ARTIKEL ILMIAH Judul TEKNIK KULTUR JARINGAN DALAM RANGKA PENGADAAN BIBIT DAN PELESTARIAN JERUK BESAR (Citrus grandis (L.) Osbect) VAR. CIKONENG Oleh : Ketua Anggota I Anggota II : Erni Suminar, S.P. : Denny Sobardini Sobarna., Dra.,MP. : Murgayanti, S.P.,M.P. Dibiayai oleh Dana Penelitian Dosen DIPA PNBP Tahun Anggaran 2005 Berdasarkan SK No. 211/J06.14/LP/PL/2005 Tanggal 29 Maret 2006 LEMBAGA PENELITIAN UNIVERSITAS PADJADJARAN FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS PADJADJARAN NOPEMBER TAHUN 2006 1
ABSTRAK TEKNIK KULTUR JARINGAN DALAM RANGKA PENGADAAN BIBIT DAN PELESTARIAN JERUK BESAR (Citrus grandis (L.) Osbect) Varietas Cikoneng Penelitian ini dilakukan di laboratorium Kultur Jaringan Teknologi Benih Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran sejak bulan Maret 2006 sampai dengan Nopember 2006. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk perbanyakan dan pelestarian species ini melalui multiplikasi secara kultur jaringan. Eksplan pucuk dikulturkan dalam media MS normal dan setengah konsentrasi hara makro, hara mikro dan vitamin yang dikombinasikan dengan (0.0; 0.01; 0.1; and 1.0 md/l) and BAP ( 0.0; 1.0; and 2.0 mg/l). Metode percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak lengkap pola Faktorial. Subkultur pertama dilakukan pada 14 hari setelah tanam dari media MS tanpa pemberian zat pengatur tumbuh dan subkultur kedua dilakukan dari media MS dengan penambahan 0.5 mg/l BAP to media dengan penambahan TDZ dan BAP. Parameter yang diamati terdiri dari jumlah tunas, jumlah akar, dan jumlah daun setelah 84 hari dalam media perlakuan. Jumlah tunas tertinggi (3.67 tunas), jumlah akar (1.00) dan jumlah daun (8.67 cm). Key words : Thidiazuron (TDZ). 6-Benzylaminopurine (BAP). Murashige Skoog (MS). ABSTRACT IN VITRO TECHNIQUE IN ORDER TO SERVE OF SEEDLING AND CONSERVATION OF Citrus grandis (L.) Osbect Varietas Cikoneng* Erni Suminar, Denny Sobardini, Murgayanti. 2006 Tissue Culture Laboratory of Seed Technology, Agriculture Faculty, Padjadjaran University. The experiment has been conducted in Tissue Culture Laboratory of Seed Technology, Agriculture Faculty, Padjadjaran University since March 2006 until November 2006. One of the effort to propagate and to conserv this species in by multiplication through tissue culture method. Shoot tip explants were cultured in MS normal and half strength concentration macroelements, suplemented with microelements and vitamins; combination on TDZ (0.0; 0.01; 0.1; and 1.0 md/l) and BAP ( 0.0; 1.0; and 2.0 mg/l). The design was a factorial completely randomized. The first subculture was carried out at the age 14 days from MS without growth regulators, and the second subculture from MS with 0.5 mg/l BAP to medium was treated combination of TDZ and BAP. Parameters assessed were number of shoot, number of root number of leaves at 84 days. Maximum shoot number (3.67 shoots), number of root (1.00) and number of leaves (8.67). Key words : Thidiazuron (TDZ). 6-Benzylaminopurine (BAP). Murashige Skoog (MS). 2
PENDAHULUAN Citrus grandis (L.) Osbect yang dikenal dengan nama daerah jeruk besar atau jeruk bali. Jeruk besar ini merupakan tanaman asli Indonesia. Di Indonesia tiap daerah mempunyai nama yang berbeda diantaranya Munter, Nagiri (Aceh), Unte balon, unte godang, unte susu (Toba), limau gadang (Minagkabau), jeruk dalima (Sunda), jeruk adas, jeruk gulung (Jawa), jeruk macan (Madura), jeruk muntis, jeruk jeruti (Bali) (Fried dan Eiseman, 1988). Perkembangan varietas jeruk besar tidak sebaik jeruk keprok atau jeruk manis, bahkan cenderung merosot jumlahnya, mendekati punah. Kejayaan Jeruk Cikoneng terjadi pada tahun 1980-an, setelah itu mengalami kepunahan akibat dari debu yang berasal dari letusan Gunung Galunggung serta serangan penyakit CVPD, sehingga untuk memenuhi tuntutan pasar/konsumen dalam hal kualitas dan kuantitas maupun kontinuitas, diperlukan upaya terobosan yang mengarah pada terwujudnya kawasan sentra produksi yang mantap dan dikelola secara profesional (Direktorat Jenderal Bina Produksi Hortikultura, 2004). Menurut hasil identifikasi Lembaga Biologi Nasional (LBN), terdapat 15 kultivar jeruk yang masih dapat dijumpai, yaitu : jeruk besar nambangan, bali, cikoneng, pandanwangi, pandan, sinyonya, simanalagi, jomblang, delima, silempang, oyod, gondrong, kepyar, macan, sabun, celeng, dan gulung. Namun, secara umum keberadan jeruk besar ini hampir punah (Tabel 1.), sehingga tindakan konservasi pun perlu dilakukan untuk menjaga kelangsungan hidup jenis ini Tabel 1. Daerah produksi jeruk di Indonesia Propinsi Sentra Produksi Keterangan DKI Jakarta Ragunan Pasar Minggu Hampir punah Jawa Barat Sumedang Hampir punah Jawa Timur Madiun (Nambangan) Magetan (Sukomoro) Banyuwangi Hampir Punah Berkembang Data tidak lengkap Bali Sambas Data tidak lengkap Jeruk Cikoneng adalah salah satu jenis jeruk besar yang banyak ditanam di daerah Sumedang Jawa Barat dan keberadaannya hampir punah. Jeruk besar jenis ini memiliki buah yang berkulit kuning, daging buahnya kemerah-merahan dengan rasa cukup manis, sedikit getir. 1
Selama ini tanaman jeruk besar diperbanyak dengan menggunakan biji, cangkok dan okulasi. Bibit yang berasal dari biji atau generatif mempunyai beberapa kekurangan diantaranya sifat tidak selalu sama dengan induknya, masa berbuahnya lebih lama, dan sifatsifat tanaman baru diketahui setelah besar, sedangkan bibit cangkokan tidak bisa diperoleh dalam jumlah banyak dan perakaran dangkal sehingga mudah roboh untuk daerah berangin keras. Secara umum bibit okulasi memberikan keuntungan yang lebih daripada kedua cara perbanyakan di atas, namun seringkali batang atas tidak sesuai dengan batang bawah, sehingga proses pengangkutan air dan hara dari dalam tanah sering terhambat (Janick dan Moore, 1995). Untuk tujuan komersial dibutuhkan bibit yang sehat dalam jumlah besar dan homogen yang ternyata sulit diperoleh melalui perbanyakan konvensional. Teknik kultur jaringan dapat dimanfaatkan dalam membantu usaha konservasi dan perbanyakan tanaman klonal secara kultur jaringan dapat diupayakan untuk meningkatkan populasi tanaman. Sedangkan penyimpanan plasma nutfah secara in vitro pada suhu rendah telah dikembangkan untuk tanaman anggur, Fragaria, Rubus, Alfalfa (Bhojwani & Razdan, 1983). Pada jeruk-jerukan konservasi plasma nutfah in vitro diusulkan oleh Marin & Duran-Vila (1991), melalui siklus perbanyakan tunas dari eksplan buku batang, pengakaran dan pemanjangan tunas. Dengan metoda ini subkultur bisa diperpanjang sampai 12 bulan. Berdasarkan uraian tersebut di atas, maka perlu diadakan untuk penelitian sebagai langkah awal penyediaan bibit dan konservasi plasma nutfah Jeruk Besar var. Cikoneng. METODE PENELITIAN Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Teknologi Benih Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran di Jatinangor pada bulan Maret 2006 sampai bulan Nopember 2006. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan eksplan adalah medium dasar ½ MS dan MS penuh yang dibuat padat dengan penambahan agar 8 g per L, sukrosa 30 g per L, agar 8 g per L dan pemberian zat pengatur tumbuh TDZ (0.0; 0.01; 0.1; dan 1 mg/l), BAP (0.0;1.0; dan 2 mg/l). Eksplan diambil dari pucuk dari biji steril jeruk cikoneng yang 2
dikecambahkan kemudian disterilisasi dengan menggunakan deterjen selama 5 menit, alkohol 70% selama 15 menit, clorox 1% selama 10 menit selanjutnya dibilas dengan akuades steril.. Eksplan dikulturkan pada media I (MS0) untuk mendapatkan pucuk steril selama 6 minggu kemudian dilakukan subkultur I kedalam media 0.5 mg/l BAP selama 2 minggu, selanjutnya subkultur II ke media II (1/2 MS atau MS dengan penambahan Thidiazuron dan 6-Benzylaminopurine). Kultur diamati setelah 12 minggu dalam media II. Pengamatan dilakukan terhadap parameter jumlah tunas, jumlah akar, dan jumlah daun.rancangan yang digunakan pada percobaan ini adalah Rancangan Acak Lengkap pola faktorial, terdiri dari 24 perlakuan dengan 3 ulangan. HASIL DAN PEMBAHASAN Jumlah Tunas Berdasarkan hasil sidik ragam, ternyata perlakuan media subkultur dengan penggunaan BAP dan TDZ yang dikombinasikan memberikan pengaruh yang berbeda nyata terhadap jumlah tunas. Dari data yang diperoleh tampak bahwa penggunaan sitokinin (0.1 mg/l TDZ dan 2 mg/l BAP) pada media ½ MS, menghasilkan rata-rata jumlah tunas yang relatif lebih tinggi daripada perlakuan lainnya yaitu sebanyak 3.67 buah. Lain halnya dengan media MS penuh maupun ½ MS, dengan konsentrasi sitokinin yang sama (0.1 mg/l TDZ dan 2 mg/l BAP) menghasilkan rata-rata jumlah tunas 1 buah, hal ini kemungkinan penambahan 0.1 mg/l TDZ dan 2 mg/l BAP telah bersifat toksik karena pertumbuhan tunas mencapai nilai yang lebih rendah daripada perlakuan kontrol. Pada media konsentrasi hara MS penuh tanpa penambahan sitokinin baik TDZ maupun BAP, terlihat bahwa rata-rata jumlah tunas yang dihasilkan lebih tinggi ( 3.00 buah) daripada media ½ konsentrasi hara MS tanpa penambahan zat pengatur tumbuh (1.67 buah). Selain zat pengatur tumbuh yang menentukan keberhasilan kultur secara in vitro antara lain garam-garam mineral makro dan mikro yang terdapat dalam media dasar turut mempengaruhinya pula. Dari beberapa penelitian ditemukan bahwa nitrogen/senyawa nitrogen dan rasio antara ammonium dengan nitrat dapat mempengaruhi terjadinya diferensiasi, dediferensiasi, pertumbuhan dan perkembangan eksplan atau pembentukan organnya. Konsentrasi 3
ammonium merupakan hal yang menentukan dalam pembentukan tunas in vitro yaitu dalam konsentrasi yang tinggi dapat meningkatkan sintesa sitokinin (Preece, 1995). Tabel 2. Rata-rata jumlah Tunas pada 12 MST No. Kode Perlakuan Rata-rata Jumlah Tunas 1 A 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 1.67 a 2 B 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 1.00 a 3 C 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 1.33 a 4 D 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 1.67 a 5 E 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 1.00 a 6 F 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 2.00 b 7 G 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 2.00 b 8 H 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 1.00 a 9 I 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 3.67 b 10 J 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 1.67 a 11 K 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 1.33 a 12 L 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 1.33 a 13 M MS + 0 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 3.00 b 14 N MS + 0 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 1.00 a 15 O MS + 0 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 1.33 b 16 P MS + 0,01 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 1.67 a 17 Q MS + 0,01 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 1.67 a 18 R MS + 0,01 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 2.00 b 19 S MS + 0,1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 1.67 a 20 T MS + 0,1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 2.33 b 21 U MS + 0,1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 1.00 a 22 V MS + 1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 1.33 a 23 W MS + 1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 1.00 a 24 X MS + 1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 1,00 a Ket : Angka rataan yang diikuti huruf sama dalam kolom yang sama, tidak berbeda nyata berdasarkan uji Scottknott taraf 5% Berdasarkan Tabel 2., terlihat bahwa penambahan 1 mg/l TDZ pada berbagai konsentrasi BAP baik pada media MS penuh maupun MS 1/2 menghasilkan rata-rata jumlah tunas yang relatif sedikit. Nielsen dkk. (1995) menyatakan bahwa kandungan TDZ yang cukup tinggi akan menyebabkan gugus adenin sitokinin berubah menjadi tipe adenin yang tidak berikatan pada gugusnya, sehingga peningkatan pemberian TDZ tidak efektif dalam peningkatan jumlah tunas. 4
Jumlah Akar Berdasarkan hasil sidik ragam, perlakuan media dasar baik konsnetrasi hara MS penuh maupun ½ konsentrasi hara tidak menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata terhadap pertumbuhan akar. Dari Tabel 4, terlihat bahwa pada media ½ MS tanpa penambahan sitokinin BAP dan TDZ cenderung menghasilkan rata-rata jumlah akar yang relatif lebih tinggi (1.00 buah) dibandingkan dengan penggunaan TDZ dan BAP pada konsentrasi yang tinggi. Pada media dengan penambahan TDZ sampai dengan 1 mg/l tanpa pemberian BAP, ternyata menghasilkan rata-rata jumlah akar yang relatif lebih rendah daripada perlakuan lainnya, hal ini sesuai dengan pernyataan bahwa TDZ pada konsentrasi yang tinggi cenderung menghambat inisiasi tunas dan perakaran (Chang and Chang, 2000). Tabel 3. Rata-rata Jumlah Akar pada 12 MST No. Kode Perlakuan Rata-rata Jumlah Akar 1 A 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 1.00 a 2 B 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 0.67 a 3 C 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 0.67 a 4 D 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 0.00 a 5 E 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 0.67 a 6 F 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 0.33 a 7 G 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 0.00 a 8 H 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 0.33 a 9 I 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 0.00 a 10 J 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 0.00 a 11 K 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 0.33 a 12 L 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 1.00 a 13 M MS + 0 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 0.33 a 14 N MS + 0 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 0.33 a 15 O MS + 0 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 0.67 a 16 P MS + 0,01 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 1.00 a 17 Q MS + 0,01 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 0.67 a 18 R MS + 0,01 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 0.67 a 19 S MS + 0,1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 0.33 a 20 T MS + 0,1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 0.00 a 21 U MS + 0,1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 0.33 a 22 V MS + 1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 0.00 a 23 W MS + 1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 0.33 a 24 X MS + 1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 0.33 a Ket : Angka rataan yang diikuti huruf sama dalam kolom yang sama, tidak berbeda nyata berdasarkan uji Scottknott taraf 5% 5
Hal ini disebabkan penambahan sitokinin baik TDZ maupun BAP dalam konsentrasi yang tinggi dapat merangsang biosintesis etilen yang dapat menghambat proses pertunasan dan perakaran (Khakafalla dan Hattori, 2000.). Jumlah Daun Berdasarkan Tabel 4. terlihat bahwa jenis media dasar yaitu MS dan ½ MS dengan penambahan sitokinin berupa BAP dan TDZ menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata terhadap jumlah daun. Penggunaan 0.01 mg/l TDZ yang dikombinasikan dengan berbagai konsentrasi BAP (1 2 mg/l) pada media MS penuh, ternyata menghasilkan rata-rata jumlah daun yang lebih banyak daripada perlakuan lainnya. Tabel 3. Rata-rata Jumlah Daun pada 12 MST No. Kode Perlakuan Rata-rata Jumlah Daun 1 A 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 5.00 b 2 B 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 5.00 b 3 C 1/2 MS + 0 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 5.67 b 4 D 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 5.00 b 5 E 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 6.00 b 6 F 1/2 MS + 0,01 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 4.67 a 7 G 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 3.67 a 8 H 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 5.00 b 9 I 1/2 MS + 0,1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 4.33 a 10 J 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 3.67 a 11 K 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 4.33 a 12 L 1/2 MS + 1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 6.33 b 13 M MS + 0 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 4.67 a 14 N MS + 0 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 4.33 a 15 O MS + 0 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 5.67 b 16 P MS + 0,01 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 6.67 b 17 Q MS + 0,01 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 6.68 b 18 R MS + 0,01 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 8.67 b 19 S MS + 0,1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 4.67 a 20 T MS + 0,1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 2.67 a 21 U MS + 0,1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 4.67 a 22 V MS + 1 mg /L TDZ + 0 mg /L BAP 4.33 a 23 W MS + 1 mg /L TDZ + 1 mg /L BAP 3.33 a 24 X MS + 1 mg /L TDZ + 2 mg /L BAP 4.33 a Ket : Angka rataan yang diikuti huruf sama dalam kolom yang sama, tidak berbeda nyata berdasarkan uji Scottknott taraf 5% 6
Hal ini menunjukkan bahwa pemberian sitokinin baik BAP maupun TDZ secara bersamaan dalam media konsentrasi hara MS penuh maupun ½ MS sangat berpengaruh pada pertumbuhan daun. Pada media dimana rata-rata jumlah tunas tertinggi yaitu media I (1/2 MS + 0.1 mg/l TDZ + 2 mg/l BAP), M (MS + 0 mg/l TDZ + 2 mg/l BAP), dan T (MS + 0.1 mg/l TDZ + 1 mg/l BAP), ternyata menghasilkan rata-rata jumlah daun yang relatif lebih rendah daripada perlakuan lainnya. Peningkatan jumlah daun yang sangat nyata dihasilkan dari penambahan 0.01 mg/l TDZ dengan penambahan konsentrasi BAP sampai dengan 2 mg/l pada konsentrasi hara MS penuh, menghasilkan jumlah daun yang relatif lebih banyak daripada perlakuan lainnya. Hal ini teramati pula pada percobaan G. procumbens dimana kultur dalam media dasar MS yang konsentrasi hara makro normal cenderung lebih baik bila dibandingkan dengan kultur dalam media dasar hara makro ½ MS bagian dengan perlakuan zat pengatur tumbuh yang sama (Hoesen, 2001). KESIMPULAN 1. Jumlah tunas tertinggi (3.67 buah) diperoleh pada media ½ konsentrasi hara MS dengan penambahan 0.1 mg/l TDZ dan 2 mg/l BAP, sedangkan pada media MS penuh tanpa penambahan BAP dan TDZ menghasilkan rata-rata jumlah tunas sebanyak 3.00 buah 2. Media dengan penambahan sitokinin baik TDZ maupun BAP tidak berpengaruh secara nyata terhadap jumlah akar yang terbentuk. 3. Jumlah daun tertinggi diperoleh pada media konsentrasi hara MS penuh dengan penambahan 0.01 mg/l TDZ dan 2 mg/l BAP. Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dengan penggunaan eksplan pucuk jeruk besar varietas Cikoneng pada beberapa media perlakuan berbagai kadar media dasar yaitu ½ MS dan MS penuh, ternyata rata-rata jumlah tunas yang dihasilkan masih relatif sedikit dan memakan waktu cukup lama untuk pertumbuhannya, hal ini dapat dilihat dari rata-rata jumlah tunas yang masih sedikit. Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian lanjutan dengan penggunaan berbagai macam eksplan kedalam medium yang ditambahkan auksin dan sitokinin agar pertumbuhannya baik. 7
DAFTAR PUSTAKA Anonim. 1991. Buah jeruk punya potensi menurunkan kadar kolesterol darah Pedoman Rakyat, 15 September 1991. Bhojwani, S.S. and M.K. Razdan. 1986. Plant tissue culture : theory and practice.elsevier. Amsterdam-Oxford-New York-Tokyo. Chang, C. and Wein-chin Chang 2000. Effect of Thidiazuron on bud development of Cymbidium sinense Willd in vitro. Plant Growth Regulation 30 : 171 175. Kluwer Acadeic Publishers. Printed in Netherlands. Direktorat Jenderal Bina Produksi Hortikultura. 2004. Pencanangan kebun contoh Jeruk Cikoneng oleh Bupati Sumedang bersama Direktur Tanaman Buah. Jakarta. Endang, Titik. 1988. Jeruk Besar Bernilai Dan Bergizi Tinggi, Dharma Wanita, April 1988. Fried dan Eiseman. 1988. Teknik kultur jaringan. Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman. Pusat Antar Universitas Bioteknologi. Institut Pertanian. Bogor. Gamborg, O.L. and J.P. Shyluk. 1981.Nutrition, media and characteristic of plant cell and tissue culture. In Thorpe, T.A. (ed) Plant tissue culture : Methods and application in agriculture. Academic Press. Inc. New York. George, E.F. and P.D. Sherrington. 1984. Plant propagation; by tissue culture. Exegetics. Ltd. England. Hoesen DSH.2000. Penyimpanan plasma nutfah Musa spp. Kultivar Ambon, Raja dan Tanduk secara In-Vitro dengan metode pertumbuhan minimal. Dalam : Panduan Simposium Naisonal Pengelolaan Plasma Nutfah Dan Pemuliaan. Bogor. 22-23 Agustus 2000. PERIPI-Badan Litbang Pertanian-Dirjen Perkebunan Komnas Plasma Nutfah. Janick, J. and Moore, J.N. 1995. Fruit Breeding. Tree and trpoical fruit. Vol. I. John Wiley and Sons Inc. USA. Khafkafalla, M.M. and Kazumi Hattori. 2000. Ethylene inhibitors enhance in vitro root formation on faba bean shoots regerated on medium containging thidiazuron. Plant Growth Regulation 32: 59-63. Kluwer Academic Poublishers.Printed in the Netherlands. 8
Kitto, S.L., and M.J.Young.1981.In vitro propagation of Carrizo citrange. Hort. Science 16(3) : 305-306. Livy Winata Gunawan. 1988. Teknik kultur jaringan. Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman. Pusat Antar Universitas. Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. Marin, M.L. and N.Duran-Vila. 1991.Conservation of citrus germplasm in vitro. J. Amer. Soc. Hort. Science 116 (4) : 740 746. Murashige, t. and F. Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth and biassays with tobacco tissue culture. Physiol. Plant. 15 : 473 497. Pierik, R.L.M. 1987. In vitro culture of highest Plants. Martinus Nijhoof of Publishers. Neteherland. Preece J.E., 1995. Can Nutrients Salts Partially Substitute for Plants Regulators? Plant Tissue Culture and Biotechnology 1 (1) 26-27. Watada, A.A., Ahroni, A., Zuke, A., Shejtman, H., Nissim, A. and Vaistein, A. 1996. Adventititous shoot formation from carnation stem segments : a comparison of different culture procedures. Scientia Horticulture 65:313-320. Witjaksono.1992. Kultur jaringan Jeruk Jepara. Prosiding Seminar Hasil Litbang SDH. 9
Ucapan Terima Kasih kepada : Rektor Universitas Padjadjaran, Ketua Lembaga Penelitian, Dekan Fakultas Pertanian Unpad, Ketua Jurusan Budidaya Pertanian, Kepala Laboratorium Teknologi Benih,, Koordinator Laboratorium Kultur Jaringan, Ketua Program Studi Agronomi, asisten serta para teknisi laboratorium kultur jaringan Universitas Padjadjaram yang telah mendukung pelaksanaan penelitian ini. 10