HASIL DAN PEMBAHASAN. Larutan yang sudah ditambahkan ekstrak disonikasi kembali, kemudian dikeringkan dengan pengering semprot.

Transkripsi

1 8 Larutan yang sudah ditambahkan ekstrak disonikasi kembali, kemudian dikeringkan dengan pengering semprot. Penentuan Ukuran dan Morfologi Nanopartikel dengan Mikroskop Elektron Payaran (Modifikasi Desai & Park 2005) Serbuk nanopartikel kitosan diletakkan pada potongan kuningan (stub) berdiameter 1 cm dengan menggunakan selotip dua sisi. Selanjutnya serbuk tersebut dibuat menjadi konduktif secara elektrik dengan seberkas sinar dari platina lapis tipis (coating) selama 30 detik pada tekanan dibawah 2 Pa dan kuat arus 30 ma. Foto diambil pada tegangan elektron 10 kv dengan perbesaran 3000x, 5000x, 7000x, dan x. Karakterisasi Gugus Fungsi Nanopartikel dengan Fourier Transform Infrared (FTIR) (Kencana 2009) Sebanyak 2 mg sampel nanopartikel dicampur dengan 100 mg KBr untuk dibuat pelet dengan pencetak vakum. Pelet yang terbentuk dikenai sinar infra merah pada jangkauan bilangan gelombang cm -1. Latar belakang penyerapan dihilangkan dengan cara pelet KBr dijadikan satu pada setiap pengukuran. Karakterisasi Derajat Kristalinitas Nanopartikel dengan Difraksi Sinar X (XRD) (Kencana 2009) Sebanyak 200 mg sampel dicetak langsung pada aluminium berukuran 2 x 2.5 cm dengan bantuan perekat. Derajat kristalinitas ditentukan menggunakan alat XRD dengan sumber sinar dari tembaga pada panjang gelombang Ǻ. Aktivitas Antioksidan Metode DPPH dengan spektrofotometri (modifikasi dari Salazar 2009; Yen et al. 2008) Uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH. Sampel ekstrak yang diuji adalah, ekstrak air kulit kayu mahoni, ekstrak waktu ultrasonikasi 30 dan 60 menit. Ekstrak dilarutkan dalam metanol absolut dengan konsentrasi yang berbeda (0, 10, 25, 50,75, dan 100 ppm). Sebanyak 1 ml larutan yang akan diuji ditambahkan dengan 1 ml DPPH (125µM dalam metanol). Sedangkan untuk kitosan digunakan pelarut asam asetat 0.2% dengan konsentrasi (0, 25, 100, 500, dan 1000 ppm). Campuran tersebut kemudian dihomegenasikan dengan vortex, dan diikubasi selama 30 menit. Kemudian, diukur absorbansinya dengan spektrofotometri pada panjang gelombang 517 nm. Pengujian juga dilakukan terhadap blanko (Larutan DPPH dengan pelarutnya). Kontrol positif yang digunakan adalah senyawa rutin. Nilai absorbansi yang diperoleh selanjutnya digunakan untuk mendapatkan persen penangkapan radikal dan digunakan untuk mendapatkan persamaan regresi Y = a + b ln x. Nilai IC 50 dihitung dengan menggunakan rumus persamaan regresi tersebut (Lampiran 4). Nilai IC 50 paling rendah menunjukkan aktivitas antioksidan yang paling tinggi. Adapun aktivitas persen penangkapan radikal DPPH (%) dihitung dengan rumus: %penghambatan=[(a blangko A sampel )/A blangko ] x 100% HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi kulit kayu mahoni menggunakan metode rendam air panas. Ekstraksi dilakukan dengan air panas (perbandingan 1 g sampel:10 ml air) pada temperatur 100ºC selama 4 jam. Selanjutnya larutan ekstrak air tersebut disaring dan filtratnya kemudian dikeringkan dengan menggunakan rotary vaccum evaporator bersuhu 60ºC untuk mendapatkan ekstrak kasar kering. Metode ini mengikuti percobaan oleh Harjadi (1993) diacu dalam Mardisadora (2010). Metode Rendam air panas merupakan metode yang mudah dan praktis. Metode ini didasarkan pada kebiasaan masyarakat yang sering mengkonsumsi bahan herbal dengan cara menyeduh dan melarutkannya dalam air panas. Disamping itu, air merupakan pelarut senyawa yang lebih polar, sehingga dapat berikatan dengan senyawa yang bersifat polar misalnya senyawa fenolik atau polifenol. Sriningsih et al. (2008) menyatakan bahwa senyawa fenol cenderung mudah larut dalam air. Bobot ekstrak air kulit kayu mahoni yang diperoleh adalah sebesar 9.39 gram atau memiliki nilai rendemen 5.86%. Penelitian terdahulu yang dilakukan oleh Mardisadora (2010) didapatkan rendemen ekstrak air kulit kayu mahoni adalah sebesar 6.44%. Hasil rendemen yang didapatkan pada penelitian ini lebih kecil dibandingkan hasil penelitian oleh Mardisadora (2010), hal ini dikarenakan kulit kayu mahoni yang digunakan berasal dari tanaman mahoni dengan lingkungan agrofisik 8

2 9 yang berbeda. Selain itu, umur tanaman juga berbeda. Penelitian ini menggunakan tanaman yang umurnya lebih muda (10-15 tahun) dibandingkan yang digunakan Mardisadora (2010) yang umurnya tahun, sehingga mempengaruhi kadar senyawa metabolit sekunder tanaman. Produk metabolit sekunder tanaman dipengaruhi oleh umur tanaman dan interaksi lingkungan (Nurcholis 2008). Hal ini sesuai dengan Hanani et al. (2005) yang menyatakan bahwa kandungan senyawa dalam suatu tanaman yang sama dapat berbeda karena adanya pengaruh iklim, keadaan tanah, sinar matahari, dan cara pengolahannya. Nanopartikel Tersalut Kitosan Pembuatan nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni tersalut kitosan dilakukan dengan membandingkan waktu ultrasonikasi. Variasi waktu ultrasonikasi selama 30 menit dan 60 menit dilakukan untuk mengetahui ukuran nanopartikel dan kehomogenan larutan. Proses ultrasonikasi mempunyai prinsip pemberian energi ultrasonik kepada larutan sehingga dapat memecah partikel-partikel besar yang terdapat di dalam larutan. Ultrasonikasi dengan intensitas tinggi dapat menginduksi secara fisik dan kimia. Semakin lama waktu ultrasonikasi, pemecahan molekul polimer kitosan akan terus berjalan. Kencana (2009) menyatakan bahwa kitosan akan mengalami penurunan bobot molekul secara signifikan pada rentan waktu 8 menit dan 60 menit. Selama proses ultrasonikasi terjadi resonansi, ketika frekuensi gelombang sonic mendekati frekuensi gelombung kavitasi (f f 0 ) yang pada waktu tertentu dianalogikan pecah, karena pada saat itu sistem memliki energi maksimal yang dapat diserap oleh gelembung kavitasi. Hal inilah yang menyebabkan nanopartikel yang terkurung di dalamnya juga akan dapat terpisah satu sama lain sehingga didapatkan nanopartikel dengan ukuran yang lebih kecil (Hapsari 2009). Penelitian ini menggunakan kitosan yang dilarutkan dalam asam asetat. Larutan kitosan 2% kemudian dicampurkan dengan STPP (sodium tripolifosfat) 0.5%. Penambahan STPP bertujuan untuk membentuk ikatan silang ionik antar molekul kitosan, sehingga dapat digunakan sebagai bahan penjerap (Mi et al. 1999). Fosfat memiliki fungsi antara lain meningkatkan emulsifikasi serta mengurangi penggunaan surfaktan (Madsen et al. 2001, diacu dalam Sidqi 2011). Sampel hasil ultrasonikasi dikeringkan dengan menggunakan pengering semprot (spray dryer). Pengering semprot bertujuan untuk mengubah sampel cairan menjadi serbuk karena pengaruh panas yang diberikan (Gambar 7). Prinsip kerja dari pengering semprot ini adalah udara panas yang dibawa oleh alat akan memberikan panasnya pada bahan sampel yang akan dikeringkan, dan mengangkut uap air yang dikeluarkan oleh bahan (Muchtadi & Ayustaningwarno 2010). Serbuk kitosan-stpp yang didapatkan, dilarutkan kembali dengan penambahan ekstrak diikuti oleh ultrasonikasi kedua dan dikeringkan kembali dengan pengering semprot. Sebanyak 151 ml larutan nanopartikel kitosan-ekstrak kulit kayu mahoni setelah dilakukan pengering semprot menghasilkan bobot sampel serbuk sebesar gram nanopartikel kering untuk ultrasonikasi 30 menit dan gram nanopartikel kering untuk ultrasonikasi 60 menit. Nilai rendemen berturut-turut sebesar 3.104% dan 4.149%. Rendahnya rendemen yang diperoleh disebabkan beberapa sampel menempel pada tabung pengering semprot. Hal ini disebabkan alat tidak mampu mempertahankan suhu pengeringan semprot secara stabil. Suhu pada awal penyemprotan sebesar 173 ºC (inlet) dan suhu saat sampel keluar dari tabung penguap sebesar 73 ºC (outlet). Sehingga menyebabkan sampel tidak bisa kering secara sempurna dan beberapa sampel menempel pada dinding tabung pengering semprot. Tabel 1 Rendemen tersalut kitosan Sampel Bobot Bobot Rendemen Simplisia (Gram) Ekstrak (Gram) Gram % Nanopartikel 1 (Ultrasonikasi menit) Nanopartikel 2 (Ultrasonikasi 60 menit)

3 10 a b c Gambar 6 Gambar 7 Hasil pengering semprot sampel nanokitosan (a), nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni ultrasonikasi 30 menit (b), dan ultrasonikasi 60 menit (c). Ukuran dan Morfologi Nanopartikel Indikasi penyalutan ekstrak kulit kayu mahoni terhadap kitosan dapat dilihat dari ukuran dan morfologi nanopartikel yang dihasilkan. Sampel yang telah dikeringkan kemudian dikarakterisasi dengan Scanning Electron Microscope (SEM). Penentuan ukuran partikel ditentukan oleh bentuk partikel nanokitosan (Kencana 2009). Kitosan dan ekstrak kulit kayu mahoni yang diberi perlakuan ultrasonikasi memiliki bentuk partikel yang menyerupai bola. Ukuran partikel ditentukan dengan mengukur diameter nanopartikel. Perbesaran yang digunakan yaitu mulai dari 5000 kali sampai dengan kali. Penelitian ini juga menggunakan variasi waktu ultrasonikasi dalam pembuatan nanopartikel. Variasi waktu dilakukan untuk mengetahui pengaruh waktu ultrasonikasi terhadap ukuran nanopartikel dengan perlakuan dua kali ultrasonikasi. Pengamatan ini dilakukan untuk mengetahui apakah nanopartikel masih bisa dioptimalkan ukurannya dengan penambahan waktu ultrasonikasi. Variasi waktu dibagi menjadi dua bagian, yaitu waktu ultrasonikasi selama 30 menit dan ultrasonikasi selama 60 menit. Hasil foto SEM nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit menunjukkan ukuran berkisar pada rentang nm. Sedangkan dengan waktu ultrasonikasi 60 menit berukuran nm (Gambar 8). Keragaman ukuran nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni tersalut kitosan yang diperoleh pada penelitian ini cukup besar. Perbedaan ukuran tersebut memperlihatkan efek waktu ultasonikasi. Kencana (2009) menyatakan bahwa semakin lama waktu ultrasonikasi menyebabkan energi yang dikeluarkan oleh ultrasonikator dapat diterima oleh semua partikel dalam larutan kitosan. Morfologi permukaan nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni berbentuk bola. Hasil nanopartikel dengan waktu ultrasonikasi 30 menit memiliki permukaan halus dan cembung. Sedangkan morfologi nanopartikel dengan waktu ultrasonikasi 60 menit memiliki bentuk tidak beraturan dengan permukaan kasar dan berkerut. Ini mengindikasikan bahwa nanopartikel 60 menit tidak berhasil tersalut. Hanya beberapa yang berbentuk bola dengan permukaan halus dan cembung (Gambar 8). Menurut Desai & Park (2005), bahan pengisian yang telah tersalut kitosan akan berbentuk bola dengan permukaan yang halus dan cembung, sedangkan kitosan yang belum terisi memiliki permukaan kasar dan cekung. Adanya nanopartikel kitosan yang tidak terisi oleh ekstrak kulit kayu mahoni kemungkinan disebabkan oleh waktu ultrasonikasi yang terlalu lama (60 menit), sehingga menyebabkan kitosan pecah dan tidak dapat menyalut ekstrak. Keragaman ukuran nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni tersalut kitosan yang diperoleh pada penelitian ini cukup besar. Menurut Poulain & Nakache (1997), keragaman dapat dikurangi dengan ultrafiltrasi atau ultrasentrifugasi. Ultrafiltrasi dengan alat mikrokonsentrator yang dilengkapi membran ultrafiltrasi dapat memisahkan nanopartikel dengan mikropartikel. Mikrokonsentrator ini bahkan dapat digunakan untuk seleksi nanopartikel yang telah terisi atau belum terisi. Ultrasentifugasi dengan pendingin pada kecepatan rpm selama 45 menit dapat memisahkan nanopartikel yang telah terisi pada bagian pelet dan nanopartikel yang tidak terisi pada bagian supernatan. 10

4 11 a b c d Gambar 78 SEM waktu ultrasonikasi 30 menit perbesaran 7000 kali (a), perbesaran kali (b), dan waktu ultrasonikasi 60 menit perbesaran 5000 kali (c), perbesaran kali (d) Gugus Fungsi Spesifik Nanopartikel Karakterisasi Fourier Transform Infrared (FTIR) dalam penelitian ini digunakan untuk mengetahui keberadaan ekstrak kulit kayu mahoni yang disalut kitosan. Menurut Poulain & Nakache (1997) menyebutkan bahwa FTIR digunakan untuk menentukan keberadaan polimer yang dijadikan sebagai bahan penyalut serta mengetahui kemampuan penyalutannya. Secara umum, spektrum infra merah dapat mendeteksi keberadaan gugus fungsi yang digunakan untuk identifikasi senyawa dalam suatu sampel polimer. FTIR yang digunakan pada penelitian ini menggunakan bilangan gelombang tingkat menengah yaitu cm -1. Penentuan bilangan panjang gelombang tersebut dikarenakan sesuai dengan penentuan gugus fungsi senyawa organik (Nuance 2004, diacu dalam Lestari 2010). Prinsip kerja FTIR berdasarkan pada serapan atau transmitan sinar infra merah oleh molekul penyusun suatu senyawa pada sampel. Apabila frekuensi dari suatu vibrasi gugus fungsi sama dengan frekuensi radiasi sinar infra merah maka molekul akan menyerap sinar tersebut. Hal ini menyebabkan tidak semua sinar infra merah diserap oleh molekul, sebagian lainnya diteruskan (Kencana 2009). Data yang diperoleh dari alat ini berupa grafik serapan dan transmitan dari sampel. Profil kimia yang dihasilkan merupakan spektrum Infrared (IR) yang sangat kaya dengan informasi struktur molekul yang terdiri atas gerak vibrasi dan rotasi (Kurniasari 2006). Grafik transmitan hasil FTIR menunjukkan profil kimiawi berupa pola spektrum yang berbeda dan mempunyai ciri yang khas. Menurut Firdaus et al (2008) kitosan murni memiliki gugus fungsi yang khas yaitu gugus amida (-NH 2 ) dan hidroksil (-OH). Sedangkan ekstrak kulit kayu mahoni memiliki gugus spesifik yaitu OH, C=O, C=C dan C-O (Falah et al. 2008). Pada penelitian ini, ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit berhasil tersalut oleh kitosan. Sedangkan untuk dengan waktu ultrasonikasi 60 tidak berhasil tersalut oleh kitosan. Hal ini dibuktikan dari grafik hasil FTIR nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 60 menit memiliki bentuk grafik yang hampir sama dengan nanokitosan (Gambar 9). Disamping itu, tidak terjadi pergeseran bilangan gelombang pada beberapa gugus fungsi, serta tidak ada gugus fungsi khas ekstrak kulit kayu mahoni yang terdeteksi pada sampel nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 60. Hasil ini berkorelasi dengan hasil SEM yang menunjukkan bahwa nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 60 tidak berhasil tersalut. Hasil FTIR nanokitosan menunjukkan adanya gugus amida pada bilangan gelombang 11

5 cm -1. Gugus yang sama terlihat juga pada sampel nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 menit yaitu ada bilangan gelombang cm -1 dan cm -1. Cardenas & Miranda (2004) menyebutkan bahwa gugus amida kitosan murni akan terbaca pada bilangan gelombang cm -1. Nanokitosan mengandung gugus OH pada bilangan gelombang cm -1. Nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 menit mempunyai gugus OH pada bilangan gelombang cm -1 dan cm -1. Gugus fungsi hidroksil pada kitosan murni akan muncul pada bilangan gelombang sekitaran 3450 cm -1 (Firdaus et al (2008) atau pada bilangan gelombang 3257 cm -1 (Cardenas & Miranda 2004). Pada beberapa gugus fungsi terjadi pergeseran bilangan gelombang gugus fungsi pada sampel nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit dibandingkan dengan standar nanokitosan. Pergesaran bilangan gelombang tersebut disebabkan adanya interaksi antara gugus fungsi lain selain gugus fungsi kitosan akibat penambahan STPP dan waktu ultrasonikasi (Wulandary 2010). Adapun Gugus fungsi yang mengalami pergeseran bilangan gelombang diantaranya, gugus fungsi OH, C C, NH 2, dan C-H. Nilai bilangan gelombang gugus-gugus fungsi tersebut dapat dilihat pada Tabel 2. Gugus fungsi khas yang terdapat pada ekstrak kulit kayu mahoni seperti gugus fungsi C=O, C=C dan C-O terdeteksi pada dengan waktu ultrasonikasi 30 menit. Gugus fungsi C=O ekstrak kulit kayu mahoni muncul pada bilangan gelombang 1734 cm -1, sedangkan pada nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit gugus fungsi C=O berada pada bilangan gelombang 1736 cm -1. Pada ekstrak kulit kayu mahoni gugus fungsi C=C berada pada bilangan gelombang 1615 cm -1, untuk sampel dengan waktu ultrasonikasi 30 menit gugus fungsi tersebut terbaca pada bilangan gelombang 1650 cm -1. Ekstrak kulit kayu mahoni mempunyai gugus fungsi C-O yang muncul pada bilangan gelombang 1282 cm -1, dan gugus fungsi yang sama pada sampel dengan waktu ultrasonikasi 30 menit berada pada bilangan gelombang 1251 cm -1. Hasil ini dapat menunjukkan bahwa dengan waktu ultrasonikasi 30 menit berhasil tersalut kitosan. Hal ini didasarkan pada adanya gugus-gugus fungsi khas yang dimiliki oleh ekstrak kulit kayu juga tebaca pada sampel nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit. Data ini juga didukung oleh hasil foto SEM untuk sampel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit. Berdasarkan hasil penelitian, Gambar 9 juga memperlihatkan bahwa keempat pola spektrum memiliki gugus fungsi yang sama, yaitu O-H, C-H, C-O, dan C=C tetapi nilai transmitan dan bilangan gelombang berbeda (Tabel 2). Adanya keempat gugus fungsi tersebut dalam suatu ekstrak menunjukkan kemungkinan adanya senyawa tertentu yang membentuk struktur antioksidan, seperti flavonoid (Kartika 2010). Tabel 2 Gugus Fungsi Bilangan gelombang gugus fungsi spesifik ekstrak kulit kayu mahoni, nanokitosan, sampel dengan waktu ultrasonikasi 30 menit, dan 60 menit Mahoni Nano kitosan Bilangan gelombang (cm -1 ) Sampel Ultrasonkasi 30 menit Sampel Ultrasonkasi 60 menit Acuan (Creswell et al. 2005) Regang OH Regang C-H Regang C C Regang C=O Regang N-H Regang C=C Lentur C-H Lentur C-O Lentur C=C

6 13 C-O C=O OH C=H C=C NH 2 C-O Gambar 9 Transmitan hasil FTIR untuk standar kulit kayu mahoni (hitam), standar kitosan (biru), Gambar 8 sampel ultrasonikasi 30 menit (hijau), dan sampel ultrasonikasi 60 menit (merah muda). Derajat Kristalinitas Nanopartikel Ekstrak Kulit Kayu Mahoni Analisis XRD digunakan untuk mengetahui struktur kristal dari suatu bahan, menganalisis komposisi fasa, ukuran dan bentuk kristal, kisi distorsi, dan variasi komposisi (Sundar et al. 2010). Hasil data yang diperoleh dari analisis XRD berupa grafik hubungan sudut difraksi sinar x pada bahan dengan intensitas sinar yang dipantulkan oleh bahan. Nilai derajat kristalinitas dapat diketahui dari grafik kristalinitas yang memotong bagian lembah pada grafik. Gambar 10 dan Gambar 11 merupakan hasil karakterisasi nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit dan 60 menit. Hasil analisis XRD sampel nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit dan 60 menit menunjukkan sifat amorf. Sifat ini ditandai dengan puncak lembah pada sudut difraksi 2θ = 20. Kencana (2009) menyebutkan bahwa bentuk amorf memiliki puncak lembah difraksi pada sudut 2θ = 20. Puncak difraksi untuk nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit berada pada sudut , dan untuk nanopartikel ektrsak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 60 menit. Disamping itu Costa et al. (2009) juga menyatakan bahwa kitosan memiliki struktur semikristalin. Adanya pergeseran sudut difraksi pada kedua sampel diakibatkan gugus amina pada sampel sudah berinteraksi dengan elekrostatik dengan gugus fosfat dari STPP (Lidiniyah 2011). Hasil yang diperoleh kemudian dianalisis kembali dengan menggunakan program Xpowder untuk mendapatkan nilai derajat kristalinitas. Derajat kristalinitas merupakan besaran yang menyatakan banyaknya kandungan kristal dalam suatu material dengan membandingkan luasan kurva kristal dengan luasan amorf dan kristal. Semakin teratur susunan atom dalam suatu bahan, semakin banyak kristal yang terbentuk, sehingga derajat kristalinitas meningkat (Amrina 2008). Nilai derajat kristalinitas yang didapat untuk nanopartikel ektrsak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 menit sebesar % dan %. Dari nilai derajat kristalinitas yang diperoleh, maka kedua sampel nanopartikel ektrsak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 menit bersifat amorf. Intensitas sinar X ,055 º Derajat kemiringan sinar (2ø) Gambar 10 Pola XRD nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 menit. 13

7 14 Intensitas sinar X ,804 º Derajat kemiringan sinar (2ø) Gambar Pola XRD nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 60 menit. Aktivitas Antioksidan Nanopartikel Pada penelitian ini pengukuran aktivitas antioksidan diujikan pada sampel ekstrak air kulit kayu mahoni, serbuk nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 menit, nanokitosan, dan standar senyawa rutin dengan menggunakan metode 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH). Metode ini dipilih karena mudah, cepat, dan sangat baik untuk sampel dengan polaritas tertentu (Marxen et al. 2007). DPPH adalah senyawa radikal bebas berwarna ungu. Apabila DPPH direaksikan dengan senyawa peredam radikal bebas, intensitas warna ungu akan berkurang, dan apabila senyawa peredam radikal bebas yang bereaksi dalam jumlah besar, maka DPPH dapat berubah menjadi warna kuning. Perubahan warna ini kemudian diukur dengan spektrofotometri pada panjang gelombang 517 nm (Wathoni et al. 2009). Aktivitas antioksidan dari ekstrak dinyatakan dengan nilai inhibition concentration 50 (IC 50 ) yaitu konsentrasi sampel yang dibutuhkan untuk menghambat 50% aktivitas DPPH (Lestari 2010). Makin rendah nilai IC 50 suatu bahan, makin tinggi aktivitas antioksidannya. Hasil analisis menunjukkan nilai IC 50 ratarata ekstrak air kulit kayu mahoni sebesar ppm, untuk standar senyawa rutin sebesar ppm. Sedangkan nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 menit memiliki nilai IC 50 lebih dari 100 ppm. Nilai IC 50 untuk nanokitosan dan kitosan berada pada konsentrasi diatas 1000 ppm. Hanani et al. (2005) menyebutkan bahwa suatu bahan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat apabila memiliki nilai IC 50 kurang dari 200 ppm. Nilai IC 50 rata-rata dari seluruh sampel dapat dilihat pada Tabel 3. Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak air kulit kayu mahoni dan senyawa rutin memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi, sedangkan sampel kitosan, nanokitosan, nanopartikel dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 memiliki aktivitas yang sangat rendah atau sedikit. Kecilnya nilai IC 50 kitosan, nanokitosan, nanopartikel dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 ini dapat disebabkan oleh nilai derajat deasetilasi sampel kitosan, bobot molekul kitosan, dan waktu inkubasi setelah penambahan DPPH (Yen et al. 2008). Nilai derajat deasetilasi merupakan presentasi gugus asetil yang berhasil dihilangkan selama proses deasetilasi kitin. Penambahan derajat deasetilasi menyebabkan bertambahnya gugus amina bebas (Milot et al diacu dalam Kamelia 2009). Nanopartikel ekstrak kulit kayu mahoni yang tersalut kitosan memerlukan waktu dalam pelepasan ekstrak untuk bereaksi dengan DPPH. Yen et al melaporkan bahwa aktivitas antioksidan untuk sampel kitosan dengan waktu inkubasi 120 menit lebih efektif dibandingkan dengan sampel kitosan dengan waktu inkubasi 60 dan 90 menit. Pengukuran aktivitas antioksidan kitosan dengan metode DPPH dinilai tidak efektif. Pengukuran nilai IC 50 tidak dapat dilakukan pada sampel kitosan, nanokitosan, dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60. Maka, dilakukan pengukuran daya hambat pada satu konsentrasi. Nilai hambat yang stabil terdapat pada konsentrasi 25 ppm sedangkan untuk konsentrasi diatasnya daya hambat sampel menjadi tidak stabil. Larutan kitosan dengan konsentrasi 25 ppm mempunyai daya hambat sebesar 0.137%. Sampel nanopartikel dengan waktu ultrasonikasi 30 dan 60 mempunyai daya hambat secara berutan sebesar 3.09%, dan 10.64%. Sedangkan daya hambat nanokitosan konsentrasi 25 ppm tidak tersedia (NA). Gambar 12 menunjukkan hubungan antara sampel dengan konsentrasi 25 ppm dan daya hambatnya. Tabel 3 Nilai IC 50 rata-rata seluruh sampel Ekstrak IC 50 rata-rata (ppm) Standar senyawa rutin Ekstrak air Nanopartikel 30 menit >100 Nanopartikel 60 menit >100 Nanokitosan >100 Kitosan >