This study was started with maceration of the dried leaves of dandang gendis with ethanol,and then partitioned using n-hexane. The ethanol extract free of nonpolar compounds was then partitioned with ethyl acetate. The ethanol crude extract, n-hexane fraction, and ethyl acetate fraction were tested by using brine shrimp lethality test to determine the toxicity of each extract. The ethyl acetate fraction showed the highest activity with 50% lethal concentration (LC 50 ) of 32 mg/l. Re-extraction of ethanol extract free of nonpolar compounds by using ethyl acetate in 90 minutes by three times extraction with material:solvent ratio of 1:2 resulted LC 50 value of mg/l. Phytochemical assay results showed that the ethyl acetate extract of dandang gendis leaves contained saponins, alkaloids, steroids, and flavonoids. Re-extraction of ethyl acetate extract contained higher flavonoids than ethyl acetate extract from the first extraction.

3

4 UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETIL ASETAT TERAKTIF DAUN DANDANG GENDIS (Clinacanthus nutans) MENGGUNAKAN UJI LETALITAS LARVA UDANG DWI CAHYA AGUSTINA Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen Kimia DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2012

5 Judul Skripsi : Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang Gendis (Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang Nama : Dwi Cahya Agustina NIM : G Disetujui, Pembimbing I Pembimbing II Drs Dudi Tohir, MS Dr Gustini Syahbirin, MS NIP NIP Diketahui, Ketua Departemen Kimia Prof Dr Ir Tun Tedja Irawadi, MS NIP Tanggal lulus:

6 PRAKATA Puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas rahmat dan karunia-nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini. Karya ilmiah yang berjudul Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang Gendis (Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana sains pada Departemen Kimia FMIPA IPB. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Drs Dudi Tohir, MS dan Ibu Dr Gustini Syahbirin, MS sebagai pembimbing yang telah memberikan arahan, saran, dan dorongan selama pelaksanaan penelitian dan penulisan karya ilmiah ini. Ungkapan terima kasih penulis sampaikan kepada keluarga tercinta, Bapak, Ibu, Mba Eka, Mas Didi, Yoga, dan Rara yang selalu memberikan semangat, doa, dan kasih sayang dalam berbagai bentuk yang tak pernah putus. Penulis mengucapkan terima kasih juga kepada Kak Budi Arifin, SSi, MSi, Pak Sabur, Ibu Yeni, Ibu Aah, Teh Nia dan seluruh staf Laboratorium Kimia Organik atas fasilitas dan bantuan yang diberikan selama penelitian. Ucapan terima kasih tak lupa penulis berikan kepada Mba Sherly, Vicky, Rita, Irma, Gae, Ayu, dan Noe yang turut membantu, memberikan semangat dan dukungannya dalam penyusunan karya ilmiah, serta semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu. Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat. Bogor, September 2012 Dwi Cahya Agustina

7 RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Cirebon pada tanggal 15 Agustus 1986 sebagai putri kedua dari tiga bersaudara dari pasangan Agnan Lukito dan Kusriyati Tedas. Tahun 2004 penulis lulus dari SMU Negeri 2 Brebes dan pada tahun 2005 lulus seleksi masuk Institut Pertanian Bogor (IPB) melalui jalur Seleksi Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB). Penulis memilih Program Studi Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Selama mengikuti perkuliahan, penulis pernah menjadi asisten praktikum Kimia Organik (2008/2009), Kimia Lingkungan (2008/2009), Kimia Dasar (2010/2011). Bulan Juli - Agustus 2008, penulis melaksanakan praktik lapangan di di Unit Pelaksana Teknis Biomaterial Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.

8 DAFTAR ISI Halaman DAFTAR TABEL... vii DAFTAR GAMBAR... vii DAFTAR LAMPIRAN... vii PENDAHULUAN... 1 BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat... 2 Penentuan Kadar Air... 2 Ekstraksi... 2 Uji Fitokimia... 2 Uji Toksisitas... 2 HASIL DAN PEMBAHASAN Kadar Air... 3 Ekstrak... 3 Hasil Uji Fitokimia... 3 Hasil Uji Toksisitas... 4 SIMPULAN DAN SARAN Simpulan... 4 Saran... 5 DAFTAR PUSTAKA... 5 LAMPIRAN... 7 vi

9 DAFTAR TABEL Halaman 1 Hasil uji fitokimia ekstrak etanol Hasil uji fitokimia ekstrak etil asetat awal dan re-ekstraksi Nilai LC 50 hasil ekstraksi daun dandang gendis DAFTAR GAMBAR Halaman 1 Daun dandang gendis Struktur 5 senyawa dandang gendis yang mengandung sulfur A. salina... 4 DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1 Diagram alir penelitian Uji fitokimia Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm dan penetasan larva A. salina Uji toksisitas terhadap A. salina Penentuan kadar air Rendemen ekstrak etanol Hasil uji fitokimia Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina menggunakan parameter waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali, dan nisbah sampel:pelarut 1: vii

10 viii

11 1 PENDAHULUAN Dandang gendis (Gambar 1) merupakan salah satu tumbuhan obat tradisional yang lazim digunakan masyarakat sebagai antidiabetes dan antimalaria. Kemampuan ekstrak daun dandang gendis sebagai obat alami dikarenakan terdapat kandungan senyawa bioaktif di dalamnya. Dandang gendis yang termasuk ke dalam famili Acanthaceae memiliki banyak kandungan kimia seperti alkaloid, flavonoid, dan terpenoid (Suharty 1984). Gambar 1 Daun dandang gendis. Berbagai penelitian yang telah dilakukan menunjukkan khasiat ekstrak daun dandang gendis. Ekstrak etanol dapat dijadikan sebagai antimalaria dan antimikrob karena mengandung senyawa trans-3-metilsulfonil-2- propenol dan trans-3-metilsulfinil-2-propenol (Tuntiwachwuttikul et al. 2003). Ekstrak daun dandang gendis berpotensi sebagai antikanker (Sofyan 2008), larvasida Aedes aegypti (Andriani 2008), antivirus Herpes simplex (Yoosook et al. 1999; Thongchai et al. 2008), dan antioksidan (Pannangpetch et al. 2007; Akbar 2010; Agustina 2011). Ekstrak air dari daun dandang gendis juga berpotensi sebagai antidiabetes, dibuktikan setelah pemberian glukosa 2 g/kg (b/b) terjadi penurunan kadar glukosa darah pada mencit (Nurulita 2005). Penelitian Teshima et al. (1997) menunjukkan 6 senyawa dalam ekstrak n- butanol daun dan batang dandang gendis, yaitu senyawa C-glikosil flavon, viteksin, isoviteksin, shaftosida, isomolupentin 7-Ο-βglukopiranosida, dan orientin. Penelitian lanjutan Teshima et al. (1997) juga menghasilkan 5 senyawa yang mengandung sulfur dengan rumus molekul diantaranya C 10 H 18 O 8 S (1), C 10 H 18 O 7 S (2), C 12 H 21 NO 8 S (3), C 10 H 18 O 8 S (4), dan C 10 H 18 O 8 S (5). (Gambar 2). Gambar 2 Struktur 5 senyawa dandang gendis yang mengandung sulfur (Teshima et al. 1997) Salah satu metode untuk menentukan potensi bioaktif ekstrak tanaman adalah uji kematian larva udang atau brine shrimp lethality test (BSLT). Metode ini memiliki beberapa kelebihan antara lain sederhana, cepat, tidak memerlukan peralatan khusus, dan hanya menggunakan sedikit ekstrak contoh. Uji ini tidak spesifik untuk antitumor, tetapi kemampuannya mendeteksi 14 dari 24 ekstrak Euphorbiaceae yang aktif terhadap uji leukemia secara in vivo pada mencit dan mendeteksi 2 dari 6 spesies yang aktif terhadap uji karsinoma nasofaring menunjukkan bahwa uji ini dapat dipakai untuk penapisan awal senyawa bioaktif (Meyer et al. 1982). Penelitian Setiawan (2009) meragamkan parameter suhu, jumlah ekstraksi, dan nisbah sampel:pelarut menghasilkan nilai konsentrasi mematikan 50% (LC 50 ) terendah sebesar mg/l pada suhu 40 ºC, nisbah sampel:pelarut 1:4, dan jumlah ekstraksi 3 kali. Penelitian ini melanjutkan penelitian Setiawan (2009) dengan modifikasi parameter yang digunakan meliputi waktu ekstraksi, jumlah ekstraksi, dan nisbah sampel:pelarut. Metode ekstraksi yang digunakan dalam

12 2 penelitian ini adalah ekstraksi padat-cair secara maserasi, dilanjutkan dengan ekstraksi cair-cair untuk memperoleh ekstrak paling aktif. Ekstrak paling aktif berdasarkan uji BSLT kemudian di re-ekstraksi dan ditentukan kembali nilai LC 50 dengan parameter waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2. Re-ekstraksi dengan perlakuan 3 parameter tersebut diharapkan meningkatkan bioaktivitas ekstrak terhadap hewan uji. Penelitian ini bertujuan menentukan nilai LC 50 ekstrak teraktif daun dandang gendis berdasarkan BSLT. BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah daun dandang gendis dari daerah Batuhulung Bogor, A. salina, serbuk Mg, pereaksi Meyer, Dragendorf, Wagner, Lieberman-Buchard, FeCl 3 1%, dan air laut. Alat-alat yang digunakan adalah peralatan kaca, mikropipet, pelat tetes, penguap putar, sumur uji BSLT, dan peralatan penetasan telur A. salina. Penentuan Kadar Air Pinggan porselen dikeringkan pada suhu 105 ºC selama 30 menit, didinginkan dalam eksikator, dan ditimbang. Daun yang telah dikeringudarakan kurang lebih sebanyak 3 g dimasukkan ke dalam pinggan, dikeringkan pada suhu 105 ºC selama 3 jam, didinginkan dalam eksikator dan ditimbang. Pengeringan diulangi lagi selama 3 jam pada suhu 105 ºC, didinginkan, kemudian ditimbang kembali. Prosedur ini diulangi hingga didapat bobot yang tetap (stabil). Kadar air dihitung dengan persamaan sebagai berikut: Ekstraksi Sebanyak 400 g serbuk daun dandang gendis dimaserasi beberapa kali hingga filtrat tidak berwarna hijau lagi. Filtrat disaring dengan kertas saring lalu dipekatkan pada suhu 40 o C. Ekstrak etanol yang diperoleh diuji BSLT dan fitokimia (Lampiran 1) kemudian dipartisi menggunakan n-heksana. Fraksi n-heksana dipekatkan lalu diuji BSLT dan fitokimia. Fraksi etanol bebas senyawa nonpolar ditambahkan air dan dipartisi menggunakan etil asetat. Dihasilkan fraksi etil asetat dan fraksi etanol-air. Kedua fraksi tersebut juga dipekatkan dan diuji BSLT dan fitokimia. Fraksi paling aktif dari hasil uji di re-ekstraksi menggunakan 3 parameter yaitu waktu ekstraksi 90 menit, nisbah sampel:pelarut 1:2, dan jumlah ekstraksi 3 kali, lalu ditentukan kembali nilai LC 50. Uji Fitokimia Uji fitokimia (flavonoid, alkaloid, saponin, triterpenoid, steroid, dan tanin) dilakukan berdasarkan prosedur Harborne (1987) (Lampiran 2) Uji Toksisitas Sepuluh ekor A. salina yang telah ditetaskan dimasukkan ke dalam sumur uji BSLT yang berisi air laut dan dibuat konsentrasi ekstrak 0, 10, 100, 500, dan 1000 mg/l (Lampiran 3 dan 4). Pengamatan dilakukan 24 jam setelah penetasan dengan menghitung jumlah A. salina yang mati dengan bantuan kaca pembesar. Data persen mortalitas diolah menggunakan analisis probit dengan tingkat kepercayaan 95%. Kurva penentuan LC 50 dibuat menghubungkan log konsentrasi dengan nilai probit. Nilai LC 50 diperoleh dengan menarik garis bantu pada titik tengah sumbu probit dan sumbu log konsentrasi pada kurva. Keterangan: a = bobot contoh awal (g) b = bobot contoh akhir (g)

13 3 HASIL DAN PEMBAHASAN Kadar Air Daun dandang gendis yang telah dikering kan dan digiling menjadi serbuk ditentukan kadar airnya menggunakan metode gravimetri taklangsung pada suhu 105 ºC. Kadar air yang ditentukan adalah yang terikat secara fisik dan dapat dihilangkan pada suhu ºC (Harjadi 1993). Kadar air digunakan sebagai parameter ketahanan bahan dalam penyimpanan dan sebagai faktor koreksi untuk rendemen. Menurut Winarno (1997), apabila kadar air suatu bahan kurang dari 10%, pertumbuhan mikrob dapat dihindari sehingga bahanl dapat disimpan dalam waktu relatif lama. Kadar air daun dandang gendis kering diperoleh sebesar 9.69% (Lampiran 5). Hasil ini masih di bawah 10% sehingga sampel dapat disimpan dalam waktu relatif lama. Ekstrak Proses diawali dengan maserasi sampel menggunakan etanol. Maserasi dilakukan berulang kali sampai filtrat tidak berwarna hijau lagi, sehingga dapat dianggap semua senyawa yang berbobot molekul rendah telah terekstraksi (Harborne 1987). Penggunaan etanol yang bersifat polar didasarkan pada sifat senyawa polar yang akan diekstraksi yaitu flavonoid, alkaloid, tanin. Diharapkan semua senyawa tersebut dapat terekstraksi dengan baik oleh pelarut dengan sifat kepolaran yang sama. Selain itu etanol memiliki titik didih yang rendah sehingga mudah diuapkan kembali, dan sifatnya tidak setoksik pelarut polar lainnya seperti metanol. Maserasi dengan etanol menghasilkan rendemen sebesar 25.46% (Lampiran 6). Ekstrak etanol selanjutnya dipartisi dengan n-heksana untuk menarik senyawa nonpolar. Fraksi etanol bebas senyawa nonpolar ditambahkan akuades dan dipartisi kembali dengan etil asetat. Akuades ditambahkan untuk meningkatkan kepolaran, sebab etil asetat memiliki kepolaran yang tidak jauh berbeda dengan etanol. Hal ini dapat memperjelas batas pemisahan pada proses partisi etil asetat (Afif 2006). Parameter waktu re-ekstraksi dipilih 90 menit karena pada saat itu ekstrak telah menjadi lebih jernih dibandingkan dengan waktu ekstraksi 30 dan 60 menit. Semakin lama waktu ekstraksi semakin banyak senyawa bioaktif akan terambil, ditandai dengan perubahan warna ekstrak. Demikian pula dengan jumlah ekstraksi, ekstraksi beberapa kali dengan sedikit pelarut lebih efektif dibandingkan dengan menggunakan pelarut dalam jumlah banyak sekaligus. Hasil Uji Fitokimia Uji kualitatif fitokimia digunakan untuk mengetahui jenis senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak. Golongan senyawa dapat ditentukan dari perubahan warna setelah penambahan pereaksi spesifik untuk setiap uji kualitatif. Hasil uji fitokimia ekstrak kasar daun dandang gendis (Tabel 1) ialah terbentuknya warna putih, cokelat, dan jingga dengan pereaksi Meyer, Wagner, dan Dragendorf; terbentuk buih yang stabil setelah pengocokan; terbentuk warna jingga pada lapisan amil alkohol; terbentuk warna hijau dengan pereaksi Lieberman-Buchard; dan warna hitam dengan FeCl 3 1%. Hasil ini berturut-turut menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun dandang gendis positif mengandung senyawa alkaloid, saponin, flavonoid, steroid, dan tanin. Sementara ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi mengandung alkaloid, saponin, steroid, dan flavonoid (Tabel 2). Kandungan flavonoid ekstrak etil asetat re-ekstraksi lebih besar daripada kandungan flavonoid ekstrak etil asetat awal, terlihat dari lebih pekatnya warna yang dihasilkan. Gambar hasil uji fitokimia dapat dilihat pada Lampiran 7. Tabel 1 Hasil uji fitokimia ekstrak etanol Golongan Senyawa Etanol Alkaloid +++ Saponin +++ Flavonoid +++ Triterpenoid - Steroid +++ Tanin +++ Keterangan : + menunjukkan kepekatan warna

14 4 Tabel 2 Hasil uji fitokimia ekstrak etil asetat awal dan re-ekstraksi *Etil Asetat Golongan Etil Asetat Reekstraksi Senyawa Awal Alkaloid Saponin Flavonoid Triterpenoid - - Steroid Tanin ++ - Keterangan : *re-ekstraksi dilakukan pada kondisi waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2 Hasil Uji Toksisitas Proses penetasan larva udang A. salina (Gambar 3) menggunakan air laut dengan bantuan aerator untuk menjaga kadar oksigen yang terlarut. Gelembung udara dari aerator juga berfungsi untuk mengaduk telur agar tidak mengendap di dasar wadah. Telur akan sulit menetas jika oksigen dalam air kurang. Penyinaran selama proses penetasan berfungsi menjaga kondisi air laut agar tetap hangat. Umur larva udang yang digunakan adalah 24 jam setelah menetas. Kondisi membran sel larva udang pada umur tersebut masih lunak sehingga memudahkan senyawa asing dalam air laut masuk dan menyebabkan kematian. Kematian larva udang yang disebabkan masuknya senyawa asing dijadikan dasar untuk pengujian toksisitas ekstrak aktif daun dandang gendis dalam penelitian ini. Gambar 3 A. salina. Suatu senyawa memiliki potensi bioaktif jika nilai LC 50 -nya di bawah 1000 mg/l. Hasil pengujian toksisitas larva udang ekstrak kasar (fraksi etanol), fraksi n-heksana, fraksi etanolair, fraksi etil asetat, dan fraksi etil asetat reekstraksi dapat dilihat pada Tabel 3. Tabel 3 Nilai LC 50 hasil ekstraksi daun dandang gendis Pelarut Etanol n-heksana Etanol-air Etil asetat Etil asetat re-ekstraksi LC 50 (mg/l) LC 50 yang diperoleh menunjukkan bahwa semua ekstrak memiliki potensi bioaktif. Ekstrak etil asetat paling aktif dengan nilai LC mg/l (Lampiran 8). Selanjutnya dilakukan re-ekstraksi terhadap fraksi paling aktif dengan menggunakan 3 parameter, yaitu waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2 yang kemudian ditentukan kembali nilai LC 50 nya. Ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi menghasilkan nilai LC 50 sebesar mg/l dengan R 2 = 99.2% (Lampiran 9). LC 50 yang dihasilkan lebih rendah dari penelitian Setiawan (2009) yang menggunakan parameter suhu 40 ºC, nisbah sampel:pelarut 1:4, dan jumlah ekstraksi 3 kali dan menghasilkan nilai LC 50 sebesar mg/l. Setelah dilakukan re-ekstraksi, nilai LC 50 fraksi etil asetat turun menjadi mg/l. Semakin kecil nilai LC 50, semakin tinggi aktivitasnya. Hal ini menunjukkan bahwa lamanya waktu, jumlah ekstraksi, dan nisbah sampel:pelarut dapat meningkatkan keaktifan ekstrak dalam penelitian ini. Turunnya nilai LC 50 dapat juga disebabkan karena kandungan flavonoid ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi lebih besar dibandingkan dengan kandungan flavonoid pada ekstrak etil asetat awal. Keaktifan etil asetat hasil re-ekstraksi ini tergolong sangat aktif menurut National Cancer Institute (NCI) Amerika yang menyatakan bahwa standar efektivitas komponen bioaktif untuk melawan sel kanker adalah 30 mg/l (Albuntana et al. 2011). SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Setelah dilakukan re-ekstraksi, nilai LC 50 fraksi etil asetat turun dari mg/l menjadi mg/l. Hasil uji fitokimia

15 5 menunjukkan etil asetat re-ekstraksi mengandung alkaloid, saponin, steroid, dan flavonoid dengan kandungan flavonoid lebih besar dibandingkan kandungan flavonoid ekstrak etil asetat ekstraksi awal. Saran Perlu penelitian lanjutan ke arah potensi daun dandang gendis sebagai antikanker secara in vitro menggunakan sel kanker. DAFTAR PUSTAKA Afif KH Peningkatan kadar kurkumin ekstrak etanol temulawak dengan metode ekstraksi cair-cair [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Agustina S Isolasi golongan flavonoid sebagai antioksidan dari daun dandang gendis (Clinacanthus nutans) [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Akbar HR Isolasi dan identifikasi golongan flavonoid daun dandang gendis (Clinacanthus nutans) berpotensi sebagai antioksidan [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Albuntana A, Yasman, Wardhana W Uji toksisitas ekstrak empat jenis teripang suku Holothuriidae dari Pulau Penjaliran Timur, Kep. Seribu, Jakarta menggunakan BSLT. J Ilmu Teknol Kelautan Trop 3: Andriani A Identifikasi senyawa golongan aktif ekstrak daun Clinacanthus nutans yang berpotensi sebagai larvasida pada Aedes aegypti [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Harborne JB Metode Fitokimia. Padmawinata K, Sudiro I, penerjemah. Bandung: Institut Teknologi Bandung. Terjemahan dari: Phytochemical Method. Harjadi W Ilmu Kimia Analitik Dasar. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama. Meyer BN et al Brine shrimp: a convenient general bioassay for active plant constituent. Planta Med 45: Nurulita Y Penapisan aktivitas antidiabetes isolat ekstrak air daun dandang gendis (Clinacanthus nutans) pada mencit Swiss Webster jantan [skripsi]. Bandung: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Bandung. Pannangpetch P et al Antioxidant activity and protective effect against oxidative hemolysis of Clinacanthus nutans (Burm.f) Lindau. J Sci Technol 1: 1-9. Setiawan I Optimalisasi ekstraksi caircair fraksi etanol ekstrak daun dandang gendis (Clinacanthus nutans) pada uji toksisitas Artemia salina [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Sofyan D Inhibisi fraksi aktif daun dandang gendis (Clinacanthus nutans) pada pertumbuhan Saccharomyces cerevisiae sebagai uji potensi antikanker [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Suharty NS Isolasi terpenoid dari daun Clinacanthus nutans [tesis]. Bandung: Program Pascasarjana, Institut Teknologi Bandung. Teshima I et al Sulfur-containing glucosides from Clinacanthus nutans. Phytochemistry 48: Thongcai S et al Anti-herpes simplex virus type 1 activity of crude ethyl acetate extract derived from leaves of Clinacanthus nutans Lindau. J Sci Technol 27:

16 6 Tuntiwachwuttikul P, Yupa P, Pootchana P, Thongchai S, Walter CT Sulfurcontaining compounds from Clinacanthus siamensis [abstrak]. Pharm Soc Japan 51: Winarno FG Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama. Yoosook C, Panpisutchai Y, Chaichana S, Santisuk T, Reutrakul V Evaluation of anti-hsv-2 activities of Barleria lupulina and Clinacanthus nutans. J Ethnopharmacol 67:

17 LAMPIRAN 7

18 Lampiran 1 Diagram alir penelitian Uji BSLT Dipekatkan Daun Kering Maserasi dengan etanol sampai filtrat tak berwarna Ekstrak Etanol Uji Fitokimia Partisi dengan n-heksana Fraksi Etanol +Akuades Partisi dengan etil asetat *Re-ekstraksi Fraksi n-heksana Fraksi Etanol-Air *Fraksi Etil Asetat *fraksi paling aktif di re-ekstraksi menggunakan parameter waktu 90 menit, 3 kali jumlah ekstraksi, dan nisbah bahan:pelarut 1:2 Uji BSLT Dipekatkan Uji Fitokimia 8

19 9 Lampiran 2 Uji fitokimia Uji alkaloid. Sebanyak 0.1 g sampel dilarutkan dalam 10 ml kloroform dan 4 tetes NH 4 OH kemudian disaring dan filtratnya dimasukkan ke dalam tabung reaksi tertutup. Ekstrak kloroform dalam tabung reaksi dikocok dengan 6 ml H 2 SO 4 2 M dan lapisan asamnya dipisahkan ke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam ini diteteskan pada lempeng tetes dan ditambahkan pereaksi Meyer, Wagner, dan Dragendorf yang akan menimbulkan endapan dengan warna berturut-turut putih, cokelat, dan merah jingga. Uji saponin dan flavonoid. Sebanyak 0.1 g sampel dimasukkan ke dalam gelas piala kemudian ditambahkan 100 ml air panas dan didihkan selama 5 menit. Setelah itu, disaring dan filtratnya digunakan untuk pengujian. Untuk uji saponin, 10 ml filtrat dimasukkan ke dalam tabung reaksi tertutup kemudian dikocok selama 10 detik dan dibiarkan selama 10 menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil. Sebanyak 10 ml filtrat yang lain ditambahkan 0.5 g serbuk Mg, 1 ml HCl pekat, dan 1 ml amil alkohol kemudian dikocok dengan kuat. Terbentuknya warna merah, kuning, dan jingga pada lapisan amil alkohol menunjukkan adanya flavonoid. Uji triterpenoid dan steroid. Sebanyak 0.1 g sampel dilarutkan dengan 25 ml etanol panas (50 o C) kemudian hasilnya disaring ke dalam pinggan porselen dan diuapkan sampai kering. Residu ditambahkan eter dan ekstrak eter dipindahkan ke dalam lempeng tetes kemudian ditambahkan 3 tetes anhidrida asetat dan 1 tetes H 2 SO 4 pekat (uji Lieberman-Buchard). Warna merah atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid dan warna hijau atau biru menunjukkan adanya steroid. Uji Tanin. Sebanyak 0.1 g sampel ditambahkan 100 ml air panas, dididihkan selama 5 menit, dan disaring. Sebagian filtrat yang diperoleh ditambah larutan FeCl 3 1%. Terbentuknya warna hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin (Harborne 1987). Lampiran 3 Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm dan penetasan larva A. salina Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm Ekstrak ditimbang sebanyak 0.25 g lalu dimasukkan ke dalam gelas piala 25 ml yang berisi air laut kemudian diaduk sampai larut sempurna. Bila tidak larut, ditambahkan Tween 80 secukupnya. Larutan ekstrak dimasukkan ke dalam labu takar 50 ml lalu ditera dengan air laut. Penetasan larva A. salina. Kista A. salina yang sudah siap ditetaskan ditimbang sebanyak 50 mg lalu dimasukkan ke dalam wadah yang berisi air laut yang sudah disaring; setelah itu, diaerasi. Kista dibiarkan selama 48 jam di bawah pencahayaan lampu agar menetas sempurna. Larva yang sudah menetas diambil untuk digunakan dalam uji toksisitas. Lampiran 4 Uji toksisitas terhadap A. salina Sebanyak 10 ekor larva A. salina dimasukkan ke dalam vial yang berisi air laut kemudian ditambahkan larutan ekstrak kasar dan ditepatkan volumenya dengan air laut hingga konsentrasinya menjadi 0, 10, 100, 500, dan 1000 mg/l. Pengamatan dilakukan setelah 24 jam dengan menghitung jumlah larva yang mati dari total larva yang dimasukkan ke dalam vial. Pengamatan memakai bantuan lampu neon.

20 10 Lampiran 5 Penentuan kadar air Ulangan a (g) b (g) c (g) Kadar air (%b/b) Rataan 9.93 Keterangan: a : bobot sampel (g) b : bobot sampel dan cawan petri sebelum dikeringkan (g) c : bobot sampel dan cawan petri setelah dikeringkan (g) Contoh perhitungan: Lampiran 6 Rendemen ekstrak etanol Bobot sampel = g Bobot labu bulat kosong = g Bobot labu bulat + isi = g Bobot isi = g Contoh perhitungan:

21 11 Lampiran 7 Hasil uji fitokimia Ekstrak kasar etanol Meyer Wagner Dragendorf (Alkaloid) (Steroid) (Flavonoid) Ekstrak etil asetat ekstraksi awal Meyer Wagner Dragendorf ( Alkaloid) (Steroid) (Flavonoid) Ekstrak etil asetat re-ekstraksi Meyer Wagner Dragendorff (Alkaloid) (Steroid) ( Flavonoid)

22 12 Lampiran 8 Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A. salina Konsentrasi (mg/l) Jumlah Larva Artemia Jumlah yang mati %Mortalitas Rerata Probit Log (mg/l) Contoh perhitungan: Konsentrasi 10 ppm ulangan 1 Keterangan: Nilai probit diperoleh dengan merefleksikan nilai % mortalitas ke dalam tabel probit, kemudian dibuat kurva linear hubungan antara log konsentrasi dengan nilai probit. Persamaan garis yang diperoleh:

23 13 Lampiran 9 Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina menggunakan parameter waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2 Konsentrasi (mg/l) Jumlah Larva Artemia Jumlah yang mati %Mortalitas Rerata Probit Log (mg/l) Nilai probit diperoleh dengan merefleksikan nilai % mortalitas ke dalam tabel probit, kemudian dibuat kurva linear hubungan antara log konsentrasi dengan nilai probit. Persamaan garis yang diperoleh:

24 14