ISOLASI DAN IDENTIFIKASI FUNGI ENDOFIT DAUN SIRIH MERAH ( Piper crocatum Ruiz & Pav ) SEBAGAI ANTI BAKTERI TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli DAN Bacillus cereus ISOLATION AND IDENTIFICATION OF ENDOPHYTIC FUNGI OF RED BETEL VINE LEAF (Piper crocatumruiz &Pav) AS ANTI BACTERIA ON Staphylococcus aureus, Escherichia coli AND Bacillus cereus Oleh: Dewi Mazroatul Achiroh 51 2009 007 SKRIPSI Diajukan kepada Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian dan Bisnis guna memenuhi sebagian persyaratan untuk mencapai gelar Sarjana Pertanian Program Studi Agroekoteknologi FAKULTAS PERTANIAN DAN BISNIS UNIVERSITAS KRISTEN SATYA WACANA SALATIGA 2015 i
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI FUNGI ENDOFIT DAUN SIRIH MERAH ( Piper crocatum Ruiz & Pav ) SEBAGAI ANTI BAKTERI TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli DAN Bacillus cereus ISOLATION AND IDENTIFICATION OF ENDOPHYTIC FUNGI OF RED BETEL VINE LEAF (Piper crocatumruiz &Pav) AS ANTI BACTERIA ON Staphylococcus aureus, Escherichia coli AND Bacillus cereus Oleh : DEWI MAZROATUL ACHIROH 51 2009 007 SKRIPSI Diajukan kepada Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian dan Bisnis guna Memenuhi Sebagian dari Persyaratan untuk Mencapai Gelar Sarjana Pertanian Pembimbing I Disetujui oleh, Pembimbing II Dr. Ir. Endang Pudjihartati, MS Dr. Ir. Nugraheni Widyawati, MP Disahkan oleh, Dekan Fakultas Pertanian dan Bisnis Dr. Ir. Bistok Hasiholan S., M.Si. FAKULTAS PERTANIAN DAN BISNIS UNIVERSITAS KRISTEN SATYA WACANA SALATIGA 2015 ii
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI FUNGI ENDOFIT DAUN SIRIH MERAH ( Piper crocatum Ruiz & Pav ) SEBAGAI ANTI BAKTERI TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli DAN Bacillus cereus ISOLATION AND IDENTIFICATION OF ENDOPHYTIC FUNGI OF RED BETEL VINE LEAF (Piper crocatumruiz &Pav) AS ANTI BACTERIA ON Staphylococcus aureus, Escherichia coli AND Bacillus cereus Skripsi, 2015. 26 halaman ABSTRAK Sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) biasa digunakan sebagai anti bakteri, sehingga fungi yang hidup di dalamnya diduga memiliki kemampuan yang sama. Penelitian ini bertujuan untuk untuk mengetahui genus dari fungi endofit daun sirih merah serta mengetahui potensinya sebagai antibakteri terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Bacillus cereus. Penelitian ini diawali dengan mengisolasi fungi endofit, dilanjutkan dengan mengekstraksi filtrat kultur dan menguji kemampuan antibakterinya dengan metode Kirby- Beauer. Dari isolasi yang telah dilakukan diperoleh satu isolate dari genus Gliocladium sp. Filtrat kulturnya efektif menghambat pertumbuhan S. aureus (bakteri gram positif) dengan diameter daya hambat 14,89 mm dan pada B. cereus (bakteri gram positif) dengan diameter daya hambat 19,67 mm sehingga termasuk dalam golongan antibiotik kuat. Akan tetapi filtrat kultur Gliocladium sp. tidak efetif menghambat pertumbuhan E. coli (bakteri gram negatif) sehingga filtrat kultur Gliocladium sp. termasuk dalam kategori antibakteri berspektrum sempit. Kata kunci: Fungi endofit, Daun sirih merah, Gliocladium sp., Anti bakteri. Pembimbing I Disetujui oleh, Pembimbing II Dr. Ir. Endang Pudjihartati, M.P. Dr. Ir. Nugraheni Widyawati, M.P. iii
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI FUNGI ENDOFIT DAUN SIRIH MERAH ( Piper crocatum Ruiz & Pav ) SEBAGAI ANTI BAKTERI TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli DAN Bacillus cereus ISOLATION AND IDENTIFICATION OF ENDOPHYTIC FUNGI OF RED BETEL VINE LEAF (Piper crocatumruiz &Pav) AS ANTI BACTERIA ON Staphylococcus aureus, Escherichia coli AND Bacillus cereus Thesis, 2015. 26 pages ABSTRACT Endophytic fungi of red betel vine (Piper crocatum Ruiz & Pav) is sassumed to have the herb antibiotic ability as the host plant. The aim of this research is to find out the genus of red betel vine s endophytic fungi and its antibacterial potential towards Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Bacillus cereus. This research was begun by isolating the red betel vine s endophytic fungi in purpose to obtain the filtrate of culture extract further by it was tested the antibacterial abilities by Kirby-Beauer method. From the isolation done, there was obtained the genus Gliocladium sp. Filtrate of the culture of that fungus effectively retarded the growth of S. aureus (Gram-positive bacteria) with retardant diameter of 14,89 mm and B. cereus (Gram-positive bacteria) with retardant diameter of 19,67 mm, which can be categorized as a strong antibiotic. Although, it is not effective in retarding the growth of E. coli (Gram-negative bacteria) which means that the filtrate of culture of Gliocladium sp. is categorized as narrow spectrum of antibacterial. Keywords: Endophytic fungi, Red betel vine leaf, Gliocladium sp., Antibacterial. Supervisor I Approved by, Supervisor II Dr. Ir. Endang Pudjihartati, M.P. Dr. Ir. Nugraheni Widyawati, M.P. iv
PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI Yang bertanda tangan di bawah ini: Nama : Dewi Mazroatul Achiroh NIM : 51 2009 007 Program Studi : Agroteknologi Fakultas : Pertanian dan Bisnis, Universitas Kristen Satya Wacana ISOLASI DAN IDENTIFIKASI FUNGI ENDOFIT DAUN SIRIH MERAH ( Piper crocatum Ruiz & Pav ) SEBAGAI ANTI BAKTERI TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli DAN Bacillus cereus Yang dibimbing oleh: 1. Dr. Ir. Endang Pudjihartati. MS 2. Dr. Ir. Nugraheni Widyawati, MP Adalah benar-benar karya saya. Di dalam skripsi ini tidak terdapat keseluruhan atau sebagian tulisan dan gagasan dari orang lain yang saya ambil dengan cara menyalin atau meniru dalam bentuk rangkaian kalimat atau gambar serta simbol yang saya akui seolah-olah sebagai karya saya sendiri tanpa memberikan pengakuan pada penulis atau sumber aslinya. Salatiga, Oktober 2015 Yang memberi pernyataan Dewi Mazroatul Achiroh v
PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI SKRIPSI UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS Sebagai sivitas akademika Universitas Kristen Satya Wacana (UKSW), saya yang bertanda tangan di bawah ini: Nama : Dewi Mazroatul Achiroh NIM : 51 2009 007 Program Studi : Agroteknologi Fakultas : Pertanian dan Bisnis, Universitas Kristen Satya Wacana Jenis Karya : Skripsi/ Tesis/ Disertasi (hapus yang tidak perlu) Demi mengembangkan ilmu pengetahuan, menyetujui untuk memberikan kepada UKSW hak bebas royalty non-eksklusif (non-ekslusive royalty free right) atas skripsi saya yang berjudul: ISOLASI DAN IDENTIFIKASI FUNGI ENDOFIT DAUN SIRIH MERAH ( Piper crocatum Ruiz & Pav ) SEBAGAI ANTI BAKTERI TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli DAN Bacillus cereus Beserta perangkat yang ada (jika perlu). Dengan bebas royalty non-eksklusif ini, UKSW berhak meyimpan, mengalihmedia/mengalihformatkan, mengelola dalam bentuk pangkalan data, merawat, dan mempublikasikan skripsi saya, selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis/pencipta. Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya. Dibuat di : Salatiga Pada tanggal : Oktober 2015 Yang menyatakan, Dewi Mazroatul Achiroh Pembimbing mengetahui, Pembimbing Dr. Ir. Endang Pudjihartati MS Dr. Ir. Nugraheni Widyawati, MP vi
KATA PENGANTAR Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa, yang Maha Pengasih serta Maha Penyayang atas selesainya penyusunan hasil penelitian Skripsi dengan judul Isolasi dan Identifikasi Fungi Endofit Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) Sebagai Anti Bakteri Terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Bacillus sereus dengan baik. Penulis menyadari bahwa dalam penyusunan Skripsi ini dapat diselesaikan dengan baik atas bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak. Oleh karena itu penulis sampaikan terima kasih kepada : 1. Prof. Dr. Ir. Sony Heru Priyanto, M.M. selaku Dekan Fakultas Pertanian dan Bisnis UKSW Salatiga 2. Dr. Ir. Suprihati, MS selaku Kepala Program Studi Agroekoteknologi 3. Dr. Ir. EnDang Pudjihartati, M.S. dan Dr. Ir. Nugraheni Widyawati, M.P. selaku pembimbing skripsi 4. Bapak, Ibu dan adik-adik tercinta 5. Para sahabat 6. Teman-teman di Fakultas Pertanian dan Bisnis UKSW Salatiga 7. Pihak-pihak lain yang telah membantu proses pelaksanaan penelitian dan penyusunan skripsi ini, yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu. Semoga Tuhan selalu memberikan perlindungan, kelancara, kebarokahan dan kesuksesan kepada kita semua. Salatiga, Oktober 2015 Penulis vii
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i HALAMAN PENGESAHAN... ii ABSTRAK... iii ABSTRACT... iv LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI... v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI SKRIPSI... vi KATA PENGANTAR... vii DAFTAR ISI... viii DAFTAR GAMBAR... x DAFTAR TABEL... xi DAFTAR LAMPIRAN... xii BAB I. PANDAHULUAN... 1 1.1. Latar Belakang... 1 1.2. Tujuan Penelitian... 2 1.3. Signifikansi Penelitian... 2 1.4. Model Hipotetik... 2 1.5. Batasan Masalah... 3 BAB II. TELAAH TEORI... 4 2.1. Tinjauan Pustaka... 4 2.1.1. Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav)... 4 2.1.2.1. Fungi Endofit dan Potensinya sebagai Antibakteri... 5 2.1.3. Bakteri Penyebab Penyakit/ Kuman... 6 2.1.3.1. Staphylococcus aureus... 6 2.1.3.2. Escherichia coli... 7 2.1.3.3. Bacllus cereus... 8 2.1.4. Hipotesis Penelitian... 8 2.1.5. Identifikasi Fungi Endofit, Definis dan Pengukuran Variabel. 9 BAB III. METODE PENELITIAN... 11 3.1. Waktu dan Tempat Peneltian... 11 3.2. Rancangan Penelitian... 11 3.3. Alat dan Bahan... 11 3.4. Prosedur Penelitan... 12 3.4.1. Sterilisasi Alat dan Bahan... 12 3.4.2. Pembuatan Media... 12 3.4.3. Perlakuan Optimasi terlisasi... 13 3.4.4. Isolasi Fungi Endofit... 13 3.4.5. Identifikasi Isolat Fungi Endofit... 13 3.4.7. Perlakuan Optimasi Filtrat Kultur Fungi Endofit... 14 3.4.8. Uji Antibakteri... 14 viii
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN... 15 4.1. Optimasi Sterilisasi dan Isolasi Fungi Endofit... 15 4.2. Identifikasi Fungi Endofit... 17 4.3. Optimasi Fltrat Kultur... 19 4.4. Uji Antibakter... 20 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN... 23 5.1. Kesimpulan... 23 5.2. Saran... 23 DAFTAR PUSTAKA... 24 ix
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 4.1.1 Fungi endofit... 17 Gambar 4.2.1. Fungi endofit secara makroskopis dan mikroskopis... 18 Gambar 4.3.1 Perubahan warna filtrat kultur.... 20 Gambar 4.4.1. Zona pengamatan berupa terang... 21 x
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 4.1.1 Penelitian pendahuluan optimasi sterilisasi untuk isolasi fungi endofit daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav). 16 Tabel 4.3.1. Optimasi filtrat kultur... 19 Tabel 4.4.1. Daya hambat... 21 xi
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1 Tahap Eksplorasi... 27 Lampiran 2. Ekstraksi Filtrat Kultur... 28 Lampiran 3. Uji Anti Bakteri.... 29 Lampiran 4. Tabel Hasil Pengamatan... 30 Lampiran 5. The Anova Procedure of SAS Program... ` 31 xii
xiii