3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Obat Spesialite Obat didefinisikan sebagai senyawa yang digunakan untuk mencegah, mengobati, mendiagnosis penyakit atau gangguan, atau menimbulkan suatu kondisi tertentu (Anonim, 2000). Selain itu obat dalam pengertian umum adalah suatu substansi yang melalui efek kimianya membawa perubahan dalam fungsi biologik (Katzung, 2002). Dalam pemasarannya, obat juga dapat dikelompokkan menjadi 3 bagian berdasarkan nama mereknya, antara lain: obat paten, obat generik bermerk atau bernama dagang, obat generik. Obat paten atau spesialite adalah obat milik suatu perusahaan dengan nama khas yang dilindungi hukum, yaitu merk terdaftar atau proprietary name (Tjay dan Rahardja, 2007). Obat paten merupakan obat jadi dengan nama dagang yang terdaftar atas nama si pembuat atau yang dikuasakannya dan dijual dalam bungkus asli dari pabrik yang memproduksinya. Obat generik adalah obat yang tercantum dalam daftar obat essensial nasional (DOEN) dan mutunya terjamin karena diproduksi sesuai dengan persyaratan cara pembuatan obat yang baik (CPOB) dan diuji ulang oleh pusat pemeriksa obat dan makanan dari Departemen Kesehatan (Anief, 2002). B. Natrium Diklofenak Natrium diklofenak memiliki struktur C 14 H 10 C 12 NNaO 2, berat molekul 318,13. Sinonim natrium diklofenak yaitu asam benzane asetat natrium [o-[(2,6-diklorofenil)amino], monosodium, [o-(dikloroanilino)fenil] asetat. Pemeriannya berupa serbuk hablur hingga hampir putih, higroskopik, melebur pada suhu 284. Kelarutannya mudah larut dalam metanol, larut dalam etanol, agak sukar larut dalam air, praktis tidak larut dalam kloroform dan dalam eter ( Depkes RI, 2009). Diklofenak merupakan derivat fenil asetat
4 dan termasuk NSAID yang terkuat daya antiradangnya dengan efek samping yang lebih kecil dibandingkan dengan obat lainnya. Obat ini sering digunakan untuk segala macam nyeri, juga pada migrain dan encok, lagi pula secara parenteral sangat efektif untuk menanggulangi rasa nyeri hebat (Tjay dan Rahardja, 2002). Gambar 1. Strukur natrium diklofenak (www.newdruginfo.com) Absorpsi obat natrium diklofenak melalui saluran cerna berlangsung cepat dan lengkap. Obat ini terikat 99% pada protein plasma dan mengalami efek metabolisme lintas pertama (first pass effect = FPE), walaupun waktu paruhnya singkat yakni sekitar 1-3 jam, natrium diklofenak diakumulasi di cairan sinovial yang menjelaskan efek terapi di sendi jauh lebih panjang dari waktu paruh obat tersebut. Indikasi dari obat natrium diklofenak yaitu sebagai pengobatan jangka pendek untuk kondisi-kondisi akut seperti nyeri inflamasi setelah trauma (terkilir), nyeri inflamasi setelah operasi (operasi gigi dan tulang). Kontra indikasi natrium diklofenak yaitu hipersensitif terhadap zat aktif dan tukak lambung, dan memiliki efek samping pada saluran pencernaan seperti mual, muntah, diare, kejang perut, dyspepsia, perut kembung, anoreksia. Natrium diklofenak memiliki dosis takaran permulaan untuk dewasa 100-150 mg sehari. Pada kasus-kasus yang sedang, juga untuk anakanak di atas usia 14 tahun 75-100 mg sehari pada umumnya sudah mencukupi. Dosis seharian harus diberikan dengan dosis terbagi 2-3 kali (Anonim, 2000). Tablet harus diberikan dengan air, sebaiknya sebelum makan, tidak dianjurkan untuk pemakaian anak-anak.
5 C. Analisis Cairan Biologis dalam Darah Intensitas efek farmakologik atau efek toksik suatu obat seringkali dikaitkan dengan konsentrasi obat dengan reseptor, yang biasanya terdapat pada sel-sel jaringan. Oleh karena sebagian besar sel-sel jaringan diperfusi oleh cairan jaringan atau plasma, maka pemeriksaan kadar obat dalam plasma merupakan suatu metode yang sesuai untuk pemantauan pengobatan. Secara klinik, perbedaan individual dalam farmakokinetika obat sering terjadi. Pemantauan konsentrasi obat dalam darah atau plasma meyakinkan bahwa dosis yang telah diperhitungkan benar-benar telah melepaskan obat dalam plasma dalam kadar yang diperlukan untuk efek terapetik. Untuk beberapa obat, kepekaan reseptor pada individu berbeda, sehingga pemantauan kadar obat dalam plasma diperlukan untuk membedakan penderita yang menerima terlalu banyak obat dan penderita obat yang sangat peka terhadap obat. Lebih lanjut, fungsi-fungsi fisiologik penderita dalam dapat dipengaruhi oleh penyakit, makanan, lingkungan, obat yang diberikan bersamaan dalam terapi, dan faktor-faktor lain. Model farmakokinetika dapat memberikan penafsiran yang lebih teliti tentang hubungan kadar obat dalam plasma dan respon farmakologik. Tanpa data farmakokinetika, kadar obat dalam plasma hampir tidak berguna untuk penyesuaian dosis. Untuk menggunakan data ini secara tepat, penting untuk diketahui kapan cuplikan darah diambil, berapa dosis yang diberikan, dan bagaimana rute pemberiannya. Dengan demikian pemantauan konsentrasi obat dalam plasma memungkinkan untuk penyesuaian dosis obat secara individual dan juga untuk mengoptimasi terapi (Shargel dan Andrew, 1988). D. Validasi Metode Analisis (Harmita, 2004) 1. Uji presisi (keseksamaan) Keseksamaan adalah ukuran yang menunjukan derajat kesesuaian antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual dari rata-rata jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampelsampel yang diambil dari campuran yang homogen. Keseksamaan diukur
6 sebagai simpangan baku atau simpangan baku relatif (relative standard deviation, RSD) atau (koefisien variasi, KV). Kriteria presisi dikatakan baik jika hasil simpangan baku relatife sebesar 2% atau kurang. 2. Uji linearitas Linieritas merupakan kemampuan metode analisis yang memberikan respon yang secara langsung atau dengan bantuan transportasi matematik yang baik, proporsional terhadap konsentrasi analit dalam sampel. Sebagai parameter adanya hubungan linier digunakan koefisien korelasi r pada analisis regresi linier Y= a + bx. Hubungan linier yang dicapai jika nilai b = 0 dan r = -1 bergantung pada arah garis. Sedangkan nilai a menunjukan kepekaan analisis terutama instrumen yang digunakan. 3. Uji kecermatan ( accuracy) Kecermatan merupakan ukuran yang menunjukan derajat kedekatan hasil analisis dengan kadar analit yang sebenarnya. Kecermatan dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan kecermatan ditentukan dengan dua cara yaitu metode simulasi (spiked placebo recovery) atau metode penambahan baku (standard addition method). Kriteria penerimaan akurasi untuk suatu metode adalah antara 80 sampai 120%. Dalam metode simulasi sejumlah analit bahan murni ditambahkan dalam campuran bahan pembawa sediaan farmasi kemudian campuran tersebut dianalisis dan dibandingkan dengan kadar analit yang ditambahkan. Dalam metode penambahan baku, sampel dianalisis lalu sejumlah tertentu analit yang diperiksa ditambahkan dalam sampel dicampur dan dianalisis lagi. Selisih kedua hasil dibandingkan dengan kadar yang sebenarnya. Dalam kedua metode tersebut, persen perolehan kembali dinyatakan dalam rasio antara yang hasil yang diperoleh dengan hasil yang sebenarnya. Persen perolehan kembali dapat ditentukan dengan cara membuat sampel plasebo kemudian ditambahkan analit dengan
7 konsentrasi tertentu kemudian dianalisis dengan metode yang akan divalidasi. Bila tidak dimungkinkan dapat digunakan metode adisi, dengan menambahkan sejumlah analit dengan konsentrasi tertentu pada sampel yang diperiksa, lalu dianalisis dengan metode tersebut. Persen perolehan kembali ditentukan dengan menentukan berapa persen analit yang ditambahkan tadi dapat ditemukan. Kriteria kecermatan sangat bergantung pada konsentrasi analit dalam matriks sampel dan pada keseksamaan metode (RSD). 4. Batas deteksi dan batas kuantitasi Batas deteksi merupakan jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blangko. Batas kuantitasi merupakan parameter pada analisis renik dan diartikan sebagai kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama. Batas deteksi dan kuantitasi dapat dihitung secara statistik melalui garis regresi linier dari kurva kalibrasi. Nilai pengukuran akan sama dengan nilai b pada persamaan garis linier Y= a + bx, sedangkan simpangan baku blangko sama dengan simpangan baku residual (sy/x). Batas deteksi (Q) (LOD) Karena k = 3 atau 10 simpangan baku (sb) = (sy/x), maka Q = 3sy / x sb Batas kuantitasi (LOQ) Q = 10sy / sb x Dimana Q = LOD atau LOQ K = 3 untuk batas deteksi dan 10 untuk batas kuantitasi Sb = simpangan baku respon analitik dari blangko.
8 E. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau HPLC (High Performance Liquid Chromatography) (Gandjar dan Rohman, 2007) Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) atau biasa disebut dengan HPLC merupakan sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi. Hal ini karena didukung oleh kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pompa tekanan tinggi, dan detektor yang sangat sensitif dan beragam. KCKT mampu menganalisa berbagai cuplikan secara kualitatif maupun kuantitatif, baik dalam komponen tunggal maupun campuran (Ditjen POM, 1995). KCKT berkembang pada akhir tahun 1960-an dan pada awal tahun 1970-an. Kegunaan umum KCKT adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa biologi, analisis ketidakmurnian, analisis senyawa-senyawa tidak menguap (non-volatil), penentuan molekulmolekul netral, ionik, maupun zwitter ion, isolasi dan pemurnian senyawasenyawa dalam jumlah sekelumit, dalam jumlah banyak, dan dalam skala proses industri. KCKT dapat digunakan baik untuk analisis kualitatif maupun kuantitatif. Gambar 2. Skema alat instrumen KCKT ( www.lansida.htm)
9 Instrumen KCKT terdiri dari : 1. Wadah Fase Gerak pada KCKT, wadah fase gerak harus bersih dan inert. Wadah pelarut kosong ataupun laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase gerak. Wadah ini biasanya dapat menampung fase gerak antara 1 sampai 2 liter. Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing (penghilangan gas) yang ada pada fase gerak, sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama dipompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisis. Pada saat membuat larutan fase gerak, maka sangat dianjurkan untuk menggunakan larutan, buffer, dan reagen dengan kemurnian yang sangat tinggi. Adanya pengotor dapat mengganggu sistem kromatografi. Fase Gerak pada KCKT atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat bercampur secara keseluruhan, berperan dalam daya elusi dan resolusi. Daya elusi dan resolusi ini ditentukan oleh polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase diam, dan sifat komponen-komponen sampel. Untuk KCKT fase normal (fase diam lebih polar dari fase gerak), kemampuan elusi meningkat dengan meningkatnya polaritas pelarut. Sementara untuk fase terbalik (fase diam kurang polar dari fase gerak), kemampuan elusi menurun dengan meningkatnya polaritas pelarut. Fase gerak yang paling sering digunakan untuk pemisahan dengan fase terbalik adalah campuran larutan bufer dengan metanol atau campuran air dengan asetonitril. Untuk pemisahan dengan fase normal, fase gerak yang paling sering digunakan adalah campuran pelarut-pelarut hidrokarbon dengan pelarut yang terklorisasi atau menggunakan pelarutpelarut jenis alkohol. Pemisahan dengan fase normal ini kurang umum dibanding dengan fase terbalik. 2. Pompa Fase gerak dalam KCKT adalah suatu cairan yang bergerak melalui kolom. Ada dua tipe pompa yang digunakan, yaitu kinerja konstan (constant pressure) dan pemindahan konstan (constant displacement). Pemindahan konstan dapat dibagi menjadi dua, yaitu: pompa
10 reciprocating dan pompa syringe. Pompa reciprocating menghasilkan suatu aliran yang berdenyut teratur (pulsating),oleh karena itu membutuhkan peredam pulsa atau peredam elektronik untuk, menghasilkan garis dasar (base line) detektor yang stabil, bila detektor sensitif terhadapan aliran. Keuntungan utamanya ialah ukuran reservoir tidak terbatas. Pompa syringe memberikan aliran yang tidak berdenyut, tetapi reservoirnya terbatas (Putra Effendy, 2004). 3. Penyuntikan sampel Pada saat pengisian sampel, sampel digelontorkan melalui keluk sampel dan kelebihannya dirilis ke pembuang. Pada saat penyuntikan, katup diputar sehingga fase gerak mengalir melewati keluk sampel dan menggelontorkan sampel ke kolom. Presisi penyuntikan ditentukan dengan keluk sampel ini dapat mencapai nilai RSD 0,1%. Penyuntik ini mudah digunakan untuk otomatisasi dan sering digunakan untuk autosampler pada KCKT. 4. Kolom Kolom adalah jantung kromatografi. Berhasil atau gagalnya suatu analisis tergantung pada pemilihan kolom dan kondisi percobaan yang sesuai. Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok : a. Kolom analitik : Diameter dalam 2-6 mm. Panjang kolom tergantung pada jenis material pengisi kolom. Untuk kemasan pellicular, panjang yang digunakan adalah 50-100 cm. Untuk kemasan poros mikropartikulat, 10-30 cm. Dewasa ini ada yang 5 cm. b. Kolom preparatif: umumnya memiliki diameter 6 mm atau lebih besar dan panjang kolom 25-100 cm. Kolom umumnya dibuat dari stainle steel dan biasanya dioperasikan pada temperatur kamar, tetapi bisa juga digunakan temperatur lebih tinggi, terutama untuk kromatografi penukar ion dan kromatografi eksklusi (Putra Effendy, 2004).
11 5. Detektor Suatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen sampel di dalam kolom (analisis kualitatif) dan menghitung kadamya (analisis kuantitatif). Detektor yang baik memiliki sensitifitas yang tinggi, gangguan (noise) yang rendah, kisar respons linier yang luas, dan memberi respons untuk semua tipe senyawa. Suatu kepekaan yang rendah terhadap aliran dan fluktuasi temperatur sangat diinginkan, tetapi tidak selalu dapat diperoleh. 6. Komputer, integrator, atau rekorder Alat ini akan mengukur sinyal elektronik yang dihasilkan oleh detektor lalu memplotkannya sebagai kromatogram. Jenis-jenis KCKT : a. Kromatografi adsorpsi (biasanya menggunakan fase normal dengan fase diam silica gel dan alumnia). b. Kromatografi partisi fase diam yang paling banyak digunakan adalah ODS atau C18 (Oktadesilsilan) dan pemisahannya adalah fase terbalik. Sebagai fase gerak adalah campuran metanol atau asetonitril dengan air atau dengan bufer. c. Kromatografi penukar ion. Fase diam yang digunakan yaitu fase diam yang dapat menukar kation atau anion dengan suatu fase gerak. d. Kromatografi ekslusi ukuran. Fase diam yang digunakan dapat berupa silika atau polimer yang bersifat porus sehingga solut dapat melewati porus atau berdifusi melalui fase diam.