THE COMPARITION OF MOTILITY AND PROPORTION OF SEXING AND WITHOUT SEXING SPERMS OF ONGOLE CROSS-BRED BULL

Transkripsi

1 PERBANDINGAN MOTILITAS DAN PROPORSI SPERMATOZOA SEXING DAN TANPA SEXING PADA SEMEN SAPI PERANAKAN ONGOLE (PO) Prinsner Umbu Njukambani, Enike Dwi Kusumawati, Waluyo Edi Susanto Fakultas Peternakan, Universitas Kanjuruhan Malang ABSTRAK Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui perbandingan motilitas dan proporsi jenis kelamin dan tanpa sperma jenis kelamin sapi jantan yang dibiakkan silang. Metode yang digunakan adalah laboratorium penelitian dengan metode kepadatan gradien metode seks albumen putih telur dan tanpa hubungan seks. Hasil penelitian menunjukkan bahwa motilitas sperma tanpa jenis kelamin dan lapisan atas setelah proses seksing memiliki pengaruh yang signifikan (p <0,01) dan lebih baik dari pada lapisan bawah. Persentase motilitas tanpa proses seksing adalah 60,05%, lapisan atas setelah proses seksing 56,90% dan lapisan bawah adalah 49,75%. Partisi sperma tinggi X dicapai pada lapisan atas (77,5%) dan proporsi sperma Y yang paling tinggi dicapai pada lapisan bawah (77,1%). Dapat disimpulkan bahwa motilitas sperma tanpa hubungan seks dan lapisan atas setelah proses seksing memiliki efek yang signifikan (p <01) dan lebih baik dari pada lapisan bawah. Lapisan atas memiliki proporsi sperma X paling tinggi (p <0,05) dan lapisan bawah memiliki proporsi sperma Y tertinggi (p <0,01). Kata Kunci: motility, proporsi sperma, sexing sapi ongole THE COMPARITION OF MOTILITY AND PROPORTION OF SEXING AND WITHOUT SEXING SPERMS OF ONGOLE CROSS-BRED BULL The purpose of this research was to know about the comparison of motility and proportion of sexing and without sexing sperms of cross-bred ongole bull. The method is a research laboratory using density gradient of egg white albumen sexing method and without sexing. The result of this study showed that sperm motility of without sexing and top layer after sexing process has significant effect (P <0,01) and better than bottom layer. The percentage motility of without sexing process was 60,05%, top layer after sexing process was 56,90% and bottom layer was 49,75%. 1

2 Higest X sperms proportion achieved at top layer (77,5%) and higest Y sperm proportion achieved at bottom layer (77,1%). It can be concluded that the sperm motility without sexing and top layer after sexing process has significant effect (P<0,01) and better than bottom layer. The top layer has higest (P<0,05) of X sperm proportion and the bottom layer has higest (P<0,01) of Y sperm proportion. Key Words: Motility, proportion of sperms, sexing filial ongole, bull PENDAHULUAN Teknologi Inseminasi Buatan telah terbukti efektif dalam penyebarluaskan bibit pejantan maupun betina dengan genetik materi unggul. Inseminasi Buatan merupakan tekologi reproduksi ternak yang sudah dikembangkan sejak lama, inseminasi buatan merupakan teknologi reproduksi ternak yang paling berhasil dan dapat diterima secara luas oleh masyarakat dikarenakan biaya yang dibutuhkan murah tetapi mempunyai keefektifan dalam menyebarluaskan bibit unggul. Perkembangan teknologi dibidang reproduksi ternak terus dilakukan demi menyempurnakan dan meningkatkan produktifitas ternak yang mempunyai potensi besar dalam penyediaan daging yang tinggi maka dilakukanlah pengembangan dibidang teknologi reproduksi ternak, salah 2

3 satunya rekayasa pemisahan kromosom sel spermatozoa X dan Y atau sering disebut sexing spermatozoa yang bertujuan dapat menghasilkan keturunan-keturunan dengan jenis kelamin yang sesuai harapan nantinya. Tehnik pemisahan kromosom sel spermatozoa X dan Y ini dapat dilakukan dengan berbagai cara dan bahan percobaan yang sering dilakukan antara lain dengan menggunakan metode gradien densitas albumin putih telur, sentrifugasi gradian densitas percoll, filtrasi dengan metode sephadex kolom, manipulasi hormonal, antigen H-Y, isoelektric fucusing, eloktroforesis dan pemisahan perbedaan muatan deoxyrybo nucleic acid (DNA) (Hafez, 2008). Susilawati (2003) menyatakan tentang pembuahan sel telur, sel spermatozoa yang mempuyai kromosom X jika membuahi sel telur akan menghasilkan embrio betina, sedangkan spermatozoa yang mempunyai kromosom Y jika membuahi sel 3

4 telur akan menghasilkan embrio jantan. Secara harfiah bentuk sel spermatozoa Y mempunyai ukuran kepala lebih kecil, lebih ringan dan ukurannya lebih pendek bila dibandingkan bentuk sel spermatozoa X. Spermatozoa hasil sexing dengan menggunakan sentrifugasi gradien densitas percoll juga mempunyai trend sama dengan tanpa sexing dan yang pada populasi spermatozoa Y yang spermatozoa utuh lebih sedikit dibandingkan yang reaksi akrosom atau tidak adanya tudung akrosom, trend yang sama terjadi pula pada perlakuan sexing dengan metode sedimentasi albumen putih telur, hal tersebut menunjukan bahwa spermatozoa lebih rentan dalam lepasnya tudung akrosom dibandingkan spermatozoa X, atau kemungkinan efek dari sentrifugasi lebih terasakan spermatozoa Y dibandingkan spermatozoa X (Susulawati, 2014). Sentrifugasi dan proses pembekuan dapat mengakibatkan stres pada sel spermotozoa yang sering menghasilkan kerusakan membran serta penurunan motilitas dan viabilitas spermatozoa (Nishizona et al., 2004 dan Gadea, 2005). Untuk dapat mempertahankan kualitas semen agar tetap baik setelah sentrifugasi, selama pendinginan maupun pembekuan maka diperlukan pengencer dan pembekuan 4

5 yang tepat, sehingga spermatozoa tidak mengalami cold shock. Pada semen segar terdapat 69,16 ± 8,85 spermatozoa yang utuh, hal ini menunjukan bahwa spermatozoa dalam keadaan segar masih banyak tudung akrosom yang utuh. Sedangkan pada semen beku terjadi peningkatan jumlah spermatozoa yang pada ½ kepala berpendar, hal ini menunjukan bahwa pada proses pembekuan mentriger terjadinya reaksi akrosom atau tidak intaknya tudung akrosom, walau hanya sedikit yang mengalami reaksi akrosom (Diliyana, 2014).Pengamatan motilitas massa menggunakan mikroskop cahaya tanpa cover glass pembesaran 100x atau 200x pada suhu yang dijaga konstan 37ºC. Standar penilaian motilitas massa ditentukan berdasarkan penjelasan Hafez (2008). Gerakan spermatozoa dalam satu kelompok yang cenderung bergerak cepat secara bersama atau kelompok kesatu arah membentuk gelombang besar atau tipis. Kriteria motilitas massa spermatozoa yaitu, 0,+ sampai +++. Standar minimal spermatozoa yang memenuhi syarat untuk diproses lebih lanjut adalah ++ (Hafez, 2008; Susilawati, 2011). Motilitas individu sangat penting dilakukan untuk mengetahui kualitas semen segar. Motilitas tinggi dari semen akan 5

6 memberikan peluang terjadinya fertilisasi lebih besar dibandingkan dengan semen motilitas rendah. Persentase spermatozoa motil yang bergerak progresif dapat digunakan sebagai ukuran kesanggupan untuk membuahi ovom (Setiadi, 2002). Susilawati, (2002 a ) melaporkan bahwa penggunaan putih telur cukup efektif sebagai bahan pemisahan spermatozoa X dan Y dengan menghasilkan spermatozoa Y proporsi bahwa sebesar 75,8 ± 13%; demikian pula hasil pemisahan spermatozoa dengan menggunakan gradien putih telur yang di IB-kan pada sapi PO memperoleh kebuntingan 40% (Susilawati, 2002 b ). Sapi Peranakan Ongole (PO) juga banyak dipelihara, potensi sapi Peranakan Semen yang digunakan yaitu semen segar yang berasal dari Sapi PO yang dipelihara di Loka Penelitian Sapi Potong Grati Pasuruan dengan kriteria motilitas massa 2+, motilitas individu 70%. Frekuensi penampungan dua kali per minggu untuk setiap individu. Metode penelitian yang digunakan yaitu metode percobaan. Percobaan dilakukan menggunakan sexing gradien densitas albumin putih telur dengan pengencer Adromed pada sapi Peranakan Ongole (PO). 6

7 Ongole (PO) yang berbeda-beda disebabkan oleh pengaruh lingkungan yang bervariasi. Keunggulan sapi PO adalah daya adaptasi yang tinggi terhadap perubahan atau tantangan lingkungan (Mariyono, 2009). Berdasarkan uraian diatas maka diperlukan penelitian tentang perbandingan motilitas dan proporsi spermatozoa sexing dan tanpa sexing pada semen sapi Peranakan Ongole (PO). MATERI DAN METODE Lokasi penelitian berada di Loka Penelitian Sapi Potong Grati Pasuruan mulai 4 Desember Januari Gambar 2. Tahap Penelitian Variabel yang diamati adalah perbandingan motilitas dan proporsi spermatozoa X yang diasumsikan terletak pada lapisan bagian atas dan spermatozoa Y yang diasumsikan terletak pada lapisan bawah setelah proses sexing dan tanpa sexing menggunakan gradien densitas albumin putih telur dengan pengencer AndroMed. 7

8 Evaluasi Semen makroskopis dan mikroskopis Sexing Penampungan Tanpa Sexing Perhitungan Motilitas dan Proporsi Spermatozoa X dan Y menggunakan chi-squre terlebih dahulu agar lebih diketahui bahwa semen segar yang akan digunakan dalam penelitian ini memiliki nilai rasio yang seimbang antara spermatozoa X dan spermatozoa Y yaitu 50:50 (Sastrosupadi, 2000, Suciptawati, 2010). HASIL DAN PEMBAHASAN Evaluasi semen segar dapat dilakukan dalam waktu singkat setelah proses penampungan semen segar yang terdiri dari pemeriksaan secara makroskopis dan mikroskopis. Pemeriksaan Parameter Rataan ± SD Volume (ml) 5,00 ± 1,5 Warna Putih Kekuningan ph 7 ± 0,00 Motilitas Individu (%) 70 ± 0,00 Motilitas Massa ++ Viabilitas (%) 92,12 ± 1,42 Abnormalitas (%) 5,54 ± 3.59 Konsentasi (10 6 /ml) 1437,50 ± 450,31 Spermatozoa X (%) 50,4 ± 1,17 Spermatozoa Y (%) 49,6 ± 1,17 secara Data motilitas spermatozoa dianalisis menggunakan ANOVA dengan Rancangan Acak Kelompok. Sedangkan mengetahui proporsi spermatozoa X dan Y dianalisis menggunakan uji T berpasangan, untuk mengetahui proporsi spermatozoa X dan Y setelah proses sexing. Data diproses 8

9 makroskopis meliputih volume, warna, ph dan konsentrasi sedangkan pemeriksaan secara mikroskopis meliputi persentase motilitas massa dan individu, viabilitas, abnomalitas, konsentrasi spermatozoa, total spermatozoa motil dan proporsi spermatozoa X dan Y. Tabel 2. Hasil Evaluasi Semen Segar 9

10 Berdasarkan hasil evaluasi semen segar secara makroskopis seperti tertera pada Tabel 2 menunjukan nilai ph sebesar 7 dan berwana putih kekuningan. Semen segar dengan ph 7 yang digunakan dalam penelitian ini dapat dikatakan normal karena menurut Garner and Hafez (2008) rata-rata ph semen yang normal adalah 6,4-7,8 dan warna semen segar dalam penelitian ini tidak jauh berbeda dengan hasil penelitian Sianturi (2004) yang menunjukan nilai ph 7 dengan warna putih kekuningan. Salah satu ciri spermatozoa yang berkualitas baik adalah mempunyai gerakan massa dan motilitas progresif. Motilitas spermatozoa dapat diamati menggunakan pengamatan gerak gelombang dan persentase bergerak. Gerak gelombang dapat diamati menggunakan mikroskop dengan perbesaran 100 kali. Setetes semen ditempatkan pada kaca yang telah dihangatkan hingga 37 C dan dilihat gerakan individual yang baik adalah gerakan maju progresif atau gerak aktif maju kedepan. Hasil evaluasi semen segar secara makroskopis pada Tabel 2 menunjukan motilitas massa ++ dan motilitas individu 70%. Dengan demikian bahwa kualitas semen segar yang digunakan sebagai materi penelitian adalah baik, karena berada diatas persyaratan minimal semen yang digunakan 1

11 untuk proses sexing pada tahap selanjutnya. Seperti hasil penelitian Rahman (2007) menunjukkan motilitas massa dan motilitas individu spermatozoa semen segar adalah ++ dengan motilitas individu 71,75%. Semen segar yang digunakan dalam penelitian ini memiliki motilitas yang tinggi, agar spermatozoa mampu menembus gradien densitas albumin putih telur ketika proses sexing dilakukan. Persentase viabilitas spermatozoa semen segar adalah 92,12%. Nilai viabilitas tersebut masih termasuk kisaran normal dan tergolong tinggi seperti hasil penelitian Partiwi (2006) menunjukan persentase viabilitas spermatozoa semen segar 93,5%. Sedangkan hasil pengamatan abnomalitas spermatozoa semen segar adalah 5,54%. Nilai abnomalitas tersebut tergolong rendah karena kurang dari 20% hal ini menunjukkan kualitas semen bagus dan layak untuk proses lebih lanjut baik pembekuan semen ataupun proses sexing (Hafez and Hafez, 2008). Hasil pengamatan abnomalitas ini tidak jauh berbeda dengan hasil penelitian Wijono dan Hartati (2005) dimana nilai abnomalitas spermatozoa semen segar 7,47%. Nilai konsentrasi yang didapatkan dalam penelitian ini adalah 1437,50 x 10 6 /ml yang menunjukkan bahwa nilai konsentrasi tersebut tergolong normal. 1

12 Proporsi spermatozoa X dan Y pada semen segar didapatkan hasil yaitu spermatozoa X sebesar 50,4% dan spermatozoa Y sebesar 49,6%. Hasil tersebut didapatkan dengan cara mengukur besar kepala spermatozoa X adalah spermatozoa yang mempunyai besar kepala diatas rata-rata dan spermatozoa Y adalah spermatozoa yang mempunyai besar kepala dibawah rata-rata (Saili, 1999). Pengamatan proporsi spermatozoa dalam penelitian ini tidak menunjukkan hasil Perlakuan Motilitas (%) Tanpa Sexing Sexing Lapisan Atas Sexing Lapisan Bawah 64,05 ± 3,86 b 56,90 ± 8,23 b 49,75 ± 8,19 a 1

13 (1994) berpendapat bahwa perbandingan spermatozoa X dan Y yang dihasilkan dari proses spermatogenesis pada fase meiosis yang secara normal adalah 1 : 1, sehingga masing-masing besar peluang yang sama untuk membentuk embrio jantan dan embrio betina. Berdasarkan hasil analisa data (Lampiran 1) menunjukkan bahwa persentase motilitas spermatozoa tanpa sexing dan sexing lapisan atas lebih baik dari spermatozoa sexing lapisan bawah (P<0,01) seperti pada Tabel 3 dan Gambar 2. Tabel 3. Motilitas Spermatozoa sexing Lapisan Atas dan Sexing Lapisan Bawah perbandingan 50% spermatozoa X dan 50% spermatozoa Y, tetapi menurut hasil penelitian statistik dengan chi-square menunjukkan bahwa perbandingan 50,4% dan 49,6% dan tidak berbeda nyata (P>0,05) 1

14 Motlititas (%) Tanpa Sexing ,9 49,75 1

15 Sexing Sexing Lapisan Lapisan Perlakuan atau dapat dikatakan hasil pengukuran tersebut sama dengan teori bahwa rasio spermatozoa X dan Y yaitu 50 : 50. Graves 1

16 Atas 1

17 Bawah Gambar 2, menunjukkan bahwa motilitas spermatozoa tanpa sexing sebesar 64,05% sedangkan setelah proses sexing menggunakan gradien densitas albumin putih telur dengan pengencer andromed didapatkan motilitas pada lapisan atas sebesar 56,90% dan lapisan bawah 1

18 didapatkan motilitas sebesar 49,75%. Motilitas sexing lapisan atas sama tingginya dengan tanpa sexing (tidak berbeda). Sehingga hal tersebut menunjukan bahwa motilitas semen sexing lapisan atas kualitasnya sebanding dengan semen tanpa sexing. Dari analisis statistik menunjukkan 1

19 sexing dan tanpa sexing tidak ada perbedaan Motilitas spermatozoa setelah proses sexing menggunakan gradien densitas albumin putih telur dengan pengencer andromed, lapisan atas memiliki rataan persentase motilitas spermatozoa lebih tinggi dibandingkan pada lapisan bawah. Pada lapisan atas diduga spermatozoa X dan pada lapisan bawah diduga sebagai spermatozoa Y seperti tercantum pada Tabel 4. Tingginya motilitas spermatozoa lapisan atas dikarenakan spermatozoa X tidak mampu menembus sampai pada lapisan bawah sehingga energi spermatozoa tetap tinggi. Sedangkan spermatozoa Y yang cenderung lebih kecil ukuran kepalanya sehingga mampu menembus sampai pada lapisan bawah mengakibatkan energi berkurang sehingga motilitasnya menurun seperti pada Tabel 3. Semakin tinggi konsentrasi albumin putih telur menyebabkan viskositas larutan meningkat yang menyebabkan gerak dari spermatozoa lambat dan membutuhkan tenaga extra untuk menembus gradien yang berisi konsentrasi albumin putih telur. Hal ini sesuai pendapat Sianturi (2004) bahwa kesulitan pergerakan spermatozoa untuk menembus gradien akan membutuhkan energi lebih banyak untuk dikeluarkan sehingga berakibat pada penurunan motilitas. Keadaan ini diduga karena 1

20 semakin lama proses inkubasi akan membuat spermatozoa bergerak lebih lama dalam menembus konsentrasi albumin putih telur, hal tersebut berhubungan dengan jumlah penggunaan energi bagi pergerakan spermatozoa. Spermatozoa yang banyak menggunakan energi maka akan menurun pula nilai persentase motilitasnya bahkan tidak bergerak sama sekali (Hafez and Hafez, 2008). Motilitas spermatozoa setelah proses sexing menggunakan gradien densitas albumin putih telur dengan pengencer andromed, lapisan atas memiliki rataan persentase motilitas spermatozoa lebih tinggi dibandingkan pada lapisan bawah. Pada lapisan atas diduga spermatozoa X dan pada lapisan bawah diduga sebagai spermatozoa Y seperti tercantum pada Tabel 4. Tingginya motilitas spermatozoa lapisan atas dikarenakan spermatozoa X tidak mampu menembus sampai pada lapisan bawah sehingga energi spermatozoa tetap tinggi. Sedangkan spermatozoa Y yang cenderung lebih kecil ukuran kepalanya sehingga mampu menembus sampai pada lapisan bawah mengakibatkan energi berkurang sehingga motilitasnya menurun seperti pada Tabel 3. Semakin tinggi konsentrasi albumin putih telur menyebabkan viskositas larutan meningkat 2

21 Proporsi Spermatozoa (%) yang menyebabkan gerak dari spermatozoa lambat dan membutuhkan tenaga extra untuk menembus gradien yang berisi konsentrasi albumin putih telur. Hal ini sesuai pendapat Sianturi (2004) bahwa kesulitan pergerakan spermatozoa untuk menembus gradien akan membutuhkan energi lebih banyak untuk dikeluarkan sehingga berakibat pada penurunan motilitas. Keadaan ini diduga karena semakin Perlakuan lama proses inkubasi akan membuat spermatozoa Proporsi bergerak Spermatozoa lebih (%) lama dalam menembus konsentrasi albumin putih telur, hal tersebut berhubungan X dengan jumlah Y penggunaan Sexing Lapisan Atas 77,5 ± 1,27 22,5 ± 1,27 Sexing energi bagi Lapisan pergerakan Bawah spermatozoa. Spermatozoa yang 22,9 banyak ± 1,4 77,1 ± 1, ,1 22, ,9 X Y 2

22 menggunakan energi maka akan menurun pula nilai persentase motilitasnya bahkan tidak bergerak sama sekali (Hafez and Hafez, 2008). Tabel 4. Proporsi Spermatozoa Lapisan Atas X dan Spermatozoa Lapisan Bawah Y Setelah Sexing Berdasarkan hasil analisis data seperti tercantum pada Tabel 4 menunjukkan bahwa proporsi spermatozoa X dan Y setelah proses sexing menggunakan gradien densitas albumin putih telur dengan pengencer andromed didapatkan spermatozoa X sebesar 77,5% sedangkan pada lapisan bawah didapatkan spermatozoa Y sebesar 77,1%. Lapisan Atas Lapisan Bawah Sexing Pada metode sexing sedimentasi putih telur, persentase spermatozoa Y tertinggi pada 2

23 lapisan bawah, sedangkan spermatozoa X tertinggi pada lapisan atas. Hal ini sesuai 2

24 dengan pendapat Hafez and Hafez (2008) bahwa spermatozoa X lebih besar kepalanya dari pada spermatozoa Y yang memungkinkan spermatozoa Y dapat menembus lapisan bawah dengan pergerakannya. Proporsi spermatozoa X dan Y yang membedakan adalah proporsi spermatozoa X terdapat pada lapisan atas sedangkan spermatozoa Y terdapat pada lapisan bawah. Menurut Hafez (2008) hal ini disebabkan oleh perbedaan massa dan ukuran kepala spermatozoa, yaitu spermatozoa Y lebih kecil daripada spermatozoa X, sehingga berdampak langsung terhadap pergerakan spermatozoa Y yang lebih cepat dan mempunyai daya penetrasi yang lebih tinggi untuk menembus konsentrasi gradien albumin putih telur. Hal ini diduga spermatozoa Y semakin lama waktu inkubasi yang dilakukan akan membuat pergerakan menembus konsentrasi gradien putih telur akan optimal. Pernyataan tersebut sama bagi spermatozoa X yang cenderung lebih banyak proporsinya tetapi pada lapisan yang berbeda yaitu pada lapisan atas. KESIMPULAN DAN SARAN Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa persentase motilitas spermatozoa setelah proses sexing lapisan 10

25 atas dan tanpa sexing lebih baik dibandingkan sexing lapisan bawah. Proporsi spermatozoa X lebih tinggi proporsinya pada lapisan atas, sedangkan spermatozoa Y proporsinya lebih tinggi pada lapisan bawah. Kelemahan dari pengencer andromed tersebut adalah bahannya masih harus import, maka perlu disarankan suatu upaya pencarian metode dengan bahan baku yang ada. a. Disarankan menggunakan spermatozoa X setelah sexing pada lapisan atas dapat digunakan untuk perkembangan pedet betina, dan dapat menghasilkan susu. b. Untuk spermatozoa Y setelah sexing pada lapisan bawah dapat digunakan untuk perkembangan pedet jantan yang nantinya dapat menghasilkan daging. DAFTAR PUSTAKA Anonimus Aplikasi Inseminasi Semen Hasil Sexing Pada Sapi Induk Peranakan Ongole. Prosiding Seminar Nasional Teknology Peternakan dan Veteriner 2005:

26 Astuti, J.M Potensi dan Keragaman Sumber Daya Genetik Sapi Peranakan Ongole (PO). Fakultas Peternakan, Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta. Badan Standarisasi Nasional Semen Beku Sapi SNI Diakses 8 Desember Belitz. H.D., W. Grosch and P. Schieberle Strukture Physical Properties and Camposition Eggs Food Chemistry Brandeis. V,T. And M.T. Manuel Effect of four Method of Sper Preparations and the Motile, Concentration, Morpology and Acrosome Status Samples. Journal of Ass Repro Gen 106: Eddy. E.M the spermatozoa. Physiolagy of Reproduction 3th Editions. Elsevier Inc. All rigt Reserved 1: De Jonge C.J., S.P. Flsherty, A.M. Barness, NJ. Swand and Mathew Failure Of Multitube sperm Swim up for Pre Selection Fertility and sterility 6: Ducha. N Suplementasi Kuning Telur Dalam Pengencer CEP-2 Terhadap Kualitas Intergrtitas Membran Spermatozoa Sapi Limousin Selama Penyimpanan Pada Suhu 4-5 C. Disertai Program Studi Ilmu Ternak. 26

27 Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya. Malang. Feradis Bioteknologi Reproduksi Pada Ternak. Alfabeta. Bandung. Garner DI., Hafez ESE, Spermatozoa and seminal plasma in reproduction in farm animals 7 th edition. Ed by ESE Hafez, and B Hafez Edition Blackwell: Garner. D.L. and E.S.E. Hafez Spermatozoa and seminal plasma. Reproduction in Farm Animals ed by E.S.E. Hafez 7 Th Edition. Blackwell Publishing Profesional press: Graves. J.A.P Mammalian Sex Determining Genes in the Differences Between The Sexes. Cambridge University Press: Ganer. D.L. and E.S.E Hafez Spermatozoa and Seninal Plasma. Reproduction in Farm Animals ed by E.S.E. Hafez 7 thn Edition. Blackwell Publishing Professional USA: Hafez. E.S.E Preservation and Cryopreservation of Gamet and Emberyos. Reproduction in Farm Animal ed by E.S.E. Hafez 7 th Edition. Blacwell Publising Profesional USA: Hafez. E. S. E and B. Hafez X and Y Chromosome Beiring Spermotozoa. Reproduction in farm Animals ed by E.S.E. Hafez 7 th Edition. Blackwell Publishing Professional USA: Li, Chan. E.C.Y., W.D. Powrie and S. Nikai The Chemistry of Eggs and Egg Products. Egg Science and Tecnology. 4 th Edition. The Haworth Press, Inc. New York: Partodihardjo. S Ilmu Reproduksi Hewan. Mutiara Sumber Widya. Jakarta. Pratiwi. W.C., D. Pamungkas, L. Affandy dan Hartati Evaluasi kualitas Spermatozoa Hasil Sexing Pada Kemasan Straw Dingin yang Disimpan Pada Suhu 5ºC Selama 7 Hari. Prosiding Seminar Nasional teknology Peternakan dan verteriner 2006: Pamungkas. D., L. Affandhy, D.B. Wijono dan Hartati Aplikasi Insmanasi Semen hasil Sexing Pada Sapi Induk Peranakan Ongole. Prosiding Seminar Nasional Teknologi dan veteriner 2005: 1-8. Rahmah. Z Perubahan Integritas Membran Spermatozoa Pada Proses Sexing Dengan Metode Sentrifugasi Gradien Densitas Percoll. Tesis ProgramPascasarjana Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Brawijaya. Malang. 27

28 Rahardian. P.P., Wahyuningsih, S., Ciptadi, G The Test Quality of Boar Goat Semen Which Frozen With Mr. Frosty Instrument by Andromed Diluter at the stroge temperature of-45 C. Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya. Saili. T Efektifitas Penggunaan Albumin Sebagai Medium Seperasi Dalam Upaya Mengubah Rasio Alamiah Spermatozoa Pembawa Kromosom X dan Y Pada Sapi. Tesis Program Pascasarjana. Institut Pertanian. Bogor. Saili, T, M.R Toelihere, A. Boediono dan B. Tanppa Keefektifan Albumin Sebagai Media Pemisah Spermatozoa Sapi Pembawa Kromosom X dan Y. Hayati 7.4: Susilawati. T., S.B Sumitro, S. Hardjopranjoto, Y. Mantara dan Nuryadi Pola Kapisitasi Spermatozoa X dan Y Hasil Pemisahan Menggunakan Filtrasi Spahadex dan Sentrifugasi Gradien Densitas Percoll. Jurnal Penelitian Ilmuilmu Hayati 11: Susilawati. T. (2011). Proporsi dan Karakteristik Spermotozoa X dan Y Hasil Seperasi Kolom Albumin. Jurnal Media Peternakan 27.1 : Susilawati. T Sexing Spermatozoa Kambing Peranakan Etawa Menggunakan Gradien Putih Telur. Widya Agrika 10: Susilawati. T Tingkat Keberhasilan Inseminasi Buatan Pada Sapi Peranakan Ongole Menggunakan Semen Beku Hasil Sexing Dengan Gradien Konsentrasi Putih Telur. Jurnal Ilmu Peternakan dan Perikanan Fakultas PeternakanUniversitas Muhammadiyah Malang 20: Susilawati. T Tingkat Keberhasilan Kebuntingan dan Ketepatan Jenis Kelamin Hasil Inseminasi Buatan Menggunakan Semen Beku Sexing Pada Sapi Peranakan Ongole, Animal Production 7.3: Susilawati. T Motilitas dan Proses Pembentukan Semen Segar Menjadi Semen beku Susilawati. T Differential Incorporation of fatty Acid Into and Paroxidative Loss of Fatty Acid From Phospholippid of Human Spermatozoa. Journal Mol Reprod Dev 42: