LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA ENZIM

Transkripsi

1 LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA ENZIM Dosen Pembimbing : Siti Imroatul Maslikah, S.Si., M.Si, Kelompok : 1 Offering: A 1. Endah Puspa Rini ( ) 2. Endah Wahyuningtias ( ) 3. Muhammad Fahrurrizal A. ( ) 4. Nila Wahyuni ( ) 5. Santy Faiqotul H ( ) 6. Sovi Makhmudah ( ) JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS NEGERI MALANG 2013

2 ENZIM TUJUAN 1. Mengenal jenis jenis enzim yang ada pada manusia dan tumbuhan. 2. Mengenal cara cara isolasi enzim dari alam secara sederhana. 3. Mengenal substrat yang dikatalisis enzim. 4. Mengenal senyawa hasil katalisasi enzim. 5. Menjelaskan faktor faktor yang nerpengaruh pada aktifitas enzim. DASAR TEORI Enzim merupakan katalisator protein untuk reaksi reaksi kimia dalam system biologi. Katalisator adalah zat yang mempercepat reaksi kimia. Selama proses reaksi, meskipun katalisator mengalami perubahan fisik, tetapi bila reaksi telah selesai keadaan katalisator akan kembali ke bentuk semula. Enzim disebut katalisator protein, karena terutamatersusun atas protein dan senyawa lain. Hampir semua reaksi kimia dalam sel hidup akan berlangsung sangat lama bila reaksi tersebut tidak dikatalisis oleh enzim. Berbeda dengan katalisator non protein (H +, OH -, atau ion ion logam), setiap enzim mengkatalis sejumlah kecil reaksi, bahkan kebanyakan satu enzim hanya mengkatalis satu reaksi saja. Jadi enzim adalah katalisator yang bersifat spesifik. Pada hakekatnya semua reaksi di dalam biokimia dikatalisis oleh enzim. Hampir setiap senyawa organik di alam dan juga banyak senyawa anorganik, terdapat satu enzim yang mampu mengkatalisis perubahan kimia dan juga mampu bereaksi dengan senyawa anorganik tersebut (Suwono 2001).

3 Enzim berfungsi meningkatkan laju sehingga terbentuk kesetimbangan kimia antara produk dan pereaksi. Pada keadaaan kesetimbangan, istilah pereaksi dan produk tidaklah pasti dan bergantung pada pandangan kita. Dalam keadaan fisiologi yang normal, suatu enzim tidak mempengaruhi jumlah produk dan pereaksi yang sebenarnya dicapai tanpa kehadiran enzim. Jadi, jika keadaan kesetimbangan tidak menguntungkan bagi pembentukan senyawa, enzim tidak dapat mengubahnya (Salisbury dan Ross 1990). Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi fungsi enzim diantaranya adalah (Dwidjoseputro, 1992) : a. Suhu Oleh karena reaksi kimia itu dapat dipengaruhi suhu maka reaksi menggunakan katalis enzim dapat dipengaruhi oleh suhu. Di samping itu, karena enzim adalah suatu protein maka kenaikan suhu dapat menyebabkan denaturasi dan bagian aktig enzim akan terganggu sehingga konsentrasi dan kecepatan enzim berkurang. b. ph Umumnya enzim efektifitas maksimum pada ph optimum, yang lazimnya berkisar antara ph 4, Pada ph yang terlalu tinggi atau terlalu rendah umumnya enzim menjadi non aktif secara irreversibel karena menjadi denaturasi protein. c. konsentrasi enzim Seperti pada katalis lain, kecepatan suatu reaksi yang menggunakan enzim tergantung pada konsentrasi enzim tersebut. Pada suatu konsentrasi substrat tertentu, kecepatan reaksibertambah dengan bertambahnya konsentrasi enzim. Semakin besar konsentrasi enzim semakin cepat pula reaksi yang berlangsung. Dengan kata lain, konsentrasi enzim berbanding lurus dengan kecepatan reaksi d. Konsentrasi substrat

4 Bila jumlah enzim dalam keadaan tetap, kecepatan reaksi akan meningkat dengan adanya peningkatan konsentrasi substrat. Namun, pada saat sisi aktif semua enzim bekerja,penambahan substrat tidak dapat meningkatkan kecepatan reaksi enzim lebih lanjut. Kondisi ini disebut konsentrasi substrat pada titik jenuh atau disebut dengan kecepatan reaksi telah mencapai maksimum (V max). e. Zat-zat penghambat Hambatan atau inhibisi suatu reaksi akan berpengaruh terhadap penggabungan substrat pada bagian aktif yang mengalami hambatan. Suatu enzim hanya dapat bekerja spesifik pada suatu substrat untuk suatu perubahan tertentu. Misalnya, sukrase akan menguraikan rafinosa menjadi melibiosa dan fruktosa, sedangkan oleh emulsin, rafinosa tersebut akan terurai menjadi sukrosa dan galaktosa. Dalam percobaan ini terdapat beberapa enzim yang digunakan antara lain: A. Enzim Amilase Enzim (eksoenzim) yang berperan dalam merubah karbohidrat komplek adalah karbohidrase, amilase, selulase. Pati merupakan substansi yang terlebih dahulu harus diubah menjadi molekul lebih sederhana agar dapat diserap oleh sel. Mikroorganisme memproduksi enzim untuk memecah substansi di dalam sel, salah satunya adalah amilase (Mahbub, 2011). Tumbuhan mengandung α dan ß amylase; hewan memiliki hanya α amylase, dijumpai dalam cairan pankreas dan juga (pada manusia dan beberapa spesies lain) dalam ludah. Amilase memotong rantai polisakarida yang panjang, menghasilkan campuran glukosa dan maltosa. Amilosa merupakan polisakarida yang terdiri dari molekul glukosa yang saling berikatan membentuk rantai lurus. Dalam air, amilosa bereaksi dengan iodine memberikan warna biru yang khas (Fox, 1991). Pada manusia, α amilase pada ludah dan pankreas berguna dalam hidrolisis pati yang terkandung dalam makanan ke dalam bentuk aligosakarida, di mana dalam perubahan tersebut dapat dihidrolisis oleh disakarida atau trisakarida dalam jumlah kecil.

5 Contohnya, α amilase pada mamalia memiliki ph optimum 6-7, bergantung pada ada atau tidaknya ion halogen (Wirahadikusumah 1989). Amilase sendiri merupakan enzim yang paling penting dan keberadaanya paling besar, pada bidang bioteknologi, enzim ini diperjual belikan sebanyak 25% dari total enzim yang lainya. Amilase didapatkan dari berbagai macam sumber, seperti tanaman, hewan dan mikroorganisme (Mahbub, 2011). Enzim amilase dapat diperoleh dari sekresi air liur atau saliva. Saliva adalah suatu cairan oral yang kompleks dan tidak berwarna yang terdiri atas campuran sekresi dari kelenjar ludah besar dan kecil yang ada pada mukosa oral. Saliva dapat disebut juga kelenjar ludah atau kelenjar air liur. Semua kelenjar ludah mempunyai fungsi untuk membantu mencerna makanan dengan mengeluarkan suatu sekret yang disebut saliva (ludah atau air liur). Pembentukan kelenjar ludah dimulai pada awal kehidupan fetus (4-12 minggu) sebagai invaginasi epitel mulut yang akan berdiferensiasi ke dalam duktus dan jaringan asinar. Enzim amilase di dalam tubuh manusia sangat penting. Enzim amilase ikut bertanggung jawab menjaga kesehatan dan proses metabolisme di dalam tubuh. Kekurangan enzim amilase dapat menyebabkan tubuh mengalami gangguan pencernaan (maladigesti), yang selanjutnya menyebabkan gangguan penyerapan (malabsorpsi). Saliva merupakan cairan mulut yang kompleks terdiri dari campuran sekresi kelenjar saliva mayor dan minor yang ada dalam rongga mulut. Saliva sebagian besar yaitu sekitar 90 persennya dihasilkan saat makan yang merupakan reaksi atas rangsangan yang berupa pengecapan dan pengunyahan makanan (Kidd 1992). Saliva terdapat sebagai lapisan setebal 0,1-0,01 mm yang melapisi seluruh jaringan rongga mulut. Pengeluaran air ludah pada orang dewasa berkisar antara 0,3-0,4 ml/menit sedangkan apabila distimulasi, banyaknya air ludah normal adalah 1-2 ml/menit. Menurunnya ph air ludah (kapasitas dapar / asam) dan jumlah air ludah yang kurang menunjukkan adanya resiko terjadinya karies yang tinggi. Meningkatnya ph air ludah (basa) akan mengakibatkan pembentukan karang gigi. Saliva memiliki beberapa fungsi, yaitu melicinkan dan membasahi rongga mulut sehingga membantu proses mengunyah dan menelan makanan, membasahi dan melembutkan makanan menjadi bahan setengah cair ataupun cair sehingga mudah ditelan dan dirasakan,

6 membersihkan rongga mulut dari sisa-sisa makanan dan kuman, mempunyai aktivitas antibacterial dan sistem buffer, membantu proses pencernaan makanan melalui aktivitas enzim ptyalin (amilase ludah) dan lipase ludah, perpartisipasi dalam proses pembekuan dan penyembuhan luka karena terdapat faktor pembekuan darah dan epidermal growth factor pada saliva, jumlah sekresi air ludah dapat dipakai sebagai ukuran tentang keseimbangan air dalam tubuh dan membantu dalam berbicara (pelumasan pada pipi dan lidah) (Soeharsono 1975). Setiap hari sekitar liter saliva dikeluarkan oleh kelenjar saliva. Saliva terdiri atas 99.24% air dan 0.58% terdiri atas ion-ion Ca2+, Mg2+, Na+, K+, PO43-, Cl-, HCO3-, SO42-, dan zat-zat organik seperti musin dan enzim amilase (ptialin). Saliva bersifat agak sedikit asam. Saliva mempunyai ph antara 5.75 sampai Pada umumnya ph saliva adalah sedikit dibawah 7 (Soeharsono 1975). B. Enzim Bromelin Bromelin adalah enzim proteolitik yang ditemukan pada bagian batang dan buah nanas (Ananas comosus). Enzim ini diproduksi sebagai hasil sampingan dari pabrik jus nanas. Dalam memproduksi bromelin, beberapa senyawa yang dapat digunakan untuk presipitasi (pengendapan) enzim ini adalah amonium sulfat dan alkohol. Beberapa kegunaan dari enzim ini adalah mengurangi rasa sakit dan pembengkakan karena luka atau operasi, mengurangi radang sendi, menyembuhkan luka bakar, meningkatkan fungsi paru-paru pada penderita infeksi saluran pernapasan, dan lain-lain. Untuk meningkatkan kelancaran pencernaan pada manusia, umumnya digunakan bromelin berdosis 500 mg dalam bentuk kapsul. Apabila konsumsi bromelin dilakukan bersamaan dengan senyawa anti-koagulan maka risiko terjadinya pendarahan akan meningkat. Bromelain adalah suatu protease sulfihidril (-SH) yang sudah menjadi tidak aktif, disebabkan karena terbentuknya ikatan disulfida antara enzim-enzim. Secara relatif hal ini dpat diatasi dengan penambahan senyawa pereduksi seperti sistein, markaptoetanol, glukation, dan vitamin C. selain dengan cara penambahan senyawa pereduksi juga dapat distabilkan dengan cara amobilisasi enzim. Aktivitas enzim

7 bromelain dipengaruhi oleh beberapa inhibitornya seperti diisopropilfosfofluoridat (DIPF) (Ciptadi 2011).

8 ALAT DAN BAHAN Alat : 1 beaker glass 50ml dan 100ml 11 korek api 2 pipet tetes 12 termometer 3 tabung reaksi 13 gelas ukur 10ml 4 penjepit tabung reaksi 14 pelat tetes 5 corong kaca 15 neraca digital 6 pisau 16 mortar dan pistil 7 kaca arloji 17 parutan kelapa 8 lampu spiritus 18 kain untuk menyaring 9 kasa asbes 10 kaki tiga Bahan : 1 kertas saring 11 Es batu 2 buah nanas 12 Aquadest 3 larutan NaCl 0,9% 13 IKI 4 kecambah kacang hijau 14 Larutan Fehling A dan B 5 suspensi pati 1% 15 Larutan ninhidrin 6 susu kedelai 16 Kertas Label 7 susu sapi 8 telur 9 NaOH 1N 10 HCl 1N

9 CARA KERJA I.ISOLASI ENZIM 1 Enzima amilase dalam saliva Ambil larutan NaCl 0,9 % sebanyak 50 ml Masukkan larutan dalam beaker glass 50ml Gunakan larutan untuk berkumur-kumur Gunakan enzim yang terkandung dalam saliva untuk percobaan II 2 Enzima amilase dalam kecambah kacang hijau Ambil kecambah kacang hijau 25g Gerus dalam sedikit aquadest hingga halus Lalu saringlah kembali hingga diperoleh sari Gunakan enzim yang terkandung dalam hasil gerusan untuk percobaan II Ambil sari kecambah kacang hijau 50ml 3 Enzima Bromelialin Kupas 1 buah nanas hingga bersih Parutlah hingga halus Campurkan hasil parutan dengan 200ml aquadest Gunakan hasil perasan yang mengandung enzima bromealin untuk percobaan II Peras hasil parutan dengan menggunakan kain saring

10 II.Aktivitas Enzima amilase dan Papain 1 Aktivitas amilase dari saliva Ambil 2 tabung reaksi,lalu masing-masing tabung diisi 2 ml suspensi amilum 2% Tambah 1ml amilase dari saliva pada salah satu tabung dan 1ml HCl 1N pada tabung ke-2 Kocok hingga tercampur dan biarkan selama 15 menit amati perubahan warna yang terjadi Tambah masing-masing 1 tetes larutan IKI Setelah 15menit,ambil masing-masing 3 tetes dan teteskan pada pelat tetes Lalu lakukan uji benedict, ambil fehling A dan B masing-masing 15 tetes Kocok hingga tercampur,tambah suspensi amilum yang di uji sebanyak 5 tetes Panaskan langsung pada lampu sepiritus hingga mendidih atau selama 2menit HASIL dibandingkan Ulangi percobaan pada menit ke-30 Amati perubahan yang terjadi

11 2 Aktivitas amilase dari ekstrak kecambah kacang hijau Ambil 2 tabung reaksi,lalu masing-masing tabung diisi 2 ml suspensi amilum 2% Tambah 1ml amilase dari ekstrak kecambah pada salah satu tabung dan 1ml HCl pada tabung ke-2 Kocok hingga tercampur dan biarkan selama 15 menit amati perubahan warna yang terjadi Tambah masing-masing 1 tetes larutan IKI Setelah 15menit,ambil masing-masing 3 tetes dan teteskan pada pelat tetes Lalu lakukan uji benedict, ambil fehling A dan B masing-masing 15 tetes Kocok hingga tercampur,tambah suspensi amilum yang di uji sebanyak 5 tetes Panaskan langsung pada lampu sepiritus hingga mendidih atau selama 2menit HASIL dibandingkan Ulangi percobaan pada menit ke-30 Amati perubahan yang terjadi 3.Aktivitas enzima bromelialin Ambil 2 tabung reaksi,lalu masing-masing tabung diisi 2 ml susu kedelai,albumin telur,dan susu sapi segar Tambah ke tiap-tiap tabung 15 tetes perasan buah nanas Kocok hingga tercampur dan biarkan selama 15 menit Kocok hingga tercampur Panaskan dalam penangas air hingga mendidih selama 5menit Tambah 15 tetes bahan dan tambah 3 tetes pereaksi ninhidrin Amati perubahan yang terjadi Setelah 15menit,lakukan uji ninhidrit untuk mengetahui asam amino bebas Ulangi uji ninhidrin pada menit ke-30 HASIL dibandingkan

12 III.Faktor-faktor yang mempengaruhi Kerja Enzima 1.Pengaruh suhu Ambil 4 tabung reaksi,lalu masing-masing tabung diisi 2 ml suspensi amilum 2% Tambah 1ml larutan saliva dan kocok hingga tercampur Lalu masukkan tabung 1 dalam air es,tabung 2 dalam penangas airbersuhu o C,tabung 3 dalam penangas air mendidih dan tabung 4 pada suhu ruang Tambah masing-masing 2 tetes larutan IKI Teteskan pada pelat tetes Biarkan selama 15menit dan setelah 15menit,ambil masing-masing 3 tetes Amati perubahan warna yang terjadi Lakukan uji benedict,ambil ambil fehling A dan B masing-masing 15ml Kocok hingga tercampur,lau tambah suspense amilum yang di uji sebanyak 5 tetes 2.Pengaruh PH HASIL Amati perubahan yang terjadi Panaskan langsung pada lampu sepiritus hingga mendidih atau selama 2menit Ambil 3 tabung reaksi,lalu masing-masing tabung diisi 2 ml suspensi amilum 2% Tambah 1ml larutan saliva, kocok hingga tercampur Lalu pada tabung 1 tambah 8 tetes HCl 1N,tabung 2 ditambah 8 tetes NaOH 1N Amati perubahan yang terjadi HASIL Setelah menit ke-15,diuji dengan IKI dan lanjutkan dengan uji benedict Kocok hingga tercampur,masing-masing tabung di biarkan selama 15menit

13 3.Pengaruh Konsentrasi Enzima Ambil 4 tabung reaksi Lalu isi tabung 1 dengan 0,5ml saliva,tabung 2 dengan 1ml saliva,tabung 3 dengan 1,5ml saliva dan tabung 4 dengan 2ml saliva Tambah pada tiap-tiap tabung 2ml suspense amilum 2% amati perubahan warna yang terjadi Setelah menit ke-15,uji dengan IKI dan lanjut dengan uji benedict Kocoklah hingga tercampur dan biarkan selama 15menit HASIL 4.Pengaruh konsentrasi substrat Ambil 4 tabung reaksi Isi tabung 1 dengan 1ml suspense amilum,tabung 2 dengan 2ml amilum,tabung 3 dengan 3ml amilum dan tabung 4 dengan 4ml amilum Tambah pada tiap-tiap tabung 1ml saliva amati perubahan yang terjadi Setelah menit ke-15,uji dengan IKI dan lanjutkan dengan uji benedict Kocok hingga tercampur dan tunggu selama 15 menit HASIL

14 HASIL PENGAMATAN No Enzim Bahan 1. Amilase Saliva 2. Amilase dari ekstrak kecambah kacang hijau A. Aktivitas enzim amilase Saliva Menit ke-15 Menit ke-30 Keterangan IKI Benedict Ninhidrin IKI Benedict Ninhidrin Biru muda - Kuning Biru tua - + = biru (+) kehitaman (+++) muda Kuning kehijauan (+) (++) HCl Kuning Biru muda Kuning kehijauan Amilase HCl 1 N Putih keruh menjadi kuning dengan campuran warna hitam Bening menjadi kuning Biru menjadi hitam kemerahan Biru tetap menjadi biru - Putih keruh menjadi kuning dengan campuran /warna coklat - Ada putih keruh menjadi kuning Biru (++) Biru menjadi hitam kemerah an Biru tetap menjadi biru 3. Bromealin Telur - - Biru - - Biru Susu kedelai - - Biru keunguan - - Biru keunguan Susu sapi - - Ungu kebiruan - - Ungu kebiruan - ++ = lebih biru +++ = biru tua - Warna pada menit ke-30 lebih pekat daripada menit ke15 - B. Faktor-faktor yang mempengaruhi kerja enzim No Variabel Perlakuan Reagen Benedict IKI Keterangan 1. Suhu Es Biru (+++) Kuning (++) Kurang kuning dari keempat percobaan 40 C Biru (++++) Kuning (++++) 100 C Biru (++) kuning kehitaman Ruang Biru (+) Bening (+) Paling kuning dari keempat percobaan

15 2. ph Ditambah 8 tetes HCl 1 N Biru tua tetap biru tua 3. Konsentrasi enzim 4. Konsentrasi substrat Ditambah 8 tetes NaOH 1 N Tanpa HCl dan NaOH Biru tua menjadi semakin biru tua Biru tua tetap biru tua, tapi masih lebih tua yang HCl Putih keruh menjadi kuning dengan campuran warna hitam Putih menjadi putih kekuningkuningan dengan campuran warna hitam Putih menjadi putih dengan campuran warna hitam 0,5 ml Biru muda (+) Kuning 0,5 ml terdapat 1 ml Biru (++) Kuning tua endapan warna 1,5 ml Biru tua (++++) Kuning sangat muda orange (+) 1 ml terdapat 2 ml Biru sangat muda (++) Kuning muda endapan warna orange (+) 1,5 ml terdapat endapan warna orange (+) 2 ml terdapat endapan warna orange (+) 1 ml amilum Tetap biru tua Putih menjadi hijau Tetap biru tua Tetap biru tua Tetap biru tua kekuningan Putih menjadi kuning tua Putih menjadi hijau kehitaman Putih jadi kuning kehitaman

16 ANALISIS DATA Pada percobaan pertama yaitu mengetahui aktivitas enzim amilase dari saliva digunakan bahan uji yaitu saliva dan HCl dengan reagen larutan IKI dan Benedict. Pada percobaan ini digunakan 2 tabung reaksi yang diisi 2 ml suspensi amilum 2%. Untuk perbandingan percobaan ini dilakukan dalam waktu yang berbeda yaitu menit ke-15 dan menit ke-30. Pada menit ke-15,tabung reaksi yang ditambahkan saliva setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi kuning kehijauan sedangkan amilum dan saliva yang diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru muda. Kemudian pada tabung kedua yang ditambahkan larutan HCl setelah diteteskan larutan IKI warna berubah menjadi kuning, sedangkan amilum dan HCl yang diteteskan larutan Benedict berubah warna menjadi biru muda. Pada menit ke-30,tabung reaksi yang ditambahkan saliva setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi kuning kehijauan yang lebih tua sedangkan amilum dan saliva yang diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru tua. Kemudian pada tabung kedua yang ditambahkan larutan HCl setelah diteteskan larutan IKI warna berubah menjadi kuning kehijauan, sedangkan amilum dan HCl yang diteteskan larutan Benedict berubah warna menjadi biru tua dibanding pada menit ke-15. Pada percobaan kedua untuk mengetahui aktivitas enzim amilase dari ekstrak kecambah kacang hijau dilakukan perlakuan yang sama dengan percobaan pertama. Pada menit ke-15,tabung reaksi yang ditambahkan amilase dari ekstrak kecambah setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna dari putih keruh menjadi kuning dengan campuran warna hitam sedangkan amilum dan amilase kecambah yang diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna dari biru menjadi hitam kemerahan. Kemudian pada tabung kedua yang ditambahkan larutan HCl setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan dari bening menjadi kuning sedangkan amilum dan HCl yang diteteskan larutan Benedict tidak terjadi perubahan warna atau tetap berwarna biru. Pada menit ke-30,tabung reaksi yang ditambahkan amilase dari ekstrak kecambah setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna dari putih keruh menjadi kuning dengan

17 campuran warna coklat sedangkan amilum dan amilase dari ekstrak kecambah yang diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna dari biru menjadi hitam kemerahan. Kemudian pada tabung kedua yang ditambahkan larutan HCl setelah diteteskan larutan IKI warna berubah dari putih keruh menjadi kuning sedangkan amilum dan HCl yang diteteskan larutan Benedict tidak terjadi perbahan warna atau tetap berwarna biru. Pada percobaan ketiga untuk mengetahui aktivitas enzim bromealin digunakan bahan uji yaitu susu kedelai,albumin telur dan susu sapi dengan reagen larutan Ninhidrin. Pada percobaan ini digunakan 3 tabung reaksi yang diisi 2 ml susu kedelai, albumin telur dan susu sapi. Untuk perbandingan percobaan ini dilakukan dalam waktu yang berbeda yaitu menit ke-15 dan menit ke-30. Pada menit ke-15,tabung reaksi yang berisi susu kedelai ditambahkan perasan buah nanas setelah diteteskan larutan ninhidrin terjadi perubahan warna menjadi biru keunguan sedangkan albumin telur dan perasan buah nanas yang diteteskan larutan Ninhidrin terjadi perubahan menjadi biru lalu terakhir susu sapi dan perasan buah nanas yang diteteskan larutan Ninhidrin terjadi perubahan menjadi ungu kebiruan. Pada menit ke-30,berdasarkan data pengamatan diperoleh hasil sama seperti pada menit ke-15. Dengan keterangan warna pada menit ke-30 lebih pekat daripada menit ke-15 dan setelah dipanaskan terdapat gumpalan. Pada percobaan selanjutnya yaitu untuk mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi kerja enzim digunakan bahan yang diuji yaitu saliva dengan reagen larutan Benedict dan IKI. Pada percobaan ini variabel yang mempengaruhi yaitu suhu, ph, konsentrasi enzim dan konsentrasi substat. Pada percobaan pertama yaitu untuk mengetahui pengaruh suhu dalam aktifitas kerja enzim digunakan 4 tabung reaksi yang masing-masing diisi dengan 2 ml suspensi amilum 2% lalu ditambahkan 1 ml saliva kemudian masing-masing tabung reaksi diletakkan di tempat yang berbeda dan dibiarkan selama 15 menit. Pada tabung pertama yang diletakkan didalam air es setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan menjadi kuning. Pada tabung kedua yang diletakan pada suhu 40 C setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru tua,

18 sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan menjadi kuning tua. Pada tabung ketiga yang diletakkan pada suhu 100 C setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi lebih biru, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan menjadi kuning kehitaman. Pada tabung keempat yang diletakkan pada suhu ruang setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru muda, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan menjadi kuning bening. Dari keempat perlakuan yang paling menunjukkan enzim bekerja pada suhu optimum yaitu 40 C. Pada percobaan kedua yaitu untuk mengetahui pengaruh ph dalam aktifitas kerja enzim digunakan 3 tabung reaksi yang masing-masing diisi dengan 2 ml suspensi amilum 2% lalu ditambahkan 1 ml saliva kemudian masing-masing tabung reaksi ditambahkan larutan yang berbeda dan dibiarkan selama 15 menit. Pada tabung pertama ditambahkan 8 tetes larutan HCl 1 N setelah diteteskan larutan Benedict warna biru tua tetap menjadi biru tua, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan dari putih keruh menjadi kuning dengan campuran warna hitam. Pada tabung kedua yang ditambah 8 tetes larutan NaOH 1 N setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna dari biru tua menjadi semakin biru tua, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna dari putih menjadi putih kekuningkuningan dengan campuran warna hitam. Pada tabung ketiga tanpa ditambah dengan larutan HCl dan NaOH, setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna dari biru tua menjadi semakin biru tua namun lebih tua pada percobaan tabung pertama(hcl), sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna dari putih menjadi putih dengan campuran warna hitam. Pada percobaan ketiga yaitu untuk mengetahui pengaruh konsentrasi enzim dalam aktifitas kerja enzim digunakan 4 tabung reaksi yang masing-masing diisi dengan 2 ml suspensi amilum 2% lalu ditambahkan saliva dengan jumlah yang berbeda dan dibiarkan selama 15 menit. Pada tabung pertama yang ditambahkan 0,5 ml saliva setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru muda, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi kuning dan terdapat sedikit endapan berwarna orange. Pada tabung kedua yang ditambahkan 1 ml saliva setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi kuning tua dan terdapat endapan berwarna orange. Pada tabung ketiga yang ditambahkan 1,5 ml saliva setelah

19 diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru tua, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi kuning sangat muda dan terdapat banyak endapan berwarna orange dibanding keempat tabung reaksi. Pada tabung keempat yang ditambahkan 2 ml saliva setelah diteteskan larutan Benedict terjadi perubahan warna menjadi biru sangat muda, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi kuning muda dan terdapat endapan berwarna orange. Pada percobaan keempat yaitu untuk mengetahui pengaruh konsentrasi substrat dalam aktifitas kerja enzim digunakan 4 tabung reaksi yang masing-masing diisi dengan 1 ml saliva lalu ditambahkan suspensi amilum yang bervariasi dan dibiarkan selama 15 menit.. Pada tabung pertama yang ditambahkan 1 ml suspensi amilum, setelah diteteskan larutan Benedict tidak terjadi perubahan warna atau tetap biru tua, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi hijau kekuningan. Pada tabung kedua yang ditambahkan 2 ml suspensi amilum, setelah diteteskan larutan Benedict tidak terjadi perubahan warna atau tetap biru tua, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi kuning tua. Pada tabung ketiga yang ditambahkan 3 ml suspensi amilum, setelah diteteskan larutan Benedict tidak terjadi perubahan warna atau tetap biru tua, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi hijau kehitaman. Pada tabung keempat yang ditambahkan 4 ml suspensi amilum, setelah diteteskan larutan Benedict tidak terjadi perubahan warna atau tetap biru tua, sedangkan setelah diteteskan larutan IKI terjadi perubahan warna menjadi kuning kehitaman.

20 PEMBAHASAN A. Aktivitas Enzim Amilase dan Bromealin 1. Aktivitas amilase dari saliva Percobaan pertama adalah percobaan untuk mengetahui aktivitas amilase dari saliva. Percobaan dilakukan dengan meletakkan suspensi amilum pada tabung reaksi pertama yang kemudian ditambahkan amilase dari saliva. Setelah itu dikocok dan didiamkan selama 15 menit, ditetesi dengan menggunakan reagen IKI. Hasil menunjukkan larutan yang diuji berubah warna menjadi kuning kehijauan (+) terdapat lingkaran hitam kecil namun kami aduk sehingga warnanya sedikit berubah menjadi kehijauan. Perubahan warna menjadi kuning tersebut menunjukkan bahwa enzim amilase bekerja yaitu dengan mulai menghidrolisis amilum menjadi maltosa ( disakarida ) dan glukosa (monosakarida). Sedangkan lingkaran hitam kecil yang terbentuk menunjukkan ikatan kimia antara reagen IKI dengan amilum mulai terlepas. Kemudian dilakukan percobaan yang sama dengan waktu pendiaman 30 menit. Hasil yang didapat adalah perubahan warna larutan yang diuji yakni menjadi kuning kehitaman (++) terdapat lingkaran hitam yang lebih besar dibandingkan dengan percobaan pertama. Perubahan warna menjadi kuning tersebut menunjukkan bahwa enzim amilase bekerja yaitu dengan menghidrolisis amilum menjadi maltosa ( disakarida ) dan glukosa. Sedangkan lingkaran hitam besar yang terbentuk menunjukkan ikatan kimia antara reagen IKI dengan amilum mulai terlepas Terbentuknya lingkaran hitam kecil pada percobaan menit ke-15 dan lingkaran besar pada percobaan menit ke-30 berkebalikan dengan teori yang ada bahwa seharusnya pada menit ke-15 lingkaran yang terbentuk adalah besar karena ikatan kimia antara reagen IKI dengan amilum dalam waktu yang singkat masih kuat, dan kadar amilum yang terhidrolisis oleh enzim amylase menjadi maltose dan glukosa masih sedikit. Sedangkan pada menit ke-30 seharusnya lingkaran hitam yang terbentuk adalah lebih kecil dari percobaan pertama, karena dengan waktu

21 pendiaman yang lebih lama ikatan kimia antara reagen IKI dengan amilum sudah mulai banyak yang terlepas dan kadar amilum yang dihidrolisis oleh enzim amylase menjadi maltosa (disakarida) dan glukosa lebih banyak. Larutan IKI menunjukkan uji positif terhadap amilum. Kesalahan pada percobaan ini dapat terjadi karena kurangnya ketelitian praktikan dalam menjalankan prosedur percobaan atau juga karena kurangnnya ketelitian dalam mengamati perubahan warna yang terjadi pada larutan uji. Percobaan selanjutnya adalah uji benedict. Dimana percobaan dilakukan dengan menambahkan masing-masing 15 tetes fehling A dan B yang telah dikocok hingga tercampur pada tabung reaksi yang berisikan suspensi amilum dan saliva sebanyak 5 tetes. Setelah itu dipanaskan diatas lampu spirtus hingga mendidih atau selama 2 menit. Larutan tersebut didiamkan selama 15 menit. Hasil yang didapat adalah larutan yang diuji berwarna biru muda (+). Selanjutnya dilakukan percobaan yang sama dengan waktu pendiaman selama 30 menit. Hasil yang didapat dari percobaan ke 2 uji benedict ini adalah larutan berwarna lebih biru atau biru tua (+++). Hasil percobaan pada menit ke-15 yang menunjukkan larutan berwarna biru muda (+) sudah benar dimana percobaan ini berkaitan dengan terbentuknya lingkaran hitam yang seharusnya berukuran besar pada percobaan menit ke-15 dengan menggunakan reagen IKI. Dalam kondisi ini kadar amilum yang terhidrolisis lebih sedikit dan kadar glukosa (gula pereduksi) masih relatif sedikit sehingga menunjukkan larutan menunjukkan uji negatif terhadap benedict. Hal ini ditunjukkan oleh uji benedict dengan berwarna biru yang lebih muda (+). Sedangkan pada uji benedict pada menit ke 30 yang menunjukkan larutan berwarna biru tua (+++) sudah benar dimana percobaan ini berkaitan dengan terbentuknya lingkaran hitam yang seharusnya berukuran kecil pada percobaan menit ke-30 dengan menggunakan reagen IKI. Dimana dalam waktu yang pendiaman yang lebih lama kadar amilum yang terhidrolisis oleh enzim lebih banyak sehingga kadar glukosa (monosakarida) gula pereduksi yang terbentuk semakin banyak. Hal ini ditunjukkan dengan uji benedict dengan warna biru yang lebih tua daripada percobaan sebelumnya. Namun hasil percobaan yang telah kami lakukan terdapat kesalahan dimana berdasar teori larutan yang diuji dengan benedict sebelum dipanaskan adalah

22 berwarna biru dan setelah dipanaskan seharusnya berwarna hijau kekuningan. Hal ini dapat terjadi karena kemungkinan kurangnya ketelitian praktikan dalam menjalankan prosedur percobaan atau juga karena kurangnnya ketelitian praktikan dalam mengamati perubahan warna yang terjadi pada larutan uji. Pada percobaan selanjutnya adalah percobaan untuk mengetahui aktivitas amilase dari saliva. Percobaan dilakukan dengan meletakkan suspensi amilum ditambah saliva pada tabung reaksi yang kemudian ditambahkan HCl 1 N. Setelah itu dikocok dan didiamkan selama 15 menit, dan ditetesi dengan menggunakan reagen IKI. Hasil menunjukkan larutan yang diuji berubah warna menjadi kuning. Tingkat ph pada HCl 1 N adalah bernilai 0, dimana HCl 1 N setara dengan HCl 1 M sehingga ph HCl dapat dijelaskan sebagai berikut : ph = -log [H + ] ph = - log 1 ph = 0 Perubahan warna menjadi kuning tersebut menunjukkan bahwa enzim amilase bekerja yaitu dengan menghidrolisis amilum menjadi maltosa ( disakarida ). Perubahan warna pada percobaan kali ini, menjadi kuning yang lebih jernih daripada pada percobaan dengan menggunakan suspensi amilum ditambah saliva saja. Hal ini dikarenakan HCl yang merupakan asam kuat (tergolong asam kuat karena ion H + nya terionisasi sempurna, HCl H + + Cl - ) akan menurunkan aktifitas enzim amilase yang bekerja optimum pada ph yang netral yaitu 7. Kemudian dilakukan percobaan yang sama dengan waktu pendiaman 30 menit. Hasil yang didapat adalah perubahan warna larutan yang diuji adalah kuning kehijauan. Perubahan warna pada percobaan kali ini, menjadi kuning kehijauan yang lebih jernih daripada pada percobaan dengan menggunakan suspensi amilum + saliva saja dikarenakan HCl merupakan asam kuat (tergolong asam kuat karena ion H + nya terionisasi sempurna, HCl H + + Cl - ) akan menurunkan aktifitas enzim amilase yang bekerja optimum pada ph yang netral yaitu 7. Dengan tingkat ph yang sama yaitu 0, terbentuknya warna kuning pada percobaan menit ke-15 dan warna kuning kehijauan pada percobaan menit ke-30 berkebalikan dengan teori yang ada bahwa seharusnya pada menit ke-15 yang warna terbentuk adalah kuning kehijauan karena

23 ikatan pada amilum dalam waktu pendiaman yang singkat masih kuat atau belum banyak yang terlepas dan kandungan maltosa yang terbentuk dari hidrolisis amilum masih banyak dan terbentuknya glukosa (monosakarida) masih relatif sedikit. Sehingga warna yang seharusnya terbentuk tidak kuning sejernih seperti hasil yang kami peroleh. Sedangkan pada menit ke-30 seharusnya warna yang terbentuk adalah kuning lebih jernih daripada menit ke-15, karena dengan waktu pendiaman yang lebih lama ikatan pada amilum sudah mulai banyak yang terlepas sehingga kandungan maltosa (disakarida) yang terbentuk dari hidrolisis amilum semakin sedikit karena telah terpecah menjadi glukosa (monosakarida). Oleh karena itu, warna yang seharusnya terbentuk kuning lebih jernih tidak seperti hasil yang kami peroleh. Kesalahan pada percobaan ini dapat terjadi karena faktor human error seperti kurangnya ketelitian praktikan dalam menjalankan prosedur percobaan atau juga karena kurangnnya ketelitian praktikan dalam mengamati perubahan warna yang terjadi pada larutan uji. Percobaan selanjutnya adalah uji benedict. Dimana percobaan dilakukan dengan menambahkan masing-masing 15 tetes fehling A dan B yang telah dikocok hingga tercampur pada tabung reaksi yang berisikan suspensi amilum ditambah saliva dan HCl 1 N sebanyak 5 tetes. Setelah itu dipanaskan diatas lampu spirtus hingga mendidih atau selama 2 menit. Kemudian larutan didiamkan selama 15 menit. Hasil yang diperoleh adalah larutan yang diuji berwarna biru muda (+). Selanjutnya dilakukan percobaan yang sama dengan waktu pendiaman selama 30 menit. Hasil yang didapat dari percobaan ke 2 uji benedict ini adalah larutan berwarna lebih biru atau biru tua (++). Pada tingkat ph yang sama yaitu 0, hasil percobaan pada menit ke-15 yang menunjukkan larutan berwarna biru muda (+) sudah benar dimana percobaan ini berkaitan dengan terbentuknya warna yang seharusnya berwarna kuning lebih pekat pada percobaan menit ke-15 dengan menggunakan reagen IKI. Dimana ikatan kimia pada amilum dalam waktu pendiaman yang singkat, adalah masih kuat sehingga kandungan maltosa (disakarida) yang terbentuk dari hidrolisis amilum masih banyak dan terbentuknya glukosa (monosakarida) gula pereduksi masih relatif sedikit yang ditunjukkan oleh uji benedict dengan berwarna biru yang lebih muda (+). Sedangkan pada uji benedict pada menit ke 30 yang menunjukkan larutan berwarna biru tua (++) sudah benar dimana percobaan ini berkaitan dengan terbentuknya warna yang seharusnya berwarna kuning lebih jernih pada percobaan menit ke-30 dengan menggunakan reagen IKI.

24 Dimana ikatan kimia antara reagen IKI dengan amilum dalam waktu yang pendiaman yang lebih lama mulai melemah atau mulai banyak yang terlepas sehingga kandungan maltosa (disakarida) yang terbentuk dari hidrolisis amilum sudah semakin sedikit karena telah terpecah menjadi glukosa (monosakarida) gula pereduksi, yang ditunjukkan dengan uji benedict dengan warna biru yang lebih tua daripada percobaan sebelumnya. Namun hasil percobaan yang telah kami lakukan terdapat kesalahan dimana berdasar teori larutan yang diuji sebelum dipanaskan adalah berwarna biru dan setelah dipanaskan berwarna hijau kekuningan. Hal ini dapat terjadi karena kemungkinan kurangnya ketelitian praktikan dalam menjalankan prosedur percobaan atau juga karena kurangnnya ketelitian praktikan dalam mengamati perubahan warna yang terjadi pada larutan uji. Jadi dapat disimpulkan bahwa aktivitas enzim amylase adalah menghidrolisis amilum menjadi disakarida (maltosa) dan monosakarida (glukosaa). Dan proses tersebut akan berlangsung optimal pada ph yang memang sesaui untuk enzim tersebut bekerja contohnya adalah enzim amilase yang akan bekerja optimum pada ph netral yaitu 7, jika ditambahkan asam kinerjanya juga akan semakin turun terbukti dari percobaan diatas dimana ketika penambahan HCl, larutan uji ditetesi reagen IKI tidak terbentuk lingkaran hitam dan warnanya jauh lebih jernih. Begitupun ketika larutan diuji dengan reagen benedict warnanya semakin jernih. 2. Aktivitas enzim amilase dari ekstrak kecambah kacang hijau Pada praktikum kali ini, dilakukan pengamatan terhadap aktivitas enzim amilase. Amilase yang digunakan pada praktikum ini yaitu kecambah kacang hijau yang sudah dihaluskan. Dalam praktikum aktivitas enzim amilase digunakan kecambah kacang hijau karena kacang hijau mudah di dapatkan dan kecambah mengandung enzim α-amilase yang mudah untuk diisolasi dibandingkan kacang-kacangan lainnya. Enzim α-amilase terdapat di plasma sel sehingga mudah diisolasi. (Suarni, 2007). Dalam membuat ekstrak kecambah kacang hijau, bahan yang dibutuhkan diantaranya adalah kecambah, dan aquades. Sedangkan cara membuat ekstrak kacang hijau yakni pertama, kecambah kacang hijau yang telah dicuci diambil sebanyak 25 gram kemudian digerus dalam sedikit aquades hingga halus dan disaring. Aquades ditambahkan kembali dan dilakukan penyaringan hingga diperoleh sari kecambah kacang hijau sebanyak 50 ml. Proses menghaluskan

25 kecambah dimaksudkan untuk merusak jaringan dan dinding sel, sehingga isi sel dapat keluar. Penyaringan mendapatkan filtrat atau isi sel yang merupakan enzim amilase kasar. Setelah isolasi enzim selesai dilakukan, kegiatan berikutnya yakni pengujian aktivitas enzim amilase. Pertama, dilakukan uji amilum. 2 ml suspensi amilum 2 % dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 1 ml amilase dari ekstrak kecambah. Setelah dibiarkan selama 15 menit diambil 3 tetes, kemudian diteteskan pada pelat tetes dan diberi 1 tetes larutan IKI. Dari perlakuan tersebut, diperoleh hasil larutan yang awalnya berwarna putih keruh berubah menjadi kuning dengan campuran warna hitam. Seharusnya pada uji tersebut terjadi reaksi positif yang ditunjukkan dengan perubahan warna yakni larutan yang yang awalnya berwarna putih keruh berubah menjadi kuning dengan lingkaran biru kehitaman ditengahnya. Selanjutnya, perlakuan tersebut diatas dilakukan kembali dengan prosedur yang sama namun amilum ditambah ekstrak kecambah dibiarkan selama 30 menit. Dari perlakuan tersebut diperoleh hasil yakni larutan yang awalnya berwarna putih keruh berubah menjadi kuning dengan campuran warna cokelat. Hasil tersebut berbeda dengan larutan yang dibiarkan selama 15 menit. Hal ini dikarenakan saat dibiarkan 30 menit ikatan kimia antara larutan IKI dengan amilum mudah terlepas dan amilum sudah lebih banyak yang terhidrolisis menjadi glukosa dibandingkan menit ke-15 sehingga dihasilkan pemudaran warna dari hitam menjadi cokelat. Warna kuning yang masih terdapat dalam larutan menunjukkan bahwa enzim amilase mulai mengdidrolisis amilum dengan menjadi disakarida (maltose) dan monosakarida (glukosa). Percobaan selanjutnya yakni uji gula reduksi menggunakan reagen fehling A dan B (benedict). Pertama, diambil fehling A dan fehling B masing-masing 15 tetes ke dalam tabung reaksi. Kemudian dikocok hingga tercampur dan ditambahkan suspensi amilum yang diuji sebanyak 5 tetes, larutan kemudian dipanaskan mengunakan penjepit dan pembakar spiritus hingga mendidih atau selama 2 menit. Saat memanaskan tabung reaksi dijepit dengan posisi penjepit berada di tengah tabung reaksi. Hal ini dimaksudkan agar tabung reaksi tidak jatuh saat dipanaskan. Pada saat memaskan, tabung reaksi digoyang-goyangkan dan mulut tabung reaksi tidak mengarah pada praktikan untuk menjaga keselamatan kerja di laboratorium. Setelah pemanasan terjadi perubahan warna. Larutan amilum yang ditambahkan fehling A dan B yang awalnya berwarna biru berubah menjadi hitam kemerahan. Larutan tersebut bereaksi positif terhadap uji fehling A dan B karena amilum mulai dihidrolisis oleh enzim amylase menjadi

26 maltose dan glukosa. Oleh karena terdapatnya kandungan glukosa ini sehingga larutan berubah warna menjadi hitam kemerahan. Berikutnya, dilakukan pengujian amylase dari ekstrak kecambah kacang hijau dengan HCl 1 N. Pertama, 2 ml suspensi amilum 2 % dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 1 HCl 1 N. Setelah dibiarkan selama 15 menit, diambil 3 tetes kemudian diteteskan pada pelat tetes dan diberi 1 tetes larutan IKI. Dari perlakuan tersebut, diperoleh hasil larutan yang awalnya jernih berubah menjadi kuning. Dapat disimpulkan bahwa amilum bereaksi negatif terhadap IKI. Hal ini dikarenakan HCl merupakan asam kuat, sehingga hanya dengan sedikit penambahan HCl suasana larutan menjadi asam. Dengan penambahan HCl, amilum dapat mengalami kerusakan struktur. Hal ini juga terjadi pada larutan yang didiamkan selama 30 menit. Sedangkan ketika diuji dengan benedict, diperoleh hasil yang sama antara didiamkan 15 menit dengan didiamkan 30 menit yakni dari biru tetap menjadi biru atau tidak terjadi perubahan warna. Seharusnya, terdapat perbedaan diantara keduanya. Suspensi amilum yang telah diberi HCl 1 N dan didiamkan selama 30 menit seharusnya menghasilkan warna yang lebih muda ketika diuji dengan benedict dibandingkan dengan yang didiamkan selama 15 menit. Hal ini dikarenakan, semakin lama waktunya semakin banyak amilum yang bereaksi dengan HCl sehingga struktur amilum atau ikatan-ikatan pada amilum lebih banyak yang mengalami kerusakan. Kesalahan yang terjadi pada percobaan ini dapat dikarenakan oleh kurangnya ketelitian dalam mengamati perubahan warna dan kurang tepat dalam pemberian volum ekstrak enzim yang diperlukan. 3. Aktivitas enzim bromealin Pada praktikum ini kami melakukan percobaan mengenai aktivitas enzim bromelialin dengan melakukan uji ninhidrin untuk mengetahui adanya asam amino bebas yang terkandung dalam albumin telur, susu kedelai dan susu sapi segar. Dalam praktikum ini dibutuhkan 3 tabung reaksi yang masing-masing diisi dengan albumin telur, susu kedelai dan susu sapi segar. Setelah itu ditambahkan 15 tetes enzim bromelialin kemudian didiamkan selama 15menit. Setelah 15 menit berlalu, pada tabung yang pertama yang berisi albumin telur yang sudah bercampur dengan 15 tetes enzim bromelialin selama 15 menit diambil 15 tetes bahan dan ditambahkan 3 tetes pereaksi ninhidrin. Setelah dikocok dan dipanaskan dalam penangas air larutan tersebut

27 menghasilkan warna biru. Sedangkan pada menit ke 30 setelah larutan tersebut ditetesi oleh 3 tetes pereaksi ninhirin dan dipanaskan pada penangas air menghasilkan warna biru yang lebih pekat dibanding pada menit ke 15 dan disertai adanya gumpalan. Untuk tabung kedua yang berisi susu kedelai setelah didiamkan 15 menit kemudian diambil 15 tetes larutan dan ditambahkan 3 tetes pereaksi ninhidrin yang kemudian dipanaskan dalam penangas air warna yang terbentuk adalah biru keunguan. Sedangkan pada menit ke 30 perubahan warna yang terjadi setelah ditambahkan 3 tetes peraksi ninhidrin dan dipanaskan adalah tetap biru keunguan namun lebih pekat dibanding menit ke 15. Pada perlakuan yang terakhir yaitu tabung yang berisi susu sapi segar yang sudah dicampur enzim bromealin dan sudah didiamkan selam 15 menit setelah ditetesi oleh 3 tetes pereaksi ninhidrin dan dipanaskan dalam penangas air warna yang terbetuk adalah ungu kebiruan. Hal ini juga terjadi pada menit ke 30, setelah larutan ditetesi 3 tetes pereaksi ninhidrin dan dipanaskan warna yang terbentuk juga tetap ungu kebiruan namun pada menit ini terbentuk adanya gumpalan. Pada hasil percobaan ini warna yang terbentuk pada menit ke 30 lebih pekat jika dibandingkan dengan menit ke 15. Hal ini dikarenakan pada menit ke 30, enzim bromealin dari nanas tersebut sudah banyak menghidrolisis protein menjadi asam amino sehingga kadar proteinnya berkurang dan kadar asam amino meningkat sehingga menghasilkan warna yang lebih pekat jika dibandingkan dengan menit ke 15 saat di uji dengan ninhidrin. Uji ninhidrin ini dimaksudkan untuk mendeteksi adanya asam amino. Dan apabila larutan yang kita ujikan menghasilkan warna ungu maka larutan tersebut bereaksi dengan asam amino. Dari ketiga percobaan ini didapat bahwa larutan susu sapi segar membentuk warna ungu kebiruan karena pada larutan tersebut dapat bereaksi dengan peraksi ninhidrin. Hal ini menandakan bahwa susu sapi segar mempunyai gugus asam amino. Semakin banyak ninhidrin pada zat uji yang dapat bereaksi, semakin pekat warnanya. Hal ini juga mendasari bahwa uji Ninhidrin dapat digunakan untuk menentukan asam amino secara kuantitatif. Sedangakan endapan yang terbentuk merupakan akibat dari aktivitas enzim protease yang memutus ikatan peptida pada protein. Protein dapat dihidrolisis dengan bantuan enzim yaitu enzim protease. Fungsi dari enzim protease tersebut yaitu untuk memutus ikatan peptida yang menyebabkan terjadinya perubahan tekstur. Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh enzim yang terkandung dalam ekstrak nanas dalam proses hidrolisis protein.

28 B. Faktor faktor yang Mempengaruhi Kerja Enzim 1. Pengaruh suhu terhadap kinerja enzim Pada percobaan selanjutnya adalah untuk mengetahui pengaruh suhu terhadap kinerja enzim. Dimana percobaan dilakukan dengan meletakkan suspensi amilum sebanyak 2 ml dan ditambah larutan saliva sebanyak 1 ml pada 4 buah tabung reaksi yang berbeda. Tabung 1 dimasukkan pada air es, tabung 2 dimasukkan pada penangas air bersuhu C, tabung 3 dimasukkan pada penangas air mendidih, tabung 4 diletakkan pada suhu ruang. Selanjutnya, dbiarkan selama 15 menit. Kemudian masing-masing tabung tetesi dengan larutan IKI. Hasil yang diperoleh adalah sebagai berikut : Tabung 1 ( air es) berwarna kuning (++) Tabung 2 ( suhu 40 0 C ) berwarna kuning (++++, paling kuning) Tabung 3 ( suhu C ) berwarna kuning kehitaman Tabung 4 ( suhu ruang ) berwarna kuning bening (+) Enzim jika dipanaskan ± diatas suhu 40 0 C akan mengalami denaturasi (kerusakan) karena gaya-gaya ikatan lemah penting yang terdapat didalam enzim akan rusak akibat meningkatnya getaran termal pada suhu yang tinggi. Enzim juga sangat sensitif terhadap suhu yang rendah. Enzim tidak akan bekerja pada suhu yang rendah karena gaya-gaya lemah pada sub unit tunggal enzim terganggu pada bentuk polimeriknya. (Biokimia ; Rex Montgomery). Suhu optimum enzim untuk bekerja secara optimal adalah berbeda-beda sesuai dengan jaringan penghasilnya. Namun kebanyakan enzim akan bekerja optimal pada suhu 37 0 C-40 0 C. Hasil percobaan yang telah didapatkan mengalami kesalahan karena berdasar teori seharusnya pada suhu C enzim akan mengalami denaturasi (kerusakan) akibat suhu termal yang terlalu tinggi, dan ketika diletakkan pada suhu ruang seharusnya ia bekerja namun tidak secara optimal karena masih terdapat suhu yang menggerakkan gaya gaya lemah penyusun enzim untuk bekerja. Ketika dimasukkan pada air es seharusnya ia tidak akan bekerja dengan penanda warna kuning jernih atau tidak terdapatnya lingkaran hitam karena suhu rendah mengakibatkan gaya-gaya lemah penyusun enzim untuk bekerja tidak akan aktif. Sedangkan

29 pada suhu 40 0 C seharusnya suhu yang paling optimal bagi enzim amilase untuk bekeja. Kesalahan percobaan yang terjadi dikrenakan kurang lamanya proses pendinginan maupun proses pemanasan sehingga hasil uji tidak menunjukkan data yang akurat. Atau mungkin juga dikerenakan kurangnya ketelitian dari praktikan ketika mengamati perubahan warna yang terjadi pada larutan uji. Percobaan selanjutnya adalah uji benedict. Dimana percobaan dilakukan dengan menambahkan masing-masing 15 tetes fehling A dan B yang telah dikocok hingga tercampur pada tabung reaksi yang berisikan suspensi amilum + saliva sebanyak 5 tetes. Setelah itu dipanaskan diatas lampu spirtus hingga mendidih atau selama 2 menit. Hasil percobaan diperoleh sebagai berikut : Tabung 1 ( air es) berwarna biru (+++) Tabung 2 ( suhu 40 0 C ) berwarna biru (++++, paling biru) Tabung 3 ( suhu C ) berwarna biru (++) Tabung 4 ( suhu ruang ) berwarna biru (+) Hasil percobaan yang kami lakukan mengalami kesalahan karena berdasar teori hasil pada uji dengan reagen benedict adalah kebalikan dari uji dengan reagen IKI. Dimana seharusnya pada suhu optimal (pada suhu 40 0 C) ketika diuji dengan benedict menghasilkan warna yang lebih gelap yakni kecokelatan (++++) dan pada suhu ruang ketika larutan uji ditetesi reagen benedict akan berwarna lebih muda dari hasil uji pada suhu 40 0 C (+++) atau biasanya berwarna hijau kekuningan. Sedangkan untuk yang berada pada air es seharusnya tidak mengalami perubahan warna (tetap biru), hal ini dikarenakan enzim tidak aktif pada suhu tersebut. Begitu juga dengan suhu C juga tidak akan mengalami perubahan warna, hal ini disebabkan pada suhu tersebut enzim mengalami denaturasi sehingga tidak bisa menghidrolisis amilum menjadi maltose dan glukosa. Hal ini berkaitan dengan uji dengan reagen IKI dimana pada kondisi ini ikatan pada amilum masih kuat atau belum terlepas sehingga kandungan maltosa (disakarida) yang terbentuk dari hidrolisis amilum masih banyak dan terbentuknya glukosa (monosakarida) gula pereduksi masih relatif sedikit yang ditunjukkan oleh uji benedict dengan berwarna biru. Dan ketika ikatan pada amilum mulai melemah atau mulai banyak yang terlepas, kandungan maltosa (disakarida) yang terbentuk dari hidrolisis amilum sudah semakin sedikit karena telah terpecah menjadi glukosa (monosakarida) gula pereduksi, yang ditunjukkan dengan uji benedict dengan warna

30 biru yang lebih tua daripada percobaan sebelumnya. Kesalahan yang terjadi ini dapat disebabkan karena kurang lamanya proses pendinginan maupun pemanasan sehingga hasil uji menunjukkan data yang kurang akurat dan dapat juga dikarenakan kurangnya ketelitian pada saat mengamati perubahan warna. 2. Pengaruh ph Pada praktikum kali ini, dilakukan pengujian pengaruh ph terhadap kerja enzim amilase. Amilase yang digunakan pada praktikum ini yaitu larutan saliva. Pertama, 2 ml suspensi amilum 2 % dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 1 ml larutan saliva dan dikocok hingga tercampur. Selanjutnya, ditambah 8 tetes HCl 1 N dan dibiarkan selama 15 menit. Setelah menit ke 15, larutan tersebut diuji dengan reagen IKI. Dari pengujian tersebut terjadi perubahan warna pada larutan. Awalnya, larutan berwarna putih keruh berubah menjadi kuning dengan campuran warna hitam. Dalam pengujian ini digunakan HCl 1 N atau setara dengan HCl 1 M, sehingga larutan HCl tersebut memiliki ph 0 ph = - log [H + ] ph = - log 1 ph = 0 Pada ph 0 diperoleh hasil positif pada uji IKI yakni terdapatnya campuran warna hitam pada larutan. Warna hitam yang terbentuk pada larutan menujukkan bahwa pada ph tersebut enzim amilase tidak aktif dan karbohidrat (amilum) tidak dapat terhidrolisis. Selanjutnya, dilakukan pengujian dengan benedict namun tidak dihasilkan perubahan warna yakni biru tua tetap menjadi biru tua, hal ini berarti larutan tersebut negatif terhadap uji benedict. Hal tersebut juga dikarenakan pada kondisi yang sangat asam enzim tidak aktif sehingga amilum tidak dapat dihirolisis menjadi glukosa (gula pereduksi) oleh enzim amilase. Enzim amilase saliva memiliki ph optimal pada ph 7, karena pada ph ini diperoleh aktivitas enzim yang tinggi (kecepatan reaksi enzimatik tinggi). Menurut Amerongen (1991) amilase yang terdapat dalam saliva adalah α-amilase liur yang mampu membuat polisakarida (pati) dan glikogen dihidrolisis menjadi maltosa dan oligosakarida lain dengan menyerang ikatan glikosodat α(1 4). Amilase liur akan segera terinaktivasi pada ph 4,0 atau kurang sehingga kerja pencernaan makanan dalam mulut akan terhenti apabila lingkungan lambung yang asam menembus partikel makanan.