LAMPIRAN Lampiran 1. Persentase Data Pengamatan Kultur yang Membentuk Kalus Ulangan I II III Total A 0 B 0 0 0 0 0 A 0 B 1 0 0 0 0 A 0 B 2 0 0 0 0 A 0 B 3 0 0 0 0 A 1 B 0 1 1 1 3 A 1 B 1 1 1 1 3 A 1 B 2 1 1 1 3 A 1 B 3 1 1 1 3 A 2 B 0 1 1 1 3 A 2 B 1 1 1 1 3 A 2 B 2 1 1 1 3 A 2 B 3 1 1 1 3 A 3 B 0 1 1 1 3 A 3 B 1 1 1 1 3 A 3 B 2 1 1 1 3 A 3 B 3 1 1 1 3 Total 36 Keterangan: 1 = Kalus Tumbuh 0 = Kalus Tidak Tumbuh % Kalus Tumbuh = x 100% = x 100% = 75% % Kalus Tidak Tumbuh = x 100% = x 100% = 25%
30 Lampiran 2. Data Pengamatan Waktu Tumbuh Kalus (Hari Setelah Tanam) Ulangan I II III Rataan A 0 B 0 - - - - A 0 B 1 - - - - A 0 B 2 - - - - A 0 B 3 - - - - A 1 B 0 124 131 116 123,7 A 1 B 1 128 129 124 127,0 A 1 B 2 134 128 132 131,3 A 1 B 3 123 137 128 129,3 A 2 B 0 109 117 112 112,7 A 2 B 1 117 109 115 113,7 A 2 B 2 113 114 103 110,0 A 2 B 3 107 112 121 113,3 A 3 B 0 94 97 88 93,0 A 3 B 1 101 95 94 96,7 A 3 B 2 98 93 97 96,0 A 3 B 3 98 96 102 98,7 Daftar Sidik Ragam Waktu Tumbuh Kalus SK DB JK KT Fhit F Tabel f5% f1% 11 6222,222 565,657 22,958** 2,216 3,094 Auksin (A) 2 6050,056 3025,028 122,775** 3,402 5,613 Sitokinin (B) 3 76,000 25,333 1,028 tn 3,008 4,718 AxB 6 96,167 16,028 0,651 tn 2,508 3,666 Galat 24 591,333 24,639 - - - Total 46 13035,778 - - - - Keterangan : ** : berbeda sangat nyata tn : Tidak berbeda nyata
31 Tes Post Hoc Auksin 2,4-D Duncan a,b 2,4-D N Subset 1 2 3 A3 12 96,0833 A2 12 112,4167 A1 12 127,8333 Sig. 1,000 1,000 1,000 BAP N Sitokinin BAP Subset 1 Duncan a,b B0 9 109,7778 B2 9 112,4444 B1 9 112,4444 B3 9 113,7778 Sig. 0,130
32 Lampiran 3. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus Embriogenik Ulangan I II III Total A 0 B 0 - - - - A 0 B 1 - - - - A 0 B 2 - - - - A 0 B 3 - - - - A 1 B 0 1 1 1 3 A 1 B 1 0 1 1 2 A 1 B 2 1 1 1 3 A 1 B 3 1 1 1 3 A 2 B 0 1 1 0 2 A 2 B 1 0 0 1 1 A 2 B 2 0 1 0 1 A 2 B 3 0 0 0 0 A 3 B 0 0 0 0 0 A 3 B 1 0 1 0 1 A 3 B 2 0 0 0 0 A 3 B 3 0 0 0 0 Total 16 Keterangan: 1 = Kalus Embriogenik 0 = Kalus non Embriogenik - = Tidak Tumbuh Kalus % Kalus Embriogenik = = x100% = 44,44% % Kalus tidak Embriogenik = = x100% = 55,56%
33 Lampiran 4. Data Pengamatan Warna Kalus Ulangan I II III A 0 B 0 - - - A 0 B 1 - - - A 0 B 2 - - - A 0 B 3 - - - A 1 B 0 Kuning Kuning Kuning A 1 B 1 Kuning Kuning Kuning A 1 B 2 Kuning Kuning Kuning A 1 B 3 Kuning Kuning Kuning A 2 B 0 Kuning Kuning Kuning A 2 B 1 Kuning Coklat Kuning Kuning A 2 B 2 Kuning Coklat Kuning Coklat Kuning A 2 B 3 Kuning Coklat Kuning Coklat Kuning Coklat A 3 B 0 Coklat Kuning Kuning Coklat A 3 B 1 Kuning Coklat Kuning Coklat A 3 B 2 Coklat Kuning Coklat Coklat A 3 B 3 Kuning Coklat Coklat Kuning Coklat
34 Lampiran 5. Persentase Warna Kalus Warna Kalus Total Kuning Kuning Coklat Coklat A 0 B 0 - - - - A 0 B 1 - - - - A 0 B 2 - - - - A 0 B 3 - - - - A 1 B 0 3 - - 3 A 1 B 1 3 - - 3 A 1 B 2 3 - - 3 A 1 B 3 3 - - 3 A 2 B 0 3 - - 3 A 2 B 1 2 1-3 A 2 B 2 1 2-3 A 2 B 3-3 - 3 A 3 B 0 1 1 1 3 A 3 B 1 1 1 1 3 A 3 B 2-1 2 3 A 3 B 3-2 1 3 Total 20 11 5 36 % Kalus warna kuning = x 100% = x 100% = 55,56% % Kalus warna kuning coklat = x 100% = x 100% = 30,56% % Kalus warna coklat = x 100% = x 100% = 13,88%
35 Lampiran 6. Data Pengamatan Berat Basah Kalus (g) Ulangan I II III Rataan A 0 B 0 - - - - A 0 B 1 - - - - A 0 B 2 - - - - A 0 B 3 - - - - A 1 B 0 0,302 0,220 0,376 0,299 A 1 B 1 0,322 0,371 0,423 0,372 A 1 B 2 0,307 0,545 0,327 0,393 A 1 B 3 0,407 0,352 0,393 0,384 A 2 B 0 0,484 0,376 0,395 0,418 A 2 B 1 0,499 0,403 0,462 0,455 A 2 B 2 0,441 0,350 0,509 0,433 A 2 B 3 0,464 0,354 0,384 0,401 A 3 B 0 0,196 0,304 0,279 0,260 A 3 B 1 0,335 0,246 0,225 0,269 A 3 B 2 0,224 0,377 0,249 0,283 A 3 B 3 0,251 0,232 0,309 0,264 Daftar Sidik Ragam Berat Basah Kalus SK DB JK KT Fhit F Tabel f5% f1% 11 0,173 0,016 3,308** 2,216 3,094 Auksin (A) 2 0,151 0,076 15,876** 3,402 5,613 Sitokinin (B) 3 0,011 0,004 0,747 tn 3,008 4,718 AxB 6 0,011 0,002 0,400 tn 2,508 3,666 Galat 24 0,114 0,005 - - - Total 46 0,46 - - - - Keterangan : ** : berbeda sangat nyata tn : Tidak berbeda nyata
36 Tes Post Hoc Auksin 2,4-D Duncan a,b 2,4-D N Subset 1 2 3 A3 12 0,268917 A1 12 0,362083 A2 12 0,426750 Sig. 1,000 1,000 1,000 Sitokinin BAP Duncan a,b BAP N Subset 1 B0 9 0,325778 B3 9 0,349556 B1 9 0,365111 B2 9 0,369889 Sig. 0,227
37 Lampiran 7. Komposisi Media Murashige-Skoog (MS) Bahan Kimia Makro Nutrien NH 4 NO 3 KNO 3 CaCl 2.H 2 O MgSO 4.7H 2 O KH 2 PO 4 Iron Na 2 EDTA FeSO 4.7H 2 O Mikro Nutrien MnSO 4.4H 2 O ZnSO 4.7H 2 O H 3 BO 3 KI NaMoO 4.2H 2 O CuSO 4.5H 2 O CoCl.6H 2 O Vitamin Glycine Nicotine Acid Pyrodoxin HCl Thyamine HCl Myo-inositol Sukrosa Agar Konsentrasi dalam Media (mg/l) 1650,000 1900,000 440,000 370,000 170,000 37,000 27,800 22,300 8,600 6,200 0,830 0,250 0,025 0,025 2,000 0,500 0,500 0,100 100,000 30.000,000 7000,000 Ph 5,8
38 Lampiran 8. Alur Kerja Pembuatan Media MS Unsur Hara dimasukkan hara makro, mikro, iron, vitamin, ke dalam erlenmeyer dan ditambah akuades hingga 2000 ml. dibagi ke 16 perlakuan. ditambahkan ZPT sesuai perlakuan. ditambahkan arang aktif 0,375 g. diukur derajat keasaman (ph) larutan setiap perlakuan dengan menggunakan ph meter sebesar 5,8. ditambahkan masing-masing media dengan 0,875 g agar sambil dimasak. dimasukkan media ke dalam botol-botol kultur dengan volume lebih kurang 10 ml. ditutup aluminium foil kemudian diikat dengan karet. disterilkan botol berisi tersebut dengan autoklaf pada tekanan 15 psi, suhu 121 0 C selama 10 menit. disimpan dalam rak kultur dalam ruangan AC. Media MS
39 Pengkulturan Bunga Betina pada Media MS Bunga Betina dibersihkan dengan air mengalir hingga bersih. direndam dalam larutan fungisida 2 g/l. dibilas dengan akuades steril. direndam dengan larutan antibiotik. dibilas dengan akuades steril. direndam dengan larutan pemutih 10 % selama 10 menit. dibilas 3 kali dengan akuades steril direndam dengan HgCl 2 1 g/l selama 15 menit. dibilas 3 kali dengan akuades steril dikeringkan di atas kertas saring steril dalam cawan petri. Bunga Betina Steril dilukai salah satu sisi bunga betina satu per satu. ditanam dalam media MS sesuai perlakuan ditutup dengan aluminium foil botol yang berisi eksplan. disusun pada rak kultur diamati dan dipelihara hingga terbentuk kalus Kalus