HASIL DAN PEMBAHASAN. Pemeriksaan semen segar secara makroskopis meliputi volume, warna,

Transkripsi

1 29 IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Karakteristik Semen Segar Pemeriksaan semen segar secara makroskopis meliputi volume, warna, konsistensi, ph dan secara mikroskopis meliputi gerakan massa, konsentrasi sperma, motilitas dan tudung akrosom utuh (TAU). Karakteristik makroskopis dan mikroskopis semen segar kambing PE dapat dilihat pada Tabel 2. Tabel 2. Karakteristik semen segar kambing PE Karakteristik Semen K₁ K₂ K₃ K₄ K₅ Volume (ml) 1 1 1,8 0,8 0,7 Warna Putih Putih Putih Putih Krem susu susu susu susu Bau Anyir Anyir Anyir Anyir Anyir Konsistensi Kental Kental Kental Kental Kental ph 6,5 7,0 7,0 6,8 6,5 Gerakan massa Konsentrasi sperma (juta sel/ml) Motilitas (%) 80,34 83,89 80,51 81,19 79,19 Tudung Akrsom Utuh (%) 86,00 84,00 83,00 86,00 77,00 Keterangan: K = Kambing Hasil pemeriksaan makroskopis didapatkan rentang volume semen segar kambing PE berkisar 0,7-1,8 ml. Volume semen segar tersebut masih dalam kondisi normal karena sesuai dengan standar volume semen kambing yaitu 0,5-1,5 ml per ejakulat (Evans dan Maxwell, 1987) dan 0,8 1,2 ml per ejakulat (Garner dan Hafez, 2000).

2 30 Semen kambing hasil pengamatan pada umumnya berwarna putih susu, namun pada kambing tiga berwarna krem dan bau semen dari kelima kambing yaitu anyir. Warna dan bau tersebut masih dalam kondisi normal karena sesuai dengan pendapat Evan dan Maxwell (1987) warna semen segar pada kambing yang normal adalah putih susu sampai krem kekuningan dan baunya anyir. Konsistensi semen segar kambing PE yang diamati yakni kental. Menurut Toelihere (1993), derajat kekentalan semen berkorelasi positif dengan konsentrasi spermtozoa. Semakin kental cairan semen mengandung semakin banyak spermatozoa. Konsentrasi sperma total yang diperoleh yakni berkisar juta sel/ml. Namun, pada kambing tiga konsentrasi sperma yang diperoleh sedikit lebih rendah dari konsentrasi sperma menurut pendapat Evan dan Maxwell (1987) yakni juta sel/ml dan juta sel/ml (Hafez, 2000). Derajat keasaman (ph) semen segar kambing PE yang diamati yaitu berkisar 6,5-7,0. Hal ini sesuai dengan standar derajat keasaman semen kambing yang dapat diolah menjadi semen beku adalah 6,2 7,2 (Hafez, 1987). Variasi ph ini erat kaitannya dengan kadar asam laktat yang dihasilkan dalam proses akhir metabolisme anaerobik pada sperma (Toelihere, 1993). Gerakan massa yang diperoleh dari kelima kambing yaitu +++ yang diperlihatkan dengan gerakan yang cepat berpindah, dan terbentuk gumpalan tebal dan gelap. Hasil ini menandakan bahwa semen tersebut layak untuk diolah menjadi semen beku. Toelihere (1993) menyatakan bahwa semen yang baik dan memenuhi syarat untuk diproses menjadi semen cair atau semen beku adalah yang memiliki nilai gerakan massa ++ atau +++. Hasil pemeriksaan motilitas spermatozoa pada semen segar didapatkan rentang presentase berkisar 79,19% - 83,89%. Dari angka tersebut memiliki

3 31 tingkat fertilitas yang tinggi dan layak diproses menjadi semen beku (Garner dan Hafez, 1980). Hasil motilitas yang diamati ini sedikit lebih tinggi dari hasil pengamatan Garner dan Hafez (1980) yang menyatakan bahwa semen kambing yang baik memiliki persentase sperma motil antara 60 80%. Presentase TAU semen segar kambing PE berkisar 77,00% - 86,00%. Hasil ini sesuai dengan pengamatan Tambing (1999) pada spermatozoa kambing yang mendapatkan rataan TAU sebesar 79,87 ± 3,64% serta hasil pengamatan Rizal (2002) pada domba garut sebesar 86,74%. Hasil presentase TAU pada penelitian ini tidak dikatakan infertil karena diperoleh lebih tinggi dari 60% dan sesuai dengan pernyataan Rizal (2002) yaitu nilai presentase TAU semen segar yang kurang dai 60% dikategorikan sebagai semen yang infertil. Berdasarkan hasil pemeriksaan secara makroskopis dan mikroskopis semen kambing PE, dapat disimpulkan bahwa semen telah memenuhi syarat dan layak untuk diencerkan atau diolah sebagai semen beku (Evans dan Maxwell, 1987; Toelihere, 1993; Rizal, dkk. 2002) Pengaruh Level Gliserol dalam Pengencer Sitrat-Kuning Telur terhadap Daya Hidup Sperma Kambing PE Post Thawing Daya hidup sperma adalah kemampuan sperma untuk bertahan hidup selama penyimpanan hingga spermatozoa tersebut tidak ada pergerakan lagi. Pengamatan daya hidup didapatkan dari presentase motilitas post thawing yang diamati tiap 3 jam sekali dan apabila motilitas sudah mencapai 20% maka pengamatan dilakukan tiap jam hingga motilitas mencapai 0%. Data hasil penelitian mengenai daya hidup sperma kambing PE sampai motilitas 0% pada setiap perlakuan dapat dilihat pada Tabel 3.

4 32 Tabel 3. Daya hidup sperma kambing PE pada berbagai level gliserol dalam pengencer sitrat-kuning telur Kelompok Perlakuan P₁ P₂ P₃ P₄ P₅...Jam... K K K K K Total Rata-rata 13,4 ± 0,89 14,8 ± 0,45 13,6 ± 1,1 12,2 ± 0,84 11,2 ± 0,84 Keterangan : K = Kambing P₁ = Level gliserol 5% P₂ = Level gliserol 6% P₃ = Level gliserol 7% P₄ = Level gliserol 8% P₅ = Level gliserol 9% Hasil penelitian menunjukkan bahwa daya hidup sperma paling lama yaitu pada perlakuan P2 dengan level gliserol 6% sebesar 14,8 jam, kemudian diikuti dengan P3 (13,6 jam), P1 (13,4 jam), P4 (12,2 jam), dan daya tahan hidup sperma paling rendah yaitu pada P₅ dengan level gliserol 9% sebesar 11,2 jam. Berdasarkan hasil analisis sidik ragam bahwa level gliserol dalam pengencer sitrat kuning telur nyata (P<0,05) berpengaruh terhadap daya hidup sperma kambing PE post thawing. Adapun untuk mengetahui perlakuan mana yang paling berpengaruh terhadap daya hidup sperma, maka dilakukan uji lanjut yaitu dengan menggunakan uji jarak berganda Duncan. Hasil uji lanjut Duncan dapat dilihat pada Tabel 4.

5 33 Tabel 4. Hasil uji Duncan daya hidup sperma kambing PE post thawing Perlakuan Rataan Selisih Antar Perlakuan LSR Signifikasi P5 11, a P4 12,20 1,00 0,63 b P1 13,40 2,20 1,20 0,66 c P3 13,60 2,40 1,40 0,20 0,68 c P2 14,80 3,60 2,60 1,40 1,20 0,69 d Keterangan: Huruf berbeda pada kolom signifikasi menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (P<0,05) Hasil uji jarak berganda Duncan menunjukkan bahwa P2 (6%) nyata lebih lama (P<0,05) mempertahankan daya hidup sperma kambing PE dibandingkan dengan P1 (5%), P3 (7%), P4 (8%), dan P5 (9%). Perlakuan P1 (5%) dan P3 (7%) tidak ada perbedaan yang nyata (P>0,05) antar perlakuan namun berbeda nyata (P<0,05) dengan P2 (6%), P4 (8%), dan P5 (9%). Perlakuan P4 (8%) dan P5 (9%) menujukkan perbedaan nyata (P<0,05) dengan semua perlakuan. Hasil ini memperlihatkan bahwa penambahan gliserol 8% dan 9% tidak efektif untuk mempertahankan daya hidup sperma dan pemberian gliserol 9% merupakan hasil yang paling rendah dari seluruh perlakuan karena motilitas post thawing yang dihasilkan rendah pula. Hal ini sesuai dengan pendapat Rizal, dkk. (2002) konsentrasi gliserol yang berlebihan akan menimbulkan efek toksik pada sperma, sebaliknya apabila kurang, gliserol tidak akan memberikan efek yang optimal. Pemberian gliserol 6% merupakan hasil yang paling optimal mempertahankan daya hidup sperma kambing PE. Tambing, dkk. (2000) menyatakan selama proses pembekuan, gliserol mampu menembus membran plasma masuk ke dalam sel spermatozoa dan dapat dimetabolisir menghasilkan energi dan membentuk fruktosa. Fruktosa yang cukup akan menyebabkan spermatozoa tetap bergerak, karena fruktosa berperan menghasilkan energi berupa ATP yang mengandung fosfat anorganik (Pi) kaya energi dan akan digunakan

6 34 untuk kontraksi fibril-fibril serta menghasilkan gerak spermatozoa dan digunakan untuk mempertahankan daya hidupnya (Toelihere, 1993). Selain itu pemberian gliserol sebesar 6% ke dalam pengencer sitrat mampu melindungi spermatozoa dari pengaruh cekaman dingin selama proses pembekuan. Efek perlindungan dari gliserol adalah menjaga keseimbangan elektrolit intra dan ekstraseluler sehingga proses biokimia yang terjadi di dalam sel spermatozoa tetap berlangsung dan mengurangi kematian sel spermatozoa yang berlebihan (Tambing, dkk. 2000). Gliserol juga mampu melindungi membran plasma selama pembekuan. Futino (2010) menyatakan bahwa gliserol dapat mempertahankan integritas membran plasma spermatozoa dibanding krioprotektan lain. Kondisi membran plasma yang baik menyebabkan proses metabolisme dapat berjalan dengan lancar sehingga dapat mempertahankan motilitas dan daya hidup sperma. Rendahnya daya hidup sperma pada pemberian giserol 9% diduga karena pengaruh toksik gliserol. Pada konsentrasi tertentu gliserol dapat melindungi spermatozoa, tetapi pada dosis yang berlebih dapat bersifat toksik. Efek toksik ini akan memodifikasi struktur membran plasma selama proses pembekuan dan pada konsentrasi yang tinggi menghambat metabolisme energi dan menyebabkan kematian pada spermatozoa (Toelihere, 1993). Penggunaan krioprotektan dalam pengencer untuk proses pembekuan harus memperhatikan sifat toksisitasnya yang berkaitan dengan komposisi pengencer, metode pencampuran, ekulibrasi, pendinginan dan pembekuan (Fahy, 1986). 4.3 Pengaruh Level Gliserol dalam Pengencer Sitrat Kuning Telur terhadap Tudung Akrosom Utuh Sperma Kambing PE Post Thawing Tudung Akrosom Utuh (TAU) merupakan suatu selubung yang terdapat pada bagian kepala spermatozoa yang berfungsi untuk melindungi keluarnya materi

7 35 genetik dan enzim enzim dari bagian kepala spermatozoa. Keutuhan tudung akrosom perlu tetap diperhatikan sebelum diinseminasikan, agar enzim enzim seperti hyalurodinase, acrosin dan CPE (Corona Penetrating Enzyme) dapat dilepaskan dalam organ reproduksi betina saat proses pembuahan (Garner dan Hafez, 2000). Hasil Pengamatan Tudung akrosom utuh sperma dapat dilihat pada Tabel 5. Tabel 5. Tudung akrosom utuh sperma kambing PE pada berbagai level gliserol dalam pengencer sitrat kuning telur Kelompok Perlakuan P₁ P₂ P₃ P₄ P₅...%... K1 44,50 54,00 46,00 45,00 44,50 K2 45,50 48,00 42,50 36,00 35,00 K3 43,00 51,00 45,50 32,50 30,00 K4 48,50 58,00 52,00 43,50 40,00 K5 46,50 53,00 51,00 44,00 38,00 Total 228,00 264,00 237,00 201,00 187,50 Rata-rata 45,60 ±2,70 52,80 ±3,70 47,40 ±3,99 40,20 ±5,60 37,50 ±5,43 Keterangan : K = Kambing P₁ = Level gliserol 5% P₂ = Level gliserol 6% P₃ = Level gliserol 7% P₄ = Level gliserol 8% P₅ = Level gliserol 9% Berdasarkan Tabel 5. dapat dilihat bahwa rata-rata P₂ dengan level gliserol 6% memberikan presentase tudung akrosom utuh sperma kambing PE post thawing paling tinggi yaitu 52,80% diikuti dengan P₃ (47,40%), P₁ (45,60 %), P₄ (40,20 %) dan rata-rata presentase tudung akrosom paling rendah diperoleh pada P₅ dengan level gliserol 9% yaitu 37,50%. Pemberian gliserol 6% memberikan

8 36 hasil yang paling optimal terhadap keutuhan tudung akrosom spermatozoa. Hasil ini lebih tinggi dari hasil pengamatan Tambing, dkk. (2000) dimana penambahan gliserol 6% memberikan persentase TAU sebesar 47,54%. Hasil analisis sidik ragam menunjukkan bahwa level gliserol dalam pengencer sitrat kuning telur berpengaruh nyata (P<0,05) terhadap keutuhan tudung akrosom sperma kambing PE post thawing (Lampiran 3). Guna mengetahui perbedaan antar perlakuan dilakukan uji jarak berganda Duncan. Hasil uji lanjut Duncan dapat dilihat pada Tabel 6. Tabel 6. Hasil uji Duncan TAU sperma kambing PE post thawing Perlakuan Rataan Selisih Antar Perlakuan LSR Signifikasi P5 37, a P4 40,20 2,70 3,72 a P1 45,60 8,10 5,40 3,89 b P3 47,40 9,90 7,20 1,80 4,00 b P2 52,80 15,30 12,60 7,20 5,40 4,09 c Keterangan: Huruf berbeda pada kolom signifikasi menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (P<0,05) Hasil uji jarak berganda Duncan menujukkan bahwa presentase TAU sperma pada P2 (6%) nyata lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan dengan semua perlakuan. Hal ini menunjukan bahwa level gliserol 6% memberikan hasil yang paling optimal terhadap keutuhan tudung akrosom sperma kambing PE. Perlakuan P1 (5%) tidak berbeda nyata (P>0,05) dengan P3 (7%) namun berbeda nyata (P<0,05) dengan P2 (6%), P4 (8%), dan P5 (9%). Perlakuan P4 (8%) dan P5 (9%) tidak berbeda nyata antar perlakuan, namun berbeda nyata dengan P1 (5%), P2 (6%), dan P3 (7%). Hal ini berarti penggunaan level gliserol 5% dan 7% belum bekerja optimal untuk memelihara keutuhan tudung akrosom sperma kambing PE sedangkan level gliserol 8% dan 9% menujukkan penurunan keutuhan tudung akrosom spermatozoa kambing PE.

9 37 Penambahan gliserol 6% dalam pengencer sitrat kuning telur dapat memberikan perlindungan paling optimal terhadap keutuhan tudung akrosom sperma setelah pembekuan karena selama proses pembekuan, spermatozoa mudah mengalami peroksidasi lipid yang akan merusak sel spermatozoa. Bagian sel spermatozoa yang paling peka terhadap kerusakan peroksidasi endogenous dan eksogenous adalah bagian akrosom. Adanya gliserol yang berfungsi sebagai agen protektif akan menjaga keseimbangan konsentrasi fisiologik intra dan ekstraseluler dan tudung akrosom akan tetap utuh (Tambing, dkk. 2000). Peranan gliserol dalam melindungi tudung akrosom juga disebabkan karena membran plasma yang terlindungi (Futino, 2010). Gliserol akan berinteraksi dengan membran plasma dengan cara mengikat gugus pusat fosfolipid, sehingga menurunkan ketidakstabilan membran dan berinteraksi dengan membran untuk mengikat protein dan glikoprotein yang menyebabkan partikel-partikel intra membran terkumpul (Parks dan Graham, 1992). Membran plasma yang terlindungi akan mengurangi kerusakan tudung akrosom saat terjadi perubahan struktur dari relatif cair ke padat selama pembekuan atau yang lebih penting lagi pada saat pencairan kembali (Feradis, 1999 dalam Tambing, dkk. 2000). Hasil Penelitian terhadap penambahan gliserol 8% dan 9 % menujukkan presentase TAU lebih rendah dari level gliserol 5%, 6% dan 7%. Hal ini menunjukkan bahwa level gliserol 8% dan 9% tidak dapat melindungi tudung akrosom spermatozoa dengan optimal. Hasil persentase TAU paling rendah yaitu pada penambahan gliserol 9% yang ditandai dengan kerusakan tudung akrosom yang tinggi. Kerusakan tudung akrosom dapat disebabkan oleh kristal-kristal es akibat dehidrasi sel yang berlebihan dalam proses pembekuan semen yang menyebabkan enzim-enzim pelebur dinding ovum pada tudung akrosom akan

10 38 turut pula rusak (Afiati, dkk. 2004). Hal ini disebakan karena pemberian gliserol tidak optimal dalam melindungi tudung akrosom spermatozoa sehingga mengakibatkan rusaknya membran plasma dan keutuhan tudung akrosom (Sinha, dkk. 1996).