KRIOPRESERVASI SEMEN RUSA TIMOR (Cervus timorensis) DALAM GLISEROL

Transkripsi

1 KRIOPRESERVASI SEMEN RUSA TIMOR (Cervus timorensis) DALAM GLISEROL (Cryopreservation of Timor Deer Stag (Cervus timorensis) Semen with Concentrations) W.M.M. NALLEY 1, R. HANDARINI 2, M.R. TOELIHERE 3, T.L. YUSUF 3, B. PURWANTARA 3 dan G. SEMIADI 4 1 Fakultas Peternakan, Universitas Nusa Cendana, Kupang, Nusa Tenggara Timur 2 Jurusan Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Sumatra Utara, Medan 3 Departemen Reproduksi dan kebidanan, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor, Bogor 4 Pusat Penelitian Biologi LIPI, Jl. Ir. H. Juanda 18, Bogor ABSTRACT The objective of research was to study semen quality of Timor Stag (Cervus timorensis) cryopreserved using various glycerol concentrations. Semen was collected using electroejaculator after the stags were anaesthetized with combination of 1 mg ketamin and 2 mg xylasine kg -1 bw. Collected semen was evaluated macro and microscopically. Good quality semen was then diluted using tris glucose egg yolk extender containing 6% (G 6 ), 8% (G 8 ) and 10% (G 10 ) glycerol, each with the concentration of 100 million motile sperm 0,25 ml -1. Semen was loaded in 0,25 ml minitub straw, equilibrated for four hours at the temperature of 5 o C. After equilibration, semen was evaluated for sperm motility, live sperm, plasma membrane integrity (MI) and intact acrosomal cap (IA). Semen was than frozen at liquid nitrogen vapor (-130 o C) for ten minutes and stored in liquid nitrogen container (-196 o C). Thawing of the frozen semen was evaluated at 37 o C for 30 second. Results of this research showed that the percentages of sperm motility for G 10 were higher than G 8 and G 6 (55%; 51% and 34%) respectively, but not significantly different between G 10 and G 8, but were both significantly different with G6 (P>0,05). Percentages of live sperm, MI and IA under G 10 (70%, 55% and 56%) were significantly higher than G 6 (47%, 36% and 40%), but not significantly different with G 8 (63%, 49% and 50%). In conclusion, concentrations of 10% and 8% of glycerol in tris egg yolk extender were the best doses in maintaining frozen semen quality of Timor stag. Key words: Glycerol concentration, frozen semen, Timor stag ABSTRAK Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kualitas semen beku rusa Timor (Cervus timorensis) dalam berbagai konsentrasi gliserol. Koleksi semen dilakukan pada tiga ekor rusa timor jantan menggunakan elektroejakulator. Sebelumnya hewan dianastesi menggunakan kombinasi 1 mg ketamin dan 2 mg xylasine kg -1 bb. Semen yang diperoleh dievaluasi secara makroskopis dan mikroskopis. Semen yang memenuhi syarat kualitasnya kemudian diencerkan menggunakan bahan pengencer tris glukosa dan kuning telur dengan konsentrasi gliserol 6% (G 6 ), 8% (G 8 ) dan 10% (G 10 ). Semen dikemas dalam straw minitub (0,25 ml) dengan dosis 100 juta sel spermatozoa motil, selanjutnya diekuilibrasi pada temperatur 5 o C selama empat jam. Pascaekuilibrasi dilakukan pengamatan semen terhadap motilitas, persen spermatozoa hidup, membran plasma utuh (MPU) dan tudung akrosom utuh (TAU). Selanjutnya semen dibekukan pada uap nitrogen cair (- 130 o C) selama 10 menit, kemudian disimpan dalam kontainer nitrogen cair (-196 o C). Untuk pengujian kualitas semen pascapembekuan dilakukan thawing di dalam air hangat (37 o C) selama 30 detik. Hasil penelitian menunjukkan bahwa persentase motilitas pascathawing G 10 lebih tinggi dibandingkan G 8 dan G 6 masing-masing (55%; 51% dan 34%), namun tidak berbeda nyata antara G 10 dan G 8 tetapi keduanya berbeda nyata dengan G 6 (P>0,05). Hasil yang sama diperoleh pada persentase hidup, MPU dan TAU. Persentase hidup, MPU dan TAU pada perlakuan G 10 (70%, 55% dan 56%) nyata lebih tinggi dibandingkan G 6 (47%, 36% dan 40%) tetapi tidak berbeda nyata dengan perlakuan G 8 (63%, 49% dan 50%). Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa konsentrasi gliserol 10% dan 8% di dalam pengencer tris kuning telur merupakan dosis yang terbaik dalam mempertahankan kualitas semen beku rusa Timor. Kata kunci: Konsentrasi gliserol, semen beku, rusa 443

2 PENDAHULUAN Rusa Timor (Cervus timorensis) merupakan rusa endemik Indonesia yang telah menjadi tulang punggung pengembangan peternakan rusa di luar negeri. Di Indonesia rusa Timor ini mulai mendapat perhatian untuk dikembangbiakkan menjadi komoditi andalan sumber protein hewani (SANTOSO, 2002; SEMIADI et al., 1998; SUSMIANTO, 2002) namun demikian informasi mengenai kemampuan reproduksi rusa Timor masih sangat terbatas. Pelaksanaan program Inseminasi Buatan (IB) pada rusa baru mulai dikembangkan sekitar awal tahun 1980an dengan tingkat keberhasilan yang belum memuaskan. Beberapa faktor yang dapat menyebabkan kegagalan pelaksanaan IB adalah kualitas semen beku yang digunakan, waktu dan teknik pelaksanaan IB. Kualitas semen setelah diawetkan merupakan faktor penting yang harus diketahui untuk tujuan penerapan IB. Disamping itu rusa mempunyai kekhasan yaitu mempunyai siklus ranggah (ENGLISH, 1984) dimana kondisi ini akan mempengaruhi kualitas semen yang dihasilkan, hanya pada tahap ranggah keras mempunyai kualitas yang optimal (HANDARINI et al., 2003). Pengawetan semen rusa Timor telah dilakukan dengan hasil yang bervariasi (DRADJAT, 1994; 2000; MASYUD dan TAURIN, 2000). Dengan berhasilnya proses kriopreservasi semen beku maka ketersediaan semen rusa akan kontinyu tanpa memperhatikan siklus ranggah. Semen yang dibekukan akan mengalami penurunan kualitas yang disebabkan oleh suhu yang rendah (sekitar -196 o C). Pada kondisi tersebut akan terbentuk kristal es dan perubahan konsentrasi elektrolit yang akan menyebabkan terjadinya kerusakan pada sel. Untuk meminimalkan pengaruh tersebut maka di dalam pengencer perlu ditambahkan krioprotektan. Krioprotektan adalah zat kimia non elektrolit yang berfungsi mereduksi pengaruh letal sel yang dipaparkan saat pembekuan sehingga akan mengurangi efek larutan maupun pembentukan kristal es ekstra atau intraseluler sehingga dapat menjaga viabilitas sel setelah dikriopreservasi. Krioprotektan yang umum ditambahkan pada proses pembekuan semen mamalia adalah gliserol. Gliserol termasuk jenis krioprotektan intraseluler dan dapat dimetabolisir menjadi fruktosa sekaligus merupakan sumber karbohidrat yang secara bebas dapat menembus membran sel karena berat molekulnya yang kecil (SUPRIATNA dan PASARIBU, 1992; HOLT, 2000). Berdasarkan mekanisme kerjanya gliserol berfungsi dalam meminimalkan kerusakan sel yang terjadi selama proses pembekuan dengan cara mengurangi jumlah pembentukan kristal es intraseluler pada temperatur yang rendah, selain itu dapat mencegah perubahan tekanan osmotik yang besar sehingga dapat menjadi toksik (SALISBURY et al., 1984; KUMAR et al., 1992). Jumlah dan cara penambahan gliserol pada bahan pengencer bervariasi tergantung species, jenis pengencer dan metode pembekuan yang digunakan. Gliserol akan bersifat toksik pada konsentrasi yang tinggi, sedangkan jika konsentrasi yang digunakan terlalu rendah maka daya protektif dari gliserol akan berkurang (SALISBURY et al., 1984; FAHY, 1986; HAFEZ, 1993). Pada penelitian ini dicoba beberapa konsentrasi gliserol dalam pengencer tris dengan tujuan untuk mengetahui dosis yang optimal pada kriopreservasi semen rusa Timor. Hewan percobaan MATERI DAN METODE Penelitian dilaksanakan di lokasi Penangkaran rusa Pondok Gede Bekasi, Jakarta Timur. Hewan percobaan adalah rusa Timor (Cervus timorensis) yang berasal dari Perum Perhutani Wilayah III KSDA Jonggol. Hewan yang digunakan adalah tiga ekor rusa Timor jantan berumur sekitar tiga sampai lima tahun dengan berat badan kg kondisi tubuh proporsional, kesehatan baik dan tidak cacat, pada tahap ranggah keras yang berbentuk simetris serta mempunyai sepasang testis yang simetris dengan konsistensi kenyal. Rusa ditempatkan pada kandang dengan luasan 5 x 8 m 2, dilengkapi dengan saung (tempat berteduh), tempat makan dan minum serta tempat berkubang. Konstruksi kandang: pagar kawat setinggi dua meter berlantai semen. 444

3 Metode percobaan Penampungan semen dilakukan pada tiga ekor rusa jantan yang terlebih dahulu dianastesi menggunakan kombinasi 1 mg xylazine dan 2 mg ketamin i.m kg -1 berat badan (DRADJAT, 2000). Penampungan semen menggunakan elektroejakulator dengan rangsangan listrik voltase rendah yang ditingkatkan secara gradual sampai maksimal 18 volt. Stimulasi yang diberikan secara berulang dengan interval 5 detik dan istirahat 5 detik (on-off) sampai diperoleh ejakulat. Penampungan semen dilakukan secara reguler dengan interval tiga minggu sekali selama tahap ranggah keras yang diperoleh dari masing-masing jantan yang digunakan sebagai ulangan. Parameter yang diamati adalah pengamatan terhadap karakteristik semen yang dievaluasi secara makroskopis (volume, warna, ph, konsistensi) dan secara mikroskopis (gerakan massa, persentase motilitas, persentase hidup spermatozoa, konsentrasi, abnormalitas, integritas membran plasma (MPU) dan integritas tudung akrosom (TAU)). Semen segar yang memenuhi kriteria semen dengan kualitas baik adalah volume 1 2 ml, motilitas >60% dan konsentrasi > 500 X 10 6 ml -1, gerakan massa ++ atau +++ dengan abnormalitas <15%, akan diencerkan sesuai metode yang digunakan. Semen diencerkan menggunakan pengencer dasar tris (Tabel 1), komposisi pengencer dan perlakuan konsentrasi gliserol (Merck, Germany, cat. K ) yang menjadi bagian dari penelitian adalah: 1). 74% pengencer tris + 20% kuning telur + 6% gliserol (G 6 ). 2). 72% pengencer tris + 20% kuning telur + 8% gliserol (G 8 ). 3). 70% pengencer tris + 20% kuning telur + 10% gliserol (G 10 ). Semen yang telah diencerkan kemudian dikemas di dalam ministraw menggunakan sistem Minitub (0,25 ml) dengan dosis IB 100 juta sel spermatozoa motil per straw, kemudian diekuilibrasi di dalam lemari es dengan suhu 5 o C selama empat jam. Setelah diekuilibrasi semen diperiksa kualitasnya dan jika memenuhi syarat motilitas spermatozoa > 40% dilakukan pembekuan dengan cara meletakkan straw yang berisi semen dangan jarak 10 cm diatas permukaan N 2 cair dengan suhu sekitar 130 o C selama 10 menit, kemudian straw dicelupkan dan disimpan ke dalam N 2 cair ( 196 o C). Pengujian kualitas semen setelah pembekuan dilakukan 24 jam kemudian, dengan cara mencairkan kembali semen beku (thawing) pada air hangat 37 o C selama 30 detik. Peubah yang diamati Peubah yang diamati adalah motilitas spermatozoa secara kualitatif, persentase hidup spermatozoa, persentase MPU dan persentase TAU masing-masing pada saat ekuilibrasi (suhu 5 o C) dan thawing (suhu 37 o C). Penilaian terhadap persentase motilitas adalah spermatozoa yang bergerak progresif ditentukan secara subjektif pada sepuluh lapang pandang yang berbeda. Angka yang diberikan berkisar antara 0% hingga 100% dengan skala 5%. Persentase spermatozoa yang hidup ditentukan dengan menggunakan pewarnaan eosin (TOELIHERE 1985; HAFEZ 1993) dimana akan terlihat spermatozoa hidup ditandai dengan kepala yang berwarna putih, sedangkan yang mati ditandai dengan kepala yang berwarna merah. Persentase spermatozoa Tabel 1. Komposisi pengencer dasar tris(hydrox methylaminomethane) Bahan Jumlah Keterangan Tris (hydroxymethylaminomethane)(g) 3,63 Merck, Germany, cat. K 8382S Asam sitrat-monohidrat (g) 1,99 Merck, Germany, cat K Glukosa (g) 0,50 Merck, Germany, cat. K Akuabidestilataad (ml) 100 Suparcointra, Indonesia Penisilin-G (IU/ml) 1000 Meiji, Japan, cat. APG 0598 J Streptomisin sulfat (µg/ml) 1000 Meiji, Japan, cat. SSL 1095 A 445

4 yang memiliki membran plasma utuh (MPU) ditentukan dengan menggunakan metode osmotic resistance test (REVELL dan MRODE 1994). Spermatozoa yang memiliki membran plasma utuh ditandai oleh ekor yang melingkar, sedangkan yang rusak ditandai oleh ekor yang lurus apabila semen dipaparkan di dalam larutan hipoosmotik dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 30 menit. Persentase spermatozoa yang memiliki tudung akrosom utuh (TAU), ditandai oleh spermatozoa yang tidak menyerap warna biru dan terbentuknya cincin yang membagi kepala sperma bagian atas dan bagian bawah sedangkan tudung akrosom yang tidak utuh ditandai dengan adanya penyerapan warna biru setelah spermatozoa dipaparkan dalam pewarnaan triphan blue hasil modifikasi metode NAGY et al. (1999; 2001), seluruh parameter dievaluasi menggunakan mikroskop berlampu listrik pembesaran 400 kali dengan spermatozoa yang dihitung minimal 200 sel. Analisis data Data dianalisis dengan rancangan acak lengkap dengan tiga perlakuan dan jumlah penampungan semen sebanyak enam kali sebagai ulangan. Perbedaan antar perlakuan diuji dengan uji beda nyata terkecil (STEEL dan TORRIE, 1993). HASIL DAN PEMBAHASAN Karakteristik semen segar Evaluasi terhadap kualitas semen yang diperoleh selama penelitian sangat diperlukan karena merupakan petunjuk dasar bagi karakteristik semen rusa Timor serta kelayakan untuk diproses lebih lanjut sebagai semen cair maupun semen beku karena tidak semua pejantan yang berada pada tahap ranggah keras dapat memiliki kualitas ejakulat yang baik. Rataan hasil penelitian kualitas semen rusa Timor menunjukkan karakteristik yang cukup baik (Tabel 2). Hasil penelitian menunjukkan bahwa nilai kualitas semen yang diperoleh (volume, konsentrasi dan motilitas) sangat bervariasi jika dibandingkan dengan literatur yang ada pada rusa Timor. MASYUD dan TAURIN (1997; 2000) melaporkan bahwa volume semen rusa Timor dari empat ejakulat diperoleh rata-rata 1,4 ml (1,2 1,7 ml), warna putih hingga kuning dengan konsistensi sedang dan ph 7,7 (7,67-7,79). Evaluasi semen secara mikroskopis diperoleh hasil gerakan massa 3,25 (1 4), motilitas 70,95 % (66,7 76,7% ) dengan konsentrasi 942,5 juta sperma ml -1 ( ml -1 ). Sedangkan NALLEY et al. (2003) melaporkan bahwa rataan volume semen 1,70 ± 0,84 ml, ph 7,30 ± 0,39, warna krem/kuning dengan konsistensi sedang/kental, gerakan massa ++/+++, motilitas 75,36 ± 4,07, konsentrasi 1143,21 ± 118,49 juta sperma ml -1, spermatozoa hidup 83,14 ± 5,21%, abnormalitas 7,26 ± 2,84%, MPU 75,93 ± 5,46 % dan TAU 79,03 ± 4,47%. Selain itu terdapat perbedaan kualitas semen pada tahap ranggah keras dan velvet dengan motilitas 72,19 vs 42,05%, konsentrasi 1031,57 vs 276,26 juta sperma ml -1, dengan spermatozoa hidup 80,21 vs 43,80%, abnormalitas 7,97 vs 39,57% MPU 71,73 vs 33,89% dan TAU 75,5 vs 37,34% (HANDARINI et al., 2003). Perbedaan hasil kualitas semen dengan nilai tinggi yang dihasilkan mungkin disebabkan karena pejantan yang digunakan berada pada puncak tahap ranggah keras. Hal ini sesuai dengan penelitian ASHER et al. (1993) dalam SEMIADI et al. (1998) dimana mutu semen pada rusa merah yang dikoleksi dengan menggunakan Tabel 2. Karakteristik semen segar rusa Timor (Cervus timorensis) Parameter Jumlah Makroskopis Volume 2,28 ± 0,55 ph 7,1 ± 0,3 Warna Kuning Konsistensi Kental Mikroskopis Gerakan massa ++/+++ Motilitas (%) 77,5 ± 3,33 Konsentrasi (x 10 6 ) 1207,44 ± 128,44 Spermatozoa Hidup (%) 84,98 ± 3,08 Abnormalitas (%) 4,56 ± 2,85 Tudung akrosom utuh, 77,14 ± 4,42 TAU (%) Membran plasma utuh, 80,66 ± 3,45 MPU (%) 446

5 metode yang sama di awal dan di akhir fase ranggah keras cenderung mempunyai tingkat motilitas yang rendah. Disamping itu faktor umur pejantan yang digunakan juga sangat berpengaruh terhadap kualitas semen yang dihasilkan. Pengaruh penambahan gliserol terhadap kualitas semen beku Seluruh parameter yang diamati sampai pada tahap pascaekulibrasi perbedaan konsentrasi gliserol tidak ada pengaruh yang nyata (P>0,05) terhadap persentase motilitas, persen hidup, MPU dan TAU (Tabel 3). Namun pada tahap pascathawing perlakuan G 8 dan G 10 memberikan hasil yang nyata lebih baik dari pada G 6 (P<0,05). Motilitas spermatozoa pascathawing perlakuan G 10 mempunyai persentase tertinggi (55 ± 5,00%) dibandingkan dengan G 8 (51 ± 4,17%) dan G 6 (34 ± 9,17%). Secara statistik G 10 tidak berbeda nyata dengan G 8 (P>0,5), tetapi keduanya berbeda nyata dengan G 6 (P<0,05). Spermatozoa hidup tertinggi pada G 10 ; G 8 ; G 6 dengan masing-masing 70±2,89; 63 ± 4,17; 47 ± 9,33%. Rataan penurunan motilitas (10%) dan spermatozoa hidup (7%) dari semen segar ke pascaekulibrasi. Angka ini lebih kecil dibandingkan dari pascaekuilibrasi ke pascathawing masing-masing sebesar 24 dan 18%. Persentase MPU pascathawing tertinggi diperoleh pada perlakuan G 10 dengan persentase masing-masing adalah 55 ± 6,17% (G 10 ); 49 ± 3,50% (G 8 ) dan 36 ± 8,67% (G 6 ). Demikian juga dengan persentase TAU pascathawing G 10 ; G 8 ; G 6 masing-masing adalah 56 ± 5,83%; 50 ± 4,33% dan 40 ± 6,89%. Rataan penurunan MPU (9%) dan TAU (10%) dari semen segar ke pascaekuilibrasi lebih kecil dibandingkan rataan penurunan dari pascaekuilibrasi ke pascathawing adalah 21% (MPU) dan 22% (TAU). Pada perlakuan G 6 persentase motilitas lebih rendah dibandingkan dengan perlakuan lainnya, kemungkinan disebabkan karena kurangnya konsentrasi gliserol sehingga tidak mampu melindungi semua spermatozoa pada saat pembekuan. Pada perlakuan G 8 dan G 10 ternyata lebih mampu melindungi spermatozoa terhadap pengaruh pembekuan. Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian MONFORT et al., (1993) dimana konsentrasi gliserol yang digunakan juga 8%. Peneliti lain bahkan menggunakan konsentrasi gliserol hingga 14% (ASHER, 1992 dalam SEMIADI, 1998). Konsentrasi gliserol 8% juga cocok digunakan pada pembekuan semen kambing (SINGH et al., 1995). Dilaporkan juga konsentrasi gliserol 7% yang dikombinasi Tabel 3. Rataan kualitas semen beku rusa Timor (Cervus timorensis) Parameter Motilitas (%) Spermatozoa Hidup (%) MPU (%) TAU (%) Tahap pengolahan semen Perlakuan G 6 G 8 G 10 Awal 78 ± 3,33 a 78 ± 3,33 a 78 ± 3,33 a Ekulibrasi 68 ± 3,89 a 68 ± 4,17 a 68 ± 4,17 a Pascathawing 34 ± 9,17 a 51 ± 4,17 b 55 ± 5,00 b Awal 85 ± 3,00 a 85 ± 3,00 a 85 ± 3,00 a Ekulibrasi 77 ± 4,33 a 77 ± 3,78 a 80 ± 3,56 a Pascathawing 47 ± 9,33 a 63 ± 4,17 b 70 ± 2,89 b Awal 77 ± 4,11 a 77 ± 4,11 a 77 ± 4,11 a Ekulibrasi 67 ± 5,78 a 68 ± 5,17 a 69 ± 4,33 a Pascathawing 36 ± 8,67 a 49 ± 3,50 b 55 ± 6,17 b Awal 81 ± 3,44 a 81 ± 3,44 a 81 ± 3,44 a Ekulibrasi 68 ± 5,78 a 72 ± 4,33 a 72 ± 2,83 a Pascathawing 40 ± 6,89 a 50 ± 4,33 b 56 ± 5,83 b 447

6 dengan DMSO 1%, memberikan perlindungan lebih baik dibandingkan dengan kombinasi konsentrasi gliserol 3% dan DMSO 5% serta gliserol 6% dan 1% DMSO. Dilihat dari cara kerja gliserol dalam hal melindungi sel pada proses pembekuan dengan mengurangi pengaruh stres tekanan osmotik (HAMMERSTEDT dan GRAHAM, 1992) yang umumnya berhubungan dengan konsentrasi garam dalam sel (MAZUR et al., 1970 dalam WATSON, 1995). Pembekuan akan merangsang terjadinya dehidrasi, perubahan fase thermotropic ke lyotropic dari membran phospholipid, peningkatan konsentrasi larutan dan pembentukan kristal es intra dan ekstra seluler (PARK dan GRAHAM, 1992). Ada dua stres yang dialami spermatozoa pada saat pembekuan dan thawing. Yang pertama berhubungan dengan perubahan temperatur dan kedua diakibatkan oleh pembentukan kristal es (WATSON, 1995). Besarnya penurunan motilitas, spermatozoa hidup, MPU dan TAU pada saat pembekuan dibandingkan dengan pascaekuilibrasi, hal ini disebabkan karena pada saat ekuilibrasi (5 o C) penurunan temperatur yang dialami oleh spermatozoa (cold shock) tidak sedrastis pada saat proses pembekuan ( 130 o C). Hal ini sesuai dengan pendapat WATSON, 1981 dalam (WATSON, 1995) dimana kerusakan tertinggi terjadi pada temperatur 2 12 o C dan 0 o C ke 10 o C. Persentase akrosom intak akan turun secara gradual pada saat ekuilibrasi dan pada saat proses pembekuan, hal ini dapat dicegah dengan penambahan gula kedalam bahan pengecer seperti laktosa dan sukrosa (YILDIZ et al., 1999). Cold shock dapat menyebabkan kerusakan yang permanen terhadap motilitas, metabolisma dan level ATP pelepasan cytochrome dan lipoprotein dari dalam sel yang dapat menyebabkan pembengkakan pada bagian ujung terminal dari akrosom dan mereduksi densitas dari isi akrosom (PARRISH, 1987 dalam ANZAR dan GRAHAM 1995). KESIMPULAN Dari penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa: 1. Penurunan kualitas semen terbesar terjadi pada tahap pascaekuilibrasi ke pascathawing (18% 24%), sedangkan penurunan dari tahap awal ke tahap pascaekuilibrasi hanya cukup kecil 7% 10%. 2. Konsentrasi 10% dan 8% gliserol nyata lebih baik mempertahankan kualitas semen Rusa Timor setelah proses pembekuan dibandingkan dengan konsentrasi gliserol 6%. UCAPAN TERIMA KASIH Penulis mengucapkan terima kasih kepada Direktorat Penelitian dan Pengabdian pada Masyarakat Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi DEPDIKNAS (HIBAH PASCA), Perum Perhutani Wilayah III KSDA Jonggol dan Penangkaran rusa MOLEK. Pondok Gede Bekasi dalam bantuan dana, hewan percobaan, tempat dan fasilitas dalam penelitian sehingga penelitian ini dapat terlaksana dan berjalan dengan baik. DAFTAR PUSTAKA ANZAR, M. and E.F. GRAHAM Role of sperm motility and acrosome integrity in the filtration of bovine semen. Theriogenology DRADJAT, A.S Pengembangan teknik perkembangbiakan buatan pada rusa tropik. Department of Animal Healt, The University of Sydney, PMB3 Camden 2570, Australia. DRADJAT, A.S Penerapan teknologi inseminasi buatan, embrio transfer dan invitro fertilisasi pada rusa Indonesia. Laporan Riset Unggulan Terpadu V Bidang Teknologi Perlindungan Lingkungan. pp: ENGLISH, A.W Red deer in Australia: Their biology and management. Proced. 22: FAHY, G.M The relevance of crioprotectant toxity to cryobiology. Cryobiology, 23: HAFEZ, E.S.E Anatomy of Male Reproduction. In: Reproduction in Farm Animals. Lea and Febiger. Philadelphia. HAMMERSEDT, R.H. and J.K. GRAHAM Cryopreservation of poultri sperm: the enigma of glicerol. Cryobiology 29: HANDARINI, R., W.M.M. NALLEY, B. PURWANTARA dan M.R. TOELIHERE Kualitas semen rusa Timor (Cervus timorensis) berdasarkan 448

7 tahap ranggah. Abstrak. Seminar Nasional dan Gelar Produk Bidang Ilmu Hayati: Pengelolaan dan Pemanfaatan Keanekaragaman Hayati dalam Rangka Pembangunan Berkelanjutan. Pusat Studi Ilmu Hayati, Instrtut Pertanian Bogor, Bogor. HOLT, M.V Basic aspects of frozen storage of semen. Anim. Reprod. Sci. 62: KUMAR, S. K.L. SAHNI and G. MOOHAN Effect of different levels of glycerols and egg yolk on freezing and storred of buffalo semen in milk, tris and sodium citrate buffer. Buffalo J. 2: MASYUD, B. dan M.B. TAURIN, Karakteristik dan pengawetan sperma rusa Timor (Cervus timorensis). Media Konservasi. 6(3): MONFORT, S.L., G.W. ASHER, D.E. WILDT, T.C. WOOD, M.C. SCHIEWE, L.R. WILLIAMSON, M. BUSH and W.L. RALL Succesful intrauterine insemination of Eld s deer (Cervus eldi thamin) with frozen-thawed spermatozoa. J. Reprod. And Fertility 99: NAGY SZ, G HAZAS, A BALI PAPP, J IVANCSICS, F SZASZ, F SZASZ JR, A KOVACS and R H FOOTE Evaluation of sperm tail membrane integrity by light microscopy. Theriogenology. 52: NAGY S.Z., A. KOVACS, T. ZUBOR, Z. ZOMBORSZKY, J. TOTH and P. Horn Evaluation of membrane integrity of frozen/thawed deer spermatozoa: Short communication. Acta Veterinaria Hungarica. (49). NALLEY, W.M.M., R. HANDARINI., T.L. YUSUF., B. PURWANTARA., M.R. TOELIHERE dan G. SEMIADI Perkembangan kajian biologi peproduksi pada rusa Timor (Cervus timorensis). Lokakarya Pengembangan Rusa: Pendayagunaan rusa sebagai sumber protein hewani alternatif. Dalam Rangka Diversifikasi Usaha Ternak. Jakarta. PARK, J.E. and J.K. GRAHAM. Effects of cryopreservation procedures on sperm membranes. Theriogenology 1992; 38: REVELL, S.G. and R.A. MRODE An osmotic resistance test for bovine semen. Anim. Reprod. Sci. 36: SALISBURY, G.W., N.L.VANDEMARK dan R. DJANUAR Fisiologi Reproduksi dan Inseminasi Buatan pada Sapi. Gajah Mada University Press. SANTOSO, W.B Potensi penangkaran rusa dalam rangka peningkatan nilai guna pemanfaatan rusa. Makalah. Workshop Potensi Pengembangan Ternak Rusa. Ditjen Bina Produksi Peternakan. Jakarta. 10 September SEMIADI, G., P.D. MUIR, T.N. BARRY dan G. ASHER Produksi semen rusa sambar jantan dan tanggapan terhadap penyerentakan berahi rusa sambar betina. Media Veteriner V (3): SINGH, M.P., A.K. SINHA and B.K. SINGH Effect of cryoprotectans on certain seminal attributes and on the fertility of buck spermatozoa. Theriogenology SUPRIATNA, I. dan F.H. PASARIBU In vitro fertilisasi, transfer embrio dan pembekuan embrio. Dept. Pendidikan dan Kebudayaan Ditjen Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas Bioteknologi, Institut Pertanian Bogor, Bogor. SUSMIANTO, A Pemanfaatan satwa liar berpotensi menurut peraturan perundangan. Makalah. Workshop Potensi Pengembangan Ternak Rusa. Ditjen Bina Produksi Peternakan. Jakarta. 10 September STEEL, R.G.D. dan J.H. TORRIE Prinsip dan Prosedur Statistika, Suatu pendekatan Biometrik. Terjemahan BAMBANG SUMANTRI. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. TOELIHERE, M.R Inseminasi Buatan pada Ternak. Angkasa, Bandung. WATSON, P.F Recent Developments and consepts in the cryopreservation of spermatozoa and the assessment of their postthawing fungtion. Reprod. Fertil. Dev. 7: YILDIZ, C., A. KAYA, M. AKSOY and T. TEKELI Influence of sugar supplementation of the extender on motility, viability and acrosomal integrity of dog spermatozoa during freezing. Theriogenology

8 DISKUSI Pertanyaan: 1. Berapa konsentrasi spermatozoa yang digunakan dalam penelitian? 2. Pada pemeriksaan pascaequilibrasi, apabila motilitas kurang dari 70% apakah pembekuan masih dilanjutkan? Berhubungan dengan metodologinya. 3. Mengapa G10 motilitasnya lebih tinggi? 4. Adakah perlakuan khusus untuk rusa pejantan sehingga bisa dikoleksi semennya? 5. Apa tipe dan cara ejakulator yang digunakan dalam penampungan semen rusa? 6. Bagaimana reaksi rusa jantan apakah terjadi ereksi dan tanda-tanda ejakulasi saat penampungan? Jawaban: 1. Konsentrasi spermatozoa yang digunakan adalah 100 juta/cc. 2. Pembekuan masih tetap dilanjutkan meskipun motilitas pascaequilibrasi di bawah 70%. Jadi tidak ada kesalahan dalam metodologinya. 3. Motilitas G10 lebih tinggi karena gliserol pada konsentrasi ini mampu mengeliminir efek letal selama pembekun disamping memberikan sumbangan energi. 4. Agar rusa dapat dikoleksi semennya rusa harus dipelihara secara intensif, biasakan dengan pekerja dan semen harus ditampung secara reguler. 5. Elektroejakulator yang digunakan adalah elektroejakulator yang biasa digunakan untuk sapi, 18 volt dengan selang rangsangan 5 menit on-of. 6. Pada awalnya rusa memang mengalami kesakitan, tetapi setelah satu atau dua kali tidak lagi karena telah terbiasa dan biasanya rusa ereksi saat ditampung. Penampungan dilakukan pagi hari jam