BAB I PENDAHULUAN. A. Latar Belakang. berbagai jenis obat modern yang baru, belakangan ini terdapat kecenderungan

Transkripsi

1 BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Di tengah banyaknya jenis obat modern di pasaran dan munculnya berbagai jenis obat modern yang baru, belakangan ini terdapat kecenderungan global untuk kembali ke alam (back to nature). Beberapa hal yang mendorong masyarakat untuk menggunakan obat bahan alam antara lain mahalnya harga obat sintetis tertentu dan banyaknya efek samping yang timbul (Pramono, S., 2002). Obat tradisional Indonesia merupakan warisan budaya bangsa sehingga perlu dilestarikan, diteliti dan dikembangkan. Penelitian obat tradisional Indonesia mencakup penelitian obat herbal baik tunggal maupun dalam bentuk ramuan. Jenis penelitian yang telah dilakukan selama ini meliputi penelitian budidaya tanaman obat, analisis kandungan kimia, toksisitas, farmakodinamik, formulasi, dan uji klinik (Dewoto, 2007). Tanaman dalam genus Artocarpus (Moraceae) terdiri dari sekitar 50 spesies pohon evergreen (hijau sepanjang tahun) dan pohon yang berganti daun (gugur). Tanaman genus Artocarpus cukup penting sebagai sumber buah yang dapat dimakan dan penghasil kayu yang baik. Beberapa tanaman Artocarpus yang tersebar di Indonesia antara lain: sukun (A. altilis (Park.) Fosberg), cempedak (Artocarpus chempeden Spreng.), dan nangka (Artocarpus heterophyllus Lam.). Dalam pengobatan tradisional, sukun digunakan bagian daging buahnya sebagai tonik untuk hati dan daunnya untuk sirosis hati, hipertensi, dan diabetes; cempedak 1

2 2 (Artocarpus chempeden Spreng.) bagian bijinya digunakan untuk mengobati diare dan akarnya untuk meredakan demam pada malaria; (Jagtap & Bapat, 2010). Nangka (Artocarpus heterophyllus Lam.) merupakan salah satu tanaman yang tersebar luas di berbagai daerah tropis, terutama di Asia Tenggara. Nangka adalah salah satu tanaman terbanyak yang terdapat di pekarangan rumah dan boleh jadi adalah tanaman yang paling tersebar luas dan paling bermanfaat dalam genus Artocarpus. Daging buah dan biji dapat dimakan, buah muda dibuat sayur. Kayu dipakai untuk bahan bangunan, getah digunakan sebagai perekat untuk menangkap burung, dan untuk makanan ternak, serta batang dan kulit kayu mengandung zat warna yang dapat digunakan untuk mewarnai makanan atau bahan pakaian. Bagianbagian dari nangka termasuk kulit pohon, akar, daun, dan buah dikaitkan dengan khasiatnya untuk kesehatan (Elevitch & Manner, 2006). Bagian-bagian dari tanaman A. heterophyllus biasa digunakan untuk menyembuhkan penyakit, antara lain: daun digunakan untuk mengaktifkan susu pada wanita dan hewan, antisifilis, menghilangkan ulcer dan luka, serta sebagai obat cacing; akar digunakan untuk meringankan diare dan demam, kayu mempunyai efek sedatif (Khan, Omoloso, & Kihara, 2003), buah muda sebagai astringen; buah matang sebagai demulsen, nutrisi, dan laksatif (Lim, T. K., 2012). Flavonoid diketahui memiliki banyak keuntungan untuk kesehatan, termasuk sebagai antioksidan, anti inflamasi, antivirus, serta antikanker. Telah dilaporkan bahwa kayu nangka mengandung berbagai senyawa flavonoid yang diantaranya berpotensi sebagai antikanker serta sebagai pemutih kulit (whitening

3 3 agent). Hal ini mendorong banyak peneliti untuk melakukan penelitian lebih lanjut terhadap kayu nangka. Dalam analisis flavonoid, berbagai metode isolasi dari bahan alam dapat diaplikasikan dan pemanfaatannya tergantung pada bahan alam yang akan diekstraksi. Adanya karbohidrat dan atau senyawa lipofilik dapat mempengaruhi profil komposisi kualitatif dan kuantitatif flavonoid serta turunannya dari ekstrak yang diperoleh. Hal-hal di atas perlu dipertimbangkan dalam pemilihan metode untuk persiapan sampel dan ekstraksi, dalam banyak kasus diperlukan perlakuan tambahan dengan Solid-Phase Extraction (SPE) dari sampel yang diambil (Grotewold, 2006). Pemilihan metode ekstraksi dan pemilihan pelarut merupakan hal yang penting dalam pembuatan ekstrak untuk sediaan obat tradisional. Ketepatan penggunaan pelarut dapat mempengaruhi efek yang diharapkan karena zat aktif yang terlarut berkaitan dengan pelarut yang digunakan tersebut(departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986). Metode ekstraksi sederhana yang sering digunakan termasuk untuk penelitian diantaranya, maserasi, perkolasi, namun tidak menutup kemungkinan dilakukan secara infundasi. Pelarut yang dapat digunakan adalah etanol, air, dan campurannya (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986). Fraksinasi sering dilakukan pada ekstrak kental yang diperoleh dari proses ekstraksi. Fraksinasi dilakukan dengan tujuan untuk meningkatkan kadar zat yang diinginkan dalam ekstrak. Penelitian perlu dilakukan untuk mengetahui metode ekstraksi yang menghasilkan kadar zat aktif paling tinggi. Dasar inilah yang mendorong peneliti

4 4 melakukan penelitian agar didapatkan data ilmiah mengenai metode ekstraksi yang menghasilkan kadar flavonoid total paling tinggi sehingga dapat dijadikan acuan dalam memilih metode ekstraksi untuk pelaku usaha obat tradisional yang menggunakan flavonoid dari kayu nangka. B. Rumusan Masalah Permasalahan yang diajukan dalam penelitian ini adalah: 1. Apakah kadar flavonoid total ekstrak kental kayu nangka yang diperoleh melalui ekstraksi secara maserasi lebih tinggi dibandingkan kadar flavonoid total ekstrak kental kayu nangka yang diperoleh melalui ekstraksi secara infundasi? 2. Apakah fraksi etanol dari ekstrak dekokta kayu nangka memiliki kadar flavonoid total yang lebih tinggi daripada ekstrak kental hasil maserasi? C. Tujuan Penelitian Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui: 1. Metode yang menghasilkan kadar flavonoid lebih tinggi dari ekstrak kayu nangka antara metode maserasi dan infundasi. 2. Pengaruh fraksinasi menggunakan etanol terhadap kadar flavonoid ekstrak kayu nangka hasil infundasi. D. Manfaat Penelitian Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai metode yang menghasilkan kadar flavonoid lebih tinggi dari ekstrak kayu nangka antara metode maserasi dan infundasi. Hasil penelitian ini dapat bermanfaat untuk

5 5 pemilihan metode ekstraksi yang digunakan bagi industri yang memproduksi obat tradsional dengan kayu nangka sebagai bahan utamanya. E. Tinjauan Pustaka 1. Nangka (Artocarpus heterophyllus Lam.) a. Taksonomi dan Nama Daerah Klasifikasi Ilmiah Kerajaan : Plantae Divisi Kelas Ordo Suku Genus Spesies : Tracheophyta : Magnoliopsida : Rosales : Moraceae : Artocarpus : Artocarpus heterophyllus Lam. ( ITIS (Integrated taxonomic information system), 2015) b. Nama daerah Aceh: Pana, Panah, Panaih, Panas; Sunda: Nangka; Jawa: Nongka; Bali: Nangka; Bima: Nangga, Nanga; Sumba: Nangka, Nanga; Sulawesi Utara: Nangga; Seram Barat: Nongga; Seram Timur: Tehele kaolin; Irian Jaya: Naknak, Krour; Halmahera Utara: Naka; Ternate Tidore : Naka (Heyne, K., 1987)

6 6 Gambar 1. Pohon nangka (Artocarpus heterophyllus Lam.) (Elevitch & Manner, 2006) c. Morfologi 1) Ukuran dan bentuk: Nangka tumbuh sepanjang tahun, tinggi 8-25 m (26-82 kaki) dan diameter batang cm (12-32 inci). Seluruh bagian pohon akan mengeluarkan getah putih ketika dilukai. 2) Bunga: Berumah satu, alat reproduksi jantan dan betina pada satu pohon. 3) Daun: Daun berwarna hijau tua, berseling, mengkilap, kasar, kaku, besar (panjang sampai 16 cm), berbentuk elips sampai oval. Bentuk daun muda sangat lobe (menjorok). 4) Buah: Buah nangka relatif besar dan berbiji banyak. Kulitnya berduri lunak. Setiap biji dibalut oleh daging buah (endokarp) dan dami (eksokarp) yang mengandung gelatin. Buah nangka merupakan buah majemuk yakni berbunga banyak dan tersusun tegak lurus pada tangkai buah, membentuk bangunan besar yang kompak, dan bentuknya bulat hingga bulat lonjong.

7 7 Kulit buah berwarna hijau hingga kuning kemerahan. Daging buah tipis hingga tebal. Setelah matang, daging buah berwarna kuning merah, lunak, manis dan aroma spesifik. Pohon nangka berakar tunggang dengan akar samping yang kuat dan dalam (Sunarjono 2010). 5) Biji: Berwarna cokelat terang sampai cokelat; bulat; panjang 2-3 cm dengan diameter 1,15 cm; serta dilapisi membran berwarna keputihan. 6) Perakaran nangka memiliki akar tunggang yang kuat (Elevitch & Manner, 2006). 7) Kayu: Sifat-sifat kayu nangka yaitu agak berat, agak keras atau keras, agak padat atau padat, serat agak kasar atau kasar, warna kuning sitrun mengkilat, warna akhirnya menjadi cokelat; kayu sukar dibelah, tetapi mudah dikerjakan, mudah diserut, dibubut, dan digilapkan (Heyne, K., 1987). d. Sinonim Artocarpus integrifolia var. heterophylla (Lam.) Pers., Artocarpus brasiliensis Gomez, Artocarpus heterophylla Lam., Artocarpus integrifolia auct., Artocarpus integrifolia sensu Trimen non. L. f., Artocarpus integrifolia var. glabra Stokes, Artocarpus jaca Lam., Artocarpus maxima Blanco, Artocarpus philippinensis Lam., Polyphema jaca Lour., Saccus cauliflorum Gaertn., Tsjaka-maram Rheede (Lim, T. K., 2012). e. Kegunaan Kayu nangka memiliki efek sedatif untuk kejang dan empulur kayunya dapat mendorong aborsi. Serbuk dan serpihan dari inti kayu nangka digunakan sebagai pewarna kain sutera (Morton, J., 1987).

8 8 Di Jawa, kayu nangka banyak digunakan untuk membuat tiang bangunan, kentongan, dan lesung. Kayu tersebut baik sekali untuk membangun rumah dan membuat mebel (Heyne, K., 1987). f. Kandungan Kimia Wong dkk. (1992) menemukan bahwa buah nangka mengandung 45 senyawa volatil dan 32 diantaranya belum pernah dilaporkan. Proporsi besar dari ester (31,9%) dalam senyawa-senyawa volatil tersebut berperan penting terhadap rasa buah nangka. Selain itu, buah nangka merupakan sumber provitamin A karotenoid, meskipun tidak sebaik papaya (Lim, T. K., 2012). Bijinya kaya protein, kandungan proteinnya lebih tinggi daripada protein hewani seperti daging dan ikan laut (Ajayi, 2008). Zat ekstraktif pada kayu nangka didominasi oleh senyawa semi polar yang terlarut dalam etil asetat seperti alkaloid, aglikon, terpenoid, flavonoid, dan glikosida (Amilya, 2014). Kayu nangka mengandung beberapa zat warna flavon (Dave dan Venkataraman, 1956; Dave dkk., 1960, 1961; Rao dkk., 1973) dan flavonoid yang memiliki aktivitas pemutih kulit (Arung dkk., 2006). Telah dilaporkan bahwa kayu nangka mengandung senyawa flavonoid, antara lain: morin, dihidromorin, sinomakurin, artokarpin, isotokarpin, sikloartokarpin, artokarpesin, oksidihidroartokarpesin, artokarpetin, norartokarpetin, sikloartinon, artokarpenon, kudraflavon C, 6-prenilapigenin, kuwanon C, norartokarpin, albanin A, kudraflavon B, brosimon I, artokarpanon, dan 3-prenil luteolin (Dave dan Venkataraman, 1956; Dave dkk., 1960; Rao dkk., 1973; Lim, 2012). Artokarpanon dilaporkan dapat menghambat aktivitas

9 9 tirosinase jamur dan produksi melanin pada sel melanoma B16. Artokarpin, kudraflavon C, 6-prenilapigenin, kuwanon C, norartokarpin, dan albanin A yang diisolasi dari kayu nangka dapat menghambat biosintesis melanin pada sel melanoma B16 dengan sedikit bahkan tanpa sitotoksisitas (Arung dkk., 2006). 2. Ekstraksi Proses penyarian tumbuhan pada dasarnya dibedakan menjadi dua fase, yaitu fase pencucian dan fase ekstraksi. Fase pencucian merupakan fase pertama dalam penyarian karena sebagian bahan aktif akan berpindah ke dalam bahan pelarut. Semakin halus serbuk simplisia maka akan semakin optimal pula jalannya proses pencucian ini. Pada fase ekstraksi terjadi peristiwa pendesakan bahan pelarut untuk melarutkan komponen dalam sel yang tidak terluka. Mengalirnya bahan pelarut ke dalam ruang sel akan mengakibatkan pembengkakan protoplasma, dan terlarutnya bahan kandungan sel sesuai dengan kelarutannya (Voigt, R., 1994). Prinsip ekstraksi adalah pelarutan/pengikatan zat aktif berdasarkan sifat kelarutannya dalam suatu pelarut (like dissolved like). Jenis dan mutu pelarut yang digunakan sangat menentukan keberhasilan proses ekstraksi. Pelarut yang digunakan harus dapat melarutkan zat yang diinginkan, mempunyai titik didih yang rendah, murah, dan tidak toksik (Ketaren, S., 1986). Senyawa aktif yang terkandung dalam simplisia dapat digolongkan ke dalam golongan minyak atsiri, alkaloid, dan flavonoid. Bila sudah diketahui senyawa aktif yang dikandung oleh simplisia tersebut, akan mempermudah dalam

10 10 pemilihan pelarut dan cara ekstraksi yang tepat (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000). Cara penyarian yang sering dilakukan ada 4, yaitu infundasi, maserasi, perkolasi, dan sokletasi. Metode ekstraksi yang paling sederhana dan banyak dilakukan oleh masyarakat adalah infundasi dan maserasi. a. Infundasi merupakan proses penyarian yang umum digunakan untuk menyari zat aktif yang larut dalam air. Penyarian dengan cara ini akan menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang, sehingga sari yang diperoleh dengan cara infundasi tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. Infusa adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia dengan air pada suhu 90ᴼC selama 15 menit. Dekokta adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia dengan air pada suhu 90ᴼC selama 30 menit (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986). b. Maserasi merupakan cara ekstraksi yang dilakukan dengan merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Keuntungan cara ini adalah cara pengerjaan dan peralatannya sederhana, meskipun demikian ada juga kerugiannya, yaitu waktu pengerjaannya relatif lebih lama dan penyariannya kurang sempurna (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986). Maserasi merupakan cara yang paling sederhana karena simplisia yang telah diserbukkan dengan derajat halus tertentu hanya perlu direndam dalam cairan penyari selama waktu yang telah ditentukan dalam suatu wadah yang terlindung dari sinar matahari langsung untuk menghindari terjadinya reaksi

11 11 yang dikatalisis oleh cahaya dan juga untuk menghindari terjadinya perubahan warna (Voigt, R., 1994). Alat yang dibutuhkan untuk melakukan maserasi adalah bejana dan pengaduk. Bejana digunakan sebagai wadah dalam proses perendaman simplisia oleh cairan penyari. Untuk simplisia yang mengandung senyawasenyawa yang memiliki gugus ortodihidroksi atau hidroksikarbonil harus menggunakan baja yang tahan karat atau bahan logam lain yang dilapisi . Hal ini bertujuan untuk mencegah terbentuknya kompleks antara logam berat dengan senyawa-senyawa yang memiliki gugus ortodihidroksi atau hidroksikarbonil. Pengaduk digunakan untuk mengaduk rendaman simplisia agar gradien konsentrasi tetap terjaga. Pengadukan dapat dilakukan secara manual atau dengan menggunakan pengaduk mekanik (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986). 3. Fraksinasi Fraksinasi adalah suatu proses yang bertujuan untuk menghilangkan senyawa yang tidak dikehendaki tanpa berpengaruh pada senyawa yang dikehendaki, sehingga diperoleh ekstrak yang lebih murni yang mengandung senyawa yang dikehendaki. Pemilihan pelarut didasarkan pada senyawa yang dikehendaki (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000). 4. Flavonoid a. Kerangka dasar dan pengertian flavonoid Senyawa flavonoid adalah senyawa polifenol yang mempunyai 15 atom karbon yang tersusun dalam konfigurasi C6-C3-C6, yaitu dua cincin aromatik

12 12 yang dihubungkan oleh 3 atom karbon yang dapat atau tidak dapat membentuk cincin ketiga. Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan hijau sehingga dapat ditemukan pada setiap ekstrak tumbuhan (Markham, K.R., 1988). Golongan flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C6-C3-C6. Artinya, kerangka karbonnya terdiri atas dua gugus C6 (cincin benzen tersubstitusi) disambungkan oleh rantai alifatik tiga-karbon : Gambar 2. Kerangka Flavonoid (Robinson, T., 1995) Golongan terbesar flavonoid berciri mempunyai cincin piran yang menghubungkan rantai tiga-karbon dengan salah satu dari cincin benzena. Sistem penomoran untuk turunan flavonoid diberikan di bawah: Gambar 3. Sistem penomoran turunan flavonoid (Robinson, T., 1995) Diantara flavonoid khas yang mempunyai kerangka seperti di atas berbagai jenis dibedakan berdasarkan tahanan oksidasi dan keragaman lain pada rantai C3. Flavanon Flavon Flavonol

13 13 Katekin Flavanonol Leukoantosianidin Antosianidin Gambar 4. Flavonoid dikelompokkan berdasarkan rantai C3 (Robinson, T., 1995) Auron dan khalkon juga tersusun atas kerangka karbon C6-C3-C6 sehingga termasuk senyawa flavonoid dan dimasukkan ke dalam golongan flavonoid minor (Grotewold, 2006). Flavonoid terdistribusi luas pada makanan dan minuman yang berasal dari tanaman seperti buah-buahan, sayuran, teh, kakao, dan anggur. Diketahui bahwa kuersetin adalah komponen yang paling banyak ditemukan pada makanan dari berbagai flavonoid yang tergolong sebagai flavonol dan flavon (Grotewold, 2006). Gambar 5. Struktur kimia kuersetin (Andersen & Markham, 2006) Kuersetin bersama flavonoid lain yaitu kaempferol, miristin, apigenin, dan luteolin, memiliki aktivitas antioksidan di berbagai studi in vitro (Peterson & Dwyer, 1995). Selain itu, kuersetin juga diketahui dapat menghambat oksidasi

14 14 LDL (Low Density Lipoprotein) sehingga menghambat agregasi platelet secara in vitro (Hertog dkk., 1997). b. Flavonoid pada kayu nangka Beberapa zat warna flavon telah diisolasi dari kayu nangka, yaitu morin (11), dihidromorin, sinomakurin, artokarpin, isotokarpin, sikloartokarpin, artokarpesin, oksidihidroartokarpesin, artokarpetin, norartokarpetin, sikloartinon, artokarpenon (Dave dan Venkataraman, 1956; Dave dkk., 1960, 1961; Rao dkk., 1973). Arung dkk. (2010) mengisolasi senyawa dari kayu nangka: artokarpin (1); kudraflavon C (2); 6-prenilapigenin (3); kuwanon C (4); norartokarpin (5); albanin A (6); kudraflavon B (7); brosimon I (8); artokarpanon (9); 2,4 - dihidroksiflavon (10), dan morin (11).

15 15 c. Penyarian dan pemisahan flavonoid Gambar 6. Struktur senyawa 1-11 (Arung dkk., 2010) Menurut Harborne (1996), idealnya untuk analisis fitokimia harus digunakan jaringan tumbuhan yang segar. Beberapa menit setelah dikumpulkan, bahan tumbuhan tersebut harus dimasukkan ke dalam alkohol mendidih. Bila bahan tidak tersedia, maka jaringan yang diambil segar harus disimpan kering di dalam kantung plastik, dan biasanya akan tetap dalam keadaan baik untuk dianalisis setelah beberapa hari dalam perjalanan. Dengan cara lain, tumbuhan dapat dikeringkan sebelum diekstraksi. Untuk mencegah terjadinya perubahan kimia yang terlalu banyak, bahan harus dikeringkan secepat-cepatnya, lebih baik dengan aliran udara yang baik. Setelah

16 16 benar-benar kering, tumbuhan dapat disimpan sampai digunakan untuk analisis. Cara demikian telah dilakukan dengan berhasil pada analisis flavonoid, alkaloid, kuinon, dan terpenoid terhadap herbarium yang telah disimpan bertahun-tahun (Harborne, J. B., 1996). Macam ekstraksi yang tepat bergantung pada tekstur dan kandungan air bahan tumbuhan yang diekstraksi dan pada jenis senyawa yang diisolasi (Harborne, J. B., 1996). Flavonoid mudah mengalami peruraian karena panas, kerja enzim, adanya air, dan ph. Oleh karena itu, beberapa usaha perlu dilakukan untuk menghindari perubahan molekul flavonoid pada proses isolasi. Diantaranya adalah segera memanasi bagian tanaman yang masih segar pada 50 0 C. Pemanasan dimaksudkan untuk mencegah aktivitas enzim, tetapi panas yang digunakan tidak terlalu tinggi. 5. Kromatografi Kromatografi adalah metode pemisahan komponen-komponen dalam campuran berdasarkan perbedaan kecepatan migrasi komponen-komponen tersebut, yang dibawa oleh fase gerak, untuk melintasi fase diam (Skoog dkk., 2014). Keuntungan kromatografi lapis tipis dibandingkan metode kromatografi lainnya adalah lebih mudah dan lebih murah dibandingkan metode kromatografi lainnya; peralatannya lebih sederhana; banyak digunakan untuk tujuan analisis; identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan menggunakan pereaksi warna, fluoresensi, atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet; pemisahan komponen dapat dilakukan secara menaik (ascending), menurun (descending)

17 17 atau dengan cara elusi dua dimensi; dan ketepatan penentuan kadar lebih baik karena komponen yang ditentukan adalah bercak yang tidak bergerak (Gandjar, I.G. & Rohman A., 2007). a. Fase diam Fase diam yang digunakan pada KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara µm. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensinya dan resolusinya. Penjerap yang paling sering digunakan adalah silika dan serbuk selulosa, sementara mekanisme sorpsi yang utama pada KLT adalah partisi dan adsorbsi. Lapisan tipis yang digunakan sebagai penjerap juga dapat dibuat dari silika yang telah dimodifikasi, resin penukar ion, gel eksklusi, dan siklodestrin yang digunakan untuk pemisahan kiral (Gandjar, I.G. & Rohman A., 2007). 1) Silika Silika gel atau silika adalah penjerap yang paling sering digunakan untuk analisis fitokimia secara kromatografi lapis tipis, misalnya untuk determinasi komponen racun seperti asam aristolokik pada pengobatan tradisional Cina. Silika gel memiliki struktur ikatan silika dan oksigen (siloksan) dan pemisahan terjadi karena migrasi diferensial molekul sampel yang disebabkan oleh ikatan hidrogen, interaksi dipol-dipol dan interaksi elektrostatik dengan

18 18 silanol (Si-OH). Fase gerak pada silika gel biasanya lebih nonpolar dibandingkan silika gel yang bersifat polar, fase ini disebut fase normal (normal phase). (Waksmundzka-Hajnos dkk., 2008). Silika paling berguna untuk memisahkan aglikon yang kurang polar, misalnya isoflavon, flavonon, metil flavon, dan flavonol (Markham, K.R., 1988). 2) Selulosa Selulosa terdiri atas rantai panjang polimerisasi beta-glokopiranosa yang terhubung pada posisi 1-4. Mekanisme pemisahannya adalah partisi fase normal (normal phase) dengan menyerap air sebagai fase diam. Pemisahan fitokimia yang dapat dilakukan dengan menggunakan selulosa adalah untuk senyawa asam hidrosinamat ester, flavonol, glikosida, antosianin, aglikon flavon dan flavonon, saponin triterpenoid, dan glukosida iridoid (Waksmundzka-Hajnos dkk., 2008). Selulosa ideal untuk memisahkan glikosida yang satu dari glikosida yang lain, memisahkan glikosida dari aglikon, dan untuk memisahkan aglikon yang kurang polar. Selulosa sering digunakan untuk identifikasi flavonoid secara umum (Markham, K.R., 1988). b. Fase gerak Fase gerak yang digunakan untuk kromatografi lapis tipis harus memenuhi beberapa syarat. Fase gerak tidak boleh mempengaruhi secara kimiawi atau melarutkan fase diam karena akan merusak sistem kromatografi. Selain itu, fase gerak juga tidak boleh menghasilkan transformasi kimia dari

19 19 komponen senyawa yang dipisahkan. Fase gerak harus mudah dihilangkan dari fase diam atau penjerap dan harus sesuai dengan metode deteksinya. Umumnya, jika fase diam yang digunakan polar maka fase gerak yang digunakan sebaiknya nonpolar atau sedikit polar, sistem ini dinamakan sistem fase normal atau normal-phase (NP). Sebaliknya, bila fase diam bersifat nonpolar dan fase gerak polar, maka sistem ini disebut sistem fase terbalik atau reversed-phase (RP) (Waksmundzka-Hajnos dkk., 2008). Flavon dan flavonol termetilasi atau teretilasi memerlukan fase gerak yang bersifat nonpolar seperti, kloroform-metanol (15:1). Aglikon flavonoid seperti apigenin dan kuersetin dapat memakai fase gerak kloroform-metanol (96:4) atau fase gerak lain yang sifat kepolarannya sama (Andersen & Markham, 2006). c. Deteksi Metode deteksi pada kromatografi lapis tipis bertujuan untuk meningkatkan sensitivitas, meningkatkan selektivitas, dan memberikan bukti mengenai kualitas pemisahan (Jork dkk., 1990). Deteksi secara visualisasi digunakan untuk senyawa yang tidak berwarna. Banyak senyawa akan mengabsorbsi cahaya UV atau berfluoresens saat tereksitasi oleh UV atau cahaya tampak walaupun kebanyakan memerlukan penyemprotan dengan reagen tertentu (Wall, P. E., 2005).

20 20 Tabel I. Reagen untuk deteksi flavonoid Reagen Preparasi AlCl 3 - Melarutkan 0,2-1 g Aluminium klorida dalam 100 ml etanol - Melarutkan 20 g Aluminium klorida dalam 100 ml etanol Uap amonia Larutan amonia (25%) Anilin-difenilamin-asam Asam fosfat 85%-asam asetat-anillindifenilamin(20 fosfat ml + 100mL + 5 ml + 5 g) Antimon(III) klorida Melarutkan 10 g antimon(iii) klorida dalam (reagen Carr-Price) kloroform atau karbon tetraklorida hingga 50 ml 2,4-dinitrofenilhidrazin Melarutkan 100 mg 2,4-dinitrofenilhidrazin dalam campuran 90 ml etanol dan 10 ml asam hidroklorid Asam difenilborat-2- Melarutkan 1 g asam difenilborat-2-aminoetil ester aminoetil ester dalam etanol hingga 100 ml Sitroborat Melarutkan 5 g asam sitrat dan 5 g asam borat dalam etanol hingga 100 ml (Jork dkk., 1990; Depkes RI, 2013) Beberapa flavonoid akan menunjukkan warna sebagai berikut ketika diamati di bawah sinar UV 366 nm: 1) Kuersetin, mirisetin, dan bentuk 3- dan 7-O-glikosidanya: jingga-kuning. 2) Kaempferol, isorhamnetin, dan bentuk 3- dan 7-O-glikosidanya: kuninghijau. 3) Luteolin dan bentuk 7-O-glikosidanya: jingga. 4) Apigenin dan bentuk 7-O-glikosidanya: kuning-hijau. (Andersen & Markham, 2006) 6. Spektrofotometri Spektrofotometri serapan merupakan pengukuran suatu interaksi antara radiasi elektromagnetik dan molekul atau atom dari suatu zat kimia. Teknik yang sering digunakan dalam analisis farmasi meliputi spektroskopi serapan ultraviolet, cahaya tampak, inframerah, dan serapan atom (Depkes RI, 2013).

21 21 Pengukuran kuantitatif secara spektrofotometri ditetapkan dengan persamaan Lambert Beer sebagai berikut: A = abc Absorptivitas (a) merupakan suatu konstante yang tidak tergantung pada konsentrasi (c), tebal kuvet (b), dan intensitas radiasi yang mengenai larutan sampel. Absorptivitas tergantung pada suhu, pelarut, struktur molekul, dan panjang gelombang radiasi. Satuan a ditentukan oleh satuan-satuan b dan c. Jika satuan c dalam molar (M) maka absorptivitas disebut dengan absorptivitas molar dan disimbolkan dengan dengan satuan M -1 cm -1 atau Liter.mol -1 cm -1. Jika c dinyatakan dengan persen berat/volume (g/100 ml) maka absorptivitas dapat ditulis dengan % dan juga seringkali ditulis dengan %. Nilai % merupakan absorbansi suatu senyawa yang diukur pada konsentrasi 1% b/v (1 g/100 ml) dan dengan kuvet yang mempunyai ketebalan 1 cm pada panjang gelombang dan pelarut tertentu. Cara lain untuk menetapkan kadar sampel adalah dengan menggunakan perbandingan absorbansi sampel dengan absorbansi baku, atau dengan menggunakan persamaan regresi linear yang menyatakan hubungan antara konsentrasi baku dengan absorbansinya. Persamaan kurva baku selanjutnya digunakan untuk menghitung kadar sampel (Gandjar, I.G. & Rohman A., 2007). Spektrofotometri UV-Vis telah lama digunakan dalam analisis flavonoid. Berbagai golongan flavonoid dapat diketahui dari spektra UV yang dihasilkan. Metode spektrofotometri UV-Vis banyak digunakan dalam analisis kuantitatif flavonoid, tetapi tidak banyak digunakan dalam analisis struktur karena informasi yang didapatkan lebih sedikit dibandingkan dengan metode spektrofotometri

22 22 NMR (Nuclear Magnetic Resonance) atau MS (Mass Spectrophotometry) (Andersen & Markham, 2006). F. Landasan Teori Prinsip ekstraksi adalah pelarutan/pengikatan zat aktif berdasarkan sifat kelarutannya dalam suatu pelarut (like dissolved like). Salah satu kriteria pelarut yang akan digunakan yaitu harus dapat melarutkan zat yang diinginkan (Ketaren, S., 1986). Ekstraksi dengan metode infundasi menggunakan pelarut akuades (polar), sedangkan ekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol (semi-polar). Kandungan kayu nangka yang dapat diekstraksi didominasi oleh senyawa semi polar yang terlarut dalam etil asetat seperti alkaloid, aglikon, terpenoid, flavonoid, dan glikosida (Amilya, 2014). Beberapa flavonoid yang telah berhasil diisolasi dari kayu nangka adalah artokarpanon, artokarpin, kudraflavon C, 6- prenilapigenin, kuwanon C, norartokarpin, dan albanin A (Arung dkk., 2006). Berdasarkan strukturnya, flavonoid pada kayu nangka lebih banyak yang berupa aglikon sehingga akan lebih larut dalam etanol 96% yang bersifat semipolar. Fraksinasi dengan etanol 96% terhadap ekstrak kental hasil infundasi kayu nangka akan menarik senyawa-senyawa flavonoid yang banyak berupa aglikon dan meninggalkan senyawa-senyawa selain flavonoid yang tidak diinginkan. Sehingga diharapkan akan didapatkan fraksi larut etanol dengan kadar flavonoid total yang lebih tinggi.

23 23 G. Hipotesis Hipotesis yang diajukan dalam penelitian ini adalah: 1. Ekstrak kental hasil maserasi kayu nangka memiliki kadar flavonoid total lebih tinggi dibandingkan ekstrak kental hasil infundasi kayu nangka. 2. Fraksi etanol dari ekstrak kental hasil infundasi kayu nangka memiliki kadar flavonoid total ekuivalen kuersetin yang lebih tinggi dari ekstrak kental hasil maserasi kayu nangka.