OPTIMASI FASE GERAK, LAJU ALIR DAN SUHU KOLOM UNTUK ANALISIS METFORMIN HCl DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

Transkripsi

1 OPTIMASI FASE GERAK, LAJU ALIR DAN SUHU KOLOM UNTUK ANALISIS METFORMIN HCl DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) Disusun oleh : ANISA MIRRAH HAFIZHAT PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO PURWOKERTO 2017

2 OPTIMASI FASE GERAK, LAJU ALIR DAN SUHU KOLOM UNTUK ANALISIS METFORMIN HCl DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) Disusun oleh : ANISA MIRRAH HAFIZHAT PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO PURWOKERTO 2017 i

3 ii

4 iii

5 iv

6 PERSEMBAHAN Atas anugerah terindah dari Allah SWT yang tidak ternilai hingga terciptalah sebuah karya sederhana yang ingin penulis persembahkan kepada : Kedua orangtua ku, Ibu Iin dan Ayah Tirtayana, yang telah memberikan dukungan, kasih sayang, semangat serta do a yang selalu dipanjatkan untukku Adikku Mughni Nurul Huda dan Fitry Rahmawaty yang telah memberikan semangat dan keceriaan canda tawa serta do a yang selalu dipanjatkan untukku Partner Seperjuangan KCKT Agnes P yang telah memberikan bantuan, dukungan, semangat, bimbingan serta arahan dari mulai awal penelitian hingga selesai, semoga kita sukses selalu Tim Praktikum Terheboh (Dian, Nindya, Zitta, Lupi, Amel, Ridwan) yang telah memberikan semangat, dukungan dan keceriaan canda tawa, semoga kita sukses selalu Daffa SQUAD (Rianty, Witar, Neno, Ani, Yanah, Atika, Aisyah, Ummah) yang telah membantu, memberikan semangat, dukungan, do a serta keceriaan canda tawa, semoga kita sukses selalu Teman-teman Farmasi 2013 Universitas Muhammadiyah Purwokerto yang telah memberikan banyak arti, kenangan, keceriaan canda tawa dan pelajaran selama menimba ilmu, semoga kita semua sukses selalu v

7 MOTTO Barangsiapa bertawakal kepada Allah, niscaya Allah akan memberikan mencukupkan (keperluan)nya, sesungguhnya Allah melaksanakan urusan (yang dikehendaki)-nya. (QS. Ath-Thalaq: 3). Waktu itu bagaikan pedang, jika kamu tidak memanfaatkannya menggunakan untuk memotong, ia akan memotongmu (menggilasmu) (H.R. Muslim) Jangan mundur karena masalah sepele, karena semua masalah pasti ada jalannya dan Allah selalu bersama di dalam hati kita (Anisa) vi

8 KATA PENGANTAR Bismillahirohmanirohim Alhamdulillahirobbil alamin, segala puji bagi Allah SWT. Karena dengan petunjuk dan pertolongannya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul optimasi fase gerak, laju alir dan suhu kolom untuk analisis metformin HCl dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) sebagai salah satu syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto. Penulis menyadari dalam penyusunan skripsi ini masih banyak kekurangan, oleh sebab itu kritik dan saran yang membangun penulis harapkan untuk perbaikan di masa yang akan datang. Penulis mengucapkan banyak terima kasih atas segala bantuan, bimbingan, serta kerjasama dengan berbagai pihak yang terkait dalam penyusunan skripsi ini, karena terselesaikannya skripsi ini tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terimakasih kepada: 1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H.,M.H., selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto 2) Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi yang telah memimpin keseluruhan proses mengajar ditempat penulis menuntut ilmu. Selaku pembimbing satu yang dengan sabar dan perhatian membimbing penulis serta memberikan koreksi dan masukkan yang sangat berguna bagi kesempurnaan skripsi ini. 3) Dr. Pri Iswati Utami, M.Si., Apt selaku pembimbing dua yang dengan sabar dan perhatian membimbing penulis serta memberikan koreksi dan masukkan yang sangat berguna bagi kesempurnaan skripsi ini. 4) Dr. Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M. Si dan Arif Budiman, MPH., Apt selaku penguji yang telah memberikan saran dan masukan yang sangat berguna bagi kesempurnaan skripsi ini. 5) Rochmadi Budi S, A.Md selaku laboran Biologi Farmasi yang telah berbagi ilmu, memberikan motivasi dan arahan dalam menyelesaikan penelitian ini. vii

9 6) Segenap staf pengajar Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto yang memberikan ilmu dan pengarahan dari awal perkuliahan sampai selesainya skripsi. viii

10 ix

11 RIWAYAT HIDUP Nama : Anisa Mirrah Hafizhat Tepat, Tanggal Lahir : Bandung, 31 Agustus 1995 Nama Orang Tua : Tirtayana (Ayah) Iin (Ibu) Pendidikan SD N 3 Banjar SMP N 1 Banjar SMA N 1 Banjar Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Purwokerto Pengalaman 2014 Asisten praktikum Kimia Farmasi Dasar 2014 Asisten praktikum Kimia Organik II 2014 Asisten praktikum Kimia Analisis 2015 Asisten praktikum Farmasi Fisika II 2015 Experience and Cultural Exchange at Faculty of Pharmaceutical Sciences, Khon Kaen University, Thailand 2016 Asisten praktikum Fitokimia 2016 Asisten praktikum Analisis Farmasi 2017 Asisten Biofarmasetika 2017 Asisten Farmakoterapi II 2017 Asisten Analisis Makanan dan Kosmetik Penghargaan 2015 Penerima Beasiswa PPA DIKTI 2016 Penerima dana hibah PKM-P DIKTI (Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Pegagan Terhadap Bakteri Escherichia coli, Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi) Organisasi BEM Fakultas Farmasi Kabinet Matahari (Sekretaris) DEMA Fakultas Farmasi (Sekretaris) x

12 DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i HALAMAN PERSETUJUAN... ii HALAMAN PENGESAHAN... iii HALAMAN PERNYATAAN... iv PERSEMBAHAN... v MOTTO... vi KATA PENGANTAR... vii RIWAYAT HIDUP... ix DAFTAR ISI... x DAFTAR TABEL... xii DAFTAR GAMBAR... xiii DAFTAR LAMPIRAN... xiv ABSTRAK... xvi ABSTRACT... xvii BAB I. PENDAHULUAN... 1 A. Latar Belakang... 1 B. Perumusan Masalah... 2 C. Tujuan Penelitian... 3 D. Manfaat Penelitian... 3 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA... 4 A. Penelitian Terdahulu... 4 B. Landasan Teori Metformin HCl Kromatografi Cair Kinerja Tinggi... 5 a. Teori Dasar Kromatografi Cair Kinerja Tinggi... 5 b. Kegunaan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi... 6 c. Komponen Kromatografi Cair Kinerja Tinggi... 7 d. Fase Diam pada Kromatografi Cair Kinerja Tinggi xi

13 e. Fase Gerak pada Kromatografi Cair Kinerja Tinggi f. Elusi Gradien dan Isokratik g. Jenis Pemisahan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi h. Proses Kromatografi Cair Kinerja Tinggi i. Kelebihan dan Keterbatasan KCKT j. Parameter Kromatografi k. Metode Kuantifikasi C. Kerangka Konsep BAB III. METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian B. Variabel Penelitian C. Waktu dan Tempat Penelitian D. Bahan dan Alat E. Tahap Penelitian F. Analisis Data BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Kondisi Kromatografi Penentuan Waktu Retensi Analit Optimasi Fase Gerak a. Optimasi Fase Gerak Dapar fosfat ph 7 dan Asetonitril b. Optimasi Fase Gerak Dapar fosfat ph 4,5 dan Asetonitril Optimasi Laju Alir Optimasi Suhu Kolom BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan B. Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN xii

14 DAFTAR TABEL Halaman Tabel 3.1 Tabel Optimasi Perbandingan Komposisi dan ph Fase Gerak Tabel 3.1 Kondisi Pengukuran KCKT Tabel 4.1 Hasil Konsentrasi Metformin HCl 10, 50 dan 100 μg/ml Tabel 4.2 Hasil Optimasi Perbandingan Komposisi Dapar Fosfat ph 7 dengan asetonitril Tabel 4.3 Hasil Optimasi Fase Gerak ph 4,5, Laju Alir dan Suhu Kolom Tabel 4.4 Nilai N dan HETP dari Berbagai Optimasi Laju Alir xiii

15 DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1 Struktur Metformin HCl... 5 Gambar 2.2 Diagram Blok KCKT... 7 Gambar 2.3. Cara mengukur tr, σt, Wh/2, Wb Gambar 2.4. Menghitung besarnya TF pada kromatogram Gambar 2.5. Kerangka Konsep Gambar 4.1. Gugus Kromofor dan Auksokrom Metformin HCl Gambar 4.2. Spektrum Metformin HCl Gambar 4.3. Kromatogram fase gerak Gambar 4.4. Kromatogram metformin HCl konsentrasi 10, 50, dan 100 μg/ml dengan fase gerak dapar fosfat dan asetonitril Gambar 4.5. Kromatogram metformin HCl dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 7 dan asetonitril (80:20); (70:30); (60:40); dan (50:50) v/v dengan laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Gambar 4.6. Kromatogram metformin HCl dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (95:5); (90:10); dan (85:15) v/v dengan laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Gambar 4.7. Kromatogram metformin HCl dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (85:15) v/v dengan laju alir 0,5; 1; dan 1,5 ml/menit dan suhu 40 o C Gambar 4.8. Kromatogram metformin HCl dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (85:15) v/v dengan laju alir 0,5 ml/menit dan suhu 25C, 35, 40 o C xiv

16 DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Kromatogram larutan metformin HCl konsentrasi 10 μg/ml dengan fase gerak dapar fosfat dan asetonitril Lampiran 2. Kromatogram larutan metformin HCl konsentrasi 50 μg/ml dengan fase gerak dapar fosfat dan asetonitril Lampiran 3. Kromatogram larutan metformin HCl konsentrasi 100 μg/ml dengan fase gerak dapar fosfat dan asetonitril Lampiran 4. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 7 dan asetonitril (80:20), laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Lampiran 5. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 7 dan asetonitril (70:30), laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Lampiran 6. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 7 dan asetonitril (60:40), laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Lampiran 7. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 7 dan asetonitril (50:50), laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Lampiran 8. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (95:5), laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Lampiran 9. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (90:10), laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Lampiran 10. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (85:15), laju alir 1 ml/menit dan suhu 40 o C Lampiran 11. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (85:15), laju alir 0,5 ml/menit dan xv

17 suhu 40 o C Lampiran 12. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (85:15), laju alir 1,5 ml/menit dan suhu 40 o C Lampiran 13. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (85:15), laju alir 0,5 ml/menit dan suhu 25 o C Lampiran 14. Kromatogram metformin HCl perbandingan fase gerak dapar fosfat ph 4,5 dan asetonitril (85:15), laju alir 0,5 ml/menit dan suhu 35 o C xvi

18 OPTIMASI FASE GERAK, LAJU ALIR DAN SUHU KOLOM UNTUK ANALISIS METFORMIN HCl DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) Anisa Mirrah Hafizhat 1, Agus Siswanto 2, Pri Iswati Utami 3 ABSTRAK Metformin HCl merupakan obat antidiabetik golongan biguanida yang berkhasiat memperbaiki sensitivitas insulin. Metode yang dapat digunakan untuk analisis metformin HCl yaitu Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) dengan detektor ultraviolet-visibel pada panjang gelombang 233 nm. Untuk mendapatkan kondisi metformin HCl yang optimal maka perlu dilakukan optimasi metode KCKT yang digunakan. Optimasi yang dilakukan yaitu perbandingan komposisi fase gerak dan laju alir serta optimasi suhu kolom. Fase diam yang digunakan adalah kolom C-18 (Octadesyl silane) Puroshper STAR (150x4,6 mm) ukuran partikel 5 µm. Fase gerak yang dioptimasi berupa campuran dapar fosfat 0,02 M ph 7 dan 0,1 M ph 4,5 dengan asetonitril. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemisahan metformin HCl optimum diperoleh dengan fase gerak campuran dapar fosfat 0,1 M ph 4,5 dan asetonitril (85:15, v/v) elusi secara gradien dengan laju alir 0,5 ml/menit dan suhu kolom 40 0 C. Kata kunci: KCKT, Metformin HCl, Fase Gerak, Laju Alir, Suhu Kolom xvii

19 OPTIMIZATION OF MOBILE PHASE, FLOW RATE AND COLUMN TEMPERATURE FOR ANALYSIS OF METFORMIN HCl WITH HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) Anisa Mirrah Hafizhat 1, Agus Siswanto 2, Pri Iswati Utami 3 ABSTRACT Metformin is a biguanide antihyperglycemic agent used for improve insulin sensitivity. Analysis method using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) with ultraviolet-visible detector was set in 233 nm. To get the optimum condition of analysis, it is important to optimization the HPLC method. It is necessary to do mobile phase, flow rate and column temperature optimization. The stationary was used column C-18 (Octadesyl silane) merck Puroshper STAR (150x4,6 mm) particle size 5µm. Optimization of mobile phase composition were 0.02 M phosphate buffer ph 7 and 0.1 M ph 4.5 with acetonitrile. The results showed that the optimum separation of metformin HCl achieve with composition of mobile phase 0.1 M ph 4.5 and acetonitrile (85: 15, v/v) with a gradient elution and 0.5 ml / minute flow rate and column temperature of 40 0 C. Keywords: HPLC, Metformin HCl, Mobile Phase, Flow Rate, Column Temperature xviii