Lampiran 1 Lokasi pengambilan sampel tanah di Pulau Gili Meno, Lombok Utara

Transkripsi

1 LAMPIRAN

2 10 Lampiran 1 Lokasi pengambilan sampel tanah di Pulau Gili Meno, Lombok Utara C E A D B Lokasi Titik Sampling Titik sampling A : Zoraya Pavillion Titik sampling B : Bagen Ville Titik sampling C : Pantai diseberang danau Titik sampling D : Sekitar masjid Titik samping E : Kebun diseberang Electric Centre

3 11 Lampiran 2 Skema metode Bernfeld (1955) Sampel Kontrol Blanko 1 ml EEK 1 ml substrat pati 1% Akuades 1 ml substrat pati 1% Inkubasi pada 40 C 15 1 ml substrat pati 1% Homogenisasi 1 ml EEK Inkubasi pada 40 C 15 Inkubasi pada 40 o C 15 1 ml DNS 1 ml DNS 1 ml DNS Inkubasi pada 100 o C 15 Inkubasi pada 100 o C 15 Homogenisasi Pengukuran absorbansi pada λ 540 nm Pengukuran absorbansi padaa λ 540 nm Inkubasi pada 100 o C 15 Pengukuran absorbansi pada λ 540 nm Keterangan : EEK : Enzim Ekstrak Kasar Komposisi pereaksi Dinitrosalisilat (DNS) terdiri atas: NaOH KNa tartat Na 2 SO 3 (sodium sulfit DNS (asam dinitrosalisilat) Akuades steril 1 g 18,2 g t) 0,05 g 1 g 100 ml Cara membuat DNS : Masukkan sebanyak 1 gram NaOH, 18,2 gram KNa tartat, dan 0,05 gram Na 2 SO 3 ke dalam 100 ml akuades steril kemudian diaduk hingga larut. Kemudian, tambahkan 1 gram DNS bubuk sedikit demi sedikit sambil diaduk hingga rata.

4 12 Lampiran 3 Kurva standar maltosa Absorbansi (λ= 540 nm) 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 y = 1,286x + 0,002 R² = 0, ,2 Konsentrasi (mg/ml) kurva standar maltosa 0,4 0,6 0,8 1 Linear (kurva standar maltosa) Nilai absorbansi blanko digunakan untuk mengurangi nilai absorbansi sampel dan kontrol menjadi nilai absorban sampel dan kontrol terkoreksi. Absorbansi terkoreksi dimasukkan ke dalam kurva standar maltosa sebagai nilai Y untuk memperoleh nilai X (konsentrasi maltosa). y = 1,286x + 0,002 (maltosa) Absorbansi maltosa = (As - Ab) - (Ak - Ab) Keterangan : As = Absorbansi sampel Ab = Absorbansi blanko Ak = Absorbansi kontrol Konsentrasi maltosa (x) = y 0,002 1,286 Aktivitas enzim dihitung sebagai unit nanokatal (nkat) yang menunjukkan jumlah enzim yang dibutuhkan untuk menaikkan laju reaksi 1 nmol/s pada kondisi tertentu. Aktivitas enzim diukur dengan menggunakan rumus sebagai berikut. Aktivitas α-amilase (U/ml) = Konsentrasi maltosa FP 1000 BM t nkat/ml = U/ml x 16,67 Keterangan : FP : faktor pengenceran BM : berat molekul maltosa (360,32 g/mol) t : waktu inkubasi (15 )

5 13 Lampiran 4 Metode pengukuran kadar protein (Bradford 1976) Komposisi pereaksi Bradford (Bradford 1976) lima kali terdiri atas: Coomasie brilliant blue G-250 Ethanol 95% Asam ortofosfatt Akuades 0,025 g 12,5 ml 25 ml 250 ml Cara membuat pereaksi Bradford: Sebanyak 0,025 g Coomasie brilian blue (CBB) G-250 dilarutkan dalam 12,5 ml etanol 95%, lalu ditambahkan 25 ml asam fosfor 85%, kemudian tambahkan akuades sebanyak 250 ml. Campuran dihomogenkn (dikocok kuat) lalu disaring dengan kertas saring dan simpan dalam botol gelap dan suhu rendah. Sebelum digunakan untuk mengukur kadar protein, pereaksi diencerkann dengan akuades (perbandingan 1:4) dan larutan BSA 1 mg/ml diencerkan dengan akuades (perbandingan 1:9). Kurva standar BSA dibuat dengan menambahkan sebanyak 5 ml pereaksi Bradford ke dalam 0,1 ml larutan BSA (bovine serum albumin) dengan konsentrasi 0,00 mg/ml 1,0 mg/ml. selanjutnya campuran tersebut diinkubasi selama 10 pada suhu ruang dan absorbansinya dibaca pada panjang gelombang 595 nm. Sedangkan blanko dibuat dengan mencampurkan 0,1 ml akuades dengan 5 ml pereaksi Bradford, kemudian dikocok dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 595 nm. Sampel yang akan diukur kadar proteinnya diperlakukan sama. Sebanyak 5 ml pereaksi Bradford ditambahkan ke dalam 0,1 ml sampel dan diinkubasi pada suhu ruang selama 10. Selanjutnya absorbansi dibaca pada panjang gelombang 595 nm. Kurva Standar BSA Absorbansi ((λ= 595 nm) 0,5 0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 y = 0,299x + 0,168 R² = 0, ,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 Konsentrasi BSA (mg/ml) standar BSA Rata-rata Linear (standar BSA Rata-rata)

6 14

7 15 Lampiran 5 Ciri-ciri morfologi dan indeks amilolitik (IA) isolat yang berasal dari Pulau Gili Meno, Nusa Tenggara Barat Kode Diameter Diameter Indeks Ciri Koloni No. Isolat Koloni Zona Bening Amilolitik (IA) Warna Elevasi Tepian Bentuk 1 TE 1 1,1 1,4 0,28 Putih Seperti tombol Berombak Keriput 2 TB 5 0,5 0,7 0,4 Putih Seperti tombol Berombak Konsentris 3 TC 7 0,7 1,0 0,43 Putih Seperti kawah Licin Konsentris 4 TC 11 0,1 0,4 0,334 Putih Timbul Tidak beraturan Keriput 5 TA 16 0,55 0,6 0,09 Kuning Seperti tombol Seperti wol Konsentris 6 TA 17 0,5 0,6 0,2 Kuning Cembung Licin Bundar 7 TA 18 0,5 0,6 0,2 Putih Timbul Licin Tidak beraturan 8 TC 19 0,3 0,5 0,667 Putih Timbul Licin Konsentris 9 TC 20 0,5 0,6 0,2 Putih Seperti kawah Licin Keriput 10 TA 23 0,4 0,7 0,75 Putih Timbul Licin Tidak beraturan 11 TA 32 0,5 0,6 0,2 Putih Seperti kawah Licin Bundar 12 TA 33 0,45 0,6 0,334 Putih Timbul Licin Tidak beraturan (menyebar) 13 TA 34 1,0 1,1 0,1 Putih Timbul Berombak Keriput 14 TC 36 0,5 0,9 0,8 Putih Cembung Licin Konsentris 15 TC 40 0,4 0,5 0,25 Putih Tombol Licin Bundar dengan tepian timbul 16 TC 43 0,5 0,7 0,4 Kuning Cembung Licin Bundar 17 TC 48 0,4 0,5 0,25 Putih kekuningan Cembung Licin Bundar 18 TA 50 0,3 0, Putih Timbul Licin Konsentris 19 TA 51 0,3 0, Putih Tombol Licin Bundar 20 TA 52 0,4 0,6 0,5 Putih Cembung Licin Bundar 21 TA 53 0,2 0,3 0,5 Putih Cembung Licin Bundar 22 TA 54 0,4 0, Putih Cembung Licin Bundar 23 TA 55 0,3 0,4 0,334 Putih Cembung Tidak beraturan Tidak beraturan 24 TA 57 0,4 0,5 0,25 Putih kekuningan Cembung Licin Konsentris 14 15

8 15 16 Lampiran 6 Log jumlah sel dan aktivitas amilase TA 52 Waktu (jam) Log Jumlah Sel Kadar Protein Aktivitas Amilase (nkat/ml) 0 7,528 0,169 0, , ,934 0,184 0, , ,134 0,206 0, , ,294 0,169 0, , ,379 0,186 0, , ,495 0,189 0, , ,577 0,182 0,1403 0, ,657 0,249 0, , ,705 0,261 1, , ,743 0,184 0, , ,759 0,122 0, ,24173 Lampiran 7 Log jumlah sel dan aktivitas amilase TC 19 Waktu (jam) Aktivitas Spesifik (nkat/mg) Log Jumlah Sel Kadar Protein Aktivitas Amilase (nkat/ml) 0 8,926 0,127 0, , ,247 0,154 0, , ,435 0,176 0, , ,590 0,145 0, , ,709 0,099 0, , ,799 0,082 1, , ,843 0,072 1, , ,882 0,062 2, , ,920 0,080 3, , ,920 0,124 0, , ,962 0,092 5, ,12809 Aktivitas Spesifik (nkat/mg) Lampiran 8 Aktivitas amilase isolat TA 52 dan TC 19 pada berbagai suhu Suhu ( C) Aktivitas Amilase (nkat/ml) TA 52 TC , , , , , , , , , , , , , ,

9 16 17 Lampiran 9 Aktivitas amilase isolat TA 52 dan TC 19 pada berbagai ph ph Aktivitas Amilase (nkat/ml) TA 52 TC ,0072 0, , , , , , , , , , ,