KANDUNGAN KIMIA DAN UJI AKTIVITAS TOKSIK MENGGUNAKAN METODE BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) DARI EKSTRAK DAUN KERSEN (Muntingia calabura)

Transkripsi

1 JURNAL KIMIA DAN PENDIDIKAN KIMIA (JKPK), Vol.1, No.2, Agustus 2016 Program Studi Pendidikan Kimia Universitas Sebelas Maret halaman ISSN ISSN (online) KANDUNGAN KIMIA DAN UJI AKTIVITAS TOKSIK MENGGUNAKAN METODE BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) DARI EKSTRAK DAUN KERSEN (Muntingia calabura) Widiastuti Agustina Eko Setyowati * dan Muhammad Agung Safari Cahyanto Prodi Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Sebelas Maret, Surakarta, Indonesia * Keperluan korespondensi, tel/fax : , widi_greco@yahoo.com Received: August 4, 2016 Accepted: August 15, 2016 Online Published: August 31, 2016 ABSTRAK Penelitian mengenai kandungan kimia dan aktivitas toksik dari ekstrak daun Kersen (Muntingia calabura) telah dilakukan. Ekstraksi daun Kersen (Muntingia calabura) dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut metanol. Esktrak yang dihasilkan diteliti kandungan kimianya dengan uji warna dan dilakukan uji aktivitas toksiknya terhadap udang Artemia salina Leach menggunakan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daun Kersen (Muntingia calabura) mempunyai kandungan senyawa alkaloid, steroid, flavonoid, dan saponin. Dari uji BSLT, diketahui bahwa ekstrak daun Kersen (Muntingia calabura) mempunyai aktivitas toksik dengan nilai LC 50 sebesar 295,76 ppm. Kata kunci : aktivitas toksik, Brine Shrimp Lethality Test, Muntingia calabura ABSTRACT Research on the toxic chemical content and activity of cherry leaf extract (Muntingia calabura) has been performed. Extraction of leaf cherry (Muntingia calabura) was done by maceration using methanol. The chemical contents of the leaf extract was test using color test. its toxic activity was tested against shrimp Artemia salina Leach using BSLT method. The results of the study showed that the cherry leaf extract (Muntingia calabura) contains alkaloids, steroids, flavonoids and saponins compounds. Based on BSLT test, it is known that the cherry leaf extract (Muntingia calabura ) has a toxic activity with LC 50 value of ppm. Keywords : toxic activity, Brine Shrimp Lethality Test, Muntingia calabura PENDAHULUAN Penyakit kanker merupakan penyakit ke-2 terbesar di dunia dan ke-6 terbesar di Indonesia yang menyebabkan kematian. Sampai saat ini obat spesifik untuk menghentikan perkembangan sel kanker belum juga ditemukan. Hal tersebut menjadikan kanker sebagai penyakit yang sangat ditakuti karena sulit disembuhkan. Secara sederhana, kanker berarti pertumbuhan sel-sel tubuh yang tidak terkendali serta kemampuan sel-sel tersebut untuk menyerang jaringan biologis lainnya, baik dengan pertumbuhan langsung pada jaringan yang bersebelahan (invasi) atau dengan migrasi sel ke tempat yang jauh (metastasis) di dalam tubuh [1].Pola hidup yang tidak seimbang dapat 41

2 42 Setyowati dan Cahyanto., Kandungan Kimia Dan Uji Aktivitas Toksik menyebabkan tingginya pertumbuhan penyakit kanker. Berbagai usaha telah dilakukan untuk menanggulangi berbagai penyakit kanker, seperti pembedahan, radioterapi, dan kemoterapi sitostatik. Pengobatan ini dilakukan untuk membunuh sel-sel kanker, namun tidak sedikit usaha tersebut justru menimbulkan efek samping [2], seperti kerontokan pada rambut dan kulit menghitam [3]. Kenyataan ini menuntut perlunya cara alternatif yang aman untuk pengobatan penyakit kanker yaitu dengan menggunakan bahan alami atau yang dikenal sebagai obat tradisional. Kersen (Muntingia calabura) adalah sejenis pohon sekaligus buahnya yang kecil dan manis berwarna merah cerah dan banyak ditemui di daerah tropis. Selama ini beberapa bagian dari tanaman Kersen (Muntingia calabura ) banyak dimanfaatkan oleh masyarakat di daerah tertentu tersebagai obat tradisional, antara lain untuk mengobati asam urat, menyembuhkan diabetes, meredakan gejala flu, mengobati kanker dan menyembuhkan kram perut. Suatu tanaman untuk dapat dijadikan sebagai obat tradisional harus memenuhi standar mutu dari WHO, meliputi standar kualitas, keamanan dan khasiat (Depkes RI, 2002). Ujiaktivitas toksik merupakan salah satu prasyarat suatu tanaman dapat dikembangkan sebagai obat, khususnya sebagai antikanker. Salah satu metode yang digunakan untuk mengetahui aktivitas toksik dari suatu ekstrak atau senyawa bahan alam adalah Brine Shrimp Lethality Test [2].Beberapa kelebihan metode ini adalah mudah, relatif murah, tidak membutuhkan spesialisasi tertentu dalam pelaksanaannya dan memiliki hasil dengan tingkat kepercayaan tinggi (95%) untuk mengamati aktivitas toksik dari suatu senyawa di dalam ekstrak tanaman [4].Aktivitas toksik diketahui dari jumlah kematian larva Artemia salina Leach karena pengaruh ekstrak atau senyawa bahan alam pada konsentrasi yang diberikan [5]. Suatu ekstrak atau senyawa bahan alam yang diketahui memiliki aktivitas toksik melalui metode BSLT (nilai LC 50 < 1000 ppm) dapat dikembangkan lebih lanjut sebagai obat antikanker [6]. Berdasarkan uraian di atas, penelitian untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder pada tanaman kersen (Muntingia calabura) dan uji aktivitas toksiknya perlu dilakukan. Penelitian ini dilakukan pada bagian daun, mengingat pemanfaatan tanaman kersen selama ini masih terbatas pada konsumsi buahnya, sedangkan bagian daun masih belum dimanfaatkan secara maksimal. METODE PENELITIAN Bahan Daun Kersen (Muntingia calabura), Metanol, Aquades, Kloroform, kertas saring, Asam asetat anhidrat, H 2 SO 4 pekat, Reagen wagner, Serbuk Mg, HCl, Amonia, Garam kasar, Fermipan, Udang Artemia salina L. Alat Neraca anlitik, Seperangkat alat destilasi, rotary evaporator, Penjepit, Bunsen, Gelas beaker, Kaca arloji, Corong kaca, Gelas ukur, Erlenmeyer, Pengaduk kaca, Pipet tetes, Tabung reaksi, Lup.

3 JURNAL KIMIA DAN PENDIDIKAN KIMIA (JKPK), Vol. 1, No. 2, Agustus 2016, hal Prosedur Penelitian Pembuatan Ekstrak Daun kersen dikeringkan dengan cara diangin-anginkan, kemudian dihaluskan menggunakan blender sampai menjadi serbuk.sebanyak 200 gram serbuk kering daun Kersen diekstraksi menggunakan pelarut metanol dengan metode maserasi selama 2x24 jam. Filtrat hasil maserasi pertama dan kedua digabungkan dan diuapkan pelarutnya menggunakan Rotary Evaporator pada suhu 60 C hingga berbentuk ekstrak kental. Ekstrak yang dihasilkan selanjutnya digunakan sebagai sampel penelitian. Analisis Fitokimia Uji Steroid Sejumlah sampel dilarutkan dengan kloroform, kemudian ditambah dengan 2 ml asam asetat anhidrat dan ditambahkan 3 tetes H 2 SO 4 pekat.hasil positif apabila terbentuk warna hijau sampai biru. Uji Alkaloid Sejumlah sampel dimasukkan dalam tabung reaksi dan dilarutkan menggunakan ammonia. Ke dalam tabung reaksi ditambahkan 2 ml kloroform, kemudian dilakukan penyaringan. Filtrat yang diperoleh ditambah dengan 3 ml HCl lalu digojog hingga terbentuk 2 lapisan. Lapisan atas diambil, kemudian diuji menggunakan pereaksi wagner. Hasil positif apabila terbentuk endapan coklat muda sampai kuning. kemudian ditambah dengan 4 ml metanol, 10 tetes HCl pekat dan serbuk Mg sebanyak 0,1 g. Campuran tersebut dikocok dan diamati perubahan yang terjadi. Hasil positif apabila adanya perubahan warna merah, kuning atau jingga. Uji Saponin Sejumlah sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambah dengan aquades panas kemudiandisaring dan dikocok.hasil positif apabila terbentuk busa ± 10 menit. Uji Toksisitas Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test Penyiapan larva Artemia salina L Penyiapan larva dilakukan dengan mengambil telur Artemia salina L sebanyak 2 gram. Penetasan dilakukan dengan cara merendam telur tersebut dalam air garam sebanyak 600 ml dan diberi penerangan dengan lampu pijar watt serta diaerasi selama 48 jam. Air garam dibuat dengan cara melarutkan 40 g garam dalam 2 L air kemudian disaring. Penyiapan Larutan Stok Larutan uji dibuat dengan melarutkan sampel ke dalam air garam dengan konsentrasi 1000 ppm, 500 ppm, 100 ppm, 50 ppm, 25 ppm dan 0 ppm. Larutan kontrol (0 ppm) dilakukan tanpa penambahan ekstrak. Uji Flavonoid Sejumlah sampel diambil dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi Uji Toksisitas Larutan uji dengan konsentrasi 1000 ppm, 500 ppm, 100 ppm, 50 ppm, 25

4 44 Setyowati dan Cahyanto., Kandungan Kimia Dan Uji Aktivitas Toksik ppm, dan 0 ppm, masing masing dipipet sebanyak 6 ml dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Ke dalam masing-masing tabung reaksi ditambahkan 10 ekor larva udang Artemia salina L. Selanjutnya lakukan pengamatan selama 24 jam dan dihitung jumlah udang yang mati dalam waktu 24 jam tersebut. Untuk setiap larutan uji, dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali.jumlah total larva Artemia salina L yang digunakan adalah 180 ekor.total kematian diperoleh dengan menjumlahkan larva yang mati pada setiap konsentrasi, sedangkan rata-rata kematian larva diperoleh dengan membagi total kematian larva pada tiap konsentrasi dengan jumlah replikasi yang dilakukan yaitu tiga kali. Aktivitas toksik dinyatakan dalam nilai LC50 yang dihitung dengan analisis probit menggunakan Minitab 15. menggunakan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test). Tabel 1. Hasil Uji Kandungan Kimia Ekstrak Kandungan Kimia Daun Kersen (Muntingia calabura) Hasil Steroid Hujau (+) Alkaloid Endapan coklat (+) Flavonoid Jingga (+) Saponin Terbentuk busa > 10 menit (+) Keterangan (+) jika terbentuk warna hijau sampai biru (+) jika terbentuk endapan coklat muda sampai kuning (+) jika terbentuk warna merah, kuning atau jingga (+) jika terbentuk busa stabil selama ± 10 menit HASIL DAN PEMBAHASAN Maserasi terhadap bagian daun dari tamanan Kersen (muntingia calabura) menghasilkan ekstrak pekat berwarna hitam kehijauan sebanyak 50,93 gram. Hasil analisis fitokimia dengan cara uji warna menggunakan berbagai macam pereaksi menunjukkan bahwa Ekstrak daun Kersen (muntingia calabura) mempunyai kandungan metabolit sekunder berupa alkaloid, steroid, flavonoid, dan saponin (Tabel 1). Keberadaan metabolit sekunder tersebut menunjukkan bahwa daun kersen mempunyai efek farmakologis dan berpotensi untuk dijadikan sebagai bahan obat-obatan. Dengan demikian penelitian dilanjutkan dengan uji aktivitas toksik Brine Shirmp Lethality Test (BSLT) merupakan uji pendahuluan yang mengarah pada uji aktivitas toksik senyawa metabolit sekunder menggunakan larva udang Artemia salina L sebagai hewan uji. Pengujian ini adalah pengujian letalitas yang sederhana dan tidak spesifik untuk aktifitas tumor/kanker, tetapi merupakan indikator toksisitas yang baik dan menunjukkan korelasi yang kuat dengan pengujian antitumor/antikanker yang lainnya. Hasil uji aktivitas toksik menggunakan larva udang Artemia salina L pada ekstrak daun Kersen (Muntingia calabura) dapat dilihat pada Tabel 2.

5 JURNAL KIMIA DAN PENDIDIKAN KIMIA (JKPK), Vol. 1, No. 2, Agustus 2016, hal Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Toksik ekstrak daun Kersen (Muntingia calabura) Hasil analisis probit menggunakan Minitab 15 menunjukkan harga LC 50 dari ekstrak daun Kersen(muntingia calabura) adalah 295,763 ppm. Berdasarkan nilai tersebut, maka dapat dikatakan bahwa ekstrak daun Kersen (muntingia calabura) memiliki aktivitas toksik dan berpotensi untuk dikembangkan lebih lanjut sebagai antikanker. Hubungan antara konsentrasi ekstrak yang diberikan dengan kematian larva udang Artemia salina L. ditunjukkan pada Gambar 1. Gambar 1. Hubungan antara Konsentrasi Ekstrak Daun Kersen (Muntingia calabura) dengan Persentase Kematian Larva Udang Artemia salina L. Gambar 1. menunjukkan bahwa besarnya konsentrasi ekstrak yang diberikan mempengaruhi jumlah kematian larva udang. Dari gambar tersebut dapat diketahui bahwa kenaikan konsentrasi ekstrak daunkersen selalu diikuti dengan kenaikan persentase kematian larva udang Artemia salina L. Semakin besar nilai konsentrasi ekstrak yang diberikan, maka mortalitas pada Artemia salina L. juga semakin besar. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian sebelumnya yang menyebutkan bahwa setiap zat kimia apabila diberikan dengan dosis yang cukup besar akan menimbulkan gejala-gejala yang semakin meningkat [7].

6 46 Setyowati dan Cahyanto., Kandungan Kimia Dan Uji Aktivitas Toksik Aktivitas toksik yang ada pada ekstrak daun Kersen (muntingia calabura) timbul karena kandungan senyawa metabolit sekunder yang dimiliki tanaman tersebut, antara lain alkaloid, flavonoid, steroid, dan saponin. Diantara metabolit sekunder tersebut, flavonoid diperkirakan memiliki peran terbesar, dimana pada kadar tertentu, flavonoid mempunyai tingkat toksisitas akut. Salah satu mekanisme flavonoid sebagai antikanker berkaitan dengan aktivitasnya sebagai sebagai antioksidan yaitu melalui mekanisme pengaktifan jalur apoptosis sel kanker [8]. Selain Flavonoid, metabolit sekunder yang lain juga berperan terhadap timbulnya aktivitas toksik dari ekstrak daun Kersen (muntingia calabura) yaitu dengan bertindak sebagai racun perut.apabila senyawasenyawa tersebut masuk ke dalam tubuh larva, alat pencernaannya akan terganggu dan dapat menyebabkan kematian. Menghambat Proliferasi dan Memacu Apoptosis Sel MFC-7. Majalah Farmasi Indonesia. 19(1) : [2] Sukardiman., R. Abdul dan P.N. Fatma Uji Praskrining Aktivitas Antikanker Ekstrak Eter dan Ekstrak Metanol Marchantia planiloba Stephdengan Metode Uji Kematian Larva Udang dan Profil DensitometriEkstrakAktif.MajalahFarm asiairlangga [3] M Albrecht, W Jiang, J Kumi-Diaka, EP Lansky, LM Gommersall, A Patel, Mansel, R.E., Neeman, I., Geldof, A. A., Campbell, M. J Pomegranate extracts potently suppress proliferation, xenograft growth, and invasion of human prostate cancer cells. Journal of Medicinal Food. 7(3) : KESIMPULAN 1. Ekstrakdaun Kersen (Muntingia calabura) mempunyaik andungan senyawa alkaloid, steroid, flavonoid, dansaponin 2. Uji BSLT menunjukkan bahwa ekstrak daun Kersen (Muntingia calabura) mempunyai aktivitas toksik dengan nilai LC 50 sebesar 295,76 ppm. DAFTAR PUSTAKA [1] Meiyanto, E. S., Susidarti, S. A., Handayani, A. Dan Rahmi, F Ekstrak Etanolik Biji Buah Pinang (Areca catechu L.) Mampu [4] Lenny, S., Zuhra, C. F Isolasi dan Uji Bioaktifitas Kandungan Kimia Pudding Merah dengan Metode Uji Brine Shrimp. Jurnal Komunikasi Penelitian. 17(5) : [5] Silva,T.M., Nascimento,R.J., Batista, M.B.,Agra,M.F.,dan Camara,C.A Brine shrimp bioassay of some species of solanum from northeastern brazil. Revista Brasileirade Farmacognosia. 17(1) :35-38 [6] Meyer,B.N., Ferrigni,N.R., Putnam,J.E., Jacobsen,L.B, Nichols,D.E., dan McLaughlin,J.L Brine Shrimp:A Convenient General Bioassayfor

7 JURNAL KIMIA DAN PENDIDIKAN KIMIA (JKPK), Vol. 1, No. 2, Agustus 2016, hal Active Plant Constituents. Planta Medica,45 (5) : [7] Lu,F.C ToksikologiDasar : Asas, Organ Sasaran, dan Penilaian Resiko. Edisike-2. Terjemahan EdiNugroho. UI: Jakarta. [8] Woo, H. D dan Kim, J Dietary Flavonoid Intake and Risk of Stomach and Colorectal Cancer. World Journal of Gastroenterology. 19(7) :