UJI ANTIKANKER EKSTRAK METANOL JAMUR YANG DIISOLASI DARI TANAH DAERAH WONOGIRI TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA MCF-7 SECARA IN VITRO SKRIPSI

Transkripsi

1 UJI ANTIKANKER EKSTRAK METANOL JAMUR YANG DIISOLASI DARI TANAH DAERAH WONOGIRI TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA MCF-7 SECARA IN VITRO SKRIPSI Oleh : RATNA LESTARI K FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2017

2 UJI ANTIKANKER EKSTRAK METANOL JAMUR YANG DIISOLASI DARI TANAH DAERAH WONOGIRI TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA MCF-7 SECARA IN VITRO SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta di Surakarta Oleh : Ratna Lestari K FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2017 ii

3

4

5 KATA PENGANTAR Assalamu alaikum Wr. Wb Dengan memanjatkan puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberikan nikmah dan hidayah-nya, sehingga penulis mampu menyelesaikan penulisan skripsi dengan judul : UJI ANTIKANKER EKSTRAK METANOL JAMUR YANG DIISOLASI DARI TANAH DAERAH WONOGIRI TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA MCF-7 SECARA IN VITRO, sebagai prasyarat untuk memperoleh gelar strata satu farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Terselesainya penulisan skripsi ini, tak luput dari bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu penulis ingin mengucapkan terimakasih kepada : 1. Azis Saifudin, M.Sc., PH.D., Apt., selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta dan selaku dosen pembimbing. 2. Bu Maryati, Ph.D., Apt. selaku penguji skripsi 3. Bu Ratna Yuliani, M.Biotech.St. selaku penguji skripsi 4. Ayah dan Ibu tercinta yang selalu memberikan dukungan baik mental, spriritual dan finansial untuk kelancaran studi penulis. 5. Safira Sarah Rosita dan Nina Sri Wulan selaku tim peneliti. Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, saran dan kritik yang membangun sangat penulis harapkan. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang memerlukan dan bagi pembaca. Wassalamu alaikum Wr.Wb. Surakarta, 23 Januari 2017 Penulis v

6 DAFTAR ISI Halaman JUDUL SKRIPSI... ii PENGESAHAN SKRIPSI... iii KATA PENGANTAR... v DAFTAR ISI... vi DAFTAR TABEL... viii DAFTAR GAMBAR... ix DAFTAR LAMPIRAN... xi DAFTAR SINGKATAN... xii ABSTRAK... xiii ABSTRACT... xiv BAB I. PENDAHULUAN... 1 A. Latar Belakang Masalah...1 B. Rumusan Masalah...3 C. Tujuan Penelitian...3 D. Tinjauan Pustaka Tanah Jamur Kanker Sel Kanker MCF Uji Sitotoksisitas MTT assay...7 E. Keterangan Empiris...8 vi

7 BAB II. METODE PENELITIAN... 9 A. Kategori Penelitian dan Rancangan Penelitian Kategori Penelitian...9 B. Variabel Penelitian...9 C. Alat dan Bahan...9 D. Tempat Penelitian...10 E. Jalannya Penelitian...10 F. Analisis Data...18 G. Kromatografi Lapis Tipis...18 BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN A. Pengambilan Sampel...20 B. Skrining Primer...21 C. Ekstraksi...25 D. Uji Sitotoksik Terhadap Sel Kanker Payudara MCF Pemeliharaan sel MCF 7 dan metode uji MTT assay Uji sitotoksik terhadap sel kanker payudara MCF E. Uji Kualitatif...32 BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan...34 B. Saran...34 DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN vii

8 DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Letak geografis di setiap lokasi pengambilan sampel Tabel 2. Rendemen Hasil Ekstraksi Tabel 3. Data % sel hidup ekstrak metanol jamur dan media pertumbuhan jamur pada setiap konsentrasi Tabel 4. Komposisi media Czapek dox viii

9 DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Skema jalannya penelitian Gambar 2. Skema uji sitotoksik Gambar 3. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua ekstrak metanol jamur tanah waduk pada media Czapek dox setelah 14 hari Gambar 4. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua ekstrak metanol jamur tanah hutan pada media Czapek dox setelah 14 hari Gambar 5. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua ekstrak metanol jamur tanah sawah pada media Czapek dox setelah 14 hari Gambar 6. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua ekstrak metanol jamur peternakan sapi pada media Czapek dox setelah 14 hari Gambar 7. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua ekstrak metanol jamur tanah kapur pada media Czapek dox setelah 14 hari Gambar 8. Pemanenan sel MCF-7 pada konfluen 80% dan pemisahan sel setelah diberi tripsin Gambar 9. Reaksi reduksi garam kuning tetrazolium menjadi formazan berwarna ungu Gambar 10. Perubahan sel MCF-7 dari sel normal dan sel mati setelah diberi ekstrak Gambar 11. Morfologi sel MCF 7 yang hidup dan mati Gambar 12. Grafik pengaruh konsentrasi ekstrak metanol jamur waduk terhadap % sel hidup MCF Gambar 13. Pengaruh konsentrasi Czapek dox terhadap % sel hidup ix

10 Gambar 14. Pengaruh konsentrasi ekstrak metanol jamur hutan, sawah, peternakan sapi, tanah kapur dan media Czapek dok terhadap persentase sel hidup Gambar 15. Hasil KLT ekstrak jamur tanah waduk pada (A) sinar tampak, (B) sinar UV 254 nm, (C) sinar UV x

11 DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Foto pengambilan sampel Lampiran 2. Perhitungan rendemen Lampiran 3. Perhitungan larutan sampel Lampiran 4. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah hutan Lampiran 5. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah waduk Lampiran 6. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah sawah Lampiran 7. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah peternakan sapi Lampiran 8. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah kapur Lampiran 9. Perhitungan 1C50 ekstrak media pertumbuhan jamur Lampiran 10. Hasil Absorbansi pada ELISA reader Lampiran 11. Skema 96 plate well xi

12 DAFTAR SINGKATAN DMEM : Dulbecco s Modified Eagle Medium DMSO : Dimethyl Sulfoxide ELISA : Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay FBS : Foetal Bovine Serum IC 50 : Inhibitory Concentration 50 KLT : Kromatografi Lapis Tipis LAF : Laminar Air Flow MCF-7 : Michigan Cancer Foundation MK : Media Kultur MTT : 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazoliumbromide PBS : Phospate Buffered Saline SDS : Sodium Dodecyl Sulfate UV : Ultraviolet xii

13 ABSTRAK Kanker payudara merupakan penyebab kematian akibat kanker terbesar kedua di dunia, maka dari itu peneliti tertarik mengembangkan bahan alam sebagai agen sitotoksik, salah satunya mikroba yang dihasilkan dari tanah. Tujuan penelitian ini yaitu untuk mengeksplorasi tanah di Wonogiri pada ekosistem yang berbeda yaitu tanah daerah waduk, hutan, sawah, peternakan sapi, dan tanah kapur terhadap efek sitotoksik sel MCF-7. Sampel diambil dengan metode purposive sampling, kemudian ditumbuhkan pada media Czapek dox selama 14 hari dan dengan metode cawan pengenceran, pengenceran mencapai konsentrasi 10-3 jamur yang tumbuh kemudian diekstraksi dengan metanol dan dipekatkan dengan rotary evaporator. Ekstrak kental metanol jamur dari tanah diuji dengan sel MCF-7 menggunakan metode MTT pada seri konsentrasi 500 µg/ml; 250 µg/ml; 125 µg/ml; 62,5 µg/ml, dan 31,25 µg/ml. Uji kualitatif menggunakan fase diam plat silika GF 254 dan fase gerak kloroform : metanol (95 : 5). Dari hasil penelitian dihitung nilai IC 50, namun ekstrak methanol jamur tanah waduk hanya dapat menghambat 83,95% sel hidup pada konsentrasi 500 µg/ml, sedangkan ekstrak jamur yang diisolasi dari tanah daerah hutan, sawah, peternakan sapi, dan tanah kapur tidak memiliki efek sitotoksik. Hasil uji kualitatif ekstrak methanol jamur tanah waduk diduga mengandung komponen poliketida dan fenil propanoid. Kata Kunci: Tanah, jamur, MTT, sitotoksik, sel MCF-7. xiii

14 ABSTRACT Breast cancer is the leading cause of cancer deaths the second largest in the world, and therefore the researchers are interested in developing natural products as a cytotoxic agent, one of them is microbes be produced from soil. The purpose of this study is to explore the soil in Wonogiri on different ecosystems which are land reservoirs area, forests, fields, cattle and limestone soils of the cytotoxic effects of MCF-7 cells. Samples were taken with the purposive sampling method, then cultured in Czapek dox media for 14 days and methods plate dilution, dilution 10-3 mold growing concentration is then extracted with methanol and then concentrated by rotary evaporator, condensed methanol extract soil of fungi tested with MCF-7 cells using MTT methode on a series of concentration 500 µg/ml; 250 µg/ml; 125 µg/ml; 62,5 µg/ml, dan 31,25 µg/ml. Qualitative test using silika GF 254 plate stationary phase and a mobile phase of chloroform: methanol (95: 5). From the results of this study calculated IC 50 values, but the methanol extract of soil fungi reservoirs can only inhibit 83.95% of living cells at a concentration of 500 mg / ml, whereas extracts of fungi isolated from soil forest areas, fields, cattle ranches, and limestone soil has no effect cytotoxic. Qualitative test of the extract of soil fungi is thought to contain the component polyketides and phenyl propanoid. Keywords: Soil, fungi, MTT, MCF-7 cells. xiv