BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Transkripsi

1 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.L Hasil 4.L1. Ujifitokimiadaun Quercus gemelilflorg Bi Pada uji fitokimia terhadap daun Quercus gemelilflora Bi memberikan hasil yang positif terhadap steroid, fenolik dan flavonoid. Uji steroid ditandai dengan adanya wama hijau keunguan pada plat tetes setelah penambahan asam asetat anhidrat dan H2SO4 pekat (LiebermannBurchard). Uji fenolik ditandai dengan adanya endapan biru pekat setelah penambahan FeCb, sedangkan untuk uji flavonoid ditandai dengan terbentuknya larutan wama merah setelah penambahan HCl pekat dan logam Mg IsolasI daun Quercus gemelilflora Bi Sebanyak gram daun Quercus gemelilflora Bi kering yang telah dihaluskan dimaserasi dengan pelarut nheksana, hingga diperoleh ekstrak total heksana sebanyak 84,52 gram, ekstrak total tersebut berwama hijau tua. Residu hasil maserasi ini dikeringanginkan dan dimaserasi lagi dengan menggunakan pelamt metanol sehingga diperoleh ekstrak total metanol berwama cokelat kehitaman sebanyak 120,43 gram. Maserasi ini dilakukan secara bemlangulang sampai maserat tidak berwama lagi Pengujian eiutrak total dengan plat KLT Masingmasing dari ekstrak total (heksana dan metanol) dilakukan pemeriksaan dengan menggunakan kromatografi lapis tipis. Hal ini dilakukan untuk mengetahui jumlah komponen yang dikandung oleh masingmasing ekstrak dan juga untuk mencari eluen yang sesuai pada uji kromatografi lapis tipis terhadap hasil pemisahan dengan kromatografi vakum cair dan kromatografi kolom. Hasil uji KLT dapat dilihat pada tabel 1 dan lampiran 2. 25

2 Tabel 1. Hasil uji ekstrak total dengan plat KLT No HargaRf Fraksi 'nheksana Metanol nheksana: Etilasetat 0.04 ; 0.08 ; 0.28 ; (8:2) ; 0.28; 0.40; nheksana: Etilasetat 0.60 ; 0.70 ; 0.76 ; (7:3) 0.98 nheksana: Etilasetat 0.60 ; 0.76 ; 0.82 ; (6:4) Etilasetat 100% 0.00; 0.10; 0.24 Etilasetat: Metanol 5 (9:1) Etilasetat: Metanol 6 (8:2) 0.04 ; 0.42 ; 0.80 ; ; 0.70; 0.84; L4. Pemisahan dengan kromatografi vakum cair (VLC) Pemisahan dengan kromatografi vakum cair menggunakan gram ekstrak total metanol. Pengelusian dilakukan dengan berbagai eluen yang memiliki kepolaran yang meningkat dari nheksana 100%, perbandingan n heksanaetilasetat, perbandingan etilasetatmetanol sampai metanol 100%. Dari hasil pemisahan dengan kromatografi vacum cair diperoleh 24 erlemeyer. Pelarut yang ada diuapkan dengan Rotary evaporator dan selanjutnya sampel dimasukkan dalam vial, kemudian dilakukan uji KLT untuk mengetahui jumlah komponen dari masingmasing fraksi Pengujian hasil kromatografi vacum cair dengan KLT Hasil pemisahan dari kromatografi vacum cair ekstrak metanol dilakukan dengan pengujian plat KLT dengan menggunakan eluen etilasetatmetanol 9:1. Hasil uji KLT ini dapat dilihat pada tabel 2 dan lampiran 3. 26

3 Tabel 2. Hasil uji KLT masingmasing fraksi ekstrak metanol No. vial Berat (gram) Harga Rf Ekstrak No. Fraksi Metanol Etilasetatmetanol 9:1 Fl ; 0.66 F ; 0.58 F ; 0.50 F ; 0.30 F L6. Pemisahan dengan kromatografi kolom Fraksi hasil pemisahan kromatografi vacum cair dilanjutkan pemisahan dengan kromatografi kolom. Fraksi yang dilanjutkan dengan kromatografi kolom adalah fraksi yang memiliki noda KLT yang bagus dan memiliki sampel yang cukup. Adapun fraksi yang pemisahannya dilanjutkan dengan kromatografi kolom yaitu fraksi 4 yang berupa padatan putih kekuningan Pengujian hasil kromatografi kolom dengan KLT Sebanyak g padatan dari fraksi ke 4 ekstrak metanol dilakukan pemisahan dengan kromatografi kolom. Pengelusijui dilakukan dengan berbagai eluen yang kepolarannya ditingkatkan mulai dari nheksana 100%, perbandingan nheksana etilasetat, perbandingan etilasetatmetanol sampai metanol 100%. Hasil pemisahan kromatografi kolom fraksi 4 ini memperoleh 110 vial. Dari 110 vial diambil beberapa vial untuk perwakilan uji. Hasil pemisahan ini diuji KLT dengan eluen etilasetat: metanol (8:2). Hasil uji KLT ini dapat dilihat pada tabel 3 dan lampiran 4. Tabel 3. Hasil uji KLT kromatografi kolom No Vial Harga Rf Keterangan Bentuk Noda Minyak kekuningan noda Minyak kekuningan ; noda Minyak kekuningan ; noda memanjang Padatan putih ; noda Minyak kekuningan 27

4 noda Minyak kekuningan Ada noda Minyak kekuningan 75 G.OO Ada noda Minyak kekuningan 88 Noda tidak ada 100 Noda tidak ada Dari hasil KLT ini diperoleh beberapa vial memiliki harga Rf yang sama, sehingga dilakukan fraksi gabungan yaitu mulai dari vial no hasil KLT fraksi gabungan dapat dilihat pada Tabel 4 dan lampiran 5. Tabel 4. Hasil fraksi gabungan Fraksi No Vsal Harga Rf Keterangan Bentuk F.gab ; noda Padatan putih kekuningan Sebanyak g padatan dari fraksi gabungan ekstrak metanol dilakukan pemisahan lagi dengan kromatografi kolom. kepolaran yang meningkat dari n heksana 100%, perbandingan nheksanaetilasetat, perbandingan etilasetatmetanol sampai metanol 100%. Dari hasil pemisahan dengan kromatografi kolom diperoleh 42 vial. Pada vial no terdapat amorf berwama putih dan dari hasil uji dengan plat KLT dengan eluen etilasetat: metanol (9:1) menunjukkan 1 noda. Kemudian dilakukan rekristalisasi sehingga diperoleh kristal putih bentuk bubuk dan diberi nama Qg 1. Hasil KLT dapat dilihat pada tabel 5 dan lampiran 6. Tabel 5. Hasil KLT senyawa mumi No vial Warna kristal Perbandingan eluen HargaRf Etilasetat: metanol (9:1) putih DCM: metanol (9:1) Pcnentuan titik Icleh Kristal yang diperoleh dari fiaksi ke 3 ekstrak hheksana vial no dilakukan uji titik leleh menggunakan alat FisherJohns. Ini dilakukan untuk meyakinkan bahwa kristal yang diperoleh benarbenar sudah mumi. Kristal yang diperoleh meleleh pada tcmperatur C (tidak terkoreksi). Senyawa ini 28

5 dianggap mumi karena telah menghasiikan satu noda tunggal terhadap berbagai sistem eluen dan range pelelehan < 2. Hasil uji senyawa Qg 1 dengan plat KLT dapat dilihat pada tabel 6 dan kromatogramnya pada lampiran 6. Tabel 6. Hasil uji KLT senyawa Qg 1 dengan berbagai eluen Nama Senyawa Warna Perbandingan eluen Harga Rf eilasetat: metanol (9:1) 0.78 Qg 1 (no. vial 1417) Putih CH2Cl2:metanol(9:l) L8. Karakteristik senyawa dan uji aktivitas antlmikrobial Karakteristik senyawa dan uji aktivitas antlmikrobial belum dilakukan karena penelitian masih dalam penentuan senyawa mumi. Karakteristik senyawa meliputi: > karakterisasi spektroskopi ultraviolet (UV) > karakteristik spektroskopi inframerah (IR) > Spektroskopi massa (MS) > karakteristik spektroskopi NMR dan uji antlmikrobial meliputi uji bakteri dan uji jamur. Bakteri yang digunakan yaitu : Escherichia coli (gram negatif), Staphylococcus aureus (gram positif) dan jamur Candida albicans Pembahasan 4.2.L Isolasi senyawa idmia tumbuhan daun Quercus gemelilflora Bi Isolasi senyawa kimia dari daun Quercus gemelilflora Bi dimulai dengan menghaluskan daun sampai berbentuk bubuk, ini bertujuan untuk memperbesar luas permukaan sampel agar kontak antara sampel dan pelarut semakin basar sehingga memperbesar kelamtan senyawa kimia yang ada pada sampel. Sebanyak gram sampel kering daun Quercus gemelilflora Bi yang telah dihaluskan dimaserasi dengan pelamt nheksana, karena maserasi mempakan metoda isolasi yang cocok untuk bagian tumbuhan yang lunak seperti daun dan bunga. Maserasi ini dilakukan selama ± 24 jam secara bemlangulang sampai maseratnya agak jemih, sebelum maserat disaring dilakukan ultrasonikasi selama ± 30 menit, ini bertujuan untuk memperbesar kelamtan senyawa kimia kedalam pelamt. Karena 29

6 gclombang ultrasonik yang dikeluarkan alat ini dapat menggetarkan sampel sdiin^ga senyawa kimia yang ada di dalam sampel akan keluar dan larut dalam pelarut yang digunakan. Maserat yang diperoleh disaring dengan kapas, kemudian digabungkan dan pelarutnya diuapkan dengan alat rotary evaporator. Alat ini bckeija secara in vacuo, karena dalam keadaan vakum tekanan uap pelarut akan menjadi turun dan pelarut akan mendidih pada tcmperatur lebih rendah dari titik didihnya sehingga dapat mengurangi kerusakan senyawa termolabil yang ada dalam sampel. Ekstrak kental nheksana yang diperoleh berwama hijau tua sebanyak 84,45 gram. Residu hasil maserasi dikeringkan di udara terbuka, kemudian dilanjutkan maserasi dengan menggunakan pelamt metanol, dengan pcrlakuan yang sama maka diperoleh ekstrak kental metanol berwama coklat sebanyak 120,45 gram. Maserasi ini dilakukan berdasarkan perbedaan kclamtannya, senyawa yang nonpolar akan terdistribusi ke dalam pelamt yang nonpolar yaitu nheksana, sedangkan senyawa yang polar akan terdistribusi ke dalam pelamt polar yaitu metanol. Sebelum dilakukan pemisahan dengan kromatografi vacum cair (VLC) terlebih dahulu dilakukan uji dengan KLT terhadap masingmasing ekstrak, ini bertujuan untuk menentukan eluen yang sesuai pada uji KI.T terhadap hasil pemisahan kromatografi kolom dan untuk melihat jumlah senyawa yang terdapat pada masingmasing ekstrak. Hasil uji KLT masingmasing ekstrak dapat dilihat pada tabel 1 dan lampiran 2. Pemisahan pertama kali dilakukan dengan menggunakan kromatografi vacum cair (VLC), gram ekstrak metanol dipreadsorpsi lalu dimasukkan kedalam kolom VLC untuk dielusi dengan berbagai eluen yang memiliki kepolaran meningkat dari nheksana 100%, perbandingan nheksanaetilasetat sampai metanol 100%. Dari hasil pemisahan dengan kromatografi vacum cair ini diperoleh 24 erlemeyer. Sedangkan untuk ekstrak heksan tidak dilakukan pemisahan, karena untuk penelitian selanjutnya. Hasil pemisahan dari kromatografi vacum cair ekstrak metanol dilakukan dengan pengujian plat KLT dengan menggunakan eluen etilasetatmetanol 9:1. Hasil uji KLT ini dapat dilihat pada tabel 2 dan lampiran 3. 30

7 Hasil VLC didapat Sebanyak g padatan dari fraksi ke 4 ekstrak metanol dilakukan pemisahan dengan kromatografi kolom dengan fese diam silika gel 60 (0, mesh) dan fase gerak nheksana, etilasetat, metanol dengan sistem SGP atau "Step Gradient Polarity" yaitu dengan menggunakan pelarut yang kepolarannya ditingkatkan secara perlahanlahan sehingga didapatkan pemisahan yang baik. Sebe)um sampel dimasukkan ke dalam kolom, sampel terlebih dahulu dippcabsorbsi agar silika gel menyerap senyawa yang ada di dalam sampel secara merata sehingga proses pemisahan lebih baik, Dari hasil pemisahan fraksi ke 4 ekstrak metanol dengan kromatografi kolom diperoleh 110 vial dan dilakukan uji KLT dengan eluen etilasetat: metanol (9:1), hasil uji KLT dapat dilihat pada tabel 3 dan lampiran 4. Dari hasil KLT ini diperoleh fraksi gabungan, yaitu mulai vial Hasil uji KLT dapat dilihat pada tabel 4 dan lampiran 5. Sebanyak gram fraksi gabungan dari vial no dari ekstrak metanol dilakukan pemisahan lagi dengan kromatografi kolom, pengelusian dilakukan dengan berbagai eluen yang kepolarannya ditinghkatkan mulai dari heksan 100%, perbandingan heksanetilasetat, perbandingan etiasetat: metanol (1:1). Dari hasil pemisahan dengan kromatografi kolom ini diperoleh sebanyak 42 vial, pada vial no 1417 terdapat amorf berwama putih dan diuji KLT dengan eluen etilasetat : metanol (9:1) menghasilan I noda memanjang. seperti pada kroraatogramnya pada lampiran 6. amorf berwama putih ini dilakukan rekristalisasi sehingga menghasiikan kristal berwama putih, kristal putih ini dilakukan uji KLT terhadap berbagai eluen dan menghasiikan satu noda seperti pada tabel 5 dan lampiran 6. dan titik leleh dari kristal ini berkisar "C (tidak terkoreksi). Dari hasil uji ini diasumsikan kristal tersebut sudah mumi, dan diberi nama Qg 1. 31