Uji Bioaktivitas Senyawa Glikosida dari Biji Keben (Barringtonia asiatica L. Kurz)

Transkripsi

1 Jurnal Natur Indonesia (), ktober 009: 94 ISSN 4979, Keputusan Akreditasi No 65a/DIKTI/Kep./00 Uji bioaktivitas senyawa glikosida dari biji keben 9 Uji Bioaktivitas Senyawa Glikosida dari Biji Keben (Barringtonia asiatica L. Kurz) Bustanussalam *) dan Partomuan Simanjuntak,) ) Pusat Penelitian BioteknologiLIPI, Jalan Raya Bogor Km. 46, Cibinong 69 ) Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Srengseng Sawah, Jagakarsa, Jakarta 640 Diterima Disetujui 0009 ABSTRACT The fruits or seeds of Keben (Barringtonia asiatica L. Kurz) were used traditionally for fish poisons, to curve stomach and headeach. The aim of this research was to isolate and identify bioactive compound of nbutanol fraction of active compound against Artemia salina Leach larvae. Isolation and purification of nbutanol fraction were carried out by column chomatography (Si, CCl Me) and high pressure liquid chromatography (RP, Me). The result of purification was than tested using BSLT methode. The test showed that, BABU.4 had the highest activity with value was 0.9 ppm. BABU.4 was identified with FTIR spectrophotometer and NMR (proton and carbon) spectrophotometer as derivate of glicoside. Keywords: Barringtonia asiatica L. Kurz, glicoside, keben, toxicity PENDAULUAN Keben ( Barringtonia asiatica L. Kurz) termasuk dalam suku Lecythidaceae. Tumbuhan ini banyak dijumpai di sekitar pantai, sepanjang sungai atau di hutan mangrove pada ketinggian 50 m di atas permukaan laut. Dibeberapa daerah, tumbuhan ini sering disebut sebagai tumbuhan beracun (poisonous plant), karena dibeberapa daerah buahnya digunakan sebagai racun ikan. Misalnya, masyarakat Papua menggunakan biji keben untuk menangkap ikan. Bijinya diparut kemudian disebar dipermukaan selokan yang dalamnya mencapai meter sehingga ikan akan pingsan dan mudah ditangkap dipermukaan air (Lemmes & Bunyapraphatsara 00; Samah 9) Pemanfaatan tumbuhan ini berbedabeda di setiap negara dan daerah. Bagian tumbuhan yang digunakan adalah biji, buah dan daunnya. Di Filipina daunnya digunakan sebagai obat untuk sakit perut. Masyarakat Indonesia dan Indo Cina menggunakan buah atau bijinya sebagai racun ikan. Sedangkan suku Aborigin di Australia menggunakan tumbuhan ini sebagai racun ikan dan sebagai obat sakit kepala (Lemmes & Bunyapraphatsara 00; Samah 9; Duryatmo 006) Keben mengandung senyawa saponin, terpen, alkaloid, triterpenoid, fenolik dan tanin (Duryatmo 006). Diduga sebagian besar khasiat obat dalam biji keben *Telp: (0) 75457, Fax boest77@yahoo.com berasal dari saponin dalam tanaman tersebut. erlt, (00), menunjukkan bahwa biji keben mengandung senyawa saponin yang berkhasiat sebagai racun ikan. erlt juga telah mengisolasi dan menentukan struktur kim ianya sebagai β,5α,6α,α,β pentahydroxyoleanene();β,6α,α,β p e n t a h yd r o x y o l e a n e n e( ) ; { [ β D galactopyranosyl( )βdglucopyranosyl( )]βd glucuronopyranosyloxy}(methylbutyroyoxy) 5,6,trihydroxy(β, 5α,6α,α)olean ene();{[βdgalactopyranosyl( )βd glucopyranosyl( )]βdglucuronopyranosyloxy} [(E)methylbutenyloyloxyl5,6,trihydroxy (β,5α,6α,α)oleanene (4) (erlt et al, 00) (Gambar ). Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa aktif dari fraksi nbutanol berdasarkan hasil pengujian toksisitas terhadap larva udang Artemia salina Leach (Meyer et al., 9). Diharapkan hasil yang diperoleh dapat digunakan sebagai landasan dalam pemanfaatan keben sebagai obat alami yang memberikan nilai ekonomi tinggi. BAAN DAN METDE Tempat dan Waktu Penelitian. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biofarmaka, Pusat Penelitian BioteknologiLIPI, Cibinong. Bahan dan Alat Penelitian. Biji keben diperoleh dari Papua dan telah diidentifikasi

2 Jurnal Natur Indonesia (): 94 Bustanussalam, et al. R R = R = R R C R = R = 4 R = R = Gambar. Struktur senyawa kimia biji keben hasil isolasi erlt et al., 00 di erbarium Bogoriensis (Cibinong) sebagai Barringtonia asiatica (L.) Kurz. Pelarut yang digunakan adalah metanol, etil asetat, nbutanol, kloroform, ammoniak, natrium hidroksida. Sedangkan, alat yang kemudian dipartisi kembali dengan nbutanol sebanyak kali, dan hasilnya diuapkan dengan penguap berpusing hingga diperoleh ekstrak kasar. Terhadap ketiga ekstrak kemudian dilakukan uji penapisan fitokimia. Untuk menentukan pelarut dalam kromatografi kolom, ekstrak nbutanol dianalisis dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan sistem pelarut kloroformmetanolair (5 : 5 : ), kloroformmetanol ( : ) dan kloroformmetanol ( : ). Analisis Penapisan Fitokimia. Penapisan fitokimia untuk semua ekstrak dilakukan bedasarkan metode Franswort 996, dimana ekstrak yang akan dianalisis direaksikan dengan pereaksi tertentu dan diamati perubahan warna yang terjadi. Pengujian Toksisitas dengan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Pengujian toksisitas dari ekstrak kasar hingga senyawa murni dilakukan berdasarkan metode BSLT (Meyer et al., 9). Untuk mendapatkan nilai Lethal Concentration (LC), berbagai konsentrasi ekstrak diuji toksisitas terhadap larva, dan setelah 4 jam jumlah larva yang mati dihitung. Semakin kecil nilai, maka semakin besar toksisitasnya. Fraksinasi ekstrak nbutanol dengan Kromatografi Kolom. Fraksi ekstrak nbutanol dimurnikan (fraksinasi pertama) dengan kromatografi kolom dengan menggunakan sistem pelarut kloroformmetanol secara gradien dari 5 : ~ :. asil fraksinasi kemudian diuji dengan BSLT untuk melihat fraksi yang aktif. Fraksi yang paling aktif dimurnikan kembali (fraksinasi kedua) dengan kromatografi kolom (Si, kloroformmetanol = 5 : ~ : ). Kemudian fraksifraksi tersebut diuji kembali dengan BSLT untuk melihat fraksi yang paling aktif. Fraksi yang paling aktif selanjutnya dimurnikan dengan KCKT. Pemurnian dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Fraksi aktif hasil fraksionisasi kedua dimurnikan dengan KCKT dengan kondisi analisis sebagai berikut: fase gerak metanol p.a, fase diam Capcell Pack C, kecepatan alir,0 ml/menit, panjang gelombang 54 nm dan volume yang diinjeksikan 0 µl. Identifikasi Senyawa Murni. Struktur kimia senyawa murni yang diperoleh ditentukan dengan cara mengambil data spektra spektroskopi inframerah, untuk mengetahui gugusgugus fungsi, dan resonansi magnet inti (proton dan karbon), untuk mengetahui jumlah dan karakteristik dari proton dan karbonnya. ASIL DAN PEMBAASAN si dan partisi. Dari hasil ekstraksi dan partisi 00 gram biji keben diperoleh bobot ekstrak kasar metanol sebanyak,4 gram (5,70%), etil asetat sebanyak, gram (,6%), nbutanol sebanyak 7,5 gram (,76%) dan air sebanyak,5

3 gram (,75%). Rendemen hasil ekstraksi dan partisi biji keben dapat dilihat pada Tabel. Penapisan Fitokimia. asil penapisan fitokimia masingmasing ekstrak ditampilkan pada Tabel. Dari tabel tersebut terlihat bahwa ekstrak metanol, etilasetat, nbutanol dan air mengandung senyawa triterpenoid; ekstrak metanol, nbutanol dan air mengandung senyawa flavonoid dan kuinon; ekstrak metanol dan air mengandung senyawa saponin dan tannin dan ekstrak air mengandung senyawa alkaloid. Uji Aktivitas dengan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). asil uji toksisitas terhadap Artemia salina Leach dapat dilihat pada Tabel, 4 dan 5. Dari Tabel terlihat bahwa ekstrak etilasetat dan ekstrak nbuatnol memiliki nilai lebih rendah dari ekstrak air. Ini berarti kedua ekstrak memiliki aktivitas yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak air. Atas dasar itu, maka untuk penelitian selanjutnya digunakan ekstrak nbutanol. Tabel. Bobot dan rendemen masingmasing ekstrak No Bobot (gram) Rendemen (%). Metanol,4 5,70. Etil asetat,,6. nbutanol 7,5,76 4. Air,5,75 Tabel. asil uji toksisitas beberapa ekstrak Sampel Dosis(D) Log D Mati idup M/T 0 0 0/0 etil asetat 6 4 6/0 0 /0 nbutanol air Uji bioaktivitas senyawa glikosida dari biji keben Dari hasil fraksinasi ekstrak nbutanol diperoleh 5 fraksi (BABU~BABU5), fraksi BABU memiliki nilai lebih rendah dari fraksi yang lain. Ini berarti, fraksi tersebut memiliki aktivitas yang lebih aktif dibandingkan fraksi lainnya (Tabel 4). Atas dasar hasil ini, fraksi BABU digunakan untuk fraksinasi selanjutnya. Dari hasil fraksinasi BABU diperoleh 5 fraksi (BABU.~BABU.5). Dari Tabel 5 terlihat bahwa BABU.4 memiliki nilai yang lebih rendah dari fraksi lainnya. al ini dapat diartikan bahwa aktivitas fraksi ini paling aktif dibandingkan fraksifraksi lainnya. 6 Keterangan : bpj = bagian per sejuta, M/T = mati/total, Probit = analisis statistika Tabel. asil penapisan fitokimia ekstrak biji keben (Barringtonia asiatica L.Kurz) No Penapisan Fitokimia 0/0 /0 /0 0/0 4/0 7/0 metanol % Kematian,00 5,,,00 60,00 6,67,00 46,66, Etil asetat Probit 5,0 4,56 5,5 4,9 4,9 4,6 n butanol air. Alkaloid +. Flavonoid Saponin Tanin Steroid 6. Triterpenoid Kuinon Minyak atsiri 9. Kumarin Keterangan = + : memberikan hasil positif; : memberikan hasil negatif,69, 9, Tabel 4. asil uji toksisitas dari hasil fraksionasi pertama Sampel BABU BABU BABU BABU4 BABU5 Dosis(D) Log D Mati idup M/T Keterangan = BABU : Barringtonia asiatica nbutanol /0 7/0 7/0 6/0 7/0 9/0 4/0 6/0 6/0 6/0 /0 7/0 5/0 /0 6/0 % Kematian,, 6,67 0,00 0,00 5, 0,00 6,67 6,67,, 4, 0,00 5,95 5, 4,5 6, 5, 4,4 5,4 5,0 4,6 6, 4,67 4,6 5,95 4, 4,6 Probit 70,4 47,97 9, 95,06 5,9

4 Jurnal Natur Indonesia (): 94 Bustanussalam, et al. Tabel 5. asil uji toksisitas dari hasil fraksionasi kedua Sampel BABU. BABU. BABU. BABU.4 BABU.5 Dosis(D) Log D Mati idup M/T /0 5/0 /0 0/0 7/0 /0 0/0 7/0 9/0 0/0 6/0 /0 0/0 4/0 /0 % Kematian 50,00 6,67 6,67 0,00 5,, 46,67 6,67 Probit 5,00 4,9 5, 4,9 5, 4,4 5,0 4,56 4,9 4,9 5,4, 0,90 0,9 6,9 Gambar. Kromatogram KCKT fraksi BABU.4 C Gambar. Perkiraan struktur kimia dari fraksi BABU.4 Dari hasil pengujian toksisitas diperoleh bahwa semua ekstrak (etilasetat, nbutanol, dan air) dan hasil fraksionasi (BABU ~ BABU5) dan (BABU.~ BABU.5) bersifat toksik karena memiliki kurang dari 0 µg/ml (Meyer et al., 9). Pemurnian Fraksi BABU.4 dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. asil analisis KCKT fraksi BABU.4 menunjukkan bahwa fraksi tersebut merupakan senyawa murni yang mempunyai RT 5,5 menit. Senyawa tersebut berbentuk kristal amorf berwarna hijau muda. Kromatogram hasil kromatografi cair kinerja tinggi fraksi BABU.4 dapat dilihat pada Gambar. Identifikasi senyawa A dengan Infra Merah (IR). asil analisis fraksi BABU.4 dengan Spektrofotometer FTIR menunjukkan bahwa terdapat gugus C alkana pada bilangan gelombang 7,74 cm dan 9,5 cm ; C pada bilangan gelombang Tabel 6. Pergeseran kimia karbon senyawa isolat BABU.4 dan jenis gula (erlt, 00; ostettmann & Marston, 997) No RMI karbon ) Senyawa isolat BABU.4 Aglikon RMI karbon ) Senyawa triterpenglikosida Aglikon 4,45 (q) Triterpen 0,47 (t) 0,6 (t) 4,4 (t) 5,56 (t) 6 6,7 (d) ) pelarut D ) pelarut CD D ) pelarut D RMI karbon ) Senyawa metilglikopiranosida Gula Glukosa,7,,7 7,64 7, 70,,45,6 75, ,0 7,7 5 7,44 77,7 75,5 6 6,5 6, 6,7 Galaktosa 5, 5, 4, 6,7 6,9 69, 7,0 7, 7, 4 65, 64,9 7, 5 77,6 77, 75, 6 6,9 6,9 6,4 54,0 cm ; 6,0 cm dan 57,5 cm ; dan pada bilangan gelombang 4,9 cm. Dari data spektra infra merah ini memberikan informasi bahwa struktur kimia mempunyai gugus hidroksil dan C alkana. Spektoskopi Resonansi Magnet Inti (RMI) proton dan karbon. Penyidikan spektra untuk senyawa isolat dari fraksi BABU.4 dengan RMI proton menunjukkan bahwa 0,9~,5 ppm memberikan informasi adanya C ; C yang berikatan tunggal, sedangkan,~4,6 ppm menunjukkan adanya C dan C (Gambar ). Adanya proton anomerik terdapat pada 4, (d) dan 4, (d) yang

5 Uji bioaktivitas senyawa glikosida dari biji keben Gambar 4. Spektra RMI proton untuk senyawa isolat BABU.4 Gambar 5. Spektra RMI karbon untuk senyawa isolat BABU.4 menunjukkan bahwa senyawa isolat mempunyai gugus gula (disakarida). Data ini didukung oleh spektra RMI karbon yang terdapat pada C.7 ppm dan 5, ppm yang spesifik untuk karbon glikosidik dari dua monosakarida. Pergeseran kimia karbon lainnya terdapat pada C 6,9~,45 ppm yang merupakan jenis karbon teroksigenasi oleh gugus hidroksil (Lihat Tabel dan Gambar 4). Penelusuran pergeseran kimia karbon ( C) dari senyawa karbohidrat (sakarida) diperoleh bahwa gula yang terdapat pada senyawa isolat adalah glukosa dan galaktosa. Beberapa perbedaan pergeseran kimia karbon disakarida pada senyawa isolat adalah dikarenakan beda senyawa aglikon yang mengikat gula yaitu triterpen (erlt, 00) dan bentuk metil monosakarida (metilglukosa dan metil galaktosa) (ostettmann & Marston, 997)

6 4 Jurnal Natur Indonesia (): 94 Bustanussalam, et al. Sehingga berdasarkan interpretasi data spektra IR (gugus ), dan RMI proton dan karbon, maka struktur kimia yang diisolasi dari fraksi nbutanol Keben (Barringtonia asiatica L. Kurz) diperkirakan senyawa glikosida yang mempunyai asam lemak sebagai aglikonnya. KESIMPULAN asil isolasi senyawa kimia dari fraksi nbutanol biji keben (Barring tonia asiatica L. Kuz) adalah suatu senyawa turunan glikosida yang mempunyai daya toksisitas sebesar = 0,9 bpj. UCAPAN TERIMA KASI Terima kasih kepada Arista Fendy Saputro atas asistensinya dan PT. Akar Kehidupan Papua atas kerjasama dalam penelitian ini. DAFTAR PUSTAKA Duryatmo, S bat Papua bermula dari pantai Basege. Majalah Trubus 4:. Franswort, N. R Biological and Phytochemical Screenings of Plant. J. Pharm. Sci. 55: 565. arborne, J. B. 97. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Bandung: ITB Press. erlt, A.J., Mander, L.N., Pongoh, E.J., Rumampuk, R.J., & Tarigan, P. 00. Two mayor saponins from seeds of Barringtonia asiatica: putative antifeedants toward Epilachna sp. larvae. J. Nat. Prod. 65: 50 ostettmann K. & Marston, A Saponis, Chemistry and Pharmacology of Natural Products. Cambridge: Cambridge University Press. Lemmes, R..M.J. & Bunyapraphatsara, N. 00. Medicinal and poisonous plants. Plant resources of southeast asia, No.. Bogor: Prosea Foundation. Meyer, B. N., R. N. Ferrign, J. E. Putnam, L. B. Jacobson, D. E. Nicholas, & J. L. McLaughlin. 9. Brine Shrimp: A convenient general bioassay for active plant constituents. Planta Medica 45: 4. Plant profile Barringtonia asiatica L. Kurz September 006 Samah, A. 9. Study on Barringtonia asiatica Kurz. Buletin Penelitian Kesehatan 6():. Tanaman Khas di Indonesia. PNU/005/PNU asp. 0 November 006. Tan, R. See Poison Tree. sea_poison.htm. 0 November 006.