Karakterisasi Antibodi Antipeptida Ujung C dan Ujung N Protein CarA Salmonella typhi

Transkripsi

1 Karakterisasi Antibodi Antipeptida Ujung C dan Ujung N Protein CarA Salmonella typhi

2

3 T SUF

4 Abstrak Salmonella typhi menyebabkan demam tifoid pada manusia. Gen cara S. typhi merupakan salah satu gen yang diduga terekspresi lebih banyak secara in vivo dan penting bagi patogenesisnya. Tingkat ekspresi gen cara S. typhi pada penelitian ini dipelajari melalui pendekatan imunologi. Peneliti sebelumnya telah berhasil memproduksi antibodi antipeptida ujung C dan ujung N protein CarA S. typhi, masing-masing dari peptida sintesis (NH 3 ) Lys His Tyr Arg Ser Ser Ala (COOH) dan (NH 3 ) Ser Ala Leu Leu Val Leu Glu Lys-(COOH). Tujuan penelitian pada tahap ini adalah untuk mengkarakterisasi lebih lanjut antibodi antipeptida tersebut, dengan menekankan aspek reaksi silang antibodi. Reaksi silang antibodi antipeptida ujung C dan ujung N protein CarA S. typhi dipelajari melalui studi homologi secara in scripto dan secara eksperimen dengan menggunakan teknik I;LLSA dan Westc:n Imnrunohlotting. Hasil analisis in scripto menunjukkan adanya urutan asam amino bakteri-bakteri lain yang mempunyai homologi dan diperkirakan akan memberikan reaksi silang dengan antibodi antipeptida ujung C dan ujung N protein CarA S. typhi. Di antara bakteri-bakteri tersebut dipilih tiga bakteri yang mempunyai homologi spesifik yaitu Salmonella typhimurium, Escherichia coli, dan Pseudomonas aeruginosa. Hasil ELLSA dan Western Immunohlotting menunjukkan adanya reaksi silang antibodi antipeptida ujung C dan ujung N protein CarA S. typhi dengan S. typhimurium, E. coh dan P. aeruginosa. Tingkat reaksi silang antibodi antipeptida ujung C terhadap S. typhimunium, E. coli dan P. aeruginosa masing-masing sebesar 74,7%, 34,4% dan 186,8% sedangkan untuk antibodi antipeptida ujung N masing-masing sebesar 104,7%, 71,2%, dan 58,1%. Diharapkan antibodi antipeptida ujung C dan ujung N protein CarA S. lyphi bisa dimanfaatkan untuk mempelajari protein CarA pada organisme lainnya berdasarkan perbedaan tingkat reaksi silang yang dilakukan oleh antibodi antipeptida ujung C dan ujung N protein CarA S. typhi tersebut. vi

5 Abstract Salmonella typhi cause human typhoid fever. CarA gen of S. typhi is one of genes predicted to be expressed more in vivo and important to its pathogenesis. Expression level of CarA gen of S. typhi in this research studied by immunology approach. Terminal carboxy and terminal amino rabbit antipeptide antibodies of CarA protein of S. typhi were succesfully produced each from synthetic peptide (NH 3 ) Lys His Tyr Arg Ser Ser Ala (COOH) and (NH 3 ) Ser Ala Leu Leu Val Leu Glu Lys (COOH). The purpose of the present study would further characterize the antipeptide antibodies from cross-reaction aspect. Antipeptide antibodies of CarA protein of S. typhi cross-reaction were examined by homology study in si;ripto and experimentally using ELISA and Western Immunoblotting technique. Amino acid sequence of another bacteria which have homology and predicted to exhibit crossreaction with antipeptide antibodies are found. Among the bacteria, there are three bacteria which have spesific homology is selected : Salmonella typhimurium, Escherichia coil, and Pseudomonas aeruginosa. ELISA and Western Immnnoblouing technique showed cross-reaction of terminal carboxy and terminal amino antipeptide antibodies of CarA protein of S. typhi with S. typhimurium, E. coil and P. aeruginosa. Cross-reaction level of terminal carboxy antipeptide antibodies with S typhimurium, E coil and P. aeruginosa are 74,7%, 34,4% and 186,8%, while terminal amino antipeptide antibodies are 104,7%, 71,2%, and 58, 1% respectively. It is expected that terminal carboxy and terminal amino antipeptide antibodies of CarA protein of S. typhi could be used for study of CarA protein of other organism based on cross-reaction level differentiation of terminal carboxy and terminal amino antipeptide antibodies of CarA protein of S. typhi. vii

6

7

8

9

10

11