Jurnal Farmasi Malahayati Volume 1 No.1 Januari

Transkripsi

1 Jurnal Farmasi Malahayati Volume 1 No.1 Januari PERBANDINGAN TEKNIK EKSTRAKSI MASERASI DENGAN INFUSA PADA PENGUJIAN AKTIVITAS DAYA HAMBAT DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.) TERHADAP Escherichia coli Alfa Purwa Isnawati 1, Agustina Retnaningsih 2 ABSTRACT One of the most important stages in testing is sample preparation. To obtain the active substance in green betel leaves, one of the techniques is extraction. Extraction is a method of taking the active substance contained in the simplicia using an appropriate solvent. Extraction can be done in several ways, including maceration and infusa. The purpose of this study is to compare the extract of maceration and infusa on testing the activity of inhibitory power of green betel leaves against Escherichia coli. Antibacterial testing used is the diffusion method agar by using the calculation of obstacle zone. The results showed that green betel leaves with both extraction techniques could inhibit the growth of Escherichia coli, each with a diameter of 9.56 mm and 9.23 mm inhibition zone. Comparison of activity was tested using statistic with t test. Green betel leaf extract from the results of maceration and infusa extraction showed no significant difference in inhibiting the growth of Escherichia coli. Key Word : Escherichia coli, Green betle leaf, Extraction, Antimicrobial Activity ABSTRAK Salah satu tahapan terpenting dalam pengujian yaitu persiapan sampel. Untuk memperoleh zat aktif dalam daun sirih hijau, salah satu tekniknya yaitu ekstraksi. Ekstraksi merupakan cara pengambilan zat aktif yang terdapat dalam simplisia menggunakan pelarut yang sesuai. Ekstraksi dapat dilakukan dengan beberapa cara, antara lain maserasi dan infusa. Tujuan penelitian ini yaitu untuk membandingkan ekstrak maserasi dan infusa pada pengujian aktivitas daya hambat daun sirih hijau terhadap Escherichia coli. Pengujian antibakteri yang digunakan yaitu metode difusi agar dengan menggunakan perhitungan zona hambatan. Hasil penelitian menunjukan bahwa daun sirih hijau dengan kedua teknik ekstraksi dapat menghambat pertumbuhan Escherichia coli, masing masing dengan diameter zona hambatan 9,56 mm dan 9,23 mm. Perbandingan aktivitas diuji menggunakan statistik dengan uji t. Ekstrak daun sirih hijau dari hasil ekstraksi maserasi dan infusa tidak menunjukan perbedaan yang signifikan dalam coli. Kata Kunci : Escherichia coli, Daun sirih hijau, Ekstraksi, Aktivitas Antimikroba PENDAHULUAN Sejak ratusan tahun yang lalu, sebagian besar masyarakat Indonesia secara turun - temurun telah menggunakan obat tradisional yang berasal dari tumbuhan. Sikap kembali ke alam (back to nature) sekarang ini membuat masyarakat ingin tahu tentang manfaat tanaman obat. Salah satu tanaman obat yang bermanfaat untuk kesehatan yaitu tanaman sirih hijau. Bagian dari tanaman sirih hijau yang digunakan untuk pengobatan oleh masyarakat adalah daun. Sebagian besar masyarakat menggunakan daun segarnya dengan cara perebusan dan diminum airnya. Daun sirih hijau memiliki berbagai manfaat yang digunakan untuk mengobati penyakit keputihan, diare, menghentikan mimisan, sakit jantung, menghilangkan bau mulut serta mengobati batuk. Daun sirih hijau mengandung minyak atsiri, flavonoida, tanin, alkaloida, steroida, glikosida, pati, seskuiterpen, diatase dan kavikol (Ajizah, 2004). 1. Farmasi, Universitas Malahayati 2. Akafarma Putra Indonesia Lampung

2 20 Jurnal Farmasi Malahayati Volume 1 No.1 Januari 2018 Salah satu zat aktif dalam daun sirih hijau adalah tanin yang memiliki manfaat sebagai antimikroba dan antidiare. Mekanisme kerja tanin terhadap bakteri dengan cara mempresipitasi protein, inaktivasi enzim, inaktivasi fungsi materi genetik dan menginaktifkan kemampuan menempel bakteri, karena berdasarkan penelitian Suliantari dkk (2008) ekstrak daun sirih hijau dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Sifat tanin umumnya larut dalam air dan kelarutannya meningkat apabila dilarutkan dalam air panas (12). Selain itu, Browning (1966) dalam Ismarani (2012) menjelaskan untuk memperoleh ekstrak berkualitas tinggi maka digunakan pelarut organik seperti etanol, aseton dan metanol. Untuk memperoleh zat aktif dalam daun sirih hijau, salah satu tekniknya yaitu menggunakan teknik ekstraksi. Ekstraksi merupakan cara pengambilan zat aktif yang terdapat dalam simplisia menggunakan pelarut yang sesuai. Teknik ekstraksi ada dua cara yaitu cara tanpa pemanasan dan cara dengan pemanasan. Cara dingin meliputi maserasi dan perkolasi, sedangkan cara panas diantaranya refluks, soxhletasi, digesti, dekokta dan infusa (Sulistyawati, 2009). Teknik ekstraksi yang sesuai berdasarkan sifat zat aktif pada daun sirih hijau diantaranya maserasi dan infusa. Maserasi adalah teknik ekstraksi dengan cara merendam simplisia menggunakan pelarut tanpa pemanasan. Karena sifat tanin larut dalam pelarut organik seperti etanol, maka dapat menggunakan teknik maserasi. Sedangkan infusa adalah teknik ekstraksi menggunakan pelarut air dengan pemanasan. Tetapi tanin akan terurai menjadi pyrogallol dan pyrocatechol apabila suhunya 98,89 o C 101,67 o C. Teknik ekstraksi dengan cara infusa menggunakan pemanasan dengan suhu 90 o C, suhu tersebut sudah mendekati 98,89 o C. Sehingga kemungkinan hasil dari ekstrak infusa daun sirih hijau sebagaian taninnya terurai. Maserasi dan infusa memiliki beberapa perbedaan diantaranya yaitu maserasi digunakan untuk zat yang tidak tahan pemanasan, namun memerlukan waktu lama dan banyak pelarut. Sedangkan infusa digunakan untuk bahan yang memiliki tekstur keras, zat yang tahan terhadap pemanasan, namun waktunya singkat. Berdasarkan beberapa penelitian, ekstrak daun sirih diperoleh menggunakan teknik ekstraksi maserasi. Diantaranya yaitu penelitian Suliantari dkk (2008) tentang aktivitas antibakteri ekstrak daun sirih hijau (Piper betle L.) terhadap bakteri Escherichia coli menggunakan pelarut air, etanol serta etil asetat dengan penentuan Minimum Inhibitory Concentration (MIC) mendapatkan hasil bahwa ekstrak dengan pelarut etanol mempunyai kemampuan menghambat tertinggi. Dan penelitian Hermawan dkk (2007) dengan judul pengaruh ekstrak daun sirih (Piper betle L.) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan metode difusi disk, penelitian tersebut menunjukan ekstrak daun sirih berpengaruh terhadap Escherichia coli. Metode yang digunakan untuk menguji aktivitas daya hambat daun sirih hijau terhadap bakteri Escherichia coli menggunakan kertas cakram disebut metode difusi agar. Metode difusi agar yang digunakan merupakan metode disc diffusion (test Kirby dan Bauer), metode tersebut tidak rumit dalam pengerjaannya dan efisien serta tidak memerlukan alat dan bahan yang banyak. Prinsip dari metode ini adalah mengukur zona hambatan pertumbuhan bakteri yang terjadi akibat difusi zat yang bersifat sebagai antibakteri pada media padat. Daerah hambatan pertumbuhan bakteri yaitu daerah jernih disekitar cakram (Nugroho, 2012). Berdasarkan masalah yang telah dikemukakan di atas, maka penulis tertarik untuk melakukan penelitian dengan tujuan untuk membandingkan teknik ekstraksi maserasi dengan infusa pada aktivitas daya hambat daun sirih hijau (Piper betle L.) terhadap Escherichia coli.

3 Jurnal Farmasi Malahayati Volume 1 No.1 Januari METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Alat yang digunakan adalah oven, autoklaf, jarum ose, pinset, gunting, cawan petri, beaker glass, erlenmeyer, rak tabung, kapas lidi steril, pipet ukur, bulp, kertas saring, kertas kopi, api spiritus, inkubator, tabung reaksi, disk cakram, corong, termometer, vakum evaporator, batang pengaduk, laminar air flow. Bahan yang digunakan adalah ekstrak etanol daun sirih hijau dengan cara maserasi konsentrasi 100%, ekstrak air daun sirih hijau dengan cara infusa konsentrasi 100%, aquadest steril, biakan bakteri Eschericia coli ATCC Hasil penelitian dianalisis menggunakan analisis statistik uji t. Cara Kerja Pembuatan ekstrak etanol daun sirih hijau dengan cara maserasi (BPOM, 2004) Sampel berupa daun sirih segar dibersihkan dengan air mengalir sebanyak tiga kali, ditiriskan, ditimbang sebanyak 300 gram lalu masukan ke dalam wadah lalu dilarutkan dengan etanol 95% sebanyak 300 ml. Setiap enam jam sekali kali diaduk, kemudian didiamkan selama 24 jam. Kemudian Maserat dipisahkan dengan cara disaring menggunakan kertas saring dan proses diulangi dua kali dengan jenis dan jumlah pelarut yang sama, lalu semua maserat dikumpulkan, lalu diuapkan menggunakan vakum evaporator hingga diperoleh ekstrak etanol daun sirih hijau kental. Pembuatan ekstrak air daun sirih hijau dengan cara infusa (Baheramsyah, 2009) Sampel berupa daun sirih hijau segar dibersihkan dengan air mengalir sebanyak tiga kali, ditiriskan pada nampan yang telah dialasi dengan kertas, kemudian dirajang sekitar 1 cm. Lalu sampel ditimbang sebanyak 100 gram. Panaskan air hingga suhu 90 o C dalam beaker glass, kemudian masukan sampel. Penyarian dilakukan selama 15 menit. Sambil sesekali diaduk, lalu saring selagi panas melalui kain flanel sehingga diperoleh konsentrasi ekstrak air daun sirih hijau 100%. Penentu zona hambat ekstrak daun sirih (Kusumawati, 2008) Celupkan kapas lidi steril dalam biakan mikroorganisme. Sebar mikroorganisme pada seluruh permukaan lempeng agar. Untuk mendapatkan pertumbuhan yang merata, gores secara mendatar, kemudian putar lempengan 90 o dan goresan kedua dan ketiga putar lempengan 45 o. Biarkan mengering sampai lima menit. Penelitian ini menggunakan metode difusi cakram dengan menggunakan disc cakram yang direndam dengan larutan uji ekstrak air dan etanol 100%. Kertas cakram yang telah direndam dalam larutan uji ekstrak air dan etanol 100% kemudian diambil dengan pinset steril dan diletakan diatas pulasan pada media agar. Sebagai kontrol negatif digunakan kertas cakram yang direndam dalam aquadest steril dan etanol 95%. Sebagai kontrol positif digunakan antibiotik tetrasiklin 30 mcg. Diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Diamati ada atau tidaknya zona hambatan terbentuk disekitar kertas cakram. HASIL DAN PEMBAHASAN Setelah dilakukan pengujian aktivitas daya hambat ekstrak maserasi dan infusa daun sirih hijau (Piper betle L.) dengan konsentrasi 100% A, B, C, D dan E yang dilakukan dengan pengulangan tiga kali terhadap Escherichia coli. Didapat hasil yaitu berbentuk zona hambat disekitar kertas cakram, didapatkan hasil berikut:

4 22 Jurnal Farmasi Malahayati Volume 1 No.1 Januari 2018 Tabel 1. Hasil Pengamatan Diameter Zona Hambatan Ekstraksi Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) dengan Metode Maserasi Konsentrasi 100% Sampel Pengulangan Diameter Zona Diameter Rata Rata Hambatan (mm) (mm) A B C D E 1 8,19 9,00 9,00 9,20 8,88 8,85 2 9,86 9,00 10,26 9,03 10,63 10,28 3 8,95 9,50 9,50 9,50 10,26 9,54 Jumlah (mm) 28,67 Diameter Rata Rata (mm) 9,56 Tabel 2. Hasil Pengamatan Diameter Zona Hambatan Ekstraksi Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) dengan Metode Infusa Konsentrasi 100% Sampel Pengulangan Diameter Zona Diameter Rata Rata Hambatan (mm) (mm) A B C D E 1 9,11 9,11 9,11 8,98 8,98 9, ,30 9,72 9,72 9,18 8,40 9,50 3 9,27 8,27 9,34 10,30 8,45 9,12 Jumlah (mm) 27,68 Diameter Rata Rata (mm) 9,23 Tabel 3. Kontrol No. Kontrol 1. Tetrasiklin ( + ) 2. Aquadest steril ( - ) 3. Etanol 95% ( - ) Tabel 4. Hasil Uji Statistik Diameter 16,54 mm 6 mm 7,75 mm Hasil T Hitung T Tabel 0,79 2,132 Pada penelitian ini menggunakan metode disc diffusion (test Kirby dan Bauer), metode tersebut tidak rumit dalam pengerjaannya dan efisien serta tidak memerlukan alat dan bahan yang banyak. Pemilihan media agar ini juga dilakukan dengan alasan pengujian dengan prinsip perhitungan zona hambatan serta menggunakan kertas cakram. Pemilihan media Muller Hinton Agar (MHA) dalam penelitian ini karena media tersebut telah direkomendasikan oleh Foods and Drugs Administration (FDA) dan World Health Organization (WHO) untuk tes antibakteri(acumedia, 2011). Berdasarkan sifat kimia tanin yaitu larut dalam etanol maka cara pengambilan zat aktif tersebut menggunakan teknik maserasi. Teknik maserasi juga disebut perendaman sampel dengan pelarut tanpa pemanasan. Pada proses perendaman sampel daun sirih hijau (Piper betle L.) dalam pelarut etanol dengan waktu tertentu sehingga senyawa dalam sampel larut dalam pelarut tersebut dan proses maserasi dibantu dengan pengadukan. Pengadukan tersebut bertujuan untuk mencapai waktu ekstraksi yang lebih singkat. Kemudian dilakukan proses evaporasi untuk menguapkan pelarut etanol sehingga ekstrak dapat terpisah dengan pelarutnya. Sedangkan teknik infusa atau perebusan dengan suhu 90 o C selama 15 menit. Karena berdasarkan sifat tanin yang umumnya larut dalam air, kelarutannya akan meningkat apabila dilarutkan dalam air panas.

5 Jurnal Farmasi Malahayati Volume 1 No.1 Januari Pengujian ini menggunakan antibiotik tetrasiklin sebagai kontrol positif karena menurut Edberg dkk (1986) tetrasiklin bermanfaat untuk mencegah diare yang diperkirakan disebabkan oleh Escherichia coli. Sedangkan kontrol negatifnya menggunakan aquadest steril dan etanol 95%, karena aquadest steril digunakan sebagai pelarut pada pembuatan infusa daun sirih hijau (Piper betle L.), sedangkan etanol 95% digunakan untuk pelarut pembuatan maserasi daun sirih hijau (Piper betle L). Hasil pengujian antibakteri ekstrak air dan ekstrak etanol daun sirih hijau (Piper betle L.) terhadap bakteri Escherichia coli dilakukan dengan pengulangan tiga kali, didapat hasil diameter hambatan rata-rata ekstrak air teknik infusa adalah 9,23 mm dan ekstrak etanol teknik maserasi yaitu 9,56 mm. Ekstrak tumbuh tumbuhan dapat dikelompokan berdasarkan diameter penghambatan yang dihasilkan menjadi tiga kategori yaitu tinggi ( > 11 mm ), sedang ( > 6 - <11 mm) dan rendah (< 6 mm) (6). Dari hasil yang diperoleh maka ekstrak sirih hijau dapat digolongkan ke dalam bahan yang mempunyai kemampuan menghambat sedang. Kemudian hasil diameter hambatan tersebut dibandingkan menggunakan uji t. Kriteria pengujian sebagai yaitu: H 0 diterima apabila t hitung < t tabel H 1 diterima apabila t hitung > t tabel H 0 = teknik ekstraksi maserasi dan infusa tidak terdapat perbedaan signifikan dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli. H 1 = teknik ekstraksi maserasi dan infusa berbeda signifikan dalam coli. Untuk membuat keputusan apakah hipotesa terbukti atau tidak, maka harga t hitung tersebut dibandingkan dengan t tabel. Untuk melihat harga t tabel maka didasarkan pada derajat kebebasan (dk) = 4 dengan taraf kesalahan 5 % maka harga t tabel adalah 2,132. Dari data tersebut maka dapat disimpulkan bahwa H 0 diterima dan H 1 ditolak karena t hitung < t tabel yaitu 0,79 < 2,132. Jadi teknik ekstraksi maserasi dan infusa tidak terdapat perbedaan yang signifikan dalam coli. Hal tersebut disebabkan karena pembuatan ekstrak air dengan infusa secara tertutup agar air dan zat aktif dari daun sirih hijau tidak menguap. Serta sifat kimia tanin yang akan terurai menjadi pyrogallol dan pyrocatechol apabila suhunya 98,89 o C 101,67 o C (Hermawan, 2007). Pyrogallol dan pyrocatechol merupakan hasil peruraian glikosida tanin yang dapat digunakan sebagai antibakteri dengan adanya gugus OH (Riwidikdo, 2012). Saat melakukan infusa menggunakan suhu 90 o C, suhu tersebut sudah mendekati 98,89 o C 101,67 o C tetapi tidak berpengaruh karena pyrogallol dan pyrocatechol juga berfungsi sebagai antibakteri. Sedangkan pada teknik maserasi dilakukan perendaman menggunakan etanol, karena sifat kimia tanin larut dalam pelarut organik seperti etanol. Tanin juga memiliki daya antibakteri dengan cara tanin akan berikatan dengan dinding sel bakteri sehingga akan menginaktifkan kemampuan menempel bakteri (Sujarweni, 2014), mempresipitasi protein karena tanin mempunyai efek sama dengan senyawa fenolik, inaktivasi enzim karena dapat menghambat metabolisme bakteri, serta Inaktivasi fungsi materi genetik sehingga sel bakteri tidak dapat berkembang (Ajizah, 2004). Penghambatan pertumbuhan bakteri Escherichia coli diduga disebabkan oleh mekanisme tersebut. Sehingga teknik ekstraksi maserasi dan infusa tidak terdapat perbedaan yang signifikan dalam coli. Pada awalnya penulis menduga teknik ekstraksi maserasi daun sirih hijau (Piper betle L.) berbeda signifikan dengan teknik ekstraksi infusa dalam coli. Berdasarkan penelitian sebelumnya, ekstrak daun sirih hijau

6 24 Jurnal Farmasi Malahayati Volume 1 No.1 Januari 2018 diperoleh menggunakan teknik ekstraksi maserasi. Penelitian Suliantari dkk (2008) tentang aktivitas antibakteri ekstrak daun sirih hijau (Piper betle L.) terhadap bakteri Escherichia coli menggunakan pelarut air, etanol serta etil asetat dengan penentuan Minimum Inhibitory Concentration (MIC) mendapatkan hasil bahwa ekstrak dengan pelarut etanol mempunyai kemampuan menghambat tertinggi yaitu 14 mm. Sedangkan infusa diduga menghasilkan zona hambatan yang lebih kecil, karena teknik infusa yaitu pemanasan menggunakan pelarut air, menyebabkan kemungkinan zat aktif yang tersari tidak sempurna (Sulihandari, 2013). Sehingga penulis menduga teknik ekstraksi maserasi daun sirih hijau (Piper betle L.) berbeda signifikan dengan teknik ekstraksi infusa dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli. KESIMPULAN Ekstrak daun sirih hijau (Piper betle L.) dengan teknik ekstraksi dan infusa dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli, masing masing dengan diameter zona hambatan 9,56 mm dan 9,23 mm. Dari hasil perhitungan uji t diperoleh t hitung < t tabel yaitu 0,79 <2,132. Sehingga hipotesa yang diperoleh H 0 diterima dan H 1 ditolak, artinya teknik ekstraksi maserasi dan infusa sama atau tidak terdapat perbedaan yang signifikan dalam coli. Ekstrak daun sirih hijau (Piper betle L.) mampu menghambat Escherichia coli, sehingga dapat digunakan sebagai pengobatan diare yang disebabkan oleh Escherichia coli dengan teknik infusa atau maserasi. DAFTAR PUSTAKA Acumedia Mueller Hinton Agar (7101). PI 7101 Rev 3 June Diakses pada 22 Agustus Ajizah, Aulia Sensitivitas Salmonella typhimurium Terhadap Ekastrak Daun Psidium Guajava L. Program Studi Pendidikan Biologi. FKIP Universitas Lambung Mangkurat. Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia. BPOM RI. Jakarta. Baheramsyah Tanaman Obat di Sekitar Rumah Kita. Lampung Herba Center. Lampung. Edberg, S.C. A.B. Stephen Antibiotika dan Infeksi. Penerbit Buku Kedokteran. Jakarta. Hermawan, Anang Pengaruh Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L.) Terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan Metode Difusi Disk. Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas Airlangga. Surabaya. Ismarani Potensi Senyawa Tanin dalam Menunjang Produksi Ramah Lingkungan Vol 3 No 2. Jurnal Agribisnis dan Pengembangan Wilayah. Riwidikdo, Handoko Statistik Kesehatan. Nuha Medika. Yogyakarta. Sulistyawati, Dewi. M. Sri Uji Aktivitas Anti Jamur Infusa Daun Jambu Mete (Anacardium occidentale, L) Terhadap Candida albicans Vol 2 No 1. Fakultas Biologi. Universitas Setia Budi. Solo.