III. Metode Penelitian A. Waktu dan Tempat Penelitian kelimpahan populasi dan pola sebaran kerang Donax variabilis di laksanakan mulai bulan Juni

Transkripsi

1 III. Metode Penelitian A. Waktu dan Tempat Penelitian kelimpahan populasi dan pola sebaran kerang Donax variabilis di laksanakan mulai bulan Juni sampai bulan Agustus 2013 di pulau Jefman Kabupaten Raja Ampat (Gambar 2). Penentuan stasiun pengambilan sampel dilakukan setelah survei lokasi. Pengambilan sampel dilakukan pada saat surut yaitu, pada dua stasiun, setiap stasiun ada lima plot dengan ukuran (1 x 1) m 2 disetiap titik yang ditentukan, jarak antara plot yaitu 50 m. Penelitian farmakologi dari kerang Donax variabilis dilaksanakan pada bulan Maret hingga bulan Juni 2013 di Laboratorium UPT Diponegoro Semarang. 14

2 Gambar 2. Peta pulau Jefman B. Alat dan Bahan 1. Alat Adapun alat yang digunakan dalam penelitian kelimpahan populasi dan pola sebaran kerang Donax variabilis adalah kamera, kantong plastik, pena, kertas, tali, meteran. Kemudian metode pengumpulan datanya yaitu menghitung langsung jumlah sampel yang didapatkan pada masing-masing plot, dipungut dengan menggunakan tangan. Alat-alat yang 15

3 digunakan untuk uji farmakologi dari kerang Donax variabilis adalah pisau, talenan, timbangan digital dan kertas label. Alatalat untuk ekstraksi sampel antara lain timbangan digital, gelas ukur, labu erlenmeyer, sudip kaca, kertas label, corong kaca, nyilon mesh, pipet tetes, kertas saring whatman, aluminium foil dan kapas steril. Alat-alat untuk evaporasi ekstrak antara lain vacuum rotary evaporator dan botol steril. Alat-alat untuk uji aktivitas antibakteri antara lain tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet tetes, pipet mikro, bulp, autoklaf, jarum ose, bunsen, inkubator, vorteks, cawan petri, paper disc dan plastik wrapping. 2. Bahan Bahan yang digunakan sebagai sampel adalah kerang Donax variabilis yang diambil dari tepi pantai pulau Jefman kabupaten Raja Ampat. Bahan untuk ekstraksi adalah pelarut teknis (heksana, etil asetat dan metanol). Bahan untuk uji aktivitas antibakteri adalah, media MHA (Mueller Hinton Agar), bakteri uji (Escherichia coli dan Staphylococcus aureus), akuades, korek api, spiritus dan alkohol 70%. Sedangkan bahan untuk analisis fitokimia antara lain aquades, serbuk magnesium, HCl, amil alkohol, NaOH, Besi (III) klorida (FeCl3),amonia, eter, H2SO4 2N, pereaksi Dragendorff. C. Analisa Data Kelimpahan suatu organisme dalam suatu perairan dapat dinyatakan sebagai jumlah individu persatuan luas atau volume 16

4 Odum (1993) dalam Ridhoet al. (2012). Perhitungan kelimpahan menggunakan rumus (Brower et al., 1990) K = ni A Keterangan : K = Kelimpahan suatu jenis ni = Jumlah individu suatu jenis A = Luas area pengukuran ( m 2 ) Pola sebaran kerang darah dihitung menggunakan indeks penyebaran (Morisita 1987 dalam Brower et al., 1990) yaitu : Id = n X2 n N(N 1) Keterangan : Id N n xi 2 = Indeks penyebaran Morisita = Jumlah total individu = Jumlah petakan = Penjumlahan kuadrat individu pertakan ke- i Hasil Indeks Morisita dikelompokkan menjadi tiga kategori. Apabila nilai Id < 1 maka penyebaran bersifat merata, apabila nilai Id 1 maka penyebaran bersifat acak dan apabila nilai Id > 1 maka penyebara bersifat mengelompok. 17

5 D. Prosedur Uji Aktivitas Antibakteri Sampel kerang yang digunakan adalah kerang Donax variabilis diambil dari pantai pulau Jefman Kabupaten Raja Ampat. Sampel kerang dibersihkan dengan air laut yang sudah steril, kemudian daging kerang Donax variabilis ditempelkan pada media agar yang ada isolate bakteri E. coli dan S. aureus, setelah itu di inkubasi selama 2 x 24 jam pada temperatur 30 0 C (Isnansetyo & Triyanto, 2007). Aktifitas antibakteri dinyatakan positif apabila terbentuk zona hambat berupa zona terang di sekeliling paper disk, sedangkan negatif jika tidak ada zona hambat disekeliling paper disk (Pratama, 2005). E. PersiapanSampeluntukUjiFitokimia/Zookimia Sebelum kerang Donax variabilis di uji Fitokimianya, pertama-tama kerangnya dibersihkan dengan air laut yang sudah steril, setelah itu kerangnya dikeluarkan dari cangkangnya lalu dikeringkan kemudian dihaluskan, jaringan kerang dikeringkan dengan metode kering angin, kemudian dihaluskan dengan cara diblender, setelah itu direndam menggunakan pelarut metanol.setelah itu baru diuji fitokimia F. Prosedur Uji Fitokimia Senyawa pada Donax variabilis yang diuji meliputi saponin, flavanoid, kuinon, alkaloid, fenolik, steroid,dan triterpenoid. 1. Uji Saponin 18

6 Serbuk/ ekstrak/ jaringan sampel ditimbang sebanyak 5 gr, ditambah air aquades 100 ml, kemudian dididihkan selama 5 menit setelah itu disaring untuk memisahkan filtrat dan residu, dalam keadaan panas 10 ml filtrat di kocok kuat-kuat secara vertikal selama 10 detik, maka akan muncul buih pada filtrat jika hasilnya positif. 2. Uji Flavanoid Serbuk/ekstrak/jaringan sampel ditimbang sebanyak 5 gr, tambahkan air aquades 100 ml, kemudian didihkan selama 5 menit untuk memisahkan filtrat dan residu, 5 ml filtrat ditambah serbuk magnesium, 1 ml asam klorida (HCl) pekat dan 2 ml amilalkohol, larutan dikocok dengan kuat dan dibiarkan hingga terpisah, terbentuk warna kuning sampai merah pada lapisan amil alkohol pada layer bagian atas jika hasilnya positif. 3. Uji Kuinon Serbuk/ekstrak/jaringan sampel ditimbang sebanyak 5 gr, ditambah air aquades 100 ml, kemudian dididihkan selama 5 menit setelah itu disaring untuk memisahkan filtrat dan residu,5 ml filtrat ditambah dengan larutan Natrium Hidroksida (NaOH) 1M, terbentuk warna kuning jika hasilnya positif. 4. Uji Tanin/Senyawa Fenolik Serbuk/ekstrak/jaringan sampel ditimbang sebanyak 5 gr, ditambah air aquades 100 ml, kemudian dididihkan selama 5 menit setelah itu disaring untuk memisahkan filtrat dan residu, 5 ml filtrat ditambahkan larutan Besi (III) Klorida (FeCl3) 1%, terbentuk warna hijau jika hasilnya positif. 19

7 5. Uji Alkaloid Serbuk/ekstrak/sampel jaringan dilembabkan dengan 5 ml dengan Ammonia 25% kemudian di gerus, ditambahkan kloroform, disaring dan ditambahkan 10 ml larutan organik diekstraksi dengan 2 kali larutan asam klorida (1:10). Sebanyak 5 ml larutan ditambah dengan pereaksi Dragendrof, terbentuk endapan coklat jika hasilnya positif. 6. Uji Steroid dan Triterpenoid Serbuk/ekstrak/sampel sebanyak 5 gr dimaserasi dengan 20 ml eter selama 2 jam setelah itu disaring untuk mendapatkan filtrat, 5 ml filtrat di uapkan sampai kering, 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat (H2SO4) pekat ditambahkan ke filtrat yang telah diuapkan, terbentuk warna merah untuk triterpenoid atau biru untuk steroid jika hasilnya positif. 20