LAMPIRAN. Dilakukan fraksinasi 800 ml ekstrak dengan 800 ml klorform, dihasilkan:

Transkripsi

1 71 Lampiran 1. Perhitungan Rendemen LAMPIRAN Berat kering Total Volume ekstrak (EB) : gram : ml Dilakukan fraksinasi 800 ml ekstrak dengan 800 ml klorform, dihasilkan: Volume fraksi kloroform (FKB) : ml (dievaporasi sebanyak 1000 ml) Volume ekstrak (EB) : 1000 ml Setelah dikenatalkan, maka: Berat fraksi kloroform (FKB) Berat ekstrak (EB) : 3,27 gram : 22,21 gram Konsentrasi serbuk kering total : = 0,136 g/ml Konsentrasi serbuk kering sebelum fraksi : 0,136 g/ml x 800 ml = 108,84 g Perhitungan Rendemen a. Faraksi kloroform bandotan Konsentrasi serbuk kering setelah fraksi : = 88,2 g % rendemen FKB : b. Ekstrak etanol Konsentrasi serbuk kering : = 136 g % rendemen EB :

2 72 Lampiran 2. Perhitungan Rf Kromatografi Lapis Tipis Nilai Rf = Nilai Rf bercak 1 = 1,0/8,0 = 0,125 Nilai Rf bercak 2 = 1,1/8,0 = 0,137 Nilai Rf bercak 3 = 1,25/8,0 = 0,156 Nilai Rf bercak 4 = 1,45/8,0 = 0,181 Nilai Rf bercak 5 = 1,6/8,0 = 0,200 Nilai Rf bercak 6 = 2,1/8,0 = 0,260 Nilai Rf bercak 7 = 2,3/8,0 = 0,287 Nilai Rf bercak 8 = 2,5/8,0 = 0,312 Nilai Rf bercak 9 = 2,7/8,0 = 0,337 Nilai Rf bercak 10 = 2,8/8,0 = 0,350 Nilai Rf bercak 11 = 3,0/8,0 = 0,375 Nilai Rf bercak 12 = 3,9/8,0 = 0,487 Nilai Rf bercak 13 = 4,25/8,0 = 0,531 Nilai Rf bercak 14 = 5,7/8,0 = 0,587 Nilai Rf bercak 15 = 5,1/8,0 = 0,637 Nilai Rf bercak 16 = 7,4/8,0 = 0,925

3 73 Lampiran 3. Tabel dan perhitungan viabilitas sel HeLa setelah pemberian FKB No. Absorbansi Viabilitas sel (%) Kadar Rataratrata Rata- (µg/ml) A1 A2 A3 V1 V2 V3 SD Absorbansi A1 A2 A3 Rata-rata Kontrol sel Kontrol media Pengukuran dengan ELISA reader menghasilkan nilai absorbansi. Nilai absorbansi yang dihasilkan dikonversi menjadi viabilitas sel (%sel hidup) dengan rumus: % sel hidup = x 100% Viabilitas sel HeLa setelah pemberian FKB sebagai berikut: 1. % sel hidup kadar µg/ml = x 100% = 94.45% 2. % sel hidup kadar µg/ml = x 100% = 90.66% 3. % sel hidup kadar 6.25 µg/ml = x 100% = 85.70% 4. % sel hidup kadar 12.5 µg/ml = x 100% = 77.89% 5. % sel hidup kadar 25 µg/ml = x 100% = 56.99%

4 Viabilitas Sel (%) % sel hidup kadar 12.5 µg/ml = x 100% = 9.41% Viabilitas Sel Hela pada perlakuan FKB y = x R² = Konsentrasi (um) Dibuat regresi linier untuk menentukan nilai IC 50 FKB sehingga didapatkan persamaan garis y = x dengan y sebagai %sel hidup dan x sebagai konsentrasi. y = x = x x = x = µg/ml

5 75 Lampiran 4. Tabel dan perhitungan viabilitas sel HeLa setelah pemberian 5-FU No. Absorbansi Viabilitas sel (%) Kadar Rataratrata Rata- (µg/ml) A1 A2 A3 V1 V2 V3 SD Absorbansi A1 A2 A3 Rata-rata Kontrol sel Kontrol media Pengukuran dengan ELISA reader menghasilkan nilai absorbansi. Nilai absorbansi yang dihasilkan dikonversi menjadi viabilitas sel (%sel hidup) dengan rumus: % sel hidup = x 100% Viabilitas sel HeLa setelah pemberian 5-FU sebagai berikut: 1. % sel hidup kadar 1.69 µg/ml = x 100% = 83.32% 2. % sel hidup kadar 3.38 µg/ml = x 100% = 80.00% 3. % sel hidup kadar 9.76 µg/ml = x 100% = 80.59% 4. % sel hidup kadar µg/ml = x 100% = 65.78% 5. % sel hidup kadar µg/ml = x 100% = 47.82%

6 Viabilitas Sel (%) % sel hidup kadar µg/ml = x 100% = 22.08% Viabilitas Sel Hela pada Perlakuan 5FU y = x R² = Konsentrasi (um) Dibuat regresi linier untuk menentukan nilai IC 50 FKB sehingga didapatkan persamaan garis lurus y = x dengan y sebagai %sel hidup dan x sebagai konsentrasi. y = x = x x = x = µg/ml

7 77 Lampiran 5. Desain uji sitotoksik kombinasi FKB dan 5-FU Uji kombinasi FKB dan 5-FU pada konsentrasi masing-masing ½ IC 50, 3/8 IC 50, ¼ IC 50 dan 1/8 IC 50 dimana IC 50 FKB adalah 27,48 µg/ml dan 5-FU adalah µg/ml. Konsentrasi untuk uji kombinasi Nomor Konsentrasi (µg/ml) % IC konsentrasi 50 FKB 5-FU 1 ½ IC /8 IC ¼ IC /8 IC Maping 96 well plate untuk uji kombinasi A B C D E F G H IC 50 FKB Seri konsentrasi Seri konsentrasi Seri konsentrasi IC 1-4 FKB + 5-FU 1-4 FKB + 5-FU 50 FKB 1-4 FKB 2 IC konsentrasi 1 konsentrasi FU IC 50 5-FU Seri konsentrasi FU Seri konsentrasi 1-4 FKB + 5-FU konsentrasi 2 Seri konsentrasi 1-4 FKB + 5-FU konsentrasi 4 Kontrol sel Kontrol media Viabilitas sel HeLa pada perlakuan kombinasi FKB dan 5-FU Senyawa Viabilitas perlakuan FKB (%sel hidup) Viabilitas perlakuan 5-FU (%sel hidup)

8 % viabilitas sel Viabilitas Sel Kombinasi FKB dan 5-FU 5FU FKB Nilai CI pada Kombinasi FKB dan 5-FU CI 5-FU FKB , Diagram CI Kombinasi FKB dan 5-FU FU (µg/ml) FKB (µg/ml)

9 79 Lampiran 6. Gambaran score docking, nilai RMSD dan viasualisasi hasil docking dan interaksi antara Nobiletin dan protein Bcl-xL Nilai grid box dan luas area docking Nilai score docking, RMSD dan visualisasi hasil docking

10 80 Lampiran 7. Gambaran score docking, nilai RMSD dan viasualisasi hasil docking dan interaksi antara 5-Fluorourasil dan protein Bcl-xL Nilai grid box dan luas area docking Nilai score docking, RMSD dan visualisasi hasil docking

11 81 Lampiran 8. Gambaran score docking, nilai RMSD dan viasualisasi hasil docking dan interaksi antara Ligan asli 4FC dan TH1 pada protein Bcl-xL Nilai score docking, RMSD dan visualisasi hasil docking ligan asli 4FC Nilai score docking, RMSD dan visualisasi hasil docking ligan asli TH1

12 Lampiran 9. Determinasi Herba Bandotan 82

13 83 Lampiran 10. Foto Penelitian Pengeringan Penyerbukan simplisia Fraksinasi Hasil Fraksinasi Evaporasi di evaporator Evaporasi dengan waterbath

14 84 Plat KLT dan proses elusi Maping 96-well plate untuk kombinasi