DAFTAR ISI Judul i Pengesahan.. ii Pernyataan Keaslian Tesis... iii Prakata... iv Daftar Isi. vi Daftar Tabel... ix Daftar Gambar... x Daftar Lampiran... xi Intisari. xii Abstract... xiii BAB I PENDAHULUAN A. Latar belakang... 1 B. Permasalahan... 4 C. Tujuan penelitian... 5 D. Manfaat penelitian.... 5 BAB II KAJIAN PUSTAKA A. Hipertensi dan sistem peredaran darah manusia... 6 1. Sistem pengaturan tekanan darah dan renin angiotensin system (RAS).. 6 2. Angiotensin Converting Enzyme (ACE) dan peranannya dalam sistem pengaturan tekanan darah manusia... 8 a. Mekanisme kerja ACE... 9 b. Isoform ACE mamalia 10 3. Tekanan darah tinggi (hipertensi)... 12 a. Definisi hipertensi... 13 b. Klasifikasi hipertensi... 13 c. Faktor penyebab hipertensi.. 14 B. Upaya pencegahan dan pengobatan hipertensi... 15 1. Pencegahan hipertensi. 15 2. Pengobatan hipertensi dengan obat sintetik dan efek sampingnya. 16 3. Alternatif pengobatan hipertensi secara alami melalui inhibitor ACE alami dari mikrobia... 18 C. Bakteri Asam Laktat (BAL)... 22 D. Susu kedelai fermentasi (dadih soya)... 26 vi
BAB III LANDASAN TEORI DAN HIPOTESIS A. Landasan teori... 28 B. Hipotesis... 30 BAB IV METODE PENELITIAN A. Waktu dan tempat penelitian... 32 B. Prosedur kerja 1. Pembuatan susu kedelai... 32 2. Pembuatan dadih soya... 34 a. Preparasi wadah fermentasi... 34 b. Fermentasi dadih soya... 35 3. Isolasi selektif bakteri penghasil asam... 35 4. Screening Bakteri Asam Laktat (BAL)... 36 a. Pengecatan Gram. 36 b. Uji katalase.. 37 c. Uji motilitas. 38 d. Pengecatan endospora... 38 5. Screening BAL proteolotik dari dadih soya... 38 6. Pembuatan stok isolat BAL proteolitik... 39 7. Karakterisasi dan identifikasi isolat BAL... 39 a. Uji pertumbuhan BAL pada berbagai suhu inkubasi... 40 b. Uji pertumbuhan BAL pada berbagai ph media... 40 c. Uji pertumbuhan BAL pada salinitas media yang berbeda... 40 d. Uji pembentukan gas CO 2... 41 e. Uji fermentasi BAL proteolitik terpilih pada berbagai sumber karbon... 41 8. Pembuatan dadih soya monokultur dengan isolat BAL proteolitik terpilih... 42 9. Pengukuran aktivitas penghambatan ACE a. Preparasi sampel... 43 b. Enzum, substrat, dan buffer... 43 b. Pengukuran aktivitas penghambatan ACE secara spektrofotometri... 43 10. Analisis berat molekul peptida bioaktif... 45 BAB V. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Susu kedelai... 46 B. Dadih soya... 47 C. Isolasi selektif bakteri penghasil asam... 48 D. Screening Bakteri Asam Laktat (BAL)... 52 E. Screening BAL proteolitik... 53 vii
F. Karakterisasi dan identifikasi BAL dadih soya... 55 G. Pembuatan dadih soya monokultur... 62 H. Pengukuran aktivitas penghambatan Angiotensin Converting Enzyme (ACE)... 64 I. Karakterisasi berat molekul peptida bioaktif penghambat ace dadih soya... 67 BAB VI. SIMPULAN DAN SARAN A. Simpulan... 71 B. Saran... 72 Ringkasan... 73 Summary... 77 DAFTAR PUSTAKA... 81 Lampiran... 88 viii
DAFTAR TABEL No. 1. Lima kelas nilai tekanan darah terukur pada manusia... 14 2. Aktivitas golongan obat antihipertensi dan efek 17 sampingnya... 3. Karakteristik morfologis dan fisiologis bakteri asam laktat... 25 4. Komposisi nutrien dalam susu kedelai dan susu sapi per gelas... 26 5. Isolat bakteri penghasil asam yang diisolasi dari dadih soya... 51 6. Screening BAL dari isolat bakteri penghasil asam yang diisolasi dari dadih soya... 52 7. Screening BAL proteolitik yang diisolasi dari dadih soya... 54 8. Karakterisasi dan identifikasi genus (generic assignment) isolat BAL dadih soya bentuk sel kokus... 57 9. Karakterisasi dan identifikasi genus (generic assignment) isolat BAL dadih soya bentuk sel batang... 57 10. Fermentasi 49 jenis karbohidrat oleh isolat BAL proteolitik ds15... 60 11. Perbedaan karakteristik dadih soya kultur campuran vs dadih soya monokultur Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii ds15... 63 ix
DAFTAR GAMBAR No. 1. Renin Angiotensin System... 7 2. Skema struktur primer sace dan gace (tace)... 11 3. Struktur tace setelah berikatan dengan lisinopril... 12 4. Simulasi docking TPTQQS dengan tace... 20 5. Model penghambatan ACE oleh TPTQQS... 21 6. Jalur fermentasi glukosa pada BAL... 23 7. Alur kerja penelitian... 31 8. Susu kedelai yang dibuat dari biji kedelai varietas Anjasmoro... 46 9. Hasil Total Plate Count (ALT) susu kedelai... 47 10. Dadih soya hasil fermentasi 24 jam... 48 11. Koloni bakteri yang tumbuh pada MRS agar-bromcressol purple... 49 12. Uji aktivitas proteolitik isolat BAL... 54 13. Bentuk sel BAL proteolitik yang diisolasi dari dadih soya... 56 14. Dadih Soya Monokutur hasil fermentasi dengan isolat BAL ds15 yang diidentifikasi sebagai strain anggota spesies Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii... 62 15. Penghambatan Angiotensin Converting Enzyme oleh dadih soya dan susu kedelai non-fermentasi... 65 16. Profil pita protein dadih soya dibandingkan dengan susu kedelai dengan metode SDS-Page... 68 x
DAFTAR LAMPIRAN No. 1. Formula SDS-PAGE Laemmli (resolving gel 37,5:1)... 88 2. Formula staining, fixing, dan destaining solution per100 ml... 88 3. Konfirmasi identitas isolat ds15 dengan APIweb... 89 xi