34 Lampiran 1 Diagram alir penelitian Sampel basah Determinasi Dikeringkan dan dihaluskan Serbuk kering Kadar air & kadar abu Maserasi dengan n-heksana Disaring Diuapkan Ekstrak n-heksana Residu Maserasi dengan etilasetat Disaring Diuapkan Ekstrak etilasetat Residu Maserasi dengan metanol Disaring Diuapkan Ekstrak metanol Residu Maserasi dengan air Disaring Diuapkan Ekstrak air Residu Rendemen, total penol, uji fitokimia, uji akfivitas antioksidan & inhibitor α- glukosidase Ekstrak terbaik
35 Lampiran 1 (lanjutan) Ekstrak teraktif Fraksinasi dengan romatografi kolom Pemilihan eluen terbaik Fraksi A Fraksi B Fraksi C Fraksi nx Rendemen Uji fitokimia Uji aktivitas antioksidan Uji akfivitas inhibitor α-glukosidase Fraksi teraktif Fraksinasi dengan KLTP Fraksi Ax Fraksi Bx Fraksi Cx Fraksi n Rendemen Inhibitor enzimα-glukosidase Uji aktivitas antioksidan Fraksi teraktif Identifikasi senyawa (UV-VIS, IR)
36 Lampiran 2 Hasil determinasi tanaman andaliman
37 Lampiran 3 Hasil penentuan rendemen ekstrak kasar No Ekstrak Bobot awal Bobot ekstrak (g) (g) 1 n-heksan 15,3637 Kadar air (%) Rendemen (%) 1,7866 2 Etil asetat 951,15 22,1139 9,59 2,5716 3 Metanol 36,3187 4,2234 4 Air 42,2086 4,9083 Contoh Perhitungan: Rendemen Rendemen Bobot ekstrak Bobot kering 1 kadar air X 100% 15,3637g 951,1537g 1 0,0959 X 100% Rendemen 15,3637g 859,9381 X 100% 1,7866%
38 Lampiran 4 Penentuan total fenol Sampel Ulangan Absorban Total fenol mg asam galat/ 100 g ekstrak 1 0,334 Ekstrak n-heksana 2 0,335 3 0,335 Rata-rata 0,335 1 1,505 Ekstrak etilasetat 2 1,505 3 1,503 Rata-rata 1,5043 1 3,068 Ekstrak metanol 2 3,01 3 3,01 Rata-rata 3,0293 1 3,612 Ekstrak Air 2 3,612 3 3,913 Rata-rata 3,712 38,7500 184,9125 375,5375 460,9125 Contoh perhitungan: Kurva standar (asam galat) Absorban 1.5 1 0.5 y = 0,008x + 0,025 R² = 0,995 Series1 0 0 50 100 150 Linear (Series1) Konsentrasi (ppm) Y = 0,008x + 0,025 0,335 = 0,008x + 0,025 X = 38,7500, jadi total fenol = 38,7500 mg asam galat /100 g ekstrak
39 Lampiran 5 Contoh perhitungan IC 50 ekstrak kasar buah andaliman untuk uji aktivitas antioksidan dan inhibitor α-glukosidase 1. Antioksidan Konsentrasi (ppm) Abs. sampel % Inhibisi 800 0,165 81,0563 700 0,2 77,0379 600 0,236 72,9047 500 0,329 62,2273 400 0,374 57,0609 300 0,517 40,6429 200 0,622 28,5878 blanko 0,871 IC 50 (ppm) 390,92 % Inhibisi 100 80 60 40 20 0 Ekstrak metanol y = 0,087x + 15,99 R² = 0,950 0 200 400 600 800 1000 Konsentrasi (ppm) Series1 Linear (Series1) Abs. blanko Abs. sampel % Inhibisi Abs. blanko 0,871 0,165 % Inhibisi x 100% 0,871 % Inhibisi 81,0563 Contoh perhitungan IC 50 : Y= 0,087x + 15,99 50= 0,087x + 15,99 X = 390,9195 ppm x 100%
40 Lampiran 5 (lanjutan) 2. Inhibitor α-glukosidase Konsentrasi (%) Abs (S0) Ekstrak metanol S1 S1-S0 % Inhibisi U1 U2 U1 U2 U1 U2 1 1,349 1,736 1,695 0,387 0,346 87,1981 88,5544 0,5 0,784 1,224 1,222 0,44 0,438 85,4449 85,5111 0,25 0,435 0,976 0,993 0,541 0,558 82,1039 81,5415 0,125 0,281 1,082 1,128 0,801 0,847 73,5031 71,9815 0,0625 0,181 1,526 1,565 1,345 1,384 55,5078 54,2177 0,0313 0,158 1,744 1,804 1,586 1,646 47,5356 45,5508 Blanko 0,093 3,266 2,966 3,173 2,873 Rerata blanko = 3,023 Rerata IC 50 = 0,0323 % Keterangan : S1= campuran dengan penambahan enzim S0= campuran tanpa penambahan enzim Contoh Perhitungan: 3,023 0,387 % Inhibisi x 100% 3,023 % Inhibisi 87,1981% % Inhibisi 100 50 0 Ekstrak metanol y = 12,23ln(x) + 93,08 R² = 0,907 y = 13,13ln(x) + 93,97 R² = 0,928 0 0.5 1 1.5 Konsentrasi (%) Series1 series 2 Log. (Series1) Log. (series 2) Y = 12,23 ln(x) + 93,08 50 = 12,23 ln(x) + 93,08 Ln(x) = -3,5225 X = anti ln (-3,5225) = 0,0295 Jadi IC 50 rata-rata,, Jadi IC 50 rata-rata = 0,0323 % 0,0323
41 Lampiran 6 Nilai Rf setiap tabung hasil fraksinasi ekstrak metanol dengan kromatografi kolom Tabung Jlh spot Jarak spot(cm) 1-31 1 8 Jarak eluen (cm) Rf Fraksi Warna 0.93 A Hijau muda 32-45 1 4.5 0.52 B Hijau tua 46-150 1 2.5 0.29 C Hijau 151-185 1 2 8.3 0.23 D Coklat 186-238 2 1;0.6 0.12; 0.07 E Kuning 239-358 1 0.3 0.035 F Coklat muda Contoh perhitungan: Jarak tempuh spot dari garis awal Jarak tempuh eluen dari garis awal 8 cm 8.6 cm 0.93
42 Lampiran 7 Nilai Rf dan penentuan rendemen setiap fraksi hasil penggabungan setiap tabung dari fraksinasi dengan kromatografi kolom a. Nilai Rf Fraksi Jumlah spot Jarak spot(cm) A 1 6,5 Jarak eluen (cm) Rf Warna 0,8072 Hijau muda B 2 1,6; 4 0,1928; 0,4819 Hijau tua C 2 1,6; 3,1 8.3 0,1928; 0,3855 Hijau D 2 0,6; 1,7 0,0723; 0,3855 Coklat E 1 0,6 0,0723 Kuning F 1 0 0 Coklat muda b. Contoh perhitungan rendemen fraksi hasil fraksinasi dengan kolom Fraksi Bobot (g) Bobot ekstrak (g) Rendemen (%) A 0.5274 6,1275 B 1.0557 12,2655 C 0.4724 8.6071 5,4885 D 2.3276 27,0428 E 0.6426 7,4659 F 0.8785 10,2067 Contoh perhitungan: Rendemen Bobot fraksi g Bobot ekstrak g Rendemen 0.5274 g 8.6071 g x 100% Rendemen 6.1275 %
43 Lampiran 8 Contoh perhitungan IC 50 fraksi hasil fraksinasi ekstrak terbaik dengan kromatografi kolom untuk uji aktivitas antioksidan dan inhibitor α-glukosidase. a. Antioksidan Konsentrasi (ppm) % Inhibisi 0,56 0,121 0,56 %Inhibisi 78,3929 Absorban x 100 % Fraksi E % Inhibisi 800 0,121 78,3929 700 0,137 75,5357 600 0,171 69,4643 500 0,266 52,5 400 0,316 43,5714 300 0,498 11,0714 200 0,473 15,5357 100 0,553 1,25 50 0,72-28,5714 25 0,722-28,9286 blanko 0,56 444,7716 ppm IC 50 % Inhibisi 100 50 0-50 y = 32,80ln(x) - 150,0 R² = 0,910 0 200 400 600 800 1000 Series1 Log. (Series1) -100 Konsentrasi (ppm) Y = 25,43 Ln(x) 120,6 Ln x 6,7 x anti Ln 6,7 812,4 ppm Jadi IC 50 = 812,4 ppm
44 Lampiran 8 (lanjutan) b. Inhibitor α-glukosidase Konsentrasi (%) Fraksi C S S0 S-S0 % Inhibisi U1 U2 U1 U2 U1 U2 0,26 3,711 3,71 3,611 0,1 0,099 95,5556 95,6 0,13 2,417 2,464 2,196 0,221 0,268 90,1778 88,0889 0,065 1,628 1,595 1,251 0,377 0,344 83,2444 84,7111 0,0325 1,103 1,097 0,72 0,383 0,377 82,9778 83,2444 0,01625 0,863 0,846 0,407 0,456 0,439 79,7333 80,4889 0,00812 0,984 0,978 0,278 0,706 0,7 68,6222 68,8889 0,00406 1,322 1,354 0,194 1,128 1,16 49,8667 48,4444 Blanko 2,428 2,326 0,127 Abs.blanko rata-rata = 2,25 IC 50 rata-rata = 0,0016 % K S1 S0 % Inhibisi x 100% K 2,25 0,1 % Inhibisi x 100% 2,25 % Inhibisi 95,5556 % Inhibisi 120 100 80 60 40 20 0 y = 9,464ln(x) + 111,0 R² = 0,867 y = 9,485ln(x) + 111 R² = 0,837 0 0.1 0.2 0.3 Ulangan 1 Ulangan 2 Log. (Ulangan 1) Log. (Ulangan 2) Konsentrasi (%) Y = 9,464 Ln (x) + 111 IC 50 = anti Ln ( 6,445 0,0016 IC 50 rata-rata =,, 0,0016 %
45 Lampiran 9 Nilai rendemen dan Rf fraksi C dan E dari hasil KLTP Fraksi C (0,2503 g) Fraksi E (0,2178 g) Fraksi Bobot Rendemen Jlh Bobot Rendemen Jlh Rf Fraksi (g) (%) spot (g) (%) spot Rf FC 1 0,0136 5,43 1 0,1219 FE 1 0,0481 22,08 1 0,0811 FC 2 0,0158 6,31 1 0,2439 FE 2 0,0162 7,44 1 0,1216 FC 3 0,0058 2,32 1 0,3171 FE 3 0,0088 4,04 1 0,2027 FC 4 0,0187 7,47 1 0,4268 FE 4 0,0059 2,71 2 0,1622; 0,4729 FC 5 0,0116 4,63 1 0,5366 FE 5 0,0035 1,61 1 0,5135 FC 6 0,0100 3,99 1 0,6341 FE 6 0,0021 0,96 1 0,6351 FC 7 0,0090 3,59 1 0,7073 FE 7 0,0037 1,69 2 0,5; 0,7027 FC 8 0,0053 2,12 1 0,8049 FE 8 0,003 1,38 1 0,8108 FC 9 0,0010 0,39 1 0,8902 - - - - - FC 10 0,0058 2,32 1 0,9268 - - - - - Contoh Perhitungan: Bobot fraksi Bobot ekstrak X 100 % 0,0136 0,2503 X 100 % 5,43 %
46 Lampiran 10 Perhitungan nilai IC 50 fraksi yang diperoleh dari hasil KLTP sebagai antioksidan dan inhibitor α-glukosidase a. Antioksidan FE2 Konsentrasi Absorbansi sampel % Inhibisi (ppm) U1 U2 U1 U2 500 0,143 0,138 79,2453 79,9709 400 0,176 0,181 74,4557 73,7300 300 0,187 0,186 72,8592 73,0044 200 0,193 0,189 71,9884 72,5689 100 0,476 0,432 30,9144 37,3004 50 0,532 0,523 22,7866 24,0929 25 0,707 0,733-2,6125-6,3861 blanko 0,715 0,663 Blanko rata-rata 0,689 IC 50 (ppm) 122,2034 143,7821 Rerata = 132,9928 % Inhibisi Abs. blanko Abs. sampel Abs. blanko x 100% % Inhibisi 0,689 0,143 0,689 x 100% % Inhibisi 79,2453
47 Lampiran 10 (lanjutan) FE2 DPPH 100 % Inhibisi 80 60 40 20 y = 28,54ln(x) - 91,96 R² = 0,950 y = 28,39ln(x) - 91,05 R² = 0,943 Series1 series 2 Log. (Series1) 0 Log. (series 2) -20 0 100 200 300 400 500 600 Konsentrasi (ppm) Y = 29,54 Ln(x) 91,96 50 = 29,54 Ln(x) 91,96 Ln x 141,96 29,54 Ln x 4,806 x anti Ln 4,806 ppm IC 50 = 122,2034 ppm IC 50 rata-rata =,, IC 50 rata-rata = 132,9928 ppm b Inhibitor α-glukosida Konsentrasi (ppm) S1 S0 S1-S0 % Inhibisi 500 0,453 0,436 0,017 90,8602 250 0,31 0,276 0,034 81,7204 125 0,27 0,195 0,075 59,6774 62,5 0,229 0,152 0,077 58,6022 31,25 0,216 0,13 0,086 53,7634 15,625 0,221 0,121 0,1 46,2366 7,8125 0,26 0,112 0,148 20,4301 Blanko 0,296 0,11 0,186
48 Lampiran 10 (lanjutan) % Inhibisi % Inhibisi K S1 S0 K 0,186 0,017 0,186 x 100% x 100% % Inhibisi 90,8602% % Inhibisi 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 y = 14,84ln(x) - 2,643 R² = 0,924 0 100 200 300 400 500 600 Konsentrasi (ppm) Series1 Log. (Series1) Y = 14,84 Ln(x) 2,643 50 = 14,84 Ln(x) 2,643 Ln(x) = 3,5474 X = anti ln (3,5474) = 34,7219 ppm.