Maka untuk membuat bufer asetat ph 5,5 sebanyak 100 ml adalah: Larutan asam asetat 0,2 M sebanyak 6,8 ml + 43,2 ml larutan sodium

Transkripsi

1 Lampiran 1. Pembuatan Larutan 1. Larutan bufer asetat ph 5,5 (0,05 M) Larutan stok: A : 0,2 M larutan asam asetat (11,55 ml dalam 1000 ml) B : 0,2 M larutan sodium asetat (16,4 g H302Na atau 27,2 g C2H302Na.3H20 dalam 1000 ml). X ml larutan A + Y ml larutan B, diencerkan sampai 100 ml X(ml) Y(ml) ph 6,8 43,2 5,5 Maka untuk membuat bufer asetat ph 5,5 sebanyak 100 ml adalah: Larutan asam asetat 0,2 M sebanyak 6,8 ml + 43,2 ml larutan sodium asetat 0,2 M. Kemudian ph diukur menggunakan ph meter, ph larutan tepat 5,5. Larutan ditambahkan HCI 1 N bila terlewat basa, tambahkan NaOH 1 N bila terlewat asam. Larutan dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml, tambahkan akuades hingga garis batas, kocok sampai larutan homogen. Konsentrasi bufer asetat ini dalam 100 ml adalah: Asam asetat = -^^^x 0,2 M = 0,0136 M looml Sodium asetat = 1^^^ x 0,2 M = 0,0864 M looml Konsentrasi buferasetat ph 5,5 dalam 100 ml adalah: 0,0136 M +0,0864 M = 0,1 M Jadi untuk membuat bufer asetat ph 5,5 (0,05 M) sebanyak 100 ml adalah: 6,8wZ, ^ larutan asam asetat 0,2 M + 15^27«L^ g laj-ut^n 2 2 sodium asetat 0,2 M. Atur ph larutan 5,5 lalu encerkan hingga 100 ml. 2. Larutan Bufer Sitrat-Phospat ph 6,5 (0,05 M) Larutan stok: A : 0,1 M larutan asam Sitrat (1,921 g dalam 100 ml) B : 0,2 M larutan dinatrium hihrogen phospat (5,365 g dalam 100 ml Na2HP04.7H20 atau 7,17 g Na2HP04.12H2O dalam 100 ml) 39

2 X ml larutan A + Y ml larutan B, diencerkan sampai 100 m X(ml) Y(ml) ph 14,5 35,5 6,5 (Perhitungan untuk mendapatkan konsentrasi bufer yang diinginkan caranya sama dengan poin 1). 3. Larutan standar glukosa 0,01 g glukosa dilarutkan ke dalam labu takar 100 ml dengan bufer asetat ph 5,5 (0,05 M) sampai tanda batas. 4. Larutan reagen Nelson-Somogyi - Reagen A : dilarutkan 1,5 g K-Na-Tartarat, 3 g anhidrat Na2C03, 18 g anhidrat Na2S04 ke dalam 100 ml akuades dengan pemanasan. - Reagen B : dilarutkan 1 g CUSO4.5H2O dan 9 g anhidrat Na2S04ke dalam 50 ml akuades, aduk hingga larut semuanya dan teteskan 1-2 tetes H2SO4 pekat. - Reagen Nelson-somogyi : Larutan reagen A dan Reagen B dicampurkan dengan perbandingan 4:1. 5. Larutan Arsenomolibdat 13,27 g ammonium molibdat tetrahidrat dilarutkan dalam 200 ml akuades, ditambahkan 10,5 ml H2SO4 pekat 1,5 g disodium hidrogen arsenat dilarutkan dalam 12,5 ml akuades. Larutan ini dituangkan ke dalam larutan molibdat, lalu diencerkan hingga 250 ml. Setelah bercampur baik, larutan tuangkan ini ke dalam botol coklat yang telah dibungkus dengan aluminium foil (larutan tidak boleh terkena sinar tampak). Jika ada inkubator, inkubasi larutan ini pada suhu 37 C selama 24 jam sampai 48 jam. Bila tidak ada inkubator, simpan pada suhu kamar sampai 72 jam. Setelah itu simpan larutan ini ke dalam lemari es tanpa memindahkannya dari dari botol coklat. Dalam keadaan ini arsenomolibdat dapat disimpan untuk waktu yang lama. 6. Reagen Lowrey (Reagen C) Reagen A : Dibuat 200 ml Na2C03 2 % dalam 0,1 NaOH Reagen B : Dibuat 0,5 % CuS04.5 H2O dalam 1% Natrium Kalium Tartarat Reagen C : Campurkan 50 ml reagen A dengan 1ml reagen B 3^7

3 ^ampiran 2. Perhitungan akti vitas enzim >tandar ierat glukosa yang ditimbang: 0,0013 gr /olume buffer: 13 ml Consentrasi glukosa standar : 0,0001 gr/ml= 0,1 mg/ml rabung Konsentrasi A T B SI S S S KURVA STANDAR y = 2.2x A -Linear (A) KONSENTRASI Jadi, Persamaan Y= 2,2 x 39

4 ^ktivitas crude ekstrak setelah mikropor [AMUR TNC52 TABUNG A T Konsentrasi (mg/ml) Ul U U K K Kl K Tabung uji rrata-rata = 91 % \ rata-rata = :rata-rata = ± Tabung control T rata-rata = 98.5 % A rata-rata = Crata-rata = 0.003± QJI Ul 0,0506= 2,2X X= 0,023; C 1=0,023 mg/ml U2 0,0362 = 2,2x X = 0,0165; C2= 0,0165 mg/ml U3 0,0362 = 2,2x X = 0,0165; C3= 0,0165 mg/ml KONTROL +K1 C +K1= 0 +K2 C +K2= 0 40

5 -Kl 0,0132 = 2,2x X = 0,006; C -Kl= 0,006 mg/ml -K2 0,0132 = 2,2x X = 0,006; C -K2= 0,006 mg/ml AKTIVITAS ENZIM TNC 52 SETELAH MIKROPOR AE.Ul.K rata-rata = mg/ml mg/ml = X 10-^ mg/ml= ag/ml AE.U2.K rata-rata = mg/ml mg/ml = X 10'^ mg/ml= 0.005ug/ml AE.U3.K rata-rata = mg/ml mg/ml = X 10"^ mg/ml= 0.005^g/ml Aktivitas enzim rata-rata = ug/ml ug/ml ug/ml 3 = fimoli JAMUR TNJ 63 TABUNG A T KONSENTRASI(mg/ml) Ul U U K K Kl K

6 Tabung uji Tabung control r rata-rata = % T rata-rata = % A. rata-rata = A rata-rata = C rata-rata = ± C rata-rata = ± UJI u, 0,075= 2,2x X= ; Ci= 0,0344 mg/ml. U2 0,1427= 2,2x X = 0,0649; 2= 0,0949 mg/ml. U3 0,0655= 2,2x X= 0,0297; 3= 0,0297 mg/ml KONTROL +K, 0,0222 = 2,2 X X = 0,01; Ci = 0,01 mg/ml +K2 C2 = 0,01 mg/ml -K, C=0. -K2 C=

7 5ETELAH ULTRAFILTRASI JAMUR TNC 52 Tabung A T Konsentrasi (mg/ml) Ul U U K K Kl Data menyimpang (buang) -K Tabung uji T rata-rata = % A rata-rata = Crata-rata = ± Tabung control T rata-rata = % A rata-rata = Crata-rata = ± UJI u, 0,1612 = 2,2x X= ; Ci= mg/ml. U2 0,1549 = 2,2x X= ; C2= 0,0704mg/ml U3 0,2218 = 2,2x X= 0,1008; 3= 0,1008mg/ml Kontrol +K1 0,0292= 2,2x X = 0,0133; C +K1= 0,0133 mg/ml 43

8 +K2 0,0132= 2,2x X = 0,006; C +K2= 0,006 mg/ml -K2 0,0706= 2,2x X = 0,0321; C -Kl= 0,0321mg/ml AKTIVITAS ENZIM TNC 52 SETELAH ULTRAFILTRASI AE.Ul.K rata-rata = mg/ml mg/ml = X 10"^ mg/ml= [xg/ml AE.U2.K rata-rata = mg/ml mg/ml 0.25 ml X 1 jamx60 mnit xlsogr/mol = X 10"^ mg/ml= ig/ml AE.U2.K rata-rata = mg/ml mg/ml = X 10-^ mg/ml= ^g/ml Aktivitas enzim rata-rata ^g/ml ug/ml gg/ml = imol± JAMUR TNJ 63 Tabung A T Konsentrasi (mg/ml) Ul U U K Kl K

9 Tabung uji Tabung control T rata-rata = 60 % T rata-rata = % A rata-rata = A rata-rata = C rata-rata = ± C rata-rata = ± UJI u, 0,2147 = 2,2x X= 0,0976; C,= 0,0976 mg/ml. U2 0,2291 = 2,2x X= 0,1041; C2= 0,1041mg/ml. U2 0,2218 = 2,2x X= 0,1008; C3= 0,1008mg/ml KONTROL +K2 0,0223= 2,2x X = 0,0101; C +K2= 0,0101 mg/ml -Kl 0,0223= 2,2x X = 0,0101; C-K1= 0,0101 mg/ml -K2 0,0458= 2,2x X = 0,0208; C -K2= 0,0208 mg/ml AKTIVITAS ENZIM TNJ 63 SETELAH ULTRAFILTRASI AE.Ul.K rata-rata = mg/ml mg/ml = x 10"^ mg/ml= i^g/ml 45

10 AE.U2.K rata-rata = mg/ml mg/ml 0.25 ml X 1 jamx60 mnit xlsogr/mol = x 10-^ mg/ml= ^g/ml AE.U3.K rata-rata = mg/ml mg/ml = X 10-^ mg/ml= ^g/ml Aktivitas enzim rata-rata = ug/ml ug/ml ug/ml = ^mol±