KUALITAS SPERMA HASIL PEMISAHAN YANG DIBEKUKAN MENGGUNAKAN RAK DINAMIS DAN STATIS

Transkripsi

1 KUALITAS SPERMA HASIL PEMISAHAN YANG DIBEKUKAN MENGGUNAKAN RAK DINAMIS DAN STATIS (The Quality of Sperm After Sexing Frozen in Dynamic and Static Racks) EKAYANTI M. KAIIN 1, SANDY SYAHBAN GINTING 2, MOCH. DJUARSAWIDJAJA 2, SYAHRUDDIN SAID 1 dan BAHARUDDIN TAPPA 1 1 Puslit Bioteknologi LIPI, Jl. Raya Bogor Km. 46, Cibinong Fakultas Pertanian, Universitas Djuanda, Jl. Tol Ciawi 1 PO Box 35, Bogor ABSTRACT The aim of this study is to evaluate the quality of sperm after sexing and frozen in two different kinds of racks. Factorial randomized design (2x3) with five replications was used to evaluate the result. A male Hungarian bull was used as sperm donor. Semen of the bull was collected using an artificial vagina (AV) and was evaluated macroscopically and microscopically. Separation of sperm was done using a column albumin methods, with 5% BSA for the upper fraction and 10% BSA for the lower fraction. Sperm after sexing was diluted using Tris buffer solution containing 20% egg yolk and 8% glycerol (v/v). Sperm after sexing in the 0.25 ml straw were frozen in 10 cm above liquid nitrogen using dynamic and static for 10 minutes. Thawing of straw was done in warm water (37 C) for 30 seconds. Higher percentage of sperm motility was seen at sperm frozen with dynamic racks, for control group (47%) and separated spermatozoa (X=44.1% and Y=43.7%) than static racks (control = 39.9%; X=35.4% and Y=36.8%). The same result was seen also in percentage of live sperm (control = 51.2%; X = 40.9% and Y = 47.3%) for dynamic racks, than static racks (control = 39.3%; X = 37.8% and Y = 42.7%). The abnormality of sperm was decreased (control = 13.2%; X = 13.2% and Y = 11%) in dynamic racks compared to the static racks (control = 15.8%; X = 15.3% and Y = 12%), respectively. It was concluded that dynamic racks used at freezing of spermatozoa increased the quality of frozen sperm after sexing. Key Words: Sperm After Sexing, Freezing, Dynamic and Static Racks, Thawing ABSTRAK Telah dilakukan penelitian untuk menguji kualitas sperma hasil pemisahan yang dibekukan dengan 2 jenis rak yang berbeda. Metode penelitian yang digunakan adalah rancangan acak lengkap faktorial 2x3 dengan 5 ulangan. Menggunakan seekor sapi jantan Hongarian yang ditampung semennya dengan menggunakan vagina buatan, setelah itu semen dievaluasi. Pemisahan spermatozoa dilakukan dengan metode albumin bertingkat menggunakan media BSA 5% untuk fraksi atas dan BSA 10% untuk fraksi bawah. Pengenceran sperma hasil pemisahan menggunakan tris yang mengandung 20% kuning telur dan gliserol 8% (v/v). Pembekuan sperma hasil pemisahan dalam straw 0,25 ml dilakukan dengan menggunakan rak dinamis dan statis dengan ketinggian 10 cm di atas permukaan uap nitrogen cair selama 10 menit. Thawing dilakukan dengan media air hangat (37 o C) dalam waktu 30 detik. Penggunaan rak dinamis pada proses pembekuan meningkatkan persentase motilitas sperma tanpa pemisahan (kontrol) dan hasil pemisahan secara nyata, yaitu sperma kontrol sebesar (47%), sperma X (44,1%) dan sperma Y (43,7%) dibandingkan penggunaan rak statis dengan persentase motilitas sperma kontrol (39,9%), sperma X (35,4%) dan sperma Y (36,8%). Rak dinamis juga cenderung meningkatkan persentase hidup pada sperma kontrol sebesar (51,2%), sperma X (40,9%) dan sperma Y (47,3) dibandingkan menggunakan rak statis pada sperma kontrol (39,3), sperma X (37,8%) dan sperma Y (42,7%). Rak dinamis cenderung menurunkan persentase abnormalitas pada sperma kontrol (13,2%), sperma X (13,2%) dan sperma Y (11%) dibandingkan rak statis dengan sperma kontrol (15,8%), sperma X (15,3%) dan sperma Y (12%). Dapat disimpulkan bahwa penggunaan rak dinamis meningkatkan kualitas sperma hasil pemisahan yang dibekukan. Kata Kunci: Sperma Hasil Pemisahan, Pembekuan, Rak Dinamis dan Statis, Thawing 105

2 PENDAHULUAN Berdasarkan data statistik peternakan 2003, Indonesia telah mengimpor susu lebih dari 577,5 ton/tahun dan mengimpor daging lebih dari 1.908,8 ton/ tahun. Untuk menyikapi hal tersebut perlu dilakukan upaya pemanfaatan bioteknologi reproduksi peternakan melalui teknik Inseminasi Buatan (IB) yang merupakan teknologi tepat guna dalam upaya peningkatan produksi dan mutu genetik ternak. Pemisahan spermatozoa adalah upaya untuk mengubah perolehan spermatozoa yang berkromosom jenis X atau Y dengan metode tertentu, sehingga berubah dari proporsi normal (rasio alamiah), 50 persen banding 50 persen (HENDRI, 1992). Beberapa hasil penelitian sebelumnya telah dilaporkan bahwa rata-rata kandungan spermatozoa X dan Y dalam semen sapi adalah 49,5 persen dan 50,5 persen (GARNER et al., 1983). Pemisahan sperma X diarahkan pada peternakan sapi perah untuk memperoleh lebih banyak anak sapi betina, sedangkan pemisahan sperma Y diarahkan pada peternakan sapi potong untuk memperoleh anak sapi jantan. Salah satu metode pemisahan spermatozoa berdasarkan perbedaan motilitas spermatozoa X dan Y adalah metode kolom albumin (HAFEZ, 1987). Selama proses pembekuan tidak dapat dihindari terjadinya pengurangan nitrogen cair yang akan mengubah jarak straw dengan permukaan nitrogen cair. Hal ini mengakibatkan perubahan temperatur pada straw. Oleh karena itu, dalam penelitian ini dilakukan perlakuan untuk membandingkan penggunaan rak statis dan dinamis terhadap kualitas sperma hasil pemisahan. Belum banyak penelitian mengenai pengaruh penggunaan rak dinamis di dalam pembekuan spermatozoa, sehingga data yang diperoleh pada penelitian ini sangat diperlukan untuk mendapatkan hasil yang optimum. Penelitian yang dilakukan oleh SAID et al.(2004), yang memperlakukan straw dengan ketinggian 10 cm di atas permukaan nitrogen cair dan menggunakan rak dinamis pada proses pembekuan sperma terhadap kualitas semen beku setelah thawing pada sapi peranakan Ongole (PO) menghasilkan motilitas sperma sebesar 43%, hasil ini layak digunakan IB karena masih diatas nilai minimal (40%) yang ditentukan Badan Standarisasi Nasional tahun 1998 (ANOMIMUS, 2000). Menurut KAIIN et al. (2004) perlakuan ketinggian straw dari permukaan nitrogen cair sebesar 10 cm dengan volume nitrogen cair delapan liter juga menghasilkan motilitas sperma sebesar 43%. Tujuan penelitian ini untuk memperoleh teknik pembekuan sperma hasil pemisahan dan memperoleh straw beku hasil pemisahan yang berkualitas baik dan layak IB. MATERI DAN METODE Bahan dan alat penelitian Penelitian menggunakan semen sapi yang diperoleh secara teratur dari seekor sapi jantan Hongarian berumur ± 3,5 tahun dengan bobot hidup ± 600 kg pakan yang diberikan pada sapi tersebut adalah rumput lapang dan konsentrat serta air minum secara ad libitum. Penampungan dan pemisahan spermatozoa Semen sapi ditampung dengan vagina buatan. Selanjutnya dilakukan evaluasi terhadap semen tersebut secara makroskopis (volume, warna dan bau, ph, konsistensi semen) dan secara mikroskopis (gerakan massa, persentase motilitas, persentase daya hidup, persentase abnormalitas, persentase membran plasma utuh (MPU)). Pemisahan semen dilakukan dengan metode albumin bertingkat dengan media Bovine Serum Albumin, BSA (BSA 5 % untuk fraksi atas dan BSA 10 % untuk fraksi bawah). Semen dengan konsentrasi 300 juta sel per ml didiamkan selama satu jam di atas kolom albumin bertingkat, setiap fraksi semen dikoleksi dan ditampung dalam tabung sentrifus, kemudian dicuci dengan menggunakan medium Brackett-Oliphant (BO) lalu sentrifugasi pada kecepatan 1800 rpm selama 10 menit pada suhu o C. Fraksi atas diprediksi sebagai sperma X dan fraksi bawah sebagai sperma Y. Pembekuan dan thawing spermatozoa Straw yang sudah siap diekuilibrasi kemudian dibekukan dengan menggunakan 106

3 metode rak dinamis dan statis. Semen segar (tanpa pemisahan sebagai kontrol) dan semen hasil pemisahan (X atau Y) masing-masing diencerkan dengan pengencer tris yang mengandung 20% kuning telur (v/v), dengan konsentrasi gliserol 8%. Pencampuran dilakukan pada temperatur dingin dengan metode pembekuan menggunakan kaset straw, kemudian diekuilibrasi pada suhu 5 o C selama 2 3 jam dan dibekukan 10 cm di atas uap nitrogen cair selama 10 menit, dengan volume nitrogen cair sebanyak 8 liter. Straw yang berisi 30 juta sel spermatozoa/0,25 ml disimpan dalam tangki nitrogen cair. Rak statis menggunakan rak yang tetap sehingga ketinggian nitrogen cair terhadap permukaan straw dapat berubah karena berkurangnya volume nitrogen cair. Rak dinamis menggunakan rak dengan ketinggian tetap 10 cm terhadap permukaan straw dan mengikuti penurunan volume nitrogen cair. Metode thawing dilakukan setelah proses pembekuan untuk mengevaluasi sperma dengan menggunakan media air hangat (37 o C) selama 30 detik. Parameter yang diamati: persentase motilitas, persentase daya hidup, persentase abnormalitas, persentase membran plasma utuh (MPU). Rancangan penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap Faktorial 2x3 dengan 5 ulangan. Analisis statistik dengan sidik ragam dan untuk mengetahui perbedaan perlakuan Uji Beda Nyata Terkecil (SUDJANA, 1989). HASIL DAN PEMBAHASAN Kualitas semen sapi perah Hongarian yang digunakan dalam penelitian ini ditampilkan pada Tabel 1. Dari penampungan menghasilkan volume rata-rata sebesar 7 ml dengan warna krem dan konsistensi kental s/d agak kental, ph semen 7 serta bau khas semen sapi. Berdasarkan pemeriksaan secara mikroskopis diperoleh bahwa gerakan massa (++ s/d +++) dalam konsentrasi sperma rata-rata juta/ml, persentase motilitas rata-rata 79,6%; persentase hidup rata-rata 77,8%; persentase abnormalitas rata-rata 11,6% dan persentase MPU rata-rata 48,6%. TOELIHERE (1993) menyatakan karakteristik sapi yang baik menghasilkan volume semen 5-8 ml, dengan motilitas 65% serta abnormalitas 15% pada semen segar, sedangkan konsentrasi spermatozoa dalam semen sapi segar berkisar juta/ ml (TOELIHERE, 2001). Adapun perbedaan dapat dipengaruhi oleh bangsa/jenis sapi, umur, ukuran badan, tingkatan makanan, frekuensi penampungan, dan berbagai faktor lain. Tabel 1. Karakteristik semen segar sapi Hongarian Pengamatan Parameter Nilai Makroskopis Volume (ml) 7 ± 2 Warna Konsistensi ph 7 Krem Kental agak kental Bau Khas Mikroskopis Gerakan massa ++ s/d +++ Konsentrasi ± 225 (juta/ml) Motilitas (%) 79,6 ± 6 Hidup (%) 77,8 ± 7,5 Abnormalitas (%) 11,6 ± 5,1 MPU (%) 48,6 ± 9,6 +++ = gerakan cepat sekali seperti awan berputar (sangat baik) ++ = gerakan cepat tidak berawan (baik) Penelitian yang telah dilakukan oleh AFFANDHY (2003), yang melakukan pengamatan pada dua jenis sapi potong yakni; sapi PO menghasilkan volume 3,5 ml dengan persentase motilitas sperma sebesar 84,5%, persentase sperma hidup sebesar 95,7% serta persentase abnormalitas 2,8%, sapi persilangan Simmental menghasilkan volume 5,8 ml dengan persentase motilitas 80,7%, persentase sperma hidup sebesar 79,8% serta persentase abnormalitas 6,8%. Penelitian yang serupa dilakukan oleh RASYID et al. (2003) dengan melakukan pengamatan pada sapi PO dan persilangan Simmental. Volume semen yang dihasilkan oleh sapi PO adalah 1,8 ml dengan persentase motilitas sperma sebesar 70%, persentase sperma hidup sebesar 70% serta persentase abnormalitas 7,0%, sedangkan sapi persilangan Simmental menghasilkan volume 107

4 2,3 ml dengan persentase motilitas sperma sebesar 78%, persentase sperma hidup sebesar 91,5% serta persentase abnormalitas 4,5%. Penelitian Affandhy pada sapi PO dan Simmental menghasilkan volume yang rendah, seperti halnya sapi PO dan Simmental yang diteliti RASYID et al. (2003). Pada penelitian ini rata-rata volume sperma lebih tinggi. Pengamatan terhadap persentase motilitas sperma hasil pemisahan pasca thawing yang dibekukan dengan dua kondisi rak yang berbeda diperlihatkan pada Tabel 2. Tabel 2. Persentase motilitas sperma hasil pemisahan pasca thawing setelah dibekukan pada dua rak pembekuan. Statis 39,9 a 35,4 a 36,8 a Dinamis 47 b 44,1 b 43,7 b Huruf (a,b) yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata dengan Uji statistik ANOVA kemudian diuji lanjut Beda Nyata Terkecil (BNT) menunjukkan berbeda nyata (P<0,05) Berdasarkan Tabel 2 persentase motilitas pada rak dinamis menunjukkan peningkatan motilitas yang berbeda nyata (P<0,05) dibandingkan penggunaan rak statis. Nilai rataan penggunaan rak dinamis dapat meningkat persentase motilitas baik pada sperma kontrol (47%), sperma X (44,1%) dan sperma Y (43,7%) dibandingkan nilai rataan penggunaan rak statis dengan persentase sperma kontrol (39,9%), sperma X (35,4%) dan sperma Y (36,8%). Setelah dibandingkan antara rak statis dengan dinamis pada sperma hasil pemisahan terlihat jelas perbedaannya, bahwa penggunaan rak dinamis meningkatkan kualitas motilitas sperma hasil pemisahan. Pada penelitian ini tinggi rendahnya motilitas diduga dipengaruhi oleh penggunaan rak pada proses pembekuan sperma. Nitrogen cair mudah menguap secara cepat, sehingga rak statis dapat terjadi perubahan ketinggian antara permukaan nitrogen dengan straw sejauh 1 cm. Perubahan temperatur yang ekstrim secara cepat dapat mematikan sperma yang berada di dalam straw, sehingga hal ini berdampak buruk terhadap sperma hasil pemisahan yang mempunyai kualitas lebih rendah dibandingkan tanpa pemisahan. Pada rak dinamis tidak terjadi perubahan ketinggian maupun temperatur karena rak tersebut mengikuti penguapan nitrogen cair sehingga ketinggian antara permukaan nitrogen cair dengan straw tetap konstan. Penelitian ini memperlihatkan perbaikan teknik pembekuan dari sebelumnya oleh AFIATI et al. (2003) yang juga menggunakan gliserol 8% menghasilkan persentase motilitas sperma tanpa pemisahan sebesar 40%, sperma X sebesar 30%, sperma Y sebesar 27%. Penelitian lain yang telah dilakukan oleh KAIIN et al.(2004) mendapatkan persentase motilitas sebesar 43% pada ketinggian 10 cm dengan menggunakan rak statis. Motilitas sebesar 22% diperoleh menggunakan rak statis sedangkan rak dinamis diperoleh motilitas sebesar 43% (SAID et al., 2004). BALKIS (2002) yang melakukan perbandingan kualitas semen beku produksi Balai Inseminasi Buatan (BIB) Lembang menghasilkan motilitas sebesar 29% dan BIB Singosari sebesar 32,85%. SUMARLIN (2003) melakukan thawing pada air bertemperatur 37 o C dengan waktu 30 detik terhadap semen beku produksi BIB Lembang mendapatkan motilitas sebesar 50%. Ciri utama spermatozoa adalah motilitas yang digunakan sebagai patokan paling sederhana dalam penilaian kualitas semen (TOELIHERE, 1985). Pada penelitian ini tinggi rendahnya motilitas diduga dipengaruhi oleh penggunaan rak pada proses pembekuan sperma. Nitrogen cair mudah menguap secara cepat, sehingga rak statis dapat terjadi perubahan ketinggian antara permukaan nitrogen dengan straw sejauh 1 cm ketika proses ekuilibrasi selama 10 menit. Perubahan temperatur yang ekstrim secara cepat dapat mematikan sperma yang berada di dalam straw, sehingga hal ini berdampak buruk terhadap sperma hasil pemisahan yang mempunyai kualitas lebih rendah dibandingkan tanpa pemisahan. Pada rak dinamis tidak terjadi perubahan ketinggian maupun temperatur karena rak tersebut mengikuti penguapan nitrogen cair sehingga ketinggian antara permukaan nitrogen cair dengan straw tetap konstan. Fluktuasi temperatur meskipun kecil dapat merusak spermatozoa yang sangat rentan dan labil terhadap perubahan temperatur yang sangat ekstrim. Menurut AMBROSE (1999) 108

5 apabila straw terpapar pada temperatur yang ada di sekitar mulut kontainer selama detik dapat menyebabkan kerusakan dan kematian spermatozoa. Pengamatan terhadap persentase hidup sperma hasil pemisahan pasca thawing yang dibekukan dengan dua kondisi rak yang berbeda diperlihatkan pada Tabel 3. Tabel 3. Persentase hidup sperma hasil pemisahan pasca thawing setelah dibekukan pada dua rak pembekuan Statis 39,3 a 37,8 a 42,7 a Dinamis 51,2 a 40,9 a 47,3 a Huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (P>0,05) Hasil ini menunjukkan penggunaan rak dinamis maupun rak statis tidak mempengaruhi persentase hidup sperma. Hasil yang diperoleh menunjukkan persentase hidup sperma yang dibekukan dengan rak dinamis menunjukkan sperma kontrol sebesar 51,2%, sperma X sebesar 40,9%, dan sperma Y sebesar 49,7%, cenderung lebih baik dibandingkan rak statis dengan sperma kontrol sebesar 39,3%, sperma X sebesar 37,8%, sperma Y sebesar 42,7%. Hasil penelitian menggunakan rak dinamis untuk sperma tanpa pemisahan serupa dengan hasil yang diperoleh oleh Sumarlin (2003) dengan persentase hidup sperma pada semen beku yang dithawing pada suhu 37 o C dengan waktu 30 detik yaitu sebesar 51,69%. Penelitian yang telah dilakukan oleh SAID et al. (2004) pada rak statis diperoleh persentase hidup sebesar 19% dan rak dinamis sebesar 39%. Sifat semen beku yang sangat labil mengakibatkan kondisi membran itu sendiri yang memiliki tingkat kerentanan yang cukup tinggi. Selain itu diduga karena pengaruh cold shock ketika proses pembekuan. Proses pembekuan semen akan mengakibatkan kematian spermatozoa mencapai 30% dari jumlah spermatozoa segar atau setelah diencerkan dan kerusakan akibat pengaruh pendinginan (GOLDMAN et al., 1991). Tiga faktor utama penyebab kerusakan sel selama proses kriopreservasi, yaitu (1) kerusakan mekanik akibat pembentukan kristal-kristal es yang dapat mempengaruhi struktur sel pada organel sitoplasma atau pecah karena ekspansi es, (2) adanya dehidrasi dari suspensi media baik intra maupun ekstra seluler sehingga konsentrasi larutan menjadi toksik dan letal, (3) perubahan fisik kimiawi diantaranya prepitasi, denaturasi, koagulasi dari protein, disosiasi ion dan kehilangan sifat-sifat absorbsi atau sifat-sifat pengikatan air (SUPRIATNA dan PASARIBU, 1992). Pengamatan terhadap persentase abnormalitas sperma hasil pemisahan pasca thawing yang dibekukan dengan dua kondisi rak yang berbeda diperlihatkan pada Tabel 4. Tabel 4. Persentase abnormalitas sperma hasil pemisahan pasca thawing setelah dibekukan pada dua rak pembekuan. Statis 15,8 a 15,3 a 12 a Dinamis 13,2 a 13,2 a 11 a Huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (P>0,05) Berdasarkan tabel sidik ragam persentase abnormalitas menunjukkan tidak berbeda nyata (P>0,05) terhadap kedua jenis rak dengan jenis sperma. Hal ini menunjukkan, bahwa kedua faktor tersebut tidak mempengaruhi abnormalitas yang diamati pada penelitian ini. Sperma yang dibekukan menggunakan rak dinamis cenderung mempunyai abnormalitas lebih rendah pada ketiga perlakuan sperma yaitu: sperma kontrol sebesar 13,2%, sperma X sebesar 13,2% dan sperma Y sebesar 11% dibandingkan dengan perlakuan rak statis. Tingkat abnormalitas sperma pada semua perlakuan masih di bawah 20%. HAFEZ dan HAFEZ (2000) sapi dengan spermatozoa melewati 20% menunjukkan adanya infertilitas atau ketidak suburan pejantan tersebut. Pada proses pembekuan menggunakan rak statis abnormalitas sperma sebesar 16% dan rak dinamis sebesar 12% telah diteliti oleh SAID et al. (2004). Pada pengamatan yang dilakukan oleh BALKIS (2002) kualitas semen beku produksi BIB Lembang mempunyai abnormalitas pasca thawing sebesar 28,5% dan BIB Singosari sebesar 15,95%. Berdasarkan 109

6 hasil pengamatan pada penelitian ini terbukti penggunaan rak dinamis dapat menurunkan tingkat abnormalitas pada proses pembekuan sperma. Pengamatan terhadap persentase MPU sperma hasil pemisahan pasca thawing yang dibekukan dengan dua kondisi rak yang berbeda diperlihatkan pada Tabel 5. Tabel 5. Persentase MPU sperma hasil pemisahan pasca thawing setelah dibekukan pada dua rak pembekuan. Statis 40,5 a 34,3 a 33,8 a Dinamis 37,8 a 42,7 a 49,1 a Huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (P>0,05) Berdasarkan tabel sidik ragam persentase MPU menunjukkan tidak berbeda nyata (P>0,05) terhadap kedua jenis rak dengan jenis sperma. Hal ini menunjukkan tidak ada pengaruh terhadap persentase MPU. Penggunaan rak dinamis cenderung meningkatkan persentase MPU pada sperma X sebesar 42,7% dan sperma Y sebesar 49,1% bila dibandingkan dengan kontrol sebesar 37,8%. MPU pada penelitian ini serupa yang diteliti oleh BALKIS (2002) yang memperoleh MPU pada straw produksi BIB Lembang sebesar 40,55% dan BIB Singosari sebesar 54,45%. SUMARLIN (2003) mendapatkan MPU pada straw produksi BIB Lembang sebesar 49,03%. Nilai standar untuk MPU minimal 30% (EVAN dan MAXWELL, 1987). Pada penelitian ini MPU pada straw yang dibekukan dengan rak statis maupun rak dinamis memenuhi standar untuk digunakan IB. Penggunaan rak statis menyebabkan penurunan persentase MPU pada sperma X dan sperma Y dibandingkan kontrol. Diduga hal tersebut terjadi akibat perubahan temperatur dan kualitas sperma X dan Y yang telah dibekukan setelah mengalami penurunan akibat pemisahan. KESIMPULAN Disimpulkan bahwa perlakuan rak dinamis meningkatkan persentase motilitas sperma X dan sperma Y secara signifikan dibandingkan dengan perlakuan rak statis. Sedangkan persentase hidup, abormalitas dan MPU cenderung lebih baik pada perlakuan rak diamis dibandingkan perlakuan rak statis. DAFTAR PUSTAKA Prosesing dan Pembekuan Semen serta Pemanfaatan Semen Beku. Pelatihan Trasfer Embrio dan Prosesing Sperma. Proyek Penelitian Bioteknologi-LIPI. Cibinong Inseminasi Buatan pada Ternak. Angkasa. Bandung. AFFANDHY, L Pengaruh Penambahan Cholesterol dan Kuning Telur di dalam Bahan Pengencer Tris-Sitrat dan Air Kelapa Muda Terhadap Kualitas Semen Cair Sapi Potong. Pros. Seminar Nasional Teknologi Pertanian dan Veteriner. Bogor, September Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm AFIATI, F., M. GUNAWAN, E.M KAIIN dan B. TAPPA Pengaruh Konsentrasi Gliserol pada Proses Pembekuan Terhadap Kualitas Spermatozoa Hasil Pemisahan. Pros. Seminar Nasional Teknologi Pertanian dan Veteriner. Bogor, September Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm AMBROSE, D.J An Overview of Strategies to Improve Reproductive Efficiency-Solving Problems of New Barns and Introducing New Stock. wcd99/table.htm. 12 Januari 2003 ANONIMUS Petunjuk Teknis Pengawasan Mutu Bibit Ternak. Direktorat Pembibitan. Direktorat Jenderal Peternakan. Departemen Pertanian, Jakarta. BALKIS, R.A.F Kajian kualitas semen beku pada beberapa bangsa sapi. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. BUKU STATISTIK PETERNAKAN TAHUN. 2003: Statistical Book on Livestock Direktorat Jenderal Bina Produksi Peternakan. Departemen Pertanian, Jakarta. EVAN, S.G. and W.M.C. MAXWELL Salamon s Artificial Insemination of sheep and goats. Butterworth s. London. 110

7 GARNER, D.L., B.L. GLEDHILL., D. PINKEL., S. LAKE., D. STEPHENSON., M.A. VAN DILLA and L.A. JOHNSON Quantification of the X and Y chromosome bearing spermatozoa of domestic animals by flowcytometry. Biology of Reproduction (28): GOLDMAN, E.E., J.E. ELLINGTON, F.B. FARREL dan R.H. FOOTE Use of fresh and frozen thawed bull sperm in vitro. Theriogenology. (35): HAFEZ, B. and HAFEZ E.S.E Reproduction in Farm Animals. 7 th ed. Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia. HAFEZ, E.S.E Reproduction in Farm Animals. 5 th ed. Lea and Febiger, Philadelphia. HENDRI Usaha mengubah rasio sperma X dan Y dengan metode kolom menggunakan larutan Bovine Serum Albumin (BSA) dan penilaian angka kebuntingan serta perbandingan jenis kelamin anak pada kambing. Tesis, Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. KAIIN, E.M., S. SAID, F. AFIATI dan M. GUNAWAN Optimalisasi Pembekuan Semen Sapi PO: Perbaikan Teknik Pembekuan Sperma. Pros. Seminar Nasional Industri Peternakan Modern. Puslit Bioteknologi-LIPI. Makassar. hlm RASYID, A. L, AFFANDHY dan D.B WIJONO Profil Hormon Testosteron dan Kualitas Semen Sapi Pejantan Peranakan Ongole dan Silangan Simmental. Pros. Seminar Nasional Teknologi Pertanian dan Veteriner. Bogor, September Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm SAID, S., E.M. KAIIN, F. AFIATI, M. GUNAWAN dan B. TAPPA Perbaikan Teknik Pembekuan Sperma: Pengaruh Ketinggian Straw dan Penggunaan Rak Dinamis. Pros. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Bogor, 4 5 Agustus Puslitbang Peternakan,Bogor. hlm SUJANA, M.A Desain dan Analisis Eksperimen. Edisi ke-iii. Tarsito. Bandung. SUMARLIN, T Perbedaan Kualitas Spermatozoa dari Semen Beku Sapi PO Setelah Thawing dengan Metode yang Berbeda. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. SUPRIATNA, I. dan F.H. PASARIBU In Vitro Fertilisasi, Transfer Embrio dan Pembekuan Embrio. Pusat Antar Universitas Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. TOELIHERE, M.R Inseminasi Buatan pada Ternak. Angkasa. Bandung. DISKUSI Pertanyaan: 1. Kasus di daerah Jambi, IB kurang berhasil, sehingga beralih keperkawinan alam. Apa kirakira penyebabnya? 2. Bagaimana membedakan sperma X dan Y, berapa 5 tingkat keberhasilannya. Jawaban: 1. Banyak faktor yang mempengaruhi keberhasilan IB, baik kualitas straw, ketrampilan inseminator dan faktor ternaknya sendiri. Jika kualitas straw beku yang dipergunakan setelah dievaluasi maih layak, berarti faktor straw tidak masalah. Faktor lain yang sangat berpengaruh adalah pada saat thawing, biasanya petugas IB kurang memperhatikan pengaruh thawing terhadap kualitas straw. Thawing sesuai standar adalah pada temperatur 37 C selama 30 detik dan tidak terlalu lama untuk diinseminasikan akan menghasilkan persentase kebuntingan yang lebih baik. 2. Sperma X dibedakan dari sperma Y dengan pewarnaan erosin-nigrosin dan dilakukan pengamatan di bawah mikroskop fluoresens. Sperma X akan tampak berpendar. Keberhasilan pemisahan sebesar (70-75%). Ujicoba IB dengan sperma sexing di lapang sedang berjalan dan diketahui setelah induk melahirkan. 111