LAMPIRAN. Lampiran 1. Skema Kerja Penelitian. Peremajaan Isolat. Pembuatan Suspensi Trichoderma spp.

Transkripsi

1 LAMPIRAN Lampiran 1. Skema Kerja Penelitian Peremajaan Isolat Pembuatan Suspensi Trichoderma spp. Perhitungan kepadatan spora suspensi Trichoderma spp. Pembuatan inokulum Trichoderma spp. Pengujian kemampuan isolat Trichoderma spp. Penyaringan media hasil pengujian - Pemisahan miselium dengan media - Pemisahan media dengan minyak - Uji Biosurfaktan Analisis TPH dengan Metode Gravimetri Perhitungan Bobot Miselium Kering Penulisan Laporan Penelitian 24

2 Lampiran 2. Pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA) (Sudarmaji et al., 1884). Komposisi Media Potato Dextrose Agar (PDA) per 1000 ml. Kentang (tanpa kulit) : 200 g Agar : 20 g Dextrose : 20 g Akuades : 1000 ml Cara Kerja : Disiapkan kentang yang sudah dikupas dari kulitnya dipotong-potong kecil. Kentang direbus sampai matang dengan akuades 500 ml, kemudian disaring untuk mendapatkan ekstrak. Agar dilarutkan dalam akuades mendidih sebanyak 500 ml, ditambahkan ekstrak kentang dan dextrose. Campuran tersebut ditambahkan akuades hingga volume mencapai 1000 ml, kemudian dihomogenkan di atas hot plate dan dituangkan ke dalam erlenmeyer. Mulut erlenmeyer ditutup dengan kapas dan alumunium foil kemudian disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 o C selama 30 menit dengan tekanan 2 atm. 25

3 Lampiran 3. Pembuatan media Mineral Salt Medium (MSM) (Mills et al., 1978) (Modifikasi). Komposisi Media Mineral Salt Medium (MSM) per 1000 ml NaCl : 10.0 g MgSO 4 7H 2 O : g KCL : 0.29 g KH 2 PO 4, Na 2 HPO 4 : 1.25 g NaNO 3 : 0.42 g Akuades : 1 L Cara Kerja : Disiapkan semua bahan tersebut dan dimasukkan pada beaker glass 1000 ml. Dihomogenkan di atas hot plate dengan kecepatan 3 rpm dan suhu 3 o C. Media yang sudah homogen diukur hingga ph media mencapai 5.5 dengan menambahkan 1 M HCL atau 1 M NaOH. Masing-masing media sebanyak 100 ml dituangkan pada erlenmeyer 250 ml dan disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit. 26

4 Lampiran 4. Data Persentase Penurunan Kadar Minyak (%) Pada Limbah Minyak Pelumas. No. Perlakuan Penurunan Kadar Minyak (%) 1. K 0 2. T j T n T p T b Keterangan: K : Limbah minyak pelumas tanpa isolat Trichoderma spp. T j : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 1 T n : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 2 T p : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 3 T b : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 4 27

5 Lampiran 5. Data Bobot Miselium Kering (g) Isolat Trichoderma spp. No. Perlakuan Bobot Miselium Kering (g) 1. Kontrol 0 2. T j T n T p T b Keterangan: K : Limbah minyak pelumas tanpa isolat Trichoderma spp. T j : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 1 T n : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 2 T p : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 3 T b : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 4 28

6 Lampiran 6. Data ph Perlakuan. No Perlakuan Awal ph Akhir 1. K T j T n T p T b Keterangan: K : Limbah minyak pelumas tanpa isolat Trichoderma spp. T j : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 1 T n : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 2 T p : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 3 T b : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 4 29

7 Lampiran 7. Data nilai Total Petroleum Hydrocarbons (TPH). No Perlakuan TPH (g/l) 1. Kontrol T j T n T p T b Keterangan: K : Limbah minyak pelumas tanpa isolat Trichoderma spp. T j : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 1 T n : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 2 T p : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 3 T b : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 4 30

8 Lampiran 8. Data clear zone hasil uji biosurfakatan 4 isolat Trichoderma spp. No Perlakuan Clear Zone 1. Kontrol - 2. T j + 3. T n + 4. T p + 5. T b + Keterangan: - : Tidak membentuk clear zone + : Membentuk clear zone 31

9 Lampiran 9. Spesifikasi Bahan dan Peralatan No. Nama Alat Merek/Tipe Kegunaan Tempat 1. Hotplate dan stirrer Stuart Menghomogenkan media 2. Mikroskop Olympus CH20 Melihat spora Lab. Fisiologi Hewan 3. Mikropipet Isolab 4. Sentrifugator Eppendorf 5451 R 5. Vortex mixer Stuart Mengambil sample minyak dan inokulum Memisahkan supernatan Menghomegenkan suspensi isolat Lab. Genetika dan Molekuler 6. Timbangan Analitik Explorer Ohaus USA Menimbang media 7. ph Meter ph Testr30 Waterproof Mengukur nilai ph 8. Oven Jeio Tech on Corong Pisah Schott Duran 500 ml 10. Erlenmeyer Iwaki pyrex 250 ml Mengeringkan miselium dan minyak Memisahkan minyak dan media Menguji isolat pada minyak Lab. Pengajaran I 11. Gelas Ukur Pyrex 250ml/2 Mengukur akuades 12. Beaker Glass Iwaki pyrex 1000 ml Membuat media No. Nama Bahan Spesifikasi Kegunaan 1. Glukosa g/mol Sumber karbon media MSM (Mineral Salt Medium). 2. Tween Dietil eter 1.07 g/cm 3 Meluruhkan spora dari media pertumbuhan g/mol Mengikat bahan minyak pada media pertumbuhan 32

10 Lampiran 10. Gambar Hasil Penelitian 1. Preparasi Pengujian Kemampuan Trichoderma spp. Gambar 1a. Pemurnian isolat Trichoderma spp. Gambar 1b. Spora Trichoderma spp. 2. Pengujian Kemampuan Trichoderma spp. pada Media yang Mengandung Limbah Minyak Pelumas Gambar 2a. Perlakuan sebelum inkubasi 9 hari Gambar 2b. Perlakuan sesudah inkubasi 9 hari 33

11 3. Pengukuran Perlakuan Setelah Inkubasi 9 Hari Gambar 3a. Pengukuran TPH Metode Gravimetri (Media MSM + Minyak Pelumas + Dietil eter) Gambar 3b. Pengukuran TPH Metode Gravimetri (Minyak Pelumas + Dietil eter) Gambar 2c. Pengukuran TPH Metode Gravimetri (Minyak Pelumas) Gambar 2d. Bobot miselium kering Trichoderma spp. Gambar 2c. Clear zone hasil uji biosurfaktan isolat Trichoderma spp. 34