BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN. identitas tanaman tersebut, apakah tanaman tersebut benar-benar tanaman yang

Transkripsi

1 30 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Determinasi Tanaman Determinasi dari suatu tanaman bertujuan untuk mengetahui kebenaran identitas tanaman tersebut, apakah tanaman tersebut benar-benar tanaman yang diinginkan. Dengan demikian kesalahan dalam pengumpulan bahan yang akan diteliti dapat dihindari. Bunga telang (Clittoria ternatea) dan daun sirsak (Annona muricata L.) yang digunakan untuk penelitian ini dideterminasi di Laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA) Universitas Sebelas Maret (UNS) Surakarta dengan menggunakan buku Flora of Java karangan C.A. Backer dan R.C. Bakhuizen van den Brink (1963), hasil determinasi dapat dilihat pada lampiran. Berdasarkan hasil determinasi yang telah dilakukan dapat diperoleh kepastian bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah benar spesies Clittoria ternatea dan Annona muricata (L.) (lampiran 1 dan 2) Pembuatan Ekstrak Bunga telang dan daun sirsak yang telah dikumpulkan dan dicuci bersih, selanjutnya disortasi agar bahan yang digunakan memiliki kondisi yang baik. Selanjutnya, bahan dikeringkan dibawah sinar matahari langsung sampai benarbenar kering yang ditandai dengan remahnya bahan saat diremas. Tujuan dari pengeringan adalah untuk mengurangi kadar air pada bahan sehingga tidak ditumbuhi fungi selama penyimpanan Bahan yang telah kering sebelum dilakukan penyarian diserbuk terlebih dulu dengan blender. Serbuk simplisia kemudian 30

2 31 diayak untuk mendapatkan derajat halus yang sesuai yaitu 4/18, dimana semua serbuk simplisia lolos pengayak nomor 4 dan tidak lebih dari 40 % lolos pengayak nomor 18. Tujuan penghalusan ini adalah untuk meningkatkan luas permukaan sehingga sampel kontak dengan pelarut semakin luas (Cannel, 1988). Penyarian dilakukan dengan metode perkolasi, keuntungan menggunakan metode ini adalah tidak terjadinya kejenuhan dan dapat meningkatkan difusi karena dengan dialiri cairan penyari secara kontinu zat menjadi seperti terdorong untuk keluar dari sel. Namun metode perkolasi juga memiliki kerugian yaitu cairan penyari yang digunakan relatif lebih banyak serta resiko cemaran mikroba tinggi karena dilakukan secara terbuka (Anonim, 1986). Penyarian dilakukan secara kontinu sampai tetesan dari perkolator berwarna bening, selama proses tersebut cairan penyari terus dijaga agar selalu berada selapis diatas massa. Dalam proses penyarian ini digunakan pelarut etanol 70%. Pelarut etanol dipilih karena etanol merupakan pelarut polar yang penggunaannya cenderung lebih universal, lebih selektif, tidak beracun, netral, absorbsinya baik, dapat bercampur dengan air, serta panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit sehingga ketika proses pemekatan ekstrak cair menjadi ekstrak kental waktu yang diperlukan relatif lebih sedikit, selain sebagai penyari etanol juga dapat digunakan sebagai pengawet untuk mencegah resiko cemaran mikroba (Gandjar dan Rohman, 2007). Hasil ekstraksi diperoleh ekstrak kental bunga telang sebanyak 13,5 gram dan ekstrak daun sirsak sebanyak 21,5 gram sehingga rendemen yang dihasilkan sebesar 28,7% untuk bunga telang dan 22,6% untuk daun sirsak. Perhitungan

3 32 rendemen ekstrak dapat dilihat pada lampiran 3. Ekstrak kental yang diperoleh memiliki karakteristik sebagai berikut : Tabel II. Hasil Uji Organoleptis Ekstrak Organoleptis Ekstrak Etanol Bunga Telang Ekstrak Etanol Daun Sirsak Bentuk Ekstrak kental Ekstrak kental Warna Biru kehitaman Coklat kehijauan Aroma Beraroma khas Beraroma khas Selain perhitungan rendemen dan uji organoleptis, kedua ekstrak juga dihitung bobot jenis dan susut pengeringannya. Bobot jenis ekstrak etanol bunga telang adalah 0,960 dan bobot jenis ekstrak etanol daun sirsak adalah 0,942. Susut pengeringan ekstrak etanol bunga telang adalah dan susut pengeringan ekstrak etanol daun sirsak adalah. Perhitungan bobot jenis dan susut pengeringan ekstrak dapat dilihat pada lampiran 4 dan Skrining Fitokimia Ekstrak Skrining fitokimia dilakukan terhadap ekstrak etanol bunga telang dan ekstrak etanol daun sirsak dengan menggunakan uji KLT (Kromatografi Lapis Tipis). KLT merupakan teknik pemisahan yang memisahkan komponen berdasarkan perbedaan migrasi dan distribusi senyawa atau ion-ion dalam fase yang berbeda, yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam yang digunakan pada penelitian ini yaitu plat silika GF254 dan fase gerak yang digunakan disesuaikan dengan senyawa yang diidentifikasi. Skrining fitokimia bertujuan untuk mengetahui informasi awal golongan senyawa sehingga memudahkan proses pengisolasiannya. Selain itu juga

4 33 bertujuan untuk mengetahui apakah suatu jenis tumbuhan tersebut potensial untuk dimanfaatkan (Harborne, 1987). Hasil yang didapat yaitu bercak atau noda pada plat silika yang sebagian belum terlihat jelas dan sebagian sudah terlihat jelas yang dapat diamati secara visual. Bercak atau noda yang belum terlihat jelas dilakukan pengamatan dibawah sinar UV, apabila masih belum jelas terlihat maka disemprotkan pereaksi yang sesuai dengan senyawa yang diidentifikasi. Berikut hasil dari skrinning fitokimia yang telah dilakukan terhadap golongan senyawa flavonoid, tanin, saponin, antrakinon, terpenoid, dan alkaloid pada ekstrak etanol bunga telang dan ekstrak etanol daun sirsak : Tabel III. Data hasil skrinning fitokimia ekstrak bunga telang No Senyawa Bercak warna yang muncul Hasil Uji Teori Gambar Kesimpulan 1 Flavonoid Kuning kehijauan Kuning Kehijauan 2 Tanin Ungu Ungu 3 Saponin Biru-violet Biru-violet, hijau fluoresensi 4 Antrakinon Merah 5 Terpenoid Orange Coklatkemerahan Coklatkemerahan; violet-orange 6 Alkaloid Kuningkecoklatan Orangekecoklatan

5 34 Tabel IV. Data hasil skrinning fitokimia ekstrak daun sirsak No Senyawa Bercak warna yang muncul Hasil Uji Teori Gambar Kesimpulan 1 Flavonoid Kuningkehijauan Orange-kuning, kuning Kehijauan 2 Tanin Ungu Ungu 3 Saponin Hijau fluoresensi Biru-violet, hijau fluoresensi 4 Antrakinon Coklatkemerahan Merah 5 Terpenoid Violetorange Coklatkemerahan; violet-orange 6 Alkaloid Kuningkecoklatan Orangekecoklatan Dari tabel diatas dapat diketahui bahwa ekstrak etanol bunga telang dan ekstrak etanol daun sirsak keduanya positif mengandung golongan senyawa flavonoid, tanin, saponin, antrakinon, terpenoid, dan alkaloid Metode Uji Antioksidan Pada penelitian ini metode yang digunakan untuk menentukan kadar antioksidan ekstrak adalah metode DPPH. DPPH atau 1,1-diphenyl-2- picrylhidrazil (α,α-diphenyl-β-picrylhidrazil) merupakan suatu radikal bebas yang stabil dan tidak membentuk dimer akibat delokalisasi dari elektron bebas pada seluruh molekul. Delokalisasi elektron bebas ini juga mengakibatkan terbentuknya warna ungu pada larutan DPPH sehingga bisa diukur absorbansinya pada panjang gelombang sekitar 520 nm. Uji aktivitas antioksidan dengan

6 35 menggunakan metode ini berdasarkan dari hilangnya warna ungu akibat tereduksinya DPPH oleh antioksidan. Pada metode ini tidak diperlukan substrat sehingga memiliki keuntungan, yaitu lebih sederhana dan waktu analisis yang lebih cepat (Antolovich, dkk., 2002) Pengukuran Absorbansi dan Penetapan Nilai IC 50 Sebelum dilakukan pengukuran absorbansi, terlebih dahulu melakukan penetapan operating time dan penetapan panjang gelombang. Operating time merupakan waktu yang tepat untuk pembacaan serapan larutan yang diperiksa pada saat serapannya stabil pada kurva operating time (Rahmani, dkk., 2010). Dari hasil percobaan penetepan operating time menggunakan DPPH 0,004% menunjukkan bahwa serapan stabil mulai menit ke- 30 (lampiran 6). Penetapan panjang gelombang maksimal bertujuan untuk mengetahui besarnya panjang gelombang yang dibutuhkan larutan DPPH 0,004% untuk mencapai serapan maksimal (Rohmani, dkk., 2010). Pengukuran absorbansi menggunakan panjang gelombang maksmium agar serapan yang dihasilkan dapat maksimum juga. Hasil penetapan panjang gelombang maksimal larutan DPPH 0,004% adalah 516 nm (lampiran 7). Dalam penelitian ini, digunakan DPPH 0,004% karena dalam penelitian sebelumnya (Nabilla, 2012) mengenai aktivitas antioksidan ekstrak daun sirsak juga digunakan konsentrasi DPPH sebesar 0,004% sehingga konsentrasi DPPH yang digunakan di acu dari penelitian tersebut.

7 Sampel Tunggal Setelah hasil dari penetapan waktu operating time dan panjang gelombang maksimal diperoleh, semua larutan (blanko, ekstrak bunga telang, ekstrak daun sirsak dan vitamin C) dengan berbagai konsentrasi direaksikan dengan DPPH 0,004% pada suhu kamar selama 30 menit, kemudian diukur absorbansinya menggunakan panjang gelombang maksimum 516 nm. Nilai absorbansi pada semua larutan dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel V. Data absorbansi sampel ekstrak tunggal dan kontrol vitamin C Absorbansi No. Sampel rata-rata 1 DPPH 0,004% 0,2168 0,2153 0,2148 0, EBT 10 0,1475 0,1485 0,1483 0, EBT 50 0,1202 0,1223 0,1218 0, EBT 100 0,0849 0,0843 0,0852 0, EBT 150 0,0652 0,0634 0,0627 0, EBT 250 0,0128 0,0131 0,0125 0, EDS 10 0,1306 0,1304 0,1304 0, EDS 50 0,1031 0,1014 0,1011 0, EDS 100 0,0824 0,0804 0,0788 0, EDS 150 0,0603 0,0597 0,0596 0, EDS 250 0,0191 0,0173 0,0171 0, DPPH 0,004% 0,3322 0,3328 0,3333 0, Vitamin C 2 0,1874 0,1872 0,1869 0, Vitamin C 4 0,1682 0,1682 0,1683 0, Vitamin C 6 0,1499 0,1485 0,1474 0, Vitamin C 8 0,1194 0,1187 0,1183 0, Vitamin C 10 0,0868 0,0867 0,0866 0,0867 Setelah didapat nilai absorbansi pada tiap konsentrasi baik untuk sampel bunga telang, daun sirsak, maupun vitamin C, dilanjutkan dengan penghitungan (%) aktivitas antioksidan (lampiran 8).

8 % aktivitas antioksidan 37 Tabel VI. Data (%) aktivitas antioksidan sampel ekstrak tunggal dan kontrol vitamin C No. Sampel (%) Aktivitas Antioksidan 1 EBT 10 31, EBT 50 43, EBT , EBT , EBT , EDS 10 39, EDS 50 52, EDS , EDS , EDS , Vitamin C 2 43, Vitamin C 4 49, Vitamin C 6 55, Vitamin C 8 64, Vitamin C 10 73,9456 Untuk menganalisa apakah ekstrak bunga telang dan ekstrak daun sirsak mempunyai aktivitas antioksidan, digunakan persamaan regresi linier untuk mencari nilai IC konsentrasi () ekstrak etanol bunga telang y = 0,2587x 31,06 R² = 0,9904 ekstrak etanol daun sirsak y = 0,2108x 40,176 R² = 0,9902 Gambar 3. Persamaan regresi linier sampel ekstrak tunggal

9 % Aktivitas Antioksidam y = 3,7619x 34,786 R² = 0, Konsentrasi Vitamin C () Gambar 4. Persamaan regresi linier kontrol vitamin C. Menghitung nilai IC 50 dapat dilakukan dengan perhitungan menggunakan persamaan regresi linier (lampiran 9) yang telah diperoleh pada tabel diatas dan juga dapat dilakukan dengan analisis probit menggunakan SPSS (lampiran 10, 11, 12). Dari hasil analisis probit didapatkan nilai IC 50 dari masing-masing sampel yaitu : Tabel VII. Data nilai IC 50 sampel ekstrak tunggal No Bahan Nilai IC 50 1 Ekstrak etanol bunga telang 70,93 2 Ekstrak etanol daun sirsak 48,49 3 Vitamin C 4,04 Berdasarkan hasil analisis probit, ekstrak etanol bunga telang merupakan antioksidan kuat dengan nilai IC 50 70,93, ekstrak etanol daun sirsak merupakan antioksidan yang sangat kuat denga nilai IC 50 48,49, dan vitamin C merupakan antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC 50 4,04. Dimana sampel dinyatakan sebagai antioksidan sangat kuat jika nilai IC 50 < 50 g/ml, kuat jka nilai IC g/ml, sedang jika nilai IC g/ml dan

10 39 lemah jika nilai IC g/ml dan dinyatakan tidak aktif jika mempunyai nilai IC 50 > 200 g/ml (Molyneux, 2004) Sampel Kombinasi Setelah IC 50 dari larutan sampel tunggal diketahui untuk pengukuran absorbansi sampel kombinasi dibuat larutan dengan konsentrasi ½ IC 50 dan ¼ IC 50. Dalam pembuatan larutan sampel kombinasi, nilai IC 50 yang dibuat acuan adalah nilai IC 50 sampel larutan tunggal hasil analisis probit menggunakan SPSS karena hasil analisis SPSS memberikan informasi yang lebih akurat dengan memperlakukan missing data secara tepat. Larutan tersebut kemudian direaksikan dengan DPPH 0,004% selama 30 menit dan diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometri UV-Vis dengan panjang gelombang 516 nm. Setelah didapat nilai absorbansi pada tiap konsentrasi baik untuk sampel bunga telang, daun sirsak, maupun vitamin C, dilanjutkan dengan menghitung (%) aktivitas antioksidan (lampiran 13). No. Tabel VIII. Data absorbansi dan (%) aktivitas antioksidan sampel ekstrak kombinasi Sampel Ekstrak Absorbansi (%) Ratarata Aktivitas Antioksidan 1 ¼ IC 50 (12 ) Bunga telang 0,1399 0,1393 0,1392 0, , ½ IC 50 (24 ) Bunga telang 0,1304 0,1304 0,1303 0, , ¼ IC 50 (18 ) Daun sirsak 0,1298 0,1297 0,1295 0, , ½ IC 50 (36 ) Daun sirsak 0,1157 0,1149 0,1148 0, , ¼ IC 50 (12 ) bunga telang ¼ IC 50 (18 ) daun sirsak 0,1246 0,1242 0,1241 0, , ½ IC 50 (24 ) bunga telang ¼ IC 50 (18 ) daun sirsak 0,1123 0,1122 0,1116 0, , ¼ IC 50 (12 ) bunga telang ½ IC 50 (36 ) daun sirsak 0,1128 0,1121 0,1127 0, , ½ IC 50 (24 ) bunga telang ½ IC 50 (36 ) daun sirsak 0,1109 0,1104 0,1108 0, ,6708

11 40 Untuk menganalisa apakah kombinasi dari ekstrak bunga telang dan ekstrak daun sirsak mempunyai aktivitas antioksidan yang sinergis, perhitungan nilai IC 50 dari % peredaman sampel kombinasi dihitung dengan mengaplikasikan kedalam persamaan regresi linier sampel tunggal (lampiran 14). Hasil dari perhitungan tersebut dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel IX. Nilai IC 50 sampel ekstrak kombinasi No Bahan Nilai IC 50 Berdasarkan aplikasi regresi linier sampel tunggal ekstrak bunga telang 1 ¼ IC 50 (12 ) bunga telang ¼ IC 50 (18 ) daun sirsak 43,7 2 ½ IC 50 (24 ) bunga telang ¼ IC 50 (18 ) daun sirsak 65,7 3 ¼ IC 50 (12 ) bunga telang ½ IC 50 (36 ) daun sirsak 64,8 4 ½ IC 50 (24 ) bunga telang ½ IC 50 (36 ) daun sirsak 68,1 Berdasarkan aplikasi regresi linier sampel tunggal ekstrak daun sirsak 5 ¼ IC 50 (12 ) bunga telang ¼ IC 50 (18 ) daun sirsak 10,4 6 ½ IC 50 (24 ) bunga telang ¼ IC 50 (18 ) daun sirsak 37,4 7 ¼ IC 50 (12 ) bunga telang ½ IC 50 (36 ) daun sirsak 36,3 8 ½ IC 50 (24 ) bunga telang ½ IC 50 (36 ) daun sirsak 40,3 Berdasarkan tabel diatas kombinasi dari ekstrak etanol bunga telang dan ekstrak etanol daun sirsak memiliki antioksidan yang relatif sangat kuat karena >50% nilai IC 50 sampel kombinasi masuk kedalam kategori antioksidan sangat kuat (nilai IC 50 < 50 g/ml). Untuk sampel kombinasi tidak hanya dihitung nilai IC 50 nya tetapi dhitung nilai CI (Combination Index) juga. Niali CI dihitung untuk mengetahui efek sinergisme dari sampel kombinasi tersebut. Perhitungan CI dapat dilihat pada lampiran 15 Hasil dari perhitungan nilai CI sebagai berikut :

12 CI (Combination Index) 41 Tabel X. Nilai CI kombinasi ekstrak etanol bunga telang dan ekstrak etanol daun sirsak No Bahan Nilai CI 1 ¼ IC 50 bunga telang, ¼ IC 50 daun sirsak 1,57 2 ½ IC 50 bunga telang, ¼ IC 50 daun sirsak 0,87 3 ¼ IC 50 bunga telang, ½ IC 50 daun sirsak 0,94 4 ½ IC 50 bunga telang, ½ IC 50 daun sirsak 1,12 2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 1, Ekstrak Daun Sisak 0,8692 1,1244 0, Gambar 5. Grafik nilai CI Nilai CI yang diperoleh dapat diinterpretasikan melalui tabel parameter nilai CI berikut ini : Tabel XI. Parameter nilai CI (Reynold and Maurer, 2005) Nilai CI Kesimpulan <0,1 Sinergis sangat kuat 0,1-0,3 Sinergis kuat 0,3-0,7 Sinergis 0,7-0.9 Sinergis ringan-sedang 0,9-1,1 Mendekati additif 1,1-1,45 Antagonis ringan-sedang 1,45-3,3 Antagonis >3,3 Antagonis kuat-sangat kuat

13 42 Berdasarkan hasil yang diperoleh, nilai CI yang optimum pada kombinasi ½ IC 50 (36 ) ekstrak etanol bunga telang dengan ¼ IC 50 (12 ) ekstrak etanol daun sirsak yaitu CI = 0,87 serta kombinasi ¼ IC 50 (18 ) ekstrak bunga telang dengan ½ IC 50 (24 ) ekstrak daun sirsak yaitu CI = 0,94. Sedangkan untuk kombinasi ½ IC 50 (36 ) ekstrak bunga telang dengan ½ IC 50 (24 ) ekstrak daun sirsak serta kombinasi ¼ IC 50 (18 ) ekstrak bunga telang dengan ¼ IC 50 (12 ) ekstrak daun sirsak memiliki nilai CI yang kurang optimum yaitu masing masing sebesar 1,12 dan 1,57. Meskipun tidak semua konsentrasi dari kombinasi kedua ekstrak menunjukkan nilai CI yang optimum, namun dapat dikatakan bahwa kombinasi dari kedua ekstrak tersebut memiliki efek sinergis karena 50% dari hasil menunjukkan hasil yang sinergis. Setelah diperoleh hasil pengolahan data dari sampel ekstrak tunggal dan sampel ekstrak kombinasi, maka dapat dibuat grafik perbandingan % aktivitas antioksidan dari vitamin C, sampel ekstrak tunggal, dan sampel ekstrak kombinasi.

14 % Aktivitas Antioksidan , ,444 31, , ,052647,820748, , , , vit C 2 Vit C 4 EBT 10 EDS 10 EBT 12 EDS 18 EBT 12 EDS 36 EBT 24 EDS 18 EBT 24 EDS 36 EBT 50 EDS 50 Gambar 6. Grafik perbandingan % Aktivitas Antioksidan antara kontrol vitamin C, sampel ekstrak tunggal dan sampel ekstrak kombinasi Grafik diatas menunjukkan bahwa sampel ekstrak kombinasi memiliki % aktivitas antioksidan yang mendekati 50% yang berarti kombinasi kedua ekstrak tersebut sangat berpotensi dalam menghambat aktivitas radikal bebas (DPPH). dari grafik juga dapat dilihat bahwa % aktivitas antioksidan yang optimum pada kombinasi ½ IC 50 (24 ) ekstrak bunga telang dengan ½ IC 50 (36 ) ekstrak daun sirsak yaitu % aktivitas antioksidan = 48,67%. Meskipun % aktivitas antioksidan dari sampel ekstrak kombinasi lebih kecil dibandingkan dengan sampel ekstrak tunggal, namun konsentrasi dari ekstrak kombinasi jauh lebih kecil dibandingkan dengan konsentrasi dari ekstrak tunggal. Hal tersebut menunjukkan bahwa ekstrak kombinasi dengan konsentrasi yang jauh lebih kecil mampu menunjukkan % aktivitas antioksidan yang hampir sama dengan ekstrak daun sirsak tunggal 50.

15 44 Oleh karena itu, dapat dikatakan bahwa kombinasi ½ IC 50 ekstrak bunga telang dengan ½ IC 50 ekstrak daun sirsak menunjukkan hasil yang lebih baik dalam menghambat aktivitas radikal bebas (DPPH) dibandingkan dengan ekstrak tunggalnya. Selain itu, kombinasi ½ IC 50 ekstrak bunga telang dengan ½ IC 50 ekstrak daun sirsak menunjukkan % aktivitas antioksidan yang hampir setara dengan % aktivitas antioksidan dari vitamin C 4.