INSTRUKSI KERJA ALAT MINI TRANSBLOTTER

Transkripsi

1 INSTRUKSI KERJA ALAT MINI TRANSBLOTTER Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya Malang

2 Instruksi Kerja MINI TRANSBLOTTER Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya Kode Dokumen : 000XX Revisi : Tanggal : 01 Oktober 2012 Diajukan oleh : Manajer Riset dan Kerjasama Dr. drg. Nur Permatasari, M.Kes Dikendalikan oleh : Manajer Sumber Daya dan Keuangan Disetujui oleh : Direktur Dr. Ir. Gatot Cipatadi. DESS Dra. Fatchiyah, M.Kes., Ph. D 2

3 INSTRUKSI KERJA ALAT MINI TRANSBLOTTER LABORATORIUM BIOSAINS-UB TUJUAN Instruksi kerja ini adalah penuntun untuk operator dari produk Mini Transblotter dan memberikan informasi yang diperlukan untuk mengoperasikan alat dengan benar dan aman. RUANG LINGKUP Instruksi Kerja ini meliputi semua prosedur penggunaan dan perawatan Mini Transblotter di Laboratorium Biosains UB. PIHAK YANG TERKAIT Pihak-pihak berikut ini bertanggung jawab untuk penggunaan secara benar dan perawatan Mini Transblotter: Staff Laboratorium Biosains, dan peneliti PRINSIP Alat ini digunakan untuk memindahkan protein yang telah dipisahkan berdasarkan berat molekul dari gel poliakrilamid ke membran. DOKUMEN Log penggunaan alat INFORMASI ALAT Jenis Alat : Mini Transblotter Merek : Biorad Kode : Suhu maksimum : 50 C Voltage maksimum : 150V Arus : 90 ma 500 ma Power maksimum : 40 watt CARA KERJA 1. Penyiapan Transfer Buffer 1.1 Siapkan transfer buffer dan simpan pada suhu 4⁰C sampai siap digunakan 1.2 Potong membran sesuai dengan ukuran gel. Rendam gel, membran, filter paper dan filter pads dalam transfer buffer ± menit 3

4 2. Penyiapan Gel Sandwich 2.1 Letakkan cassette pada tempat yang datar dengan posisi bagian berwarna abu-abu berada dibagian bawah 2.2 Letakkan satu fiber pad pada sisi berwarna abu-abu 2.3 Letakkan satu lembar paper filter diatas fiber pad dan hilangkan gelembung udara 2.4 Letakkan gel diatas paper filter dan hilangkan gelembung udara 2.5 Letakkan membran diatas gel dan hilangkan gelembung udara 2.6 Letakkan paper filter diatas membran dan hilangkan gembung udara 2.7 Letakkan fiber pad diatasnya 2.8 Tutup cassette dengan hati-hati supaya gel dan membrane tidak bergeser. Kunci cassette menggunakan kait berwarna putih. 2.9 Masukkan cassette ke dalam alat. 3. Masukkan blue cooling unit yang telah di bekukan dan isi penuh tank dengan transfer buffer 4. Masukkan stirrer untuk mengatur suhu buffer dan distribusi ion dalam tank. Atur kecepatan yang memungkinkan distribusi ion secara merata. 5. Pasang lid, hubungkan plud dengan power supply dan atur tegangan. Standar Buffer Transfer overnight SDS PAGE A. Tris 25 mm ph 8,3; glisin 192 mm dengan atau tanpa methanol 20% dan 0,025-0,1% SDS B. Tris 48 mm ph 9,2; glisin 39 mm dengan atau tanpa methanol 20% dan 0,025-0,1% SDS C. 10 mm NaHCO 3 ; 3 mm NaCO 3 ph 9,9; dan dengan atau tanpa methanol 20% dan 0,025-0,1% SDS DNA atau RNA TAE: 20 mm Tris ph 7,8; 10 mm CH 3 COONa; 0,5 mm EDTA TBE: 50 mm Tris ph 8,3; 50 mm Na 2 O-B 2 O 3 (natrium borat); 1 mm EDTA Native Gel 25 mm Tris ph 8,3; 192 mm glisin; tanpa metanol Buffer A, B atau C Arus 90 ma Arus 100 ma Arus 90 ma Internsitas tinggi Transfer 1 jam Buffer A, B atau C Tegangan 100 V Arus 350 ma Tegangan 80 V Arus 500 ma Tegangan100 V Arus 350 ma 4

5 Isoelectric Focusing, Native gel, Basic Protein, Gel Asam Urea Asam asetat 0,7% Arus 100 ma Tegangan100 V Arus 350 ma 6. Setelah proses selesai, bongkar blotting sandwich dan lepas membran dari susunan sandwich. Bersihkan alat, fiber pads, dan cassette dengan sabun laboratorium serta dibilas dengan aquades. 5

6 Contoh Dokumen LABORATORIUM BIOSAINS UNIVERSITAS BRAWIJAYA LOG PENGGUNAAN ALAT No Hari/Tangg al Nama/Instan si Lama pemakaian Status Pengguna Tandatangan Keterang an S1 S2 S3 laboran mulai selesai pengguna Penanggung jawab 6