DETEKSI ANTIBODI DAN VIRUS INFLUENZA TIPE A SUBTIPE H9 PADA KUCING JALANAN (Felis sp.) DI INDONESIA

Transkripsi

1 ARTIKEL ILMIAH DETEKSI ANTIBODI DAN VIRUS INFLUENZA TIPE A SUBTIPE H9 PADA KUCING JALANAN (Felis sp.) DI INDONESIA Oleh : MEI HIDANINGRUM NIM FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN UNIVERSITAS AIRLANGGA SURABAYA 2016

2 DETECTION OF ANTIBODY AND TYPE A SUBTYPE H9 INFLUENZA VIRUS ON STRAY CATS (Felis sp.) IN INDONESIA Mei Hidaningrum 1), Chairul Anwar Nidom 2,4)#, Abdul Samik 3) 1)Mahasiswa, 2) Departemen Ilmu Kedokteran Dasar Veteriner, 3) Departemen Reproduksi Veteriner 4)Avian Influenza-zoonosis Research Center Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga # nidomca@unair.ac.id ABSTRACT The aim of this study was to detect the presence of antibody and type A subtype H9 influenza virus in cats from Surabaya, Sidoarjo, Lamongan, Gresik and Jakarta. The study was conducted from December 2015 to April 2016 in the BSL-2 Laboratory AIRC-Universitas Airlangga. 41 cats were collected from Surabaya, 33 from Sidoarjo, 14 from Gresik, 12 from Lamongan, and five from Jakarta. The samples being tested in the study were nasofaring swab and blood serum of the cats..after centrifuging the swab with media transport, the supernatant was inoculated into chicken eggs with embryo (9-11 days old) then were incubated at 37 C. On the fourth day, the allantois fluid s Hemagglutinin activity was analyzed using Hemagglutination (HA) test. The prepared blood serum was analyzed for its type A subtype H9 influenza virus antibody by using Hemagglutination Inhibition (HI) test. The result of this research showed that two samples from Surabaya (4.87 %), Sidoarjo (6.06 %), Gresik (14.28 %) and one sample from Jakarta (20 %) were positive, indicating the presence of potential type A subtype H9 influenza virus antibody in the cats. The result of HA tests was negative. We recommend to do further analysis using the protective titer detection method; such as Serum Neutralization Test (SNT) and to continue the surveillance of the viruses presence in cats. Keywords: Influenza, H9, Cat, HA test, HI Menyetujui untuk dipublikasikan dengan Author Mei Hidaningrum, Surabaya, 9 Juni 2016 Mahasiswa Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II (Mei Hidaningrum) (Prof. Dr. Chairul A. Nidom, drh., MS) (Dr. Abdul Samik, drh. M.Si) NIM NIP NIP Dosen Penguji I Dosen Penguji II Dosen Penguji III (Dr. K. Rachmawati, drh., M. Kes) (Prof. Dr. A. Ma ruf, drh., M.Kes) (Nanik S. W.,drh.,SU) NIP NIP NIP

3 DETEKSI ANTIBODI DAN VIRUS INFLUENZA TIPE A SUBTIPE H9 PADA KUCING JALANAN (Felis sp.) DI INDONESIA ABSTRAK Penelitian ini bertujuan mendeteksi keberadaan antibodi virus influenza tipe a subtipe H9 pada kucing jalanan di Indonesia yang berasal dari wilayah, Surabaya, sidoarjo, lamongan, gresik dan Jakarta. Penelitian ini berlangsung dari bulan Desember 2015 hingga April 2016 di BSL-2 Laboratory AIRC-Universitas Airlangga. 41 kucing di kumpulkan dari Surabaya, 33 dari Sidoarjo, 14 dari Gresik, 12 dari Lamongan, dan lima dari Jakarta. Sampel yang diuji pada penelitian ini adalah swab nasofaring dan serum darah pada kucing. Setelah sampel swab dengan media transport di sentrifuse, supernatant diinokulasikan pada Telur Ayam Berembrio (umur 9-11 hari) lalu diinkubasi pada suhu 37 C. Pada hari keempat, cairan allantois dianalisa aktivitas hemaglutininya dengan test Hemagglutination (HA). Sampel serum darah yang telah dipreparasi dianalisa dengan test Hemagglutination Inhibition (HI) untuk mengidentifikasi antibody virus influenza tipe a subtype H9. Hasil dari penelitian ini menunujukkan bahwa dua sampel masing-masing dari Surabaya (4.87 %), Sidoarjo (6.06 %), Gresik (14.28 %) dan satu sampel dari Jakarta (20 %) terindikasi positif antibodi virus influenza tipe a subtype H9 yang potensial ada pada kucing jalanan. Hasil dari seluruh sampel yang diuji HA menunjukkan hasil yang negatif. Kami merekomendasikan untuk menganalisis lebih lanjut menggunakan uji serologis protektif yaitu SN Test, dilakukan pula isolasi virus dari kucing dan melanjutkan surveillans keberadaan virus pada kucing. Kata Kunci : Influenza, H9, kucing, uji HA, HI Pendahuluan Penyakit Flu Burung atau Avian Influenza (AI) menjadi perhatian khusus sebagai suatu isu kesehatan yang telah mewabah dan mengancam beberapa negara seperti Thailand, Vietnam, China, Eropa dan juga Indonesia. Virus Influenza merupakan golongan keluarga virus Orthomyxoviridae. Berdasarkan susunan protein strukturnya, virus ini telah dibagi menjadi tiga tipe yaitu tipe A, B dan C. Virus tipe A dapat menginfeksi unggas, manusia, babi, kuda, cerpelai, anjing laut dan paus sedangkan virus tipe B dan C menginfeksi manusia (Nidom, 2010; Kapoor and Dharma, 2014). Salah satu subtipe virus Influenza A adalah virus Influenza tipe A subtipe H9. Infeksi virus ini menyebabkan gejala klinis yang cenderung ringan, namun tidak dipungkiri peran dalam beberapa kasus wabah penyakit dan kematian di peternakan unggas yang disebabkan infeksi pathogen lain (Guan et al., 2000; Peiris et al., 2001).

4 Kasus yang terjadi pada manusia di tahun 1999 dilaporkan bahwa dua anak terinfeksi virus Influenza A subtipe H9 di Hongkong, kemudian pada tahun 2003 juga terdapat laporan seorang anak terinfeksi virus yang sama (Rahardjo dan Nidom, 2004). Virus Influenza A subtipe H9 sudah menular ke berbagai spesies mamalia. Mamalia yang pernah dilaporkan terinfeksi virus H9N2 di Iran adalah anjing jalanan (Hasiri et al., 2012). Kasus yang sama juga ditemui di daerah Cina Selatan (Sun et al., 2013). Kucing jalanan dan anjing jalanan merupakan hewan yang memiliki interaksi sangat dekat dengan manusia, sehingga memungkinkan berperan terhadap penularan virus influenza antar spesies. Kucing jalanan merupakan kucing yang dibiarkan berkeliaran dan tidak ada yang memiliki. Spesies ini memiliki kemungkinan mampu menjadi inang penyebaran virus Influenza ke manusia, karena keberadaan dan interaksi epidemiologis antara manusia dan kucing jalanan yang cukup tinggi di tempat publik. Pasar merupakan salah satu tempat publik yang potensial untuk penyebaran beragam penyakit, karena terjadi pola distribusi bahan pangan maupun non pangan dari berbagai wilayah dalam suatu daerah. Keberadaan rumah potong unggas, tempat penjualan daging, tempat pembuangan sampah dalam pasar merupakan tempat yang tidak luput dari keberadaan kucing jalanan. Kucing jalanan memiliki mobilitas yang cukup tinggi untuk mencari pakan. Tempat publik lain yang memiliki populasi kucing jalanan adalah rumah sakit, hal ini dikarenakan keberadaan kantin dan tempat pembuangan sampah yang sering dikunjungi kucing untuk mencari pakan. Potensi penyebaran penyakit pada rumah sakit juga cukup tinggi, termasuk potensi penularan virus Influenza. Hingga saat ini belum pernah dijumpai kasus H9 pada manusia maupun hewan di Indonesia. Berdasarkan beberapa penemuan mengenai wabah virus Influenza Tipe A subtipe H9 di beberapa negara yang melibatkan hewan dan manusia, maka perlu dilakukan penelitian mengenai kemungkinan kucing jalanan di Indonesia sebagai salah satu hewan yang berperan terhadap mata rantai penularan virus Influenza. Penelitian ini dilakukan untuk mendeteksi antibodi dan virus Influenza A subtipe H9 pada kucing jalanan di Indonesia

5 Metode Penelitian Penelitian dilakukan di Laboratorium BSL-2 Avian Influenza Research Center (AIRC) Universitas Airlangga Surabaya. Penelitian dilaksanakan pada bulan Desember April Bahan dan alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah 105 serum dan 73 swab nasofaring kucing yang berasal dari pasar di Indonesia, subunit antigen Influenza Tipe A Subtipe H9 yang berasal dari Hokaido University, Red Blood Cell (RBC) marmut 0,75%, TAB berumur 9-11 hari yang bersifat SAN (Specific Antibody Negative) yang diperoleh dari PT. Shigetta-IPB, Surabaya, ketamin, medium transport 199, larutan Phosphat Buffer Saline (PBS), Penicillin Streptomycin (penstrep), micropipet (50 μl, 100 μl, 1000 μl), micropipet multichannel 50 μl, keranjang, spuit 1 ml dan 3 ml, cotton-swab, Biological Safety Cabinet (BSC), inkubator telur 37 o C, egg candler, tabung conical 15 ml, tabung eppendorf 1,5 ml, centrifuge, dry bath, microplate U, vortex. Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah serum dan swab nasofaring kucing. Pengambilan sampel dimulai dengan penangkapan kucing di lapangan kemudian melakukan anestesi umum menggunakan ketamin mg/kgbb. Pengambilan darah menggunakan teknik intracardiac pada jantung sebanyak 2,5 ml. Pengambilan swab nasofaring dengan cara memasukkan cotton-swab ke dalam rongga mulut sampai masuk ke tenggorokan kemudian hasil swab dimasukkan ke tabung conical 15 ml yang berisi medium transport 3 ml. Sampel darah dan swab kemudian disimpan dalam refrigerator pada suhu 4 o C. Swab nasofaring kucing yang telah dipreparasi kemudian diinokulasikan pada TAB berumur 9-11 hari yang bersifat SAN (Specific Antibody Negative). Supernatan diinokulasikan sebanyak 0,2 ml dan ditambahkan 50 µl penstrep pada tiap TAB dengan memasukkan jarum yang berisi supernatan sedalam ±15mm agar mencapai rongga alantois. TAB diinkubasikan pada inkubator 37 o C selama 3 4 hari. Embrio yang mati sebelum empat hari dikeluarkan dari inkubator kemudian disimpan di refrigerator 4 o C. Isolat yang berupa cairan alantois digunakan untuk uji Hemaglutinasi (HA).

6 Pengujian serum dengan uji HA dan HI mikroteknik memerlukan suspensi Red Blood Cell (RBC) dengan konsentrasi 0,75%. Suspensi diperoleh dari darah marmut. Darah tersebut disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 5 menit. Supernatan dibuang dan sisa endapannya dicuci dengan menambahkan PBS, kemudian disentrifus lagi selama 5 menit. Kegiatan pencucian RBC dengan PBS ini diulang sampai dua kali, karena jika lebih dari 2 kali, dapat terjadi hemolisis (WHO, 2011). Uji HI pada serum menggunakan subunit antigen Influenza Tipe A Subtipe H9 yang sebelumnya telah dilakukan titrasi 4 HA Unit. Sampel serum sebelum dianalisa dengan uji HI diinaktivasi terlebih dahulu pada dry bath dengan suhu 56 o C selama 30 menit. Tujuan dari inaktivasi ini adalah menghilangkan komplemen-komplemen yang akan mengganggu pada saat uji berlangsung dan pembacaan uji. Hasil dan Pembahasan Sampel yang digunakan dalam penelitian ini berjumlah 106 sampel serum dan 73 sampel swab. Sampel serum diuji dengan metode uji HI untuk mendeteksi antibodi spesifik dari virus Influenza A Subtipe H9, sedangkan sampel swab diinokulasikan pada TAB berumur 9-11 hari selama 3 hari, lalu dipanen dan menghasilkan sampel isolat yang siap diperiksa dengan uji HA. Tabel 4.1 Data Hasil Uji HA pada Kucing Jalanan No. Asal sampel Jumlah sampel Jumlah sampel positif Persentase sampel positif 1. Surabaya % 2. Sidoarjo % 3. Jakarta % 4 Lamongan 1 0 0% Total % Hasil pemeriksaan dengan menggunakan uji HA menunjukkan bahwa dari 73 sampel swab isolat terjadi adanya bentukan endapan cincin hallo, dan keseluruh sampel menunjukan hasil negatif.

7 Berdasarkan uji HA yang menunjukkan nilai negatif, belum tentu menunjukkan bahwa virus tidak terdapat pada spesimen yang diperiksa. Hal itu mungkin disebabkan virus tidak dapat dideteksi dengan cara tersebut, titer virus masih rendah pada saat pemeriksaan, kematian virus yang disebabkan oleh autolisis jaringan (Susanti et al., 2007). Tabel 4.2 Data Hasil Uji HI pada kucing jalanan. No. Kota Jumlah Sampel Jumlah Sampel Positif Persentase 1. Surabaya ,87% 2. Sidoarjo ,06% 3. Gresik ,28 4. Lamongan Jakarta % 6. Total ,67% Pemeriksaan menggunakan uji HI dengan antigen virus influenza A subtipe H9 menunjukkan masing masing dua sampel positif berasal dari kucing Surabaya, Gresik, dan Sidoarjo serta satu sampel positif yang berasal dari kucing Jakarta. Pasar merupakan salah satu tempat publik yang potensial untuk penyebaran beragam penyakit, karena pola distribusi bahan pangan maupun non pangan dari berbagai wilayah dalam suatu daerah. Keberadaan rumah potong unggas, tempat penjualan daging, tempat pembuangan sampah dalam pasar merupakan tempat yang tidak luput dari keberadaan kucing jalanan. Kucing jalanan memiliki mobilitas yang cukup tinggi untuk mencari pakan. Dua sampel positif dari Surabaya berasal dari kawasan pasar yang berbeda yakni pasar Tambakrejo (KTR3) di Surabaya Timur dan pasar Wonokromo (KWN4) di Surabaya Selatan. Sampel KWN4 yang terdiri dari serum dan swab, dimana hasil uji HA pada sampel swab menunjukkan hasil negatif. Dapat disimpulkan terdapat kucing yang pernah terinfeksi virus influenza A subtipe H9. Begitupula, dua sampel positif KSG2 dan KSG4 dari kota gresik juga berasal dari kawasan yang berbeda. Hasil pengujian dari kawasan pasar yang sama

8 terdapat pada dua sampel posititf (KLAR13 dan KLAR14) dari kabupaten Sidoarjo. Hal ini bisa memungkinkan adanya penularan virus influenza A subtipe H9 pada antar spesies kucing dalam satu area yang sama. Satu sampel postif kucing Jakarta berasal dari pasar Pramuka (KPR3). Keseluruh sampel positif tersebut memiliki titer antibodi 2 4. Hasil titer antibodi yang tidak terlalu tinggi dapat disebabkan beberapa hal, diantara lain, pernah terjadinya infeksi dalam fase waktu yang telah lama, virulensi virus rendah serta kekebalan antibodi yang lebih tinggi ada pada virus Influenza tipe H5, dikarenakan penggunaan dan penerapan vaksin pada unggas yang sudah meluas (Wang et al., 2009). Virus Influenza A subtipe H9 sebelumnya belum pernah dijumpai di Indonesia. Hasil publikasi di China menunjukkan bahwa virus Influenza A subtipe H9 mampu menyerang dan menular secara kontak udara pada spesies lain seperti babi, anjing, dan anjing jalanan (Xu et al., 2004, Hasiri et al., 2012). Penelitian ini dapat memperkuat potensi kucing sebagai mamalia yang berperan sebagai inang dari virus Influenza Tipe A (subtipe H1, H3, H5, H7, H9) maupun Tipe B (subtipe Bv dan By). Hal serupa pada hasil uji serologis virus Influenza A subtipe H3 dan H7 pada kucing yang sama (KTR3) dari Pasar Tambakrejo, Surabaya. Pada penelitian yang dilakukan oleh Wardhani dan Damayanti (2016) (Unpublished) menunjukkan bahwa di daerah Surabaya, Gresik, Sidoarjo, dan Jakarta terdapat sampel yang positif dengan titer antibodi yang tinggi (2 8 dan 2 7 ), sementara pada hasil pengujian HA sampel swab keseluruhnya menunjukkan hasil yang negatif. Hal ini menunjukkan kucing mampu terinfeksi berbagai macam subtipe influenza (muti infection), serta kemungkinan potensi kucing sebagai mixing vessel. Nilai titer antibodi yang tinggi diatas titer protektif (2 4 ) diduga diperoleh dari sistem pertahanan tubuh yang merespon paparan virus Avian Influenza dari lingkungan sehingga tubuh tervaksinasi secara alami (Elfidasari, 2013). Variasi titer antibodi dapat dipengaruhi oleh beberapa kondisi diantaranya adalah kesehatan kucing, jumlah virus yang menginfeksi, dan perbedaan waktu infeksi. Kesimpulan Pada penelitian ini diindikasikan terdapat antibodi virus Influenza Tipe A subtipe H9 pada kucing

9 jalanan sejumlah tujuh sampel positif (6,67%) dengan rincian dua berasal dari Surabaya (4,87%), dua berasal dari Gresik (14,28%), dua berasal dari Sidoarjo (6,06%) dan satu berasal dari Jakarta (20 %). Dari sampel swab nasofaring menunjukkan tidak terdeteksi virus Influenza Tipe A subtipe H9 pada kucing jalanan. Daftar pustaka Damayanti Serologis dan virologis Avian Influenza H7 pada Kucing Jalanan di Indonesia. (Unpublished) Elfidasari D. dan R. L. Puspitasari Analisa Cross-Infection Virus AI Subtipe H5N1 Berdasarkan Imunoserologi pada Burung Air di Cagar Alam Pulau Dua.Jurnal Al-Azhar Indonesia Seri Sains Dan Teknologi, Vol. 2, No. 2. Guan, Y., K. F. Shortridge., S. Krauss., P. S. Chin., K. C. Dyrting., T. M. Ellis, R. G. Webster., and M. Peiris H9N2 Influenza Viruses Possessing H5N1-Like Internal Genomes Continue To Circulate in Poultry in Southeastern China. J.Virology Vol. 74, No. 20. p Hasiri, M. A., S. Nazifi, E. Mohsenifard and M. Ansari-Lari Seroprevalence of Avian H9N2 Influenza Virus in a Population of Iranian Domestic Dogs. Journal of Basic & Applied Sciences, 2012, 8, Kapoor, S. and K. Dharma Epidemiology of Influenza Viruses. Springer International Publishing Switzerland. DOI: / _5 Nidom, C. A Menelusuri Penyebaran Virus Flu Burung di Indonesia Tahun University Press. Hal ). Airlangga Peiris, J.S., Y. Guan, D. Markwell, P.Ghose, R. G. Webster, and K. F. Shortridge Cocirculation of avian H9N2 and contemporary bhumanq H3N2 influenza A viruses in pigs in southeastern China: potential for genetic reassortment? J. Virol. 75, Rahardjo, J dan C.A. Nidom Avian Influenza : Pencegahan, Pengendalian dan Pemberantasannya. Hasil Investigasi Kasus Lapangan. Gita Pustaka. Jakarta. Sun, X., X. Xu, Q. Liu, D. Liang, C. Li, Q. He, J. Jiang, Y. Cui, J. Li, L. Zheng, J. Guo, Y. Xiong, and J. Yan Evidence of avian-like H9N2 influenza A virus among dogs in Guangxi, China. J. Infection, Genetics and Evolution 20 (2013) Susanti R., Soejoedono R.D., Mahardika I.G.N.K., Wibawan I.W.T. and Suhartono M.T Waterfowl Potential as Resevoirs of High Pathogenic Avian Influenza H5N1 viruses. JITV 12(2): Wang, M,. C. Fu, and B. Zheng Antibodies against H5 and H9 Avian Influenza among Poultry Workers in China. J. Med.360;2 Wardhani. R. R Uji Serologi Antibodi dan Deteksi Virus Influenza Tipe A pada Kucing Jalanan (Felis sp.). Unpublished

10 WHO/CDR/CSR/NCS/2000.5WHO (World Health Organization) Manual for the Laboratory Diagnosis and Virological Surveillance of Influenza. WHO Press. Switzerland. ISBN Xu, C., W. Fan, R. Wei, and H. Zhao.2004.Isolation and identification of swine influenza recombinant A/Swine/Shandong/1/2003(H9N2) virus.j. Microbes and InfectionVolume 6, Issue 10, Pages