ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TANIN DARI EKSTRAK AIR KULIT BATANG KELAPA GADING (Cocos nucifera var. eburnea) Tresna Lestari, Yusup Sidik Program Studi Farmasi STIKes Bakti Tunas Husada Tasikmalaya ABSTRACT Isolation and identification of tannin compounds from aqueous extract of bark ivory palm (Cocos nucifera var. Eburnea) have been done. The bark of ivory palm was extracted by infundasi techniques. The liquid extract was then dried by freeze drying methods and then analyzed with thin layer crhomathography (KLT) using n-butanol: acetic acid: water (BAA) (4:1:5)as eluent. Eluent gave three spots with Rf value of 0.51; 0.67; 078. Based on literature and observation under UV light 254 nm and 366 nm spot with Rf value 0,67 was suggested as tannin compound. Compound with Rf value 0,67 was then isolated using preparative TLC.The isolate was then identified by UV- Vis spectrophotometer and infra red spectrophotometer (FTIR). UV-Vis spectrophotometer analysis showed that isolate has a maximum wavelength of 333 nm. Identification with FTIR showed specific absorptions of tannin compounds OH-assymmetric stretch (3424.96 cm -1 ), CH stretch (2923.56 cm -1 ), aromatic and benzene stretches (1635,34 cm -1 and 759.816 cm -1 ) and CO bond stretch (1130,08 cm -1 ). Keyword : bark ivory palm (Cocos nucifera var.burnea), Tannin, Thin-layer chromatography (TLC), UV-Vis spectrophotometer, FTIR. ABSTRAK Telah dilakukan isolasi dan identifikasi senyawa tanin dari ekstrak air kulit batang kelapa gading (Cocos nucifera var. eburnea). Ekstraksi kulit batang kelapa gading dilakukan dengan cara infundasi. Ekstrak cair selanjutnya dikeringkan dengan metode freeze drying. Terhadap ekstrak selanjutnya dilakukan KLT analitik dengan eluen n-butanol : asam asetat : air (4 : 1 : 5). Eluen ini memisahkan tiga bercak noda dengan nilai Rf yaitu 0,51;0,67;0,78. Berdasarkan studi literatur dan pengamatan dibawah lampu UV 254 nm dan 366 nm bercak dengan nilai Rf 0,67 adalah senyawa yang diduga tanin. Senyawa dengan Rf 0,67 selanjutnya diisolasi dengan KLT preparatif. Isolat selanjutnya diidentifikasi dengan spektrofometer UV-Vis dan FTIR. Hasil analisis spektrofotometer UV-Vis menunjukkan bahwa isolat memiliki serapan pada panjang gelombang maksimum 333 nm. Hasil identifikasi dengan spektrofotometer FTIR menunjukan serapan serapan spesifik dari senyawa tanin seperti rentangan OH asimetri pada bilangan gelombang 3424,96 cm -1, rentang CH pada 2923,56 cm -1, rentangan C=C cincin aromatik pada 1635,34 cm -1 C-O alkohol sekunder pada 1130,8 cm -1 dan benzene pada 759,816 cm -1. Kata kunci : Kulit batang kelapa gading (Cocos nucifera Var. eburnea), tanin, kromatografi lapis tipis (KLT), spektrofotometer UV-Vis, FTIR. PENDAHULUAN Kelapa merupakan tumbuhan asli daerah tropis, yakni daerah yang terletak di sepanjang garis khatulistiwa. Di wilayah Indonesia, tanaman kelapa dapat ditemukan hampir diseluruh provinsi, dari daerah pantai sampai ke daerah pegunungan yang agak tinggi (Warisno, 2003). 22 Kelapa merupakan tanaman yang serbaguna, baik untuk keperluan pangan maupun nonpangan. Setiap bagian dari tanaman kelapa, dari akar hingga pucuk daun dapat dimanfaatkan untuk kepentingan manusia. Dalam bidang kesehatan ekstrak kulit batang kelapa diketahui memiliki khasiat antiseptik (Dalimartha, 2008).
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, diketahui bahwa infusum kulit batang kelapa gading dapat menghambat pertumbuhan Candida albicans dan Escherichia coli pada konsentrasi 37% v/v (Nuraini, A., 2011). Hasil telaah fitokimia, ekstrak air kulit batang kelapa (Cocos nucifera var. eburnea) diketahui memiliki kandungan senyawa flavonoid, tanin dan kuinon (Fitriady, A., 2011), selain itu diketahui juga bahwa ekstrak air kulit batang kelapa gading (Cocos nucifera var. eburnea) mengandung tanin dalam kadar yang cukup tinggi, yaitu 18,65 % (Fitriadi A,2011). Senyawa tanin dalam ekstrak air kulit batang kelapa gading ini berpotensi memiliki aktivitas sebagai antimikroba. Tanin merupakan senyawa yang bersifat polar dan tahan terhadap pemanasan sehingga pada penelitian ini dilakukan ekstraksi dengan cara infundasi, tanin selanjutnya diisolasi dengan metode kromatografi lapis tipis preparatif. Isolat yang diperoleh diidentifikasi dengan spektrofotometer UV-Vis yang diperkuat dengan pereaksi geser serta didukung dengan spektrum hasil dari spektrofotometer FTIR. ALAT DAN BAHAN Alat Terdiri dari seperangkat alat kromatografi lapis tipis berupa pelat KLT silika gel, bejana KLT dan lampu UV 254 dan 366 nm, timbangan analitis, alat ekstraksi berupa bejana infusa, botol timbang, freeze drying, desikator, cawan uap, penangas air, kertas saring, dan alat-alat gelas yang digunakan di laboratorium. Alat untuk identifikasi berupa spektrofotometer UV-Vis dan Spektrofotometer FTIR (Fourier Transform Infra Red). Sampel Kulit batang kelapa gading (Cocos nucifera var.eburnea) yang diambil dari Desa Babakan Kecamatan Ciamis Kabupaten Ciamis yang dideterminasi di Herbarium Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati Institut Teknologi Bandung. Bahan kimia Aseton, akuades, kloroform, etil asetat, gelatin, formaldehid 3%, natrium asetat, HCl pekat, FeCl3 1%, FeCl3 5%, toluen, feri sulfat, asam asetat glasial, asam asetat, n-butanol, metanol, NaOH 2M, AlCl3 5%, AlCl3 1%, pelet KBr. METODE Pembuatan Ekstrak Kulit batang kelapa gading yang telah dikumpulkan dan dibersihkan, dipotong-potong kecil lalu dikeringkan dan kemudian dihancurkan sehingga menjadi serbuk. Serbuk selanjutnya diekstraksi dengan metode infundasi. Ekstrak cair yang diperoleh selanjutnya dikeringkan dengan metode freeze drying. Isolasi senyawa dengan KLT Pada pemisahan dengan KLT analitik, sebanyak 1 gram ekstrak hasil freeze drying dilarutkan dengan aseton air (7:3), kemudian ditotolkan pada pelat KLT silika gel G 60 F 254 dengan menggunakan mikrokapiler lebih kurang 1 cm dari tepi bawah pelat KLT, kemudian dibiarkan kering. Pelat KLT kemudian ditempatkan pada bejana kromatografi yang berisi eluen. Eluen yang digunakan yaitu n-butanol : asam asetat : air dengan perbandingan 4:1:5. Setelah dielusi sampai garis batas pelat KLT dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan, bercak diamati dengan sinar ultraviolet pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm serta penampak bercak FeCl 3 1%. Jarak bercak dari titik penotolan diukur dan dicatat sehingga dihasilkan harga Rf untuk setiap bercak. Isolasi senyawa dengan cara yang sama menggunakan KLT preparatif dengan ukuran pelat silika gel GF 254 10x20 cm. Bercak yang diduga tanin dikerok dan dilarutkan dalam aseton : air (7:3 kemudian disentrifus. Isolat berupa supernatan kemudian dipekatkan. 23
Uji kemurnian Uji kemurnian isolat dilakukan dengan KLT dua dimensi dengan cara menotolkan sampel pada lempeng KLT lalu dikembangkan dengan pertama, yaitu aseton. Lempeng selanjutnya diangkat, dikeringkan, diputar 90º, dan diletakkan ke dalam bejana kromatografi yang berisi pengembang kedua, yaitu aseton yang mempunyai kepolaran lebih tinggi dari metanol. Jika hasil dari pengujian hanya menghasilkan satu bercak, maka isolat dapat dikatakan murni (Gholib, 2007). Identifikasi senyawa Identifikasi senyawa tanin dilakukan dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis dan FTIR. Isolat yang dihasilkan dari KLT. Isolat dimasukan ke dalam kuvet sebanyak 2 ml kemudian diamati spektrumnya pada panjang gelombang 200-800 nm. Identifikasi dilanjutkan dengan penambahan pereaksi geser NaOH 2M, AlCl 3 5%, AlCl 3 /HCl, NaOAc/H 3 BO 3. Kemudian diamati pergeseran puncak serapannya. Identifikasi dilanjutkan dengan Spektrofotometer FTIR untuk mengetahui gugus fungsi yang ada dalam isolat. Isolat yang telah dikeringkan ditambah 0,2 g pelet KBr, kemudian diidentifikasi dengan spektrofotometer FTIR pada bilangan gelombang 4000-400 cm -1. HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Dari 3,6 kg simplisia kering yang diekstraksi dengan 7,5 liter diperoleh 6 liter ekstrak cair. Ekstrak cair yang diperoleh selanjunya dikeringkan dengan metode freeze drying, dari 3 liter ekstrak cair didapat ekstrak keringnya yaitu sebanyak 29,9 gram. Ekstrak kering ini mempunyai warna yang lebih pudar dibandingkan dengan ekstrak pada saat sebelum dilakukan pengeringan.. Isolasi senyawa dengan KLT Sebelum dilakukan pemisahan senyawa tanin dari ekstrak, terlebih dahulu dilakukan kromatografi lapis tipis analitik dengan menggunakan eluen yang terdiri dari campuran beberapa larutan yaitu n-butanol : asam asetat: air dengan perbandingan 4:1:5. Setelah diamati di bawah sinar UV 254 nm dan 366 nm dapat dilihat bahwa pemisahan dengan eluen tersebut menghasilkan tiga bercak dengan nilai Rf 0,51; 0,67; 0,78. Jika dilihat dari komposisinya, eluen yang merupakan campuran larutan yang terdiri dari n-butanol : asam asetat : air dengan perbandingan 4:1:5 merupakan pelarut yang bersifat polar sehingga mampu mengelusi beberapa senyawa yang juga bersifat polar seperti tanin. Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan pada isolasi tanin dari ekstrak daun belimbing wuluh menggunakan eluen yang sama diperoleh nilai Rf tanin sebesar 0,61 (Sa adah, 2010). Oleh karena itu diduga bahwa bercak yang memiliki nilai Rf 0,67 adalah senyawa tanin karena mempunyai nilai Rf yang hampir sama dengan nilai Rf tanin yang diisolasi dari daun belimbing wuluh. Ilustrasi gambar dari pemisahan senyawa dengan kromatografi lapis tipis analitik menggunakan eluen BAA dapat dilhat pada gambar 1. a b 24 c
Gambar 1. (a) Ilustrasi pelat KLT dengan sinar UV-Vis 254 nm (b) Ilustrasi pelat KLT dengan sinar UV-Vis 366 nm (c) Ilustrasi pelat KLT dengan penampak bercak FeCl 3 1%. Setelah dilakukan KLT analitik menggunakan eluen BAA, untuk mendapatkan senyawa dalam jumlah yang banyak perlu dilakukan isolasi dengan menggunakan kromatografi lapis tipis preparatif. Pemisahan menggunakan KLT preparatif ini sama dengan KLT analitik yaitu menggunakan eluen BAA dengan perbandingan yang sama pula. Setelah dielusi, bercak yang diduga senyawa tanin dikerok. Silika selanjutnya dilarutkan dengan aseton:air (7:3) dan disentrifus. Supernatan yang diperoleh diambil dan dipekatkan. Isolat kemudian diuji kemurniannya dengan menggunakan KLT dua dimensi Hasil dari uji kemunian menggunakan KLT dua dimensi dapat diketahui bahwa isolat hasil dari pemisahan KLT preparatif ini cukup murni, hal ini dilihat dari hasil bercak yang dihasilkan dari penggunaan KLT dua dimensi yang menghasilkan hanya satu bercak. Identifikasi Senyawa Identifikasi isolat dilakukan dengan spektrofotometer UV-Vis dan FTIR. Hasil identifikasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis diketahui bahwa isolat memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang 333 nm. Nilai panjang gelombang ini mendekati panjang gelombang tanin yang telah diisolasi dari daun belimbing wuluh yaitu sebesar 331 nm (Sa adah, 2010). Dugaan bahwa isolat merupakan senyawa tanin juga diperkuat dengan hasil pergeseran panjang gelombang pada saat ditambahkan pereaksi geser. Pereaksi geser yang digunakan adalah NaOH 2M, NaOH 5 menit, AlCl 3 5%, AlCl 3 5% yang ditambah HCl. Hasil analisis dengan seluruh pereaksi geser memberikan data yang saling menguatkan bahwa isolat tersubstitusi OH pada posisi orto di cincin A. Data hasil identifikasi dengan penambahan pereaksi geser dapat dilihat di Tabel 1. Pereaksi Tabel 1. Hasil identifikasi dengan penambahan pereaksi geser Panjang gelombang (nm) Pergeseran panjang gelombang Petunjuk penafsiran -- 333 - - NaOH 2M 332-1 3,4 -OH, o- dioh pada cincin A; pada cincin B : 3 OH yang berdampingan. NaOH 2M 5 menit 332-1 o- dioh pada cincin A (penurunan lambat: o-dioh pada cincin B isoflavon) AlCl 3 5% 341 +8 Mungkin o- dioh pada cincin A AlCl 3 5% + HCl 335 +2 Mungkin o- dioh pada cincin A NaOAc 341 +8 7-OH NaOAc + H 3 BO 3 341 +8 o-dioh pada cincin A (6,7) atau (7,8) Identifikasi dengan spektrum bilangan gelombang yang spektrofotometer FTIR dilakukan untuk identik dengan spektrum bilangan mengetahui gugus fungsi yang terdapat gelombang yang dimiliki tanin.. Data dalam isolat. Hasil dari identifikasi perbandingan spektrum bilangan terhadap isolat menggunakan gelombang antara isolat dengan senyawa spektrofotometer FTIR didapat beberapa tanin dapat dilihat pada Tabel 2. 25
Tabel 2. Data perbandingan antara isolat dengan senyawa tanin (Hayati dkk, 2010) Puncak Bilangan gelombang(cm -1 ) Isolat sampel Senyawa tanin Pustaka Jenis vibrasi 1 3424,96 3392,7 3500-3000 Rentangan asimetri OH 2 2923,56 2932,1 3000-2900 Rentangan CH sp 3 3 1635,34 1515,4; 1645-1615 Rentangan cincin aromatic 1448,1; 1404,0 4-1263,7 1280-1220 R-O-Ar (eter aromatik) 5 1130,08 1058,7 1120-1080 C-O alkohol sekunder 6-833,8; 668,8; 553,3 900-420 C-H out of plane, p-substitusi benzene 7 759,816 768,7; 606,4 900-650 OH out of plane;o-substitusi benzene Dari tabel 3, bilangan gelombang isolat yang identik dengan bilangan gelombang tanin diantaranya yaitu pada bilangan gelombang 3424,96 cm -1 yang menyatakan adanya rentang asimetri OH, bilangan gelombang 2923,56 cm -1 yang menyatakan adanya rentang CH sp 3, bilangan gelombang 1635,34 cm -1 yang menyatakan rentang cincin aromatik, bilangan gelombang 1130,08 cm -1 yang menyatakan adanya gugus C- O alkohol sekunder dan bilangan gelombang 759,816 cm -1 yang menyatakan adanya cincin aromatik yang tersubstitusi pada posisi orto. Puncak-puncak spesifik tersebut merupakan puncak spesifik dari senyawa tanin, sehingga memperkuat dugaan bahwa isolat hasil pemisahan dengan KLT preparatif adalah senyawa tanin. KESIMPULAN Berdasarkan data hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa tanin dari ekstrak air kulit batang kelapa (Cocos nucifera var. eburnea) dapat diisolasi dengan metode kromatografi lapis tipis menggunakan eluen n-butanol : asam asetat : air (BAA) dengan perbandingan (4:5:1). Bercak yang diduga tanin mempunyai nilai Rf 0,67. Berdasarkan hasil identifikasi dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dapat disimpulkan bahwa isolat memiliki serapan maksimum pada panjang gelombang 333 nm. Dengan penambahan pereaksi geser menguatkan dugaan bahwa isolat yang diperoleh adalah tanin yang tersubstitusi OH pada posisi orto di cincin A. Sedangkan hasil identifikasi terhadap isolat menggunakan spektrofotometer FTIR didapat spektrum yang spesifik untuk senyawa tanin yaitu pada bilangan gelombang 3424,96 cm -1 ; 2923,56 cm -1 ; 1635,34 cm -1 ; 1130,08 cm -1, 759,816 cm -1. PUSTAKA Creswell, Clifford J, Runquist, Olaf A, Campbel, Malcolm. 2005. Analisis Spektrum Senyawa Organik. Penerjemah: Kosasih Padmawinata. Bandung : Penerbit ITB. Dalimartha, Setiawan. 2008. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 5. Jakarta : Pustaka Bunda : 75 Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta : Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Fitriady, Ari. 2011. Skrining Fitokimia Ekstrak Air Kulit Batang Kelapa dan Pemanfaatanya Sebagai Serbuk Minuman Kesehatan [Skripsi]. Tasikmalaya: Program Studi Farmasi STIKes Bakti Tunas Husada. Ganjar, I.G dan Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. 26
Yogyakarta: Pustaka Pelajar : 353-372 Markham, K,R. 1998. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung : Penerbit ITB : 44-47 Nuraini, Ani. 2011. Uji Aktivitas Antimikroba Infusum Ekstrak Kulit Batang Kelapa (Cocos Nucifera var.eburnea) [Skripsi]. Tasikmalaya : Program Studi Farmasi STIKes Bakti Tunas Husada Sa adah, Lailis. 2010. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Tanin dari Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) [Skripsi]. Malang : Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana Malik Ibrahim Warisno. 2003. Budi Daya Kelapa Genjah. Yogyakarta: Kanisius: 9 27