Lampiran 1. Karakteristik makroskopis koloni dan mikroskopis isolat bakteri LII 61 (hasil screening dari air limbah Rumah Pemotongan Hewan Pegirian, Surabaya, Jawa Timur ) Kode isolat bakteri Karakteristik Parameter Hasil pengamatan Jenis Genus (pendugaan) Bentuk bulat Makroskopis koloni Warna Tepi Merah muda rata Elevasi rata L II 61 Mikroskopis bakteri Bentuk Bulat berpasangan berjumlah empat untuk setiap pasangnya Micrococcus Gram Positif Mikroskopis bakteri lokal dengan kode isolat L II 61 pada perbesaran 1000x L II 61 1 skala = 2 µm
Lampiran 2. Data karakteristik biosurfaktan dalam supernatan kultur Acinetobacter sp. P2(1) Kode Supernatan P1B1 P1B2 P1B3 P1B4 P1B5 P1B6 P1B7 P1B8 P1B11 P1B13 P1B15 P1B17 AE 1 jam (%) Rata-rata AE 1 jam (%) AE 24 jam (%) Rata- rata AE 24 jam (%) 25,41 19,55 51,45 13,57 19,49 ± 5,92 5,43 14,16 ± 7,62 55,20 19,49 17,49 57,76 17,21 15,4 55,82 13,62 16,21 ± 2,27 9,23 11,94 ± 3,15 57,69 17,81 11,2 57,42 62,54 54,81 50,07 60,52 60,49 ± 2,06 54,53 54,52 ± 0,29 52,42 58,42 54,23 52,98 2,94 1,25 50,20 11,29 7,12 ± 4,18 9,68 5,38 ± 4,22 53,39 7,12 5,22 55,68 28,33 16,89 53,27 30,22 28,26 ± 2,00 17,09 16,91 ± 0,17 55,96 26,23 16,75 58,46 9,8 4,7 52,98 7,82 9,62 ± 1,71 3,82 4,92 ± 1,22 55,47 11,23 6,23 57,07 17,31 16,35 58,18 15,24 15,57 ± 1,61 14,78 15,57 ± 1,11 57,56 14,15 13,21 57,42 14,02 10,61 61,02 10,83 10,82 ± 3,2 8,36 9,49 ± 1,59 60,54 7,63 6,1 59,91 14,41 9,38 52,42 12,13 10,47 ± 4,98 10,96 10,17 ± 1,12 55,27 4,88 3,13 56,86 23,23 22,63 50,76 45,96 28,18 ± 15,9 27,84 25,24 ± 3,68 52,98 15,36 13,25 54,78 24,44 22,07 55,75 25,69 24,44 ± 1,25 22,92 22,50 ± 0,6 57,90 23,19 19,21 60,54 4,18 4,08 54,57 12,54 8,36 ± 4,18 12,9 8,49 ± 6,24 55,13 8,36 7,63 56,79 TP Rata- rata TP (mn/m) Penurunan TP (mn/m) 54,80 ± 3,17 17,20 56,98 ± 1,01 15,02 51,82 ± 1,55 20,18 53,09 ± 2,75 18,91 55,89 ± 2,60 16,11 55,18 ± 2,06 16,82 57,72 ± 0,41 14,28 60,49 ± 0,56 11,51 55,04 ± 1,95 16,96 52,84 ± 2,02 19,16 58,06 ± 2,40 13,94 55,50 ± 1,16 16,50
Lanjutan lampiran 2. Data karakteristik biosurfaktan dalam supernatan kultur Acinetobacter sp. P2(1) P1B19 P1B21 P2B2 P2B3 P2B4 P2B5 14,11 9,32 54,52 12,8 14,11 ± 1,31 8,8 9,06 ± 0,37 55,48 15,42 13,83 56,10 11,35 9,09 54,92 10,67 9,42 ± 2,77 8,87 8,98 ± 0,16 56,52 6,25 5,1 57,21 7,92 5,06 46,82 28,67 19,27 ± 10,5 25,35 15,21 ± 14,3 47,92 21,22 19,86 50,33 45,3 41,84 46,13 31,76 35,17 ± 8,93 28,18 35,01 ± 9,66 50,13 28,45 24,6 50,88 30,75 26,87 47,51 45,8 37,09 ± 7,8 44,72 35,80 ± 12,6 51,30 34,72 35,6 52,33 30 27,63 48,20 20,78 27,40 ± 5,78 18,28 22,96 ± 6,61 50,19 31,43 32,26 51,92 55,48 ± 0,62 16,53 56,22 ± 1,17 15,79 48,36 ± 1,80 23,64 49,05 ± 2,55 22,95 50,38 ± 2,54 21,62 50,10 ± 1,86 21,90 Rata-rata 21,20 ± 4,8 18,04 ± 4,41 54,28 ± 0,82 17,72 ± 0,82 Lampiran 3. Grafik karakteristik biosurfaktan dalam supernatan kultur Acinetobacter sp. P2(1) 70 0 5 10 15 20 70 60 60 50 50 40 30 20 40 30 20 Rata2 AE % 1 Jam Rata2 AE % 24 jam Berat kasar (g/l) Rata2 TP 10 10 0 0
Lampiran 4. Data perolehan produk kasar biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) dengan pengendapan ammonium sulfat jenuh 60% No Kode Supernatan Volume Supernatan (ml) Berat kering perolehan produk kasar (g) Berat kering perolehan produk kasar (g/l) 1 P1B1 84 0,4 4,76 2 P1B2 50 0,5 10 3 P1B3 50 0,6 12 4 P1B4 50 0,2 4 5 P1B5 50 0,3 6 6 P1B6 50 0,3 6 7 P1B7 50 0,3 6 8 P1B8 50 0,5 10 9 P1B11 75 0,4 5,33 10 P1B13 75 0,4 5,33 11 P1B15 75 0,5 6,67 12 P1B17 50 0,4 8 13 P1B19 75 0,4 5,33 14 P1B21 60 0,4 6,67 15 P2B2 50 0,4 8 16 P2B3 50 0,2 4 17 P2B4 50 0,4 8 18 P2B5 50 0,3 6 Total 1044 6,9 122,10 Rata-rata 6,78 ± 2,18
Lampiran 5. Data karakteristik larutan produk kasar biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) pada konsentrasi sama dengan CMC Ulangan Aktivitas emulsi biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) pada solar (%) 1 jam 24 jam Tegangan permukaan biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) (mn/m) Penurunan tegangan permukaan biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) (mn/m) terhadap akuades terhadap pelarut (Buffer fosfat ph 7) 1 42,59 40,34 53,6 18,4 17,3 2 42,86 40,75 53,93 18,1 17 3 38,1 36,69 53,71 18,3 17,2 Ratarata 41,18 ± 2,68 39,26 ± 2,24 53,74 ± 0,17 18,26 ± 0,17 17,20 ± 0,17 Lampiran 6. Data karakteristik larutan surfaktan sintetis Tween-20 pada konsentrasi sama dengan CMC Ulangan Aktivitas emulsifikasi Tween-20 pada solar (%) 1 jam 24 jam Tegangan permukaan Tween-20 (mn/m) Penurunan tegangan permukaan Tween-20 (mn/m) terhadap akuades terhadap pelarut (buffer fosfat ph 7) 1 34,72 32,65 56,48 15,5 14,46 2 36,67 34,21 56,76 15,2 14,18 3 35,1 29,99 57,04 15 13,90 Ratarata 35,5 ± 1,031 32,25 ± 2,19 56,76 ± 0,28 15,24 ± 0,28 14,18 ± 0,28
Lampiran 7. Data nilai aktivitas emulsifikasi (%) dan tegangan permukaan dari crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61 Supernatan Micrococcus sp. L II 61 Ulangan Aktivitas emulsifikasi pada minyak uji solar (%) 1 jam 24 jam Tegangan permukaan media produksi (mn/m) Tegangan permukaan crude enzyme (mn/m) Ulangan 1 20,99 17,75 60,19 43,04 Ulangan 2 19,68 15,96 64,71 40,83 Ulangan 3 20,04 18,22 64,71 41,31 Rata-rata 20,24 ± 0,68 17,31 ± 1,19 63,20 ± 2,61 41,73 ± 1,17 Lampiran 8. Data persentase kelarutan oil sludge pada masing-masing perlakuan
Rata-rata persentase kelarutan oil sludge (%) Persentase Kelarutan Oil Sludge (%) 80,00 70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00 A B T Ea Eb Ec BEa BEb BEc A B T Ea Eb Ec BEa BEb BEc Kode Perlakuan Lampiran 9. Hasil uji statistik dari data persentase kelarutan oil sludge menggunakan One-Way ANOVA dan uji Duncan One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Residual for Persentase N 24 Normal Parameters a,,b Mean.0000 Std. Deviation 1.11835 Most Extreme Differences Absolute.134 Positive.134 Negative -.118 Kolmogorov-Smirnov Z.654 Asymp. Sig. (2-tailed).786 a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data.
Persentase N Mean Std. Deviation Std. Error Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum B 3 40.9273.41942.24215 39.8854 41.9692 40.49 41.33 T 3 32.1909 1.46356.84498 28.5552 35.8266 31.22 33.87 Ea 3 27.2781 1.30401.75287 24.0387 30.5174 26.38 28.77 Eb 3 31.9371 1.48164.85542 28.2565 35.6176 30.53 33.48 Ec 3 37.5769.64521.37251 35.9741 39.1796 37.17 38.32 BEa 3 53.0758.35384.20429 52.1969 53.9548 52.87 53.48 BEb 3 62.0756 2.02596 1.16969 57.0428 67.1084 60.32 64.29 BEc 3 71.0904 1.87710 1.08375 66.4274 75.7534 69.01 72.65 Total 24 44.5190 15.17598 3.09778 38.1107 50.9273 26.38 72.65 Test of Homogeneity of Variances Persentase Levene Statistic df1 df2 Sig. 2.067 7 16.109 Persentase ANOVA Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups 5268.374 7 752.625 418.616.000 Within Groups 28.766 16 1.798 Total 5297.141 23
Persentase Duncan a Subset for alpha = 0.05 Perlakuan N 1 2 3 4 5 6 7 Ea 3 27.2781 Eb 3 31.9371 T 3 32.1909 Ec 3 37.5769 B 3 40.9273 BEa 3 53.0758 BEb 3 62.0756 BEc 3 71.0904 Sig. 1.000.820 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000. Lampiran 10. Produksi biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) 1 2
Lanjutan lampiran 10. Produksi biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) 3 1. Biosurfaktan dalam supernatan kultur Acinetobacter sp. P2(1) 2. Produk kasar biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) dengan pengendapan ammonium sulfat 60% jenuh 3. Larutan produk kasar biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) konsentrasi sama dengan CMC Lampiran 11: Produksi crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61 1 2 Keterangan : 1. Kultur Micrococcus sp. L II 61 (penghasil enzim lipase) 2. Crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61 (kanan) dibanding media produksi
Lampiran 12: Kelarutan oil sludge pada kontrol (surfaktan sintetis Tween- 20) T0 T1 T2 T3 T0 T1 1 2 T2 T3 3 T0 T1 T3 T2 1. Sebelum di-vortex 2. Setelah di-vortex selama 15 menit 3. Hasil filtrasi T0: blanko T1: ulangan 1 T2: ulangan 2 T3: ulangan 3
Lampiran 13. Kelarutan oil sludge pada perlakuan B (biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1)) B0 B1 B2 B3 B0 B1 B2 B3 1 2 3 B0 B1 B3 B2 1. Sebelum di-vortex 2. Setelah di-vortex selama 15 menit 3. Hasil filtrasi B0: blanko B1: ulangan 1 B2: ulangan 2 B3: ulangan 3
Lampiran 14. Kelarutan oil sludge pada perlakuan Ea (crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61) 1 Ea0 Ea1 Ea2 Ea3 Ea0 Ea1 Ea2 Ea3 2 3 Ea0 Ea1 Ea3 Ea2 1. Sebelum di-vortex 2. Setelah di-vortex selama 15 menit 3. Hasil filtrasi Ea0: blanko Ea1: ulangan 1 Ea2: ulangan 2 Ea3: ulangan 3
Lampiran 15. Kelarutan oil sludge pada perlakuan Eb (crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61) 1 Eb0 Eb1 Eb2 Eb3 Eb0 Eb1 Eb2 Eb3 2 3 Eb0 Eb1 Eb3 Eb2 1. Sebelum di-vortex 2. Setelah di-vortex selama 15 menit 3. Hasil filtrasi Eb0: blanko Eb1: ulangan 1 Eb2: ulangan 2 Eb3: ulangan 3
Lampiran 16. Kelarutan oil sludge pada perlakuan Ec (crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61) Eb0 Ec1 Ec2 Ec3 Eb0 Ec1 Ec2 Ec3 2 1 3 Eb0 Ec1 Ec3 Ec2 1. Sebelum di-vortex 2. Setelah di-vortex selama 15 menit 3. Hasil filtrasi Ec0: blanko Ec1: ulangan 1 Ec2: ulangan 2 Ec3: ulangan 3
Lampiran 17. Kelarutan oil sludge pada perlakuan BEa, biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) dengan penambahan (crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61) BEa0 Bea1 BEa2 Bea3 BEa0 Bea1 BEa2 Bea3 1 2 3 BEa0 Bea1 Bea3 BEa2 1. Sebelum di-vortex 2. Setelah di-vortex selama 15 menit 3. Hasil filtrasi BEa0: blanko BEa1: ulangan 1 BEa2: ulangan 2 BEa3: ulangan 3
Lampiran 18. Kelarutan oil sludge pada perlakuan BEb biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) dengan penambahan (crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61) BEb0 BEb1 BEb2 BEb3 BEb0 BEb1 BEb2 BEb3 1 2 3 BEb0 BEb1 BEb3 BEb2 1. Sebelum di-vortex 2. Setelah di-vortex selama 15 menit 3. Hasil filtrasi BEb0: blanko BEb1: ulangan 1 BEb2: ulangan 2 BEb3: ulangan 3
Lampiran 19. Kelarutan oil sludge pada perlakuan BEc biosurfaktan Acinetobacter sp. P2(1) dengan penambahan (crude enzyme lipase Micrococcus sp. L II 61) BEc0 BEc1 BEc2 BEc3 BEc0 BEc1 BEc2 BEc3 2 1 3 BEc0 BEc1 BEc3 BEc2 1. Sebelum di-vortex 2. Setelah di-vortex selama 15 menit 3. Hasil filtrasi BEc0: blanko BEc1: ulangan 1 BEc2: ulangan 2 BEc3: ulangan 3
Lampiran 20. Pengamatan mikroemulsi fase cair dari masing-masing perlakuan (perbesaran 100x) B Ea Eb Ec
BEa BEb BEc
Lampiran 21. Alat dan bahan (media dan bahan kimia) penelitian 3 4 6 8 1 7 5 2 1. Beaker s glass 2. Botol kultur 3. Cawan Petri 4. Mikropipet 100-1000 μl 5. Gelas ukur 6. Pipet 7. Spiritus 8. Jangka sorong 13-37 9. Magnetic stirrer 10. Shaker 11. Spectrofotometer 12. Timbangan analitik 13. Solar 14. Oil sludge 15. Minyak goring 16. Molase 17. Whatman filter paper no.1 18. p-nitrofenil palmitat (p-npp) 19. Nutrient Agar 20. Nutrient Broth 21. (NH 4 ) 2 SO 4 22. MgSO 4. 7H 2 O 23. NaCl 24. CaCl 2 25. MnSO 4. H 2 O 26. H 3 BO 3 27. ZnSO 4. 7H 2 O 28. CuSO 4. 5H 2 O 29. CoCl 2. 6H 2 O 30. Na 2 M o O 4. 2H 2 O 31. NaOH 10% 32. HCl 5% 33. KH 2 PO 4 34. K 2 HPO 4 35. FeSO 4.7H 2 O 36. Alkohol 37. Tween-20