Prosedur pembuatan suspensi alginat

Transkripsi

1 LAMPIRA 39

2 Lampiran 1. Prosedur pembuatan suspensi alginat 1. Pembuatan suspensi alginat tanpa filler Aquades Na-alginat Pencampuran Sterilisasi 121 o C, 15 menit Pendinginan suhu ruang Suspensi alginat 2. Pembuatan suspensi alginat-filler Aquades Na-alginat Na-caseinate Pencampuran Aquades Na-alginat Sterilisasi 121 o C, 15 menit Pencampuran Pendinginan suhu ruang Sterilisasi 121 o C, 15 menit Suspensi alginat-caseinate Pendinginan hingga suhu 90 o C Whey Pencampuran Aquades Na-alginat Skim Sterilisasi 90 o C, 2 menit Pencampuran Suspensi alginat-whey Sterilisasi 121 o C, 15 menit Pendinginan suhu ruang Suspensi alginat-skim * Pencampuran alginat dan aquades dilakukan dalam erlenmayer lalu dipanaskan dengan penangas air mendidih hingga alginat larut. Setelah itu dimasukan ke dalam botol untuk disterilisasi sesuai dengan massa yang dibutuhkan 40

3 Lampiran 2. Prosedur menghitung jumlah sel (Total Plate Count) 1. Jumlah sel dalam suspensi sel (kultur cair) Sebanyak 1 ml sampel dilarutkan dalam 9 ml garam fisiologis dan dilakukan pengenceran berseri. Sebanyak 1 ml dari sampel yang telah diencerkan disebarkan pada MRS agar dalam cawan petri. Kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam. Kuantifikas hasil sel/jumlah koloni dihitung berdasarkan SNI 2981: Metode perhitungan jumlah sel pada beads basah dan kering (Sheu dan Marshal 1993) Sebanyak 1 gram beads basah disuspensikan ke dalam 9 ml bufer fosfat (0,1 M, ph 7,1 ± 0,2) (pengenceran 10-1 ) lalu divorteks selama 30 menit hingga beads hancur dan diencerkan berseri menggunakan garam fisiologis. Setelah itu dilakukan pemupukan dalam cawan petri dengan metode tuang menggunakan MRS agar dan dinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam. Sedangkan untuk beads kering sebanyak 0,1 gram disuspensikan dalam 9,9 ml bufer fosfat (pengenceran 10-2 ) lalu divorteks selama 30 menit dan diencerkan berseri menggunakan garam fisiologis lalu dilakukan pemupukan dalam MRS agar dan diinkubasi pada 37 o C selama 48 jam. 3. Total probiotik dalam dadih (S I 2981:2009) Sebanyak 25 gram dadih dilarutkan dalam 225 ml buffer pepton water (BPW) (pengenceran 10-1 ) lalu dikocok hingga homogen. Kemudian dilakukan pengenceran berseri. Sebanyak 1 ml dari tabung pengencer disebarkan pada MRS agar dalam cawan petri. Setelah agar mengeras lalu diinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam. Kuantifikasi hasil sel/jumlah koloni dihitung berdasarkan SNI 2981:

4 Lampiran 3. Prosedur pengujian ph, total asam tertitrasi, dan viskositas 1. Prosedur pengujian ph dan total asam tertitrasi (AOAC, 1995) Pengukuran nilai ph dadih dilakukan menggunakan ph meter yang telah dikalibrasi dengan standar buffer ph 4.0 dan 7.0. Sedangkan total asam tertitrasi dihitung dengan cara memasukan 10 ml sampel ke dalam erlenmayer lalu ditambahkan tiga tetes indikator phenophtalein 1%. Kemudian sampel dititrasi dengan NaOH 0,1 N yang telah distandarisasi sampai timbul warna merah muda. Total asam diasumsikan sebagai total asam laktat. Total asam tertitrasi (% asam laktat) = V NaOH x N NaOH x 90 x 100% Vol sampel x Prosedur pengujian viskositas (AOAC, 1995) Viskositas diukur dengan alat Rheometer. Sebanyak 100 ml sampel ditempatkan dalam wadah. Spindel (#05, 100 rpm) kemudian dicelupkan ke dalam sampel sampai tanda tera, kemudian tombol motor on/off dinyalakan dan spindel dibiarkan berputar kurang lebih 1 menit. Angka yang muncul pada layar setelah spindel berputar selama 1 menit dicatat sebagai nilai viskositas sampel. 42

5 Lampiran 4. Hasil pengukuran rendemen dan ukuran beads pada berbagai konsentrasi alginat Konsentrasi alginat Kode Perlakuan 2% A 1 3% A 2 4% A 3 5% A 4 Ulangan Massa Massa beads suspensi (g) (g) Yield (%) Rataan 52.0 ± Rataan 74.4 ± Rataan 90.8 ± Rataan 90.7 ± 2.2 Diameter beads (mm) 2% 3% 4% 5% Rataan 2.4 ± ± ± ±

6 Lampiran 5. Hasil analisis statistik pengukuran rendemen dan ukuran beads pada berbagai konsentrasi alginat 1. Variabel terikat: Rendemen Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Konsentrasi alginat Galat Total Rataan umum : Koefisien keragaman : 2.94% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A A 3 A A 4 B A 2 C A 1 44

7 2. Variabel terikat: Ukuran (diameter) Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Konsentrasi alginate <.0001 Galat Total Rataan umum : 2.85 Koefisien keragaman : 2.77% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A A 3 B A 2 C A 4 D A 1 45

8 Lampiran 6. Hasil pengukuran rendemen dan ukuran beads pada berbagai perbandingan alginat-bahan pengisi Filler Tanpa filler Whey Sodium Caseinate Skim Perban -dingan Total padatan 4% Alginat Filler Kode Perla kuan 1:0 4% 0% B 1 1:1 2.00% 2.00% B 2 2:1 2.67% 1.33% B 3 3:1 3.00% 1.00% B 4 1:1 2.00% 2.00% B 5 2:1 2.67% 1.33% B 6 3:1 3.00% 1.00% B 7 1:1 2.00% 2.00% B 8 2:1 2.67% 1.33% B 9 3:1 3.00% 1.00% B 10 Ulang an Massa suspensi (g) Massa beads (g) Yield (%) rataan 90.8 ± rataan 52.3 ± rataan 79.8 ± rataan 83.3 ± rataan 64.2 ± rataan 78.7 ± rataan 83.5 ± rataan 57.3 ± rataan 80.7 ± rataan 84.3 ±

9 n Tanpa Filler (Alginat 4%) Diameter beads (mm) Whey Sodium Caseinate Skim 1:1 2:1 3:1 1:1 2:1 3:1 1:1 2:1 3: Rataan 3.2 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±

10 Lampiran 7. Hasil analisis statistik pengukuran rendemen dan ukuran beads pada berbagai perbandingan alginat-bahan pengisi 1. Variabel terikat: Rendemen Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Perbandingan alginat-bahan pengisi <.0001 Galat Total Rataan umum : Koefisien keragaman : 2.54% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A B 1 B B 10 B B 7 B B 4 BC B 9 BC B 3 C B 6 D B 5 E B 8 F B 2 48

11 2. Variabel terikat: Ukuran (diameter) Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Perbandingan alginat-bahan pengisi <.0001 Galat Total Rataan umum : 2.67 Koefisien keragaman : 4.38% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A B 1 B B 7 B B 10 B B 4 C B 3 D B 9 D B 6 E B 5 EF B 8 F B 2 49

12 A B C D E F G = E * F H = G / (D+E) I J K = (I*J)/G Perlakuan Alginat 4% (1:0) Alginat-Whey (2:1) Alginat-Sodium Caseinate (2:1) Alginat-Skim (2:1) Lampiran 8. Hasil pengukuran efisiensi dan viabilitas Lb. casei terenkapsulasi pada berbagai jenis bahan enkapsulasi Ulangan Kode perlakuan Massa suspensi algninat (gram) Vol susp. sel yang ditambahkan (ml) Pupulasi sel (cfu/ml susp. sel) Jumlah sel total dalam suspensi alginat (cfu) Jumlah sel per gram susp. Alginat-sel (cfu/gram susp. Alginat-sel) Massa beads yang dihasilkan (gram) Populasi sel dalam beads (cfu/gram beads) Efisiensi enkapsulasi (%) E E E E C E E E E Rataan 4.1E+06 ± 1.8E ± E E E E C E E E E Rataan 3.7E+06 ± 2.8E ± E E E E C E E E E Rataan 3.2E+06 ± 3.2E ± E E E E C E E E E Rataan 3.6E+06 ± 7.1E ± 1.4 A B L = log H M = log J N = L M O = (M/N)*100% Perlakuan Alginat 4% (1:0) Alginat-Whey (2:1) Alginat-Sodium Caseinate (2:1) Alginat-Skim (2:1) Ulangan Log jumlah sel dalam suspensi alginat Log jumlah sel dalam beads Penurunan jumlah sel (siklus log) Viabilitas (%) Rataan ± Rataan ± Rataan ± Rataan ±

13 Lampiran 9. Hasil analisis statistik pengukuran efisiensi dan viabilitas Lb. casei terenkapsulasi 1. Variabel terikat: Efisiensi Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Komposisi bahan pengkapsul Galat Total Rataan umum : Koefisien keragaman : 5.51% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A C 1 B C 2 B C 4 B C 3 51

14 2. Variabel terikat: Viabilitas Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Komposisi bahan pengkapsul Galat Total Rataan umum : Koefisien keragaman : 0.45% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A C 1 AB C 2 AB C 4 B C 3 52

15 Lampiran 10. Hasil pengukuran ph RSM selama inkubasi Perlakuan Alginat 4% Alg-Whey (2:1) Alg-SC (2:1) Alg-Skim (2:1) L. casei Bebas (tidak dienkapsulasi) ph susu pada jam ke- Populasi L. casei Ulangan pada akhir inkubasi (cfu/ml) E E+07 Rataan E+07 ± 9.2E E E+06 Rataan E+07 ± 7.8E E E+07 Rataan E+07 ± 2.1E E E+07 Rataan E+07 ± 7.8E E E+08 Rataan E+08 ± 2.3E+07 53

16 Lampiran 11. Hasil pengukuran perubahan massa beads selama pengeringan Kode Massa Massa beads saat pengeringan pada jam ke- Perlakuan Massa beads sampel beads kering 1 Alginat 4% Alginat 4% Skim (2:1) Skim (2:1) Kode sampel Perlakuan Perubahan kadar air beads pada jam ke Alginat 4% 97.24% 93.62% 84.74% 20.41% 15.61% 15.09% 11.40% 10.65% 10.30% 2 Alginat 4% 97.21% 94.03% 88.29% 34.01% 15.72% 15.31% 11.90% 10.15% 9.51% Rataan 97.23% 93.82% 86.51% 27.21% 15.67% 15.20% 11.65% 10.40% 9.91% 3 Skim (2:1) 97.05% 92.56% 64.44% 14.76% 14.31% 13.10% 11.49% 10.42% 10.04% 4 Skim (2:1) 96.96% 92.65% 67.87% 15.22% 12.55% 13.64% 11.54% 9.54% 8.73% Rataan 97.00% 92.60% 66.15% 14.99% 13.43% 13.37% 11.51% 9.98% 9.38% 54

17 Lampiran 12. Hasil pengukuran viabilitas dan ketahanan Lb. casei terenkapsulasi selama proses pembuatan beads dan pengeringan Pembuatan beads basah A B C D E F G = E * F H = G / (D+E) I J K = (I*J)/G Jumlah sel Jumlah sel per Massa Vol susp. Massa beads Kode Pupulasi total dalam gram bahan Efisiensi Ulangan alginat ditambah- dihasilkan beads (cfu/gram beads) suspensi sel yang yang Populasi sel dalam Perlakuan perlakuan susp. sel) pengapsul (cfu/gram susp. (%) sel (cfu/ml bahan pengapsul enkapsulasi (gram) kan (ml) (gram) (cfu) Alginat-sel) Alginat 4% (1:0) Alginat- Skim (2:1) E E E E C E E E E Rataan 5.7E+07 ± 1.4E E E E E C E E E E Rataan 4.8E+07 ± 2.8E A B L = log H M = log J N = L M O = (M/N)*100% Perlakuan Alginat 4% (1:0) Alginat-Skim (2:1) Ulangan Log jumlah sel dalam suspensi alginat Log jumlah sel dalam beads Penurunan jumlah sel (siklus log) Viabilitas (%) Rataan ± Rataan ±

18 Pengeringan beads A B C D E F G H = log C I = log G J = H I Perlakuan Alginat 4% Alg-Skim (2:1) Ulangan Populasi sel dalam beads basah (cfu/g) Kadar air beads basah (%) Rendemen pengeringan (%) Kadar air beads kering (%) Populasi L. casei pada beads kering (cfu/g) Log cfu/g beads basah Log cfu/g beads kering Penurunan sel (siklus log) E % 3.1% 11.40% < 1.00E < 2.00 > E % 3.2% 11.90% < 1.00E < 2.00 > 5.76 Rataan 5.7.E % 3.1% 11.65% < 1.00E < 2.00 > E % 3.3% 11.49% 2.4.E E % 3.4% 11.54% 1.8.E Rataan 4.8.E % 3.4% 11.51% 2.1.E A B K = log (C*(1/(100% D))) L = log (G*(1/(100% F))) M = (L/K)*100% Perlakuan Ulangan log cfu/gram beads basah log cfu/gram beads kering basis kering basis kering Ketahanan (%) < 2.05 < % < 2.06 < 22.1 Rataan 9.31 < 2.05 < Alg-Skim (2:1) Rataan ±

19 Lampiran 13. Hasil pengukuran viskositas, ph, total asam tertitrasi, dan populasi L. casei pada dadih susu sapi Viskositas Total asam tertitrasi Populasi L. casei Perlakuan Kode Perlakuan Ulangan ph (cp) (%) (cfu/ml) E+08 Penggunaan L. casei E+08 terenkapsulasi kering secara D E+08 langsung Rataan 2147 ± ± ± E+08 ± 2.2E E+08 Penggunaan L. casei E+08 terenkapsulasi kering melalui D E+08 pembuatan kultur kerja Rataan 2563 ± ± ± E+08 ± 6.9E+07 Penggunaan kultur kerja dari sel bebas D E E E+09 Rataan 2301 ± ± ± E+09 ± 2.2E+08 57

20 Lampiran 14. Hasil analisis statistik pengukuran viskositas, ph, total asam tertitrasi, dan populasi L. casei pada dadih susu sapi 1. Variabel terikat: Viskositas Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Aplikasi starter Galat Total Rataan umum : Koefisien keragaman : 7.86% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah 2 3 Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A D2 AB D3 B D1 58

21 2. Variabel terikat : ph Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Komposisi bahan pengkapsul Galat Total Rataan umum : 5.67 Koefisien keragaman : 1.47% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah 2 3 Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Mean Ulangan PERLAKUA A D1 AB D3 B D2 59

22 3. Variabel terikat : Total asam tertitrasi Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Aplikasi starter Galat Total Rataan umum : Koefisien keragaman : 7.86% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah 2 3 Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A D1 AB D2 B D3 60

23 4. Variabel terikat : Populasi L. casei Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F-hitung Pr > F Aplikasi starter <.0001 Galat Total Rataan umum : 8.56 Koefisien keragaman : 0.97% Uji Duncan Taraf nyata α : 0.05 ilai tengah 2 3 Wilayah kritis Rata-rata dengan huruf yang sama adalah tidak berbeda nyata Kelompok Duncan Rataan Ulangan PERLAKUA A D3 B D2 C D1 61