32 BAB 6 RINGKASAN PENELITIAN Validasi metode analisis merupakan suatu proses untuk menentukan keabsahan dan pertanggungjawaban suatu hasil percobaan di laboratorium, tetapi dalam proses dan perhitungannya membutuhkan waktu yang tidak sedikit serta membutuhkan tingkat akurasi perhitungan yang baik, maka seiring dengan perkembangan teknologi informasi dibuat suatu perangkat lunak komputer yang bernama Sistem Validasi Metode Analisis Kromatografi (SVMAK) yang dapat menghitung validasi metode lebih cepat dan akurat. Dalam proses validasi ini, perangkat lunak SVMAK dirancang dengan metode analisis komparatif dengan menggunakan kurva kalibrasi yang berdasarkan pada tiga jenis penggunaan metode baku, yaitu baku luar, baku dalam, dan baku tinambah. tahapan validasi dihitung berdasarkan ketiga jenis metode baku tersebut. Perangkat lunak dibangun dan diuji sistem dan keakuratan perhitungannya dengan sistem black box testing sesuai dengan spesifikasi perangkat lunak validasi yang diharapkan dengan menggunakan perangkat lunak pemograman Microsoft Visual Basic 6.0 dan Microsoft Access sebagai media penyimpanan data. Dari hasil perancangan ini diperoleh perangkat lunak SVMAK yang dapat menghitung tahapan validasi dengan lebih cepat dan menunjukkan kesesuaian hasil perhitungan dengan data uji hasil penelitian yang telah divalidasi serta hasil perhitungan manual. Adapun saran untuk pembuatan perangkat lunak SVMAK ini adalah diperlukannya pengembangan perangkat lunak SVMAK ini sehingga diperoleh perangkat lunak yang memiliki cakupan yang lebih luas selain dari kromatografi, perhitungan yang lebih akurat dan meminimalisir kesalahan atau cacat program.
33 PUSTAKA Snyder. L.R, Joseph J.K and Joseph L.G, 1997, Practical HPLC Method Development, 2nd ed., John Willey and sons, Inc., New York, 654 664, 687 706 Schelfler, William C., 1978, Statistika untuk Biologi, Farmasi, kedokteran, dan ilmu yang bertautan, Penerbit ITB, Bandung, 168 191 Swartz, M.E, and Ira S, Krull, 1997, Analytical Method Development and Validation, Marcel Dekker, Inc., New York, 53 71 Novian, Agung, 2004, Panduan Microsoft Visual Basic, Penerbit Andi, Bandung, 1-5 Ibrahim, Slamet, 2007, Makalah Pengembangan dan Validasi Metode Analisis, Sekolah Farmasi ITB, Bandung, 1 15. Johnson, E.L., and Stevenson, R., 1991, Dasar Kromatografi Cair, Terjemahan, K. Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung, 232 236, 244 250. Aptech Worldwide, 2002, Database Design with MS Access 2000, Aptech Worldwide, New Jersey, 3-8. The United States Pharmacopeial Convention, 1999, The United States Pharmacopeia, 24 th Ed., United States Pharmacopeial Convention Inc., Rockville, 2149 2152.
LAMPIRAN A PERSYARATAN VALIDASI DAN KRITERIA PENERIMAAN KARAKTERISTIK VALIDASI Tabel 1.1 Tabel Persyaratan Validasi untuk Tiap Jenis Metode Analisis Metode Pengujian / Analisis Parameter Kategori II Kategori II Kategori Kategori Validasi Kategori I (Kuantitatif) (Uji Batas) III IV Linieritas Ya Ya Tidak Ya Tidak Akurasi Ya Ya * Ya Tidak Presisi Ya Ya Tidak Ya Tidak Rentang Ya Ya * Ya Tidak Spesifisitas Ya Ya Ya Ya Ya Batas Deteksi Tidak Ya Ya * Tidak Batas Kuantisasi Tidak Ya Ya * Tidak Robustness Ya Ya Ya * Tidak * Dapat dipersyaratkan tergantung sifat metode Keterangan : Kategori I Kategori II Kategori III Kategori IV Metode analisis untuk penetapan kadar komponen utama dalam bahan baku obaat atau bajhan aktif (termasuk pengawet) dalam produk farmasi Metode analisis untuk penetapan cemaran dalam bahan baku obat atau hasil degradasi dalam produk farmasi, metode ini terdiri dari penetapan kuantitatif dan uji batas Metode analisis untuk penetapan karakteristik sediaan (disolusi, pelepasan obat, dll) Metode Analisis untuk identifikasi 34
LAMPIRAN A (Lanjutan) Tabel 1.2 Tabel Kriteria Penerimaan Linieritas dan Rentang Uji Level Rentang Kriteria Penerimaan 20 sampai 120 % R 0,999 Penetapan bahan baku obat 6 %y intercept 2,0 % dan sediaan Farmasi V xo 2,0 % 10 80 % R 0,99 Disolusi 5-8 %y intercept 5,0 % V xo 5,0 % Cemaran 5 LOQ sampai 2 % R 0,98 V xo 5,0 % Cleaning Validation 5 LOQ sampai 20 % R 0,98 V xo 5,0 % Keterangan : R = Koefisien korelasi V xo = Koefisien Variansi garis regresi %y intercept = y-intercept / respon detektor x 100 % 35
LAMPIRAN A (Lanjutan) Tabel 1.3 Tabel Kriteria Penerimaan Akurasi (Kecermatan) Uji Level Rentang Kriteria Penerimaan Konsentrasi Penetapan kadar bahan baku obat dan sediaan Farmasi 3 dengan 3 kali pengujian 70, 100, 130 % ± 2 % ( 98,0 % - 102,0 %) rata-rata untuk setiap sampel Disolusi 3 dengan 3 kali pengujian 20 30 % 50 80 % 100 130 % ± 5 % ( 95,0 % - 105,0 %) rata-rata untuk setiap sampel Cemaran 1 dengan 3 kali pengujian LOQ - 1 % (kadar analit) ± 20 % ( 80,0 % - 120,0 %) rata-rata untuk setiap sampel Cleaning Validation 3 dengan 3 kali pengujian LOQ 20 kali LOQ ± 50 % ( 50,0 % - 150,0 %) rata-rata untuk setiap sampel ICH merekomendasikan, menganalisis sampel menggunakan 9 kali penentuan, minimal 3 kali level konsentrasi ( 3 x 3 pengujian) 36
LAMPIRAN A (Lanjutan) Tabel 1.4 Tabel Kriteria Penerimaan Presisi (Keseksamaan) Pengujian Repeatabilitas dan Presisi Antara Level dan Rentang Kriteria Penetapan kadar / 3 level 3 kali 70, 100, 130 % RSD 2,0 % keseragaman kandungan atau 6 penetapan pada 100 % Disolusi 12 sampel kadar rendah RSD 20,0 % Cemaran (kadar rendah) 6 Replikat pada LOQ RSD 20,0 % Cleaning Validation 6 Replikat pada 10 LOQ RSD 20,0 % Keterangan : RSD = Relatif Standard Deviation atau Simpangan Baku Relatif LOQ = Limit of Quantitation 37
LAMPIRAN B PERANCANGAN TAMPILAN DAN STRUKTUR PERANGKAT LUNAK SVMAK Gambar 3.1 Tampilan Antarmuka Perangkat Lunak SVMAK Secara Garis Besar LAMPIRAN B 38
LAMPIRAN B (Lanjutan) Gambar 3.2 Struktur Modul Perangkat Lunak SVMAK 39
LAMPIRAN B (Lanjutan) Gambar 3.26 Diagram Alur Validasi Linieritas Metode Kalibrasi Baku Luar 40
LAMPIRAN B (Lanjutan) Gambar 3.27 Diagram Alur Validasi Akurasi Presisi Metode Kalibrasi Baku Luar 41
LAMPIRAN B (Lanjutan) Gambar 3.28 Diagram Alur Validasi Linieritas Metode Kalibrasi Baku Dalam 42
LAMPIRAN B (Lanjutan) Gambar 3.29 Diagram Alur Validasi Akurasi Presisi Metode Kalibrasi Baku Dalam Start N = 0 Sigma C = 0 Sigma R = 0 Masukkan C dan R Masukkan C B dan R B N = N + 1 Ya Sigma R/R B = Sigma R/R B + R/R B Sigma C = Sigma C + C Ada tambahan data? N = 1 Tidak N >1 Perhitungan nilai Rasio Respon (k) Perhitungan Statistika R/R B Hasil Pengukuran Data Perhitungan Statistika Persamaan Garis regresi Linier k = (R/R B ) / (C/C B) Perhitungan C berdasarkan nilai k Konsen (Cu) Hasil pengukuran % Recovery Cu / Cs x 100% % Recovery Simpangan Baku dari % Recovery Koefisien Variansi (Kv) = S / X^ x100% Apakah K <= 2 1 - log C Tidak Ya Valid Tidak Valid End 43
LAMPIRAN B (Lanjutan) Gambar 3.30 Diagram Alur Validasi Spesifisitas Start Waktu Retensi (t) dan Lebas Alas Puncak (W) Resolusi =2(t R1 - t R2 ) / W 1 - W 2 Angka Lempeng (N) Faktor Kapasitas k` = (t R - t 0 ) / t 0 Faktor Selektivitas α = k`1 / k`2 Apakah N > 2000 Ya Apakah Rs > 1.5? Ya Apakah α > 1? Ya Tidak Tidak Baik Tidak Buruk End 44
LAMPIRAN C PENGUJIAN DAN UJI STABILITAS PERANGKAT LUNAK SVMAK Tabel 3.1 Tabel Pengujian Perangkat Lunak SVMAK pada Modul Introduksi No Langkah Pengujian Hasil yang Diharapkan Hasil Pengujian Status 1 Memasukkan hanya nama Proses dihentikan dan ditampilkan Proses dihentikan dan ditampilkan pesan OK proyek tanpa nama percobaan atau sebaliknya pesan kesalahan untuk memasukkan nama proyek atau percobaan kesalahan untuk memasukkan nama proyek atau percobaan 2 Memasukan nama proyek Pilihan jenis percobaan yang Pilihan jenis percobaan yang tersedia OK dan nama percobaan yang sudah tersimpan tersedia menjadi tidak bisa dirubah menjadi tidak bisa dirubah 3 Memasukkan nama proyek dan nama percobaan yang sudah tersimpan Proses dilanjutkan ke form input data sesuai dengan jenis percobaan yang dipilih Proses dilanjutkan ke form input data sesuai dengan jenis percobaan yang dipilih OK 45
LAMPIRAN C (Lanjutan) Tabel 3.2 Tabel Pengujian Perangkat Lunak SVMAK pada Modul Input Data No Langkah Pengujian Hasil yang Diharapkan Hasil Pengujian Status 1 Memasukan nilai nol pada semua parameter Data tidak dapat dimasukkan kedalam tabel, proses dihentikan dan ditampilkan pesan kesalahan 2 Memasukan nilai yang Data tidak dapat dimasukkan berupa huruf kedalam tabel, proses dihentikan dan ditampilkan pesan kesalahan 3 Memasukan nilai yang Data nilai dimasukkan kedalam tabel berupa angka yang sesuai 4. Memasukan data untuk Proses tidak dapat dilanjutkan dan kurva kalibrasi dan akurasi ditampilkan pesan kesalahan kurang dari 6 pengukuran Data tidak dapat dimasukkan kedalam OK tabel, proses dihentikan dan ditampilkan pesan kesalahan Data tidak dapat dimasukkan kedalam OK tabel, proses dihentikan dan ditampilkan pesan kesalahan Data nilai dimasukkan kedalam tabel yang OK sesuai Proses tidak dapat dilanjutkan dan OK ditampilkan pesan kesalahan 5 Memasukan data Proses tidak dapat dilanjutkan dan Proses tidak dapat dilanjutkan dan OK keberulangan kurang dari 3 pengukuran ditampilkan pesan kesalahan ditampilkan pesan kesalahan 6. Memasukkan data interday kurang dari 3 hari dan 3 data Proses tidak dapat dilanjutkan dan ditampilkan pesan kesalahan Proses tidak dapat dilanjutkan dan ditampilkan pesan kesalahan OK 46
No Langkah Pengujian Hasil yang Diharapkan Hasil Pengujian Status 7. Menekan tombol kembali Data yang telah dimasukkan dalam Data yang telah dimasukkan dalam form OK dan batal form tidak tersimpan dalam database tidak tersimpan dalam database 8. Menekan tombol Kembali dan Simpan Data yang telah dimasukkan dalam form tersimpan dalam database Data yang telah dimasukkan dalam form tersimpan dalam database OK 47
LAMPIRAN C (Lanjutan) Tabel 3.3 Tabel Pengujian Perangkat Lunak SVMAK pada Modul Output Data No Langkah Pengujian Hasil yang Diharapkan Hasil Pengujian Status 1 Pemanggilan data hasil input Data yg tersimpan dapat ditampilkan Data yg tersimpan ditampilkan kembali OK data kedalam tabel di output data kembali pada tabel output data pada tabel output data 2 Validasi Perhitungan Perhitungan oleh SVMAK sesuai Perhitungan oleh SVMAK sesuai dengan OK dengan perhitungan secara manual perhitungan secara manual 3 Menekan Tombol Grafik Regresi Membuka Microsoft Excel dan menampilkan Grafik Regresi linier data Microsoft Excel Terbuka otomatis dan ditampilkan grafik regresi linier dari data OK 48
LAMPIRAN C (Lanjutan) Tabel 3.4 Tabel Pengujian Perangkat Lunak SVMAK pada Modul Validasi dan Printout No Langkah Pengujian Hasil yang Diharapkan Hasil Pengujian Status 1 Pemanggilan data input dan Data yg tersimpan dapat ditampilkan Data yg tersimpan ditampilkan kembali OK output data kedalam tabel pada form validasi kembali kedalam tabel pada form validasi kedalam tabel pada form validasi 2 Validasi perhitungan Perhitungan oleh SVMAK sesuai Perhitungan oleh SVMAK sesuai OK dengan perhitungan secara manual dengan perhitungan secara manual 3 Validasi Kesimpulan Kesimpulan sesuai dengan hasil Kesimpulan sesuai dengan hasil OK perhitungan perhitungan 4. Menekan tombol Cetak Proses dilanjutkan dengan membuka Proses dilanjutkan dengan membuka OK form Printout sesuai dengan jenis form validasi form Printout sesuai dengan jenis form validasi 5. Menekan tombol interday pada form akurasi Proses dilanjutkan dengan membuka form output interday sesuai dengan jenis percobaannya Proses dilanjutkan dengan membuka form output interday sesuai dengan jenis percobaannya OK 49
LAMPIRAN C (Lanjutan) Tabel 3.5 Tabel Uji Stabilitas Perangkat Lunak SVMAK No Sistem Operasi Hasil Pengujian Status 1 Windows 98 Perangkat lunak SVMAK berjalan OK dengan baik 2 Windows XP Profesional Edition Perangkat lunak SVMAK berjalan OK Servis Pack 1 dengan baik 3 Windows XP Profesional Edition Service Pack 2 Perangkat lunak SVMAK berjalan dengan baik OK 50
LAMPIRAN D VALIDASI PERHITUNGAN Tabel 3.6 Tabel Validasi Perhitungan Perangkat Lunak SVMAK Menggunakan Data Kurva Kalibrasi Lisinopril dengan Metode Baku Luar Hasil Perhitungan No. Parameter Perangkat Lunak SVMAK Hasil Penelitian Perhitungan Manual Microsoft Excel XP 1. Slope (b) 29785.29 29688,10 29785 29785 2. Intercept (a) 110972.1 113306,17 110973 110973 3. Koef. Korelasi 0,9997 0,9997 0.9997 0,9997 4. SB thd Regresi 120104.23-120103.9 - (Sy/x) 5. Koef. Variasi 2.52-2.52 - Regresi (Vx0) 6. Batas Deteksi 12.097 12,80 12.10 - (LOD) Batas 40.323 42,67 40.32-7. Kuantitasi (LOQ) 51
LAMPIRAN D (Lanjutan) Tabel 3.7 Tabel Validasi Perhitungan Perangkat Lunak SVMAK Menggunakan Data Kurva Kalibrasi Lisinopril - Enalapril Maleat dengan Metode Baku Dalam Hasil Perhitungan No. Parameter Perangkat Lunak SVMAK Hasil Penelitian Perhitungan Manual Microsoft Excel XP 1. Slope (b) 0.0288 0,0287 0,0288 0.0288 2. Intercept (a) 0.1687 0,1672 0,1687 0.1649 3. Koef. Korelasi 0.9993 0,9994 0,9993 0,9993 4. SB thd Regresi 0,2268-0,2268 - (Sy/x) 5. Koef. Variasi 4,9215-4,92 - Regresi (Vxo) 6. Batas Deteksi 23,625 16,92 23,625 - (LOD) 7. Batas Kuantitasi 78,75 56,40 78,75 - (LOQ) 52
LAMPIRAN E TAMPILAN ANTAR MUKA PERANGKAT LUNAK SVMAK Gambar 3.3 Tampilan Antarmuka Form Introduksi 53
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.4 Tampilan Antarmuka Form Input Data Kalibrasi Metode Baku Luar 54
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.5 Tampilan Antarmuka Form Input Data Kalibrasi Metode Baku Dalam 55
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.6 Tampilan Antarmuka Form Input Data Kalibrasi Metode Baku Tinambah 56
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.7 Tampilan Antarmuka Form Input Data Interday Kalibrasi Metode Baku Luar 57
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.8 Tampilan Antarmuka Form Input Data Akurasi Presisi Interday Baku Dalam 58
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.9 Tampilan Antarmuka Form Input Data Akurasi Presisi Interday Metode Baku Tinambah 59
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.10 Tampilan Antarmuka Form Input Data Spesifisitas 60
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.11 Tampilan Antarmuka Form Output Data Kalibrasi Metode Baku Luar 61
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.12 Tampilan Antarmuka Form Output Data Kalibrasi Metode Baku Dalam 62
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.13 Tampilan Antarmuka Form Output Data Kalibrasi Metode Baku Tinambah 63
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.14 Tampilan Antarmuka Form Validasi Linieritas Metode Baku Luar 64
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.15 Tampilan Antarmuka Form Printout Validasi Linieritas Metode Baku Luar 65
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.16 Tampilan Antarmuka Form Validasi Akurasi Presisi Metode Baku Luar 66
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.17 Tampilan Antarmuka Form Printout Validasi Akurasi Presisi Metode Baku Luar 67
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.18 Tampilan Antarmuka Form Validasi Akurasi Presisi Interday Metode Baku Luar 68
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.19 Tampilan Antarmuka Form Printout Validasi Akurasi Presisi Interday Metode Baku Luar 69
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.20 Tampilan Antarmuka Form Output Spesifisitas 70
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.21 Tampilan Antarmuka Form Printout Output Spesifisitas 71
LAMPIRAN E (LANJUTAN) Gambar 3.22 Tampilan Antarmuka Form Single Data Metode Baku Luar 72
LAMPIRAN E (LANJUTAN) Gambar 3.23 Tampilan Antarmuka Form Single Data Metode Baku Dalam 73
LAMPIRAN E (LANJUTAN) Gambar 3.24 Tampilan Antarmuka Form Single Data Metode Baku Tinambah 74
LAMPIRAN E (LANJUTAN) Gambar 3.25 Tampilan Antarmuka Grafik Regresi Linier Metode Baku Luar 75