LAMPIRAN. Hasil Translasi sequens dengan ExPASy Translate Tool

LAMPIRAN 1. Hasil Sekuensing isolat virus IBD No. Isolat Hasil Sekuensing 1. IBDV-Indo5 AACAAGCGTCCAAGGCCTTATACTGGGTGCTACCATCT ACCTTATAGGCTTTGATGGGACCGCGGTAATCACCAG GCTGTGGCCGCAGACAATGGGCTAACGGCCGGCACTG ACAACCTTATGCCATTCAATATTGTGATTCCAACCAGC GAGATAACCCAGCCAAT 2. virus vvibd lokal AAGCGTCCAAGGCCTTATACTGGGTGCTACCATCTACC TCATAGGCTTTGATGGGACTGCGGTAATCACCAGAGCT GTGGCCGCAGACAATAGGCTAACGGCCGGCACTGACA ACCTTATGCCATTCAATATTGTGATCCCAACCAGCGAG ATAACCCAGCCAATTACATCCGACGCCTATGAGGTAG ATGGTAGCACCCAGTATAAGGCCTTGG 3. virus IBD Intermediate plus lokal ACCATCTACCTTATAGGCTTTGATGGGACTGCGGTAAT CACCAGGGCTGTGGCCGCAAACAATGGGCTGACGACC GGCACGACAACCTTATGCCATTCAATCTTGTGATTCCA ACAAACGAGATAACCCAGCCAATTACATCCAAAGCCT ATAAGGTAGATGGTAGCACCCACTATAAGGCCGTGGA CGCTTGTTTGAAACACGA 4. virus IBD Intermediate plus komersial AAGCGTCCAAGGCCTTATACTGGGCGCCACCATCTACC TTATAGGCTTTGATGGGACAACGGTAATCACCAGAGT GTGGCCGCAAACAATGGGCTGACGGCCGGCACCGACA ATCTTATGCCATTCAATCTTGTGATTCCAACCAACGAG ATAACCCAGCCAATTACATCA Hasil Translasi sequens dengan ExPASy Translate Tool IBDV-Indo5 Please selected one of the following frames: 5'3' Frame 1 NKRPRPYTGCYHLPYRLStopWDRGNHQSCGRRQWANGRHStopQPYAIQ YC DSNQRDNPAN 5'3' Frame 2 TSVQGLILGATIYLIGFDGTAVITRAVAADNGLTAGTDNLMetPFNIVIPTSE ITQP

94 5'3' Frame 3 QASKALYWVLPSTLStopALMetGPRStopSPELWPQTMetGStopRPALTTLC HSILStopFQPARStopPSQ 3'5' Frame 1 IGWVISLVGITILNGIRLSVPAVSPLSAATALVITAVPSKPIRStopMetVAPSI RPWTLV 3'5' Frame 2 LAGLSRWLESQYStopMetAStopGCQCRPLAHCLRPQLWStopLPRSHQSLS topgrwstophpvstopglgrl 3'5' Frame 3 WLGYLAGWNHNIEWHKVVSAGRStopPIVCGHSSGDYRGPIKAYKVDGS TQYKALDAC vvibdv lokal Please select one of the following frames: 5'3' Frame 1 KRPRPYTGCYHLPHRLStopWDCGNHQSCGRRQStopANGRHStopQPYAIQ P YCDPNQRDNPANYIRRLStopGRWStopHPVStopGL 5'3' Frame 2 SVQGLILGATIYLIGFDGTAVITRAVAADNRLTAGTDNLMetPFNIVIPTSEI TQ PITSDAYEVDGSTQYKAL 5'3' Frame 3 ASKALYWVLPSTSStopALMetGLRStopSPELWPQTIGStopRPALTTLCHSIL StopSQPARStopPSQLHPTPMetRStopMetVAPSIRPW 3'5' Frame 1 PRPYTGCYHLPHRRRMetStopLAGLSRWLGSQYStopMetAStopGCQCRPL AYCLRPQLWStopLPQSHQSLStopGRWStopHPVStopGLGR IBDV-Indo5 Please selected one of the following frames: 5'3' Frame 1 NKRPRPYTGCYHLPYRLStopWDRGNHQSCGRRQWANGRHStopQPYAIQ R YC DSNQRDNPAN 5'3' Frame 2 TSVQGLILGATIYLIGFDGTAVITRAVAADNGLTAGTDNLMetPFNIVIPTSE ITQP 5'3' Frame 3 QASKALYWVLPSTLStopALMetGPRStopSPELWPQTMetGStopRPALTTLC HSILStopFQPARStopPSQ Sto

95 3'5' Frame 1 IGWVISLVGITILNGIRLSVPAVSPLSAATALVITAVPSKPIRStopMetVAPSI RPWTLV 3'5' Frame 2 LAGLSRWLESQYStopMetAStopGCQCRPLAHCLRPQLWStopLPRSHQSLS topgrwstophpvstopglgrl 3'5' Frame 3 WLGYLAGWNHNIEWHKVVSAGRStopPIVCGHSSGDYRGPIKAYKVDGS TQYKALDAC virus vvibd lokal Please select one of the following frames: 5'3' Frame 1 KRPRPYTGCYHLPHRLStopWDCGNHQSCGRRQStopANGRHStopQPYAIQ YCDPNQRDNPANYIRRLStopGRWStopHPVStopGL 5'3' Frame 2 SVQGLILGATIYLIGFDGTAVITRAVAADNRLTAGTDNLMetPFNIVIPTSEI TQ PITSDAYEVDGSTQYKAL 5'3' Frame 3 ASKALYWVLPSTSStopALMetGLRStopSPELWPQTIGStopRPALTTLCHSIL StopSQPARStopPSQLHPTPMetRStopMetVAPSIRPW 3'5' Frame 1 PRPYTGCYHLPHRRRMetStopLAGLSRWLGSQYStopMetAStopGCQCRPL AYCLRPQLWStopLPQSHQSLStopGRWStopHPVStopGLGR 3'5' Frame 2 QGLILGATIYLIGVGCNWLGYLAGWDHNIEWHKVVSAGRStopPIVCGHSS GDYRSPIKAYEVDGSTQYKALDA 3'5' Frame 3 KALYWVLPSTSStopASDVIGWVISLVGITILNGIRLSVPAVSLLSAATALVI TAVPSKPMetRStopMetVAPSIRPWTL virus IBD Intermediate plus lokal Please select one of the following frames: 5'3' Frame 1 TIYLIGFDGTAVITRAVAANNGLTTGTTTLCHSILStopFQQTRStopPSQLHP KP IRStopMetVAPTIRPWTLVStopNT 5'3' Frame 2 P S T L Stop A L Met G L R Stop S P G L W P Q T Met G Stop R P A R Q P Y A I Q S C D S N K R D N P A N Y I Q S L Stop G R W Stop H P L Stop G R G R L F E T R

96 5'3' Frame 3 HLPYRLStopWDCGNHQGCGRKQWADDRHDNLMetPFNLVIPTNEITQPIT KA YKVDGSTHYKAVDACLKH 3'5' Frame 1 SCFKQASTALStopWVLPSTLStopALDVIGWVISFVGITRLNGIRLSCRSSA HCLRPQPWStopLPQSHQSLStopGRW 3'5' Frame 2 RVSNKRPRPYSGCYHLPYRLWMetStopLAGLSRLLESQDStopMetAStopG CRAGRQPIVCGHSPGDYRSPIKAYKVDG 3'5' Frame 3 VFQTSVHGLIVGATIYLIGFGCNWLGYLVCWNHKIEWHKVVVPVVSPLFA ATALVITAVPSKPIRStopMet virus IBD Intermediate plus komersial : Please select one of the following frames: 5'3' Frame 1 KRPRPYTGRHHLPYRLStopWDNGNHQSCGRKQWADGRHRQSYAIQSCD P SNQRDNPANYI 5'3' Frame 2 SVQGLILGATIYLIGFDGTTVITRAVAANNGLTAGTDNLMetPFNLVIPTNEI TQPITS TS 5'3' Frame 3 ASKALYWAPPSTLStopALMetGQRStopSPELWPQTMetGStopRPAPTILCH SILStopFQPTRStopPSQLH 3'5' Frame 1 StopCNWLGYLVGWNHKIEWHKIVGAGRQPIVCGHSSGDYRCPIKAYKVD GGAQYKALDA 3'5' Frame 2 D V I G W V I S L V G I T R L N G I R L S V P A V S P L F A A T A L V I T V V P S K P I R Stop Met V A P S I R P W T L 3'5' Frame 3 Met Stop L A G L S R W L E S Q D Stop Met A Stop D C R C R P S A H C LR P Q L W Stop L P L S H Q S L Stop G R W W R P V Stop G L G R

97 2. Anova diameter Folikel Limfoid Bursa Fabricius Embrio Ayam The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values perlakuan 3 P0 P1 P2 hari 4 1 2 3 12 r 3 1 2 3 Number of Observations Read 36 Number of Observations Used 36 Dependent Variable: respons Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 19 22710.65843 1195.29781 25.73 <.0001 Error r 16 743.42971 46.46436 Corrected Total 35 23454.08814 R-Square Coeff Var Root MSE respon Means 0.968303 9.439724 6.816477 72.21056 Source DF Type I SS Mean F Value Pr > F Square perlakuan 2 339.13653 169.56826 3.65 0.0495 hari 3 21081.28515 7027.09505 151.24 <.0001 r(hari) 8 710.88496 88.86062 1.91 0.1284 perlakuan*hari 6 579.35180 96.55863 2.08 0.1136 Source DF Type III SS Mean F Value Pr > F Square perlakuan 2 339.13653 169.56826 3.65 0.0495 hari 3 21081.28515 7027.09505 151.24 <.0001 r(hari) 8 710.88496 88.86062 1.91 0.1284 perlakuan*hari 6 579.35180 96.55863 2.08 0.1136

98 Tests of Hypotheses Using the Type III MS for r(hari) as an Error Term Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F hari 3 21081.28515 7027.09505 79.08 <.0001 Duncan's Multiple Range Test for respon NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 16 Error Mean Square 46.46436 Number of Means 2 3 Critical Range 5.899 6.186 Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N perlakuan A 76.192 12 P1 A B A 71.718 12 P2 B B 68.722 12 P0 The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for respon NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 8 Error Mean Square 88.86 062 Number of Means 2 3 4 Critical Range 10.25 10.68 10.92 Means with the same letter are not significantly different

99 Duncan Grouping Mean N hari A 108.316 9 3 B 79.037 9 2 C 56.687 9 1 D 44.802 9 12 The GLM Procedure Level of ------------respon----------- perlakuan N Mean Std Dev P0 12 68.7220833 28.8598725 P1 12 76.1916667 24.8202446 P2 12 71.7179167 25.5425616 Level of ------------respon----------- hari N Mean Std Dev 1 9 56.687222 7.5437678 2 9 79.037222 11.4355234 3 9 108.315556 9.9552098 12 9 44.802222 3.1328173 Level of Level of ------------respon----------- perlakuan hari N Mean Std Dev P0 1 3 51.215000 3.1650000 P0 2 3 69.866667 8.5990310 P0 3 3 112.600000 3.2000000 P0 12 3 41.206667 1.2000556 P1 1 3 65.306667 5.7061838 P1 2 3 86.700000 4.2375937 P1 3 3 106.160000 18.2283625 P1 12 3 46.600000 1.2000000 P2 1 3 53.540000 3.7200000 P2 2 3 80.545000 14.6132910 P2 3 3 106.186667 3.5509201 P2 12 3 46.600000 2.7000000

100 Class Level Information Class Level Values kombinasi 12 P01 P012 P02 P03 P11 P112 P12 P13 P21 P212 P22 P23 r 3 1 2 3 Number of Observations Read 36 Number of Observations Used 36 Uji lanjut diameter Folikel limfoid bursa fabricius embrio ayam Dependent e Variable: respon Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 11 21999.77347 1999.97941 33.00 <.0001 Error 24 1454.31467 60.59644 Corrected Total 35 23454.08814 R-Square Coeff Var Root MSE respon Mean 0.937993 10.78010 7.784372 72.21056 Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F kombinasi 11 21999.77347 1999.97941 33.00 <.0001 Number of Means 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Critical Range 13.12 13.78 14.20 14.50 14.72 14.90 15.03 15.14 15.23 15.31 15.37

101 Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N kombinasi A 112.600 3 P03 A A 106.187 3 P23 A 106.160 3 P13 B 86.700 3 P12 B C B 80.545 3 P22 C C D 69.860 3 P02 D E D 65.307 3 P11 E E F 53.540 3 P21 F F 51.215 3 P01 F F 46.600 3 P212 F F 46.600 3 P112 F F 41.207 3 P012 3. Anova Jumlah Folikel Limfoid dalam Plika Bursa Fabricius Embrio Ayam The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values perlakuan 3 P0 P1 P2 hari 4 1 2 3 12 r 3 1 2 3 Number of Observations Read 34 Dependent Variable: respon

102 Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 19 4801.756730 252.724038 5.02 0.0024 Error 13 653.957361 50.304412 Corrected Total 32 5455.714091 R-Square Coeff Var Root MSE respon Mean 0.880133 27.56339 7.092560 25.73182 Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F perlakuan 2 532.252333 266.126167 5.29 0.0208 hari 3 3772.592122 1257.530707 25.00 <.0001 r(hari) 8 276.033654 34.504207 0.69 0.6978 perlakuan*hari 6 220.878621 36.813103 0.73 0.6328 Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F perlakuan 2 532.252333 266.126167 5.29 0.0208 hari 3 3772.592122 1257.530707 25.00 <.0001 r(hari) 8 276.033654 34.504207 0.69 0.6978 perlakuan*hari 6 220.878621 36.813103 0.73 0.6328 Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F perlakuan 2 568.492602 284.246301 5.65 0.0171 hari 3 3557.840554 1185.946851 23.58 <.0001 r(hari) 8 246.203889 30.775486 0.6 0.7537 perlakuan*hari 6 220.878621 36.813103 0.7 0.6328 Tests of Hypotheses Using the Type III MS for r(hari) as an Error Term Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F hari 3 3557.840554 1185.946851 38.54 <.0001 Duncan's Multiple Range Test for respon NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.

103 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 13 Error Mean Square 50.30441 Harmonic Mean of Cell Sizes 10.93923 NOTE: Cell sizes are not equal. Number of Means 2 3 Critical Range 6.552 6.862 Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N perlakuan A 30.941 11 P2 A B A 24.917 12 P0 B B 20.980 10 P1 Duncan's Multiple Range Test for respon NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.050000 Error Degrees of Freedom 8.000000 Error Mean Square 30.775490 Harmonic Mean of Cell Sizes 8.228571 NOTE: Cell sizes are not equal. Number of Means 2 3 4 Critical Range 6.307 6.572 6.721 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N perlakuan A 38.356 8 3 A A 34.019 8 2 B 19.194 8 1 B B 12.956 9 12

104 Level of perlakuan Level of hari ------------respon--------- N Mean Std Dev P0 12 24.9166667 9.9578962 P1 10 20.9800000 15.0544050 P2 11 30.9409091 13.3902543 ------------respon--------- N Mean Std Dev 1 8 19.1937500 8.08015371 2 8 34.0187500 7.99481696 3 8 38.3562500 8.81417031 12 9 12.9555556 6.81892791 Level of perlakuan Level of hari -----------respon------------ N Mean Std Dev P0 1 3 21.0666667 6.0044428 P0 2 3 29.6666667 8.4387993 P0 3 3 34.9333333 6.8478707 P0 12 3 14.0000000 2.4248711 P1 1 2 8.2000000 3.3941125 P1 2 2 33.9000000 4.1012193 P1 3 3 35.5333333 5.9911045 P1 12 3 6.3333333 0.2309401 P2 1 3 24.6500000 3.9896742 P2 2 3 38.4500000 9.2847994 P2 3 3 47.7250000 11.9854599 P2 12 3 18.5333333 8.1223970 Class Levels Values kombinasi 12 P01 P012 P02 P03 P11 P112 P12 P13 P21 P212 P22 P23 r 3 1 2 3 Number of Observations Read 34 Number of Observations Used 33

105 Dependent Variable: respon Sum of Source DF Squares Mean F Pr > F Square Value Model 11 4555.552841 414.141167 9.66 <.0001 Error 21 900.161250 42.864821 Corrected Total 32 5455.714091 R-Square Coeff Var Root MSE respon Mean 0.835006 25.44369 6.547123 25.73182 Sum of Source DF Type I Mean Square F Value Pr > F Kombinasi 11 4555.552841 414.141167 9.66 <.0001 Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F Corrected Total 11 4555.552841 414.141167 9.66 <.0001 Uji lanjut jumlah folikel limfoid dalam plika bursa fabricius embrio ayam Duncan's Multiple Range Test for respon NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 21 Error Mean Square 42.86482 Harmonic Mean of Cell Sizes 2.666667 NOTE: Cell sizes are not equal Number of Means 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Critical Range 11.79 12.38 12.75 13.02 13.21 13.36 13.48 13.57 13.64 13.71 13.76

106 Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N Kombinasi A 47.725 2 P23 A B A 38.450 3 P22 B A C B A C 35.533 3 P13 B C B C 34.933 3 P03 B C B C 33.900 2 P12 B C B D C 29.667 3 P02 D C E D C 24.650 3 P21 E D E D 21.067 3 P01 E D E D F 18.533 3 P212 E F E F 14.000 3 P012 F F 8.200 2 P11 F F 6.333 3 P112 4. Hasil Analisis Skor Jumlah Antigen pada Bursa Fabricius Embrio Ayam dengan Uji Kruskal Wallis 1 hari pi Chi-Square 8.000 df 2 Asymp. Sig..018 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respon yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.01) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda

107 Perlakuan N Mean Rank Kontrol (a) 3.00 2.00 IBDV Intermediate plus lokal 3.00 6.50 4.50 IBDV Intermediate plus komersial 3.00 6.50 4.50 0.00 k 3 N 9 sum(t^3) 243 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 3.630264759 2 hari pi Chi-Square 8.000 df 2 Asymp. Sig..018 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respon yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.01) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Perlakuan N Mean Rank Kontrol (a) 3.00 2.00 virus IBD Intermediate plus lokal 3.00 6.50 4.50 virus IBD Intermediate plus komersial 3.00 6.50 4.50 0.00 k 3 N 9 sum(t^3) 243 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 3.630264759

108 3 hari pi Chi-Square 8.000 df 2 Asymp. Sig..018 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.01) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Perlakuan N Mean Rank Kontrol (a) 3.00 2.00 virus IBD Intermediate plus lokal 3.00 6.50 4.50 virus IBD Intermediate plus komersial 3.00 6.50 4.50 0.00 k 3 N 9 sum(t^3) 243 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 3.630264759 5. Hasil Analisis Skor Kerusakan Bursa Fabricius dengan uji Kruskal Wallis 1 hari pi Chi-Square 15.121 Asymp. Sig..010 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda

109 Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.01) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda. Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 2.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 14.00 12.00 Intermediate plus Lokal 3.00 5.00 3.00 9.00 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 14.00 12.00 0.00 9.00 Intermediate plus komersial 3.00 8.00 6.00 6.00 3.00 6.00 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 14.00 12.00 0.00 9.00 0.00 6.00 k 6 N 18 sum(t^3) 184 sum(t) 16 z 1.96 pembanding 8.419102463 2 hari pi Chi-Square 13.974 Asymp. Sig..016 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respon yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.016) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

110 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 3.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 14.33 11.33 Intermediate plus Lokal 3.00 5.33 2.33 9.00 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 14.33 11.33 0.00 9.00 Intermediate plus komersial 3.00 6.67 3.67 7.67 1.33 7.67 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 13.33 10.33 1.00 8.00 1.00 6.67 Total k 6 N 18 sum(t^3) 176 sum(t) 14 z 1.96 pembanding 8.423574762 3 hari pi Chi-Square 15.328 Asymp. Sig..009 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.009) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda

111 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 2.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 13.00 11.00 Intermediate plus Lokal 3.00 5.83 3.83 7.17 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 12.67 10.67 0.33 6.83 Intermediate plus komersial 3.00 7.17 5.17 5.83 1.33 5.50 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 16.33 14.33 3.33 10.50 3.67 7.17 k 6 N 18 sum(t^3) 176 sum(t) 14 z 1.96 pembanding 8.423574762 7 hari pi Chi-Square 14.711 Asymp. Sig..012 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.012) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

112 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 3.50 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 12.17 10.17 Intermediate plus Lokal 3.00 3.50 1.50 9.50 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 12.17 10.17 0.83 6.33 Intermediate plus komersial 3.00 7.50 5.50 5.50 1.67 5.17 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 14.67 12.67 1.67 8.83 2.00 5.50 N 18 sum(t^3) 440 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 8.22678266 14 hari pi Chi-Square 16.342 Asymp. Sig..006 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.006) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

113 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3 2.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3 15.00 13.00 Intermediate plus Lokal 3 6.50 4.50 8.50 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3 16.00 14.00 1.00 9.50 Intermediate plus komersial 3 6.50 4.50 8.50 0.00 9.50 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3 11.00 9.00 4.00 4.50 5.00 4.50 k 6 N 18 sum(t^3) 251 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 8.369749452 6. Anova Skor Jumlah RES pada Limpa Ayam 1 hari pi Chi-Square 8.000 Asymp. Sig..156 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.156) > alpha 5% artinya terima H0. semua perlakuan memberikan respons yang sama. 2 hari pi Chi-Square 14.387 Asymp. Sig..013

114 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.013) < alpha 5% artinya tolak H0. minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda. Perlakuan N Mean Ranks Kontrol 3.00 4.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 16.00 12.00 Intermediate plus Lokal 3.00 6.17 2.17 9.83 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 11.67 7.67 4.33 5.50 Intermediate plus komersial 3.00 4.00 0.00 12.00 2.17 7.67 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 10.50 6.50 5.50 4.33 1.17 6.50 k 6 N 18 sum(t^3) 587 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 8.113844861 3 hari Chi-Square 12.079 Asymp. Sig..034 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.013) < alpha 5% artinya tolak H0. minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

115 Perlakuan N Mean Ranks Kontrol 3.00 4.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 14.83 10.83 Intermediate plus Lokal 3.00 6.50 2.50 8.33 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 11.50 7.50 3.33 5.00 Intermediate plus komersial 3.00 6.50 2.50 8.33 0.00 5.00 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 13.67 9.67 1.17 7.17 2.17 7.17 k 6 N 18 sum(t^3) 864 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 7.896641795 7 hari Chi-Square 8.236 Asymp. Sig..144 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.144) > alpha 5% artinya terima H0. semua perlakuan memberikan respons yang sama. 14 hari Chi-Square 10.711 Asymp. Sig..057

116 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.057) > alpha 5% artinya terima H0. semua perlakuan memberikan respons yang sama. 7. Hasil Analisis Jumlah sel RES pada Korteks Timus dengan Uji Kruskal Wallis 1 hari Chi-Square 16.420 Asymp. Sig..006 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.006) < alpha 5% artinya tolak H0. minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda. Perlakuan N Mean Ranks Kontrol 3.00 5.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 13.00 8.00 Intermediate plus Lokal 3.00 5.00 0.00 8.00 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 16.00 11.00 3.00 11.00 Intermediate plus komersial 3.00 5.00 0.00 8.00 0.00 11.00 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 13.00 8.00 0.00 8.00 3.00 8.00 k 6 N 18 sum(t^3) 1080 sum(t) 18 z 1.96 pembanding 7.723845431

117 2 hari pi Chi-Square 16.440 Asymp. Sig..006 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 5.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 11.50 6.50 3.00 5.00 0.00 6.50 Intermediate plus Lokal 3.00 16.00 11.00 4.50 11.00 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 5.00 0.00 6.50 0.00 11.00 Intermediate plus komersial Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 14.50 9.50 3.00 9.50 1.50 9.50 3 hari pi Chi-Square 15.214 Asymp. Sig..009 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.009) < alpha 5% artinya tolak H0. minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

118 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 5.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 13.33 8.33 Intermediate 3.00 5.00 3.33 8.33 plus Lokal Intermediate 3.00 13.67 5.33 0.33 8.67 plus Lokal + virus vvibd lokal Intermediate 3.00 5.00 3.33 8.33 0.00 8.67 plus komersial Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 15.00 6.67 1.67 10.00 1.33 10.00 k 6 N 18 sum(t^3) 882 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 7.882320417 7 hari pi Chi-Square 14.326 Asymp. Sig..014 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.009) < alpha 5% artinya tolak H0. minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

119 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 5.5 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 15.33 9.83 Intermediate plus Lokal 3.00 5.5 0.00 9.83 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 14 8.50 1.33 8.50 Intermediate plus komersial 3.00 5.5 0.00 9.83 0.00 8.50 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 11.17 5.67 4.16 5.67 2.83 5.67 k 6 N 18 sum(t^3) 1344 sum(t) 18 z 1.96 pembanding 7.506228525 14 hari pi Chi-Square 10.723 Asymp. Sig..057 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respon yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.057) > alpha 5% artinya terima H0. semua perlakuan memberikan respons yang sama.

120 8. Anova Ketebalan Korteks Timus The GLM Procedure Dependent Variable: respon Sum of Source DF Squares Mean Square F Pr > F Value Model 39 42.25193724 1.08338301 3.27 <.0001 Error 50 16.54162029 0.33083241 Corrected Total 89 58.79355753 R-Square Coeff Var Root MSE respon Mean 0.718649 19.23875 0.575180 2.989696 Source DF Type I SS Mean F Value Pr > F Square perlakuan 5 4.07236277 0.81447255 2.46 0.0453 minggu gu 4 6.39312695 1.59828174 4.83 0.0023 r(minggu) g 10 5.45416924 0.54541692 1.65 0.1201 perlakuan*minggu 20 26.33227828 1.31661391 3.98 <.0001 Source DF Type III SS Mean F Value Pr > F Square perlakuan 5 4.07236277 0.81447255 2.46 0.0453 minggu 4 6.39312695 1.59828174 4.83 0.0023 r(minggu) 10 5.45416924 0.54541692 1.65 0.1201 perlakuan*minggu 20 26.33227828 1.31661391 3.98 <.0001 Tests of Hypotheses Using the Type III MS for r(minggu) as an Error Term Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F minggu g 4 6.39312695 1.59828174 2.93 0.0765

121 The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for respon NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 50 Error Mean Square 0.330832 Number of Means 2 3 4 5 6 Critical Range 4219.4437.4580.4685.4765 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N perlakuan A 3.4117 15 P1 A B A 3.0283 15 P0 B A B A 3.0106 15 P3 B B 2.9167 15 P5 B B 2.8224 15 P4 B B 2.7485 15 P2 The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for respon NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.545417 Number of Means 2 3 4 5 Critical Range.5485.5732.5877.5970 Means with the same letter are not significantly different.

122 Duncan Grouping Mean N minggu A 3.2362 18 4 A A 3.1943 18 5 A A 3.1670 18 1 A B A 2.7842 18 3 B B 2.5668 18 2 The GLM Procedure Level of ------------respon----------- perlakuan N Mean Std Dev P0 15 3.02834444 0.78570132 P1 15 3.41166667 0.80913221 P2 15 2.74850000 0.88849414 P3 15 3.01061111 0.90569880 P4 15 2.82238889 0.60240893 P5 15 2.91666667 0.81487827 Level of ------------respon----------- minggu N Mean Std Dev 1 18 3.16703704 0.79347143 2 18 2.56675926 0.70748969 3 18 2.78420370 0.58864682 4 18 3.23622222 1.05780583 5 18 3.19425926 0.69769724

123 Level of Level of ------------respon----------- perlakuan minggu N Mean Std Dev P0 1 3 3.18666667 0.87070055 P0 2 3 2.78722222 0.28814702 P0 3 3 3.07688889 0.59326557 P0 4 3 3.55594444 1.13217412 P0 5 3 2.53500000 0.96715361 P1 1 3 2.73944444 0.31412282 P1 2 3 2.59055556 0.55380084 P1 3 3 3.63333333 0.38103295 P1 4 3 4.49000000 0.43513169 P1 5 3 3.60500000 0.52899538 P2 1 3 2.93777778 0.24367746 P2 2 3 1.39277778 0.39059902 P2 3 3 2.69611111 0.10959944 P2 4 3 3.73027778 0.79671911 P2 5 3 2.98555556 0.56769596 P3 1 3 3.92944444 1.06473045 P3 2 3 3.21388889 0.48374791 P3 3 3 2.40833333 0.55499499 P3 4 3 1.98638889 0.46604597 P3 5 3 3.51500000 0.14669507 P4 1 3 2.68222222 0.28932072 P4 2 3 2.63000000 0.77051029 P4 3 3 2.50388889 0.39921567

124 The GLM Procedure Level of Level of -------------respon-------------- perlakuan minggu N Mean Std Dev P4 4 3 3.48861111 0.37774030 P4 5 3 2.80722222 0.81089171 P5 1 3 3.52666667 1.20245929 P5 2 3 2.78611111 0.19280339 P5 3 3 2.38666667 0.42453897 P5 4 3 2.16611111 0.10726827 P5 5 3 3.71777778 0.40078511 9. Hasil Analisis Jumlah Sel Positif Mengandung Antigen virus IBD pada Organ Bursa Fabricius Ayam dengan uji Kruskal Wallis 1 hari pi Chi-Square 16.400 Asymp. Sig..006 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.006) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda. Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 5.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 14.50 9.50 Intermediate plus Lokal 3.00 5.00 0.00 9.50 Diinfeksi i virus IBD Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 13.00 8.00 1.50 8.00 Diinfeksi i virus IBD Intermediate plus komersial 3.00 5.00 0.00 9.50 0.00 8.00 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 14.50 9.50 0.00 9.50 1.50 9.50

125 k 6 N 18 sum(t^3) 1241 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 7.591047359 2 hari pi Chi-Square 14.450 Asymp. Sig..013 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respon yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.013) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda. Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 5.50 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 14.50 9.00 3.00 5.50 0.00 9.00 Intermediate plus Lokal 3.00 11.50 6.00 3.00 6.00 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 5.50 0.00 9.00 0.00 6.00 Intermediate plus komersial Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 14.50 9.00 0.00 9.00 3.00 9.00. k 6 18 sum(t^3) 1512 sum(t) 18 z 1.96 pembanding 7.364397663

126 3 hari pi Chi-Square 16.400 Asymp. Sig..006 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.006) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda. Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3 5.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3 14.50 9.50 Intermediate plus Lokal 3 5.00 0.00 9.50 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3 13.00 8.00 1.50 8.00 3 5.00 0.00 9.50 0.00 8.00 Intermediate plus komersial Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3 14.50 9.50 0.00 8.00 1.5 9.5 k 6 N 18 sum(t^3) 1241 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 7.591047359 2 hari pi Chi-Square 14.450 Asymp. Sig..013

127 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respon yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.013) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda. Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 5.50 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 14.50 9.00 3.00 5.50 0.00 9.00 Intermediate plus Lokal 3.00 11.50 6.00 3.00 6.00 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 5.50 0.00 9.00 0.00 6.00 Intermediate plus komersial 3.00 14.50 9.00 0.00 9.00 3.00 9.00 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal k 6 N 18 sum(t^3) 1512 sum(t) 18 z 1.96 pembanding 7.364397663 3 hari pi Chi-Square 16.400 Asymp. Sig..006 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.006) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

128 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3 5.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3 14.50 9.50 Intermediate plus Lokal 3 5.00 0.00 9.50 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3 13.00 8.00 1.50 8.00 3 5.00 0.00 9.50 0.00 8.00 Intermediate plus komersial Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3 14.50 9.50 0.00 8.00 1.5 9.5 k 6 N 18 sum(t^3) 1241 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 7.591047359 7 hari pi Chi-Square 16.400 Asymp. Sig..006 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respon yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.006) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

129 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 5.00 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 14.50 9.50 Intermediate plus Lokal 3.00 5.00 0.00 9.50 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 13.00 8.00 1.50 8.00 Intermediate plus komersial 3.00 5.00 0.00 9.50 0.00 8.00 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 14.50 9.50 0.00 9.50 1.50 9.50 k 6 N 18 sum(t^3) 1242 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 7.590220402 14 hari pi Chi-Square 13.611 Asymp. Sig..018 H0 : Semua perlakuan memberikan respons yang sama H1 : minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda Kesimpulan : pada output di atas didapat nilai-p(0.018) < alpha 5% artinya tolak H0. Minimal ada satu perlakuan yang memberikan respons yang berbeda.

130 Perlakuan N Mean Rank Kontrol 3.00 7.50 Diinfeksi virus vvibd lokal 3.00 7.50 0.00 Intermediate plus Lokal 3.00 7.50 0.00 0.00 Intermediate plus Lokal + virus vvibd lokal 3.00 16.67 9.17 9.17 9.17 Intermediate plus komersial 3.00 7.50 0.00 0.00 0.00 9.17 Intermediate plus komersial + virus vvibd lokal 3.00 10.33 2.83 2.83 2.83 6.33 2.83 k 6 N 18 sum(t^3) 954 sum(t) 17 z 1.96 pembanding 7.824772794 10. Pewarnaan Hematoksilin dan Eosin a. Prosedur Pewarnaan HE Preparat diletakkan dalam rak dan dicelupkan ke dalam larutan secara berurutan : Xylol (1) 3 menit Xylol (2) 3 menit Etanol absolute (1) 3 menit Etanol absolute (2) 3 menit Etanol 90% 3 menit Etanol 80% 3 menit Dibilas dengan air yang mengalir 1 menit Larutan hematoksilin 6-7 menit Dibilas dengan air yang mengalir 1 menit Larutan Scot 1 menit Dibilas dengan air yang mengalir 1 3 menit

131 Larutan eosin Dibilas dengan air yang mengalir Etanol 70% Etanol 90% Etanol absolute (1) Etanol absolute (2) Xylol (1) Xylol (2) Xylol (3) 1 5 menit 1 menit 10 celupan 10 celupan 10 celupan 1 menit 3 menit 3 menit 3 menit Area di sekeliling jaringan dilap dengan tissue, dikeringkan hingga cairan menguap kemudian dicelupkan dalam xylol. Preparat diangkat dari larutan Xylol dalam keadaan basah langsung diberi satu tetes larutan DPX dengan menggunakan syring kaca lalu ditutup dengan kaca penutup. Cairan yang berlebih dilap dengan tissue. b. Pembuatan Larutan BNF 10% Bahan : NaH 2 PO4 80 gram Na2HPO4.2H 2 O 163 gram 2 liter aquadest 2 liter Formalin pa Kedua serbuk dilarutkan dengan 2 liter aquadest dalam gelas Erlenmeyer dan diaduk dengan magnetic stirer. Larutan kemudian dimasukkan ke dalam jerigen berkapasitas 20 liter. Selanjutnya ditambahkan 2 liter formalin dan aquadest hingga volume mencapai 20 liter. Larutan di cek menggunakan ph meter (ph7). Larutan siap digunakan. c. Pembuatan Larutan Hematoksilin Serbuk hematoksilin 0,5 gram Potasium Aluminium Sulfat 25 gram Sodium Iodat ) 0,1 gram

132 Aquadest (375 ml; 100ml) Khloral Hidrat 25 gram Asam Sitrat 0,5 gram Serbuk Hematoksilin dilarutkan dengan 375 ml aquadest dan diaduk menggunakan magnetik stirer hingga larut. Potasium aluminium sulfat ditambahkan ke dalam larutan (larutan A). Sementara itu, sodium iodat dilarutkan dengan 100 ml aquadest dan diaduk menggunakan magnetic stirer (B). Larutan A dan B dicampur perlahan-lahan dengan pipet kemudian disimpan selama 24 jam (larutan an C). Selanjutnya Khlorat hidrat dan asam sitrat masing-masing ditimbang sebanyak a 25 gram dan 0,5 gram dilarutkan pada larutan C dengan menggunakan magnetic stirer hingga homogen (D). Larutan D disimpan selama 2 hari kemudian disaring menggunakan kertas saring. Larutan siap digunakan. d. Pembuatan Larutan Scot Lithium i karbonat 1 sendok teh Aquadest 2,25 liter Lithium karbonat dilarutkan dalam aquadest dan diaduk dengan magnetic stirer hingga homogen. Larutan siap digunakan. e. Pembuatan Larutan Eosin Eosin 3 gram Erythrosin 1 gram Kalsium khlorida 1 gram Aquadest 400 ml Semua serbuk dimasukkan ke dalam gelas Erlenmeyer, lalu ditambahkan aquadest dan diaduk hingga homogen. Larutan siap digunakan. 11. Pembuatan Larutan untuk Pewarnaan IHK a. Pembuatan larutan PBS 0,01M, ph 7.2 Na 2 PO4 :1,48 gram KH PO4 2 : 0,43 gram NaCl : 7,2 gram

133 Semua garam dilarutkan dengan 1 liter aquadest, diaduk dengan magnetik stirer hingga homogen. Larutan dicek dengan ph meter (7,2). larutan siap digunakan. Skim milk 0,1 %. Sebanyak 1 gram skim milk lemak dilarutkan dalam 100 ml PBS 0,01M, ph 7.2, diaduk dengan magnetik stirer. Disiapkan ketika hendak digunakan (fresh). Trypsin 0,5% dalam CaCl 2 0,1% Bahan: CaCl : 10 mg H H 2 2 O: 100 ml Garam CaCl 2 dilarutkan dalam aquadest diaduk sampai homogen dengan magnetic stirer, kemudian ph diukur dengan ph meter. Basa NaOH 0,1N ditambahkan hingga mencapai ph 7,8. Trypsin sebanyak 1 gram dilarutkan dalam 2 ml larutan CaCl larutan diaduk dengan menghisap dan menyemprotkan kembali dengan pipet secara berulang-ulang hingga homogen. Larutan siap digunakan. H2O 2 3% AEC 15 ml working solution Mayer Haematoksilin (dapat dilihat pada pewarnaan HE) 2. Selanjutnya 12. Pembuatan Kultur Sel Chicken Embrio Fibroblast Bahan : Telur ayam berembrio SPF umur 10 hari Media + Bovine Foetal Serum 7,5% Fungizon 5 mg untuk 100 cc media Gentamycin 1 ml untuk 200 cc media PBS + Penstrep 1000 IU/ml Cara kerja : 1. Media dituangkan pada cawan petri secukupnya 2. Telur yang sudah disterilkan dengan alkohol, dipecahkan dengan pinset

134 3. Embrio dikeluarkan dari dalam telur dari bagian yang tumpul, kemudian diletakkan dalam cawan petri yang telah berisi media biakan. Kepala, sayap, kaki dan jerohan dibuang, diletakkan pada cawan petri yang bersih. 4. Embrio dicuci dengan media, buang media. 5. Ditambahkan PBS, embrio dicuci, lalu PBS dibuang. 6. Embrio digunting kecil-kecil hingga lumat. 7. Ditambahkan trypsin secukupnya untuk memecah sel 8. Menggunakan syring 5 cc tanpa jarum, suspensi dihisap dan disemprotkan suspensi berulang-ulang. 9. Setelah hancur dimasukkan dalam botol. 10. Suspensi diinkubasikan pada suhu 37ºC selama 10 menit dalam waterbath, diaduk dengan stirer dengan kecepatan ± 5 rpm 11. Supernatan bagian atas diambil dimasukkan ke dalam botol yang berisi media. 12. Endapan ditambah trypsin secukupnya stirer lagi seperti no.10. 13. Supernatan no.11 dalam botol direndam dalam air dingin untuk menghentikan kerja trypsin. 14. Disiapkan corong dengan tebung Erlenmeyer. 15. Supernatan no 12, 13 disaring, kemudian dimasukkan ke dalam botolbotol. 16. Dicentrifus 1000 rpm : selama 10 menit 17. Selanjutnya supernatan dibuang. 18. Media dituangkan pada botol 20 cc 19. Cairan media diambil dari botol tersebut ± 5 cc, dimasukkan dalam botol yang berisi presipitat 20. Isi botol 19 dimasukkan pada botol no.18 21. Dibagi dalam botol flask masing-masing 20 cc 22. Disimpan dalam inkubator. 13. Pembuatan Antibodi Poliklonal pada Kelinci Virus vvibd lokal disuntikan pada 3 ekor kelinci New Zealand White yang telah dewasa, dan 1 ekor sebagi kontrol negatif disuntik dengan PBS.

135 Penyuntikan dilakukan secara subkutan dengan dosis sebanyak 0,5 ml isolat virus yang mengandung 1000TCID 50 partikel virus /100 µl (Boenisch 2001) pada hari ke-0, ke-7 dan ke-14. Selanjutnya pada hari ke-21 serum diambil untuk pengukuran titer antibodi dengan teknik Elisa. Tiga minggu setelah imunisasi terakhir, disuntikkan lagi 0,5 ml virus secara intravena. Darah diambil dari vena auricularis sebanyak 10 ml, dibiarkan pada suhu ruang hingga serum keluar. Serum kemudian dipisahkan lalu diinaktivasi pada suhu 56 0 C selama 30 menit. Serum kemudian dialiquot dan disimpan pada suhu -20 0 C hingga digunakan.