BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT) DARI DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) Inda Mapiliandari dan Candra Irawan Akademi Kimia Analisis

Transkripsi

1 BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT) DARI DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) Inda Mapiliandari dan Candra Irawan Akademi Kimia Analisis ABSTRACT Having been researched toxicity bioassay with Brine Shrimp Lethality Test (BSL T) method using Artemia salina egg of n-hexane, ethyl acetic, and methanol extracts of leaf Piper crocatum Ruiz & Pav. The LCso values using Probit analysis method for n- hexane, acetic ethyl, and methanol extracts were 133,0 ppm; 36,41; dan 16,15 ppm. Key Word: Artemia salina Leach; Brine Shrimp Lethality Test; Piper crocatum Ruiz & Pav PENDAHULUAN aktivitas farmakologis sebagai antikanker (Feri Manoi, 007). Daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) merupakan bagian tanaman sering digunakan sebagai ramuan obat tradision untuk mengatasi berbagai penyakit seperti kanker, tumor, gangguan ginjal, lever, asam urat, hipertensi, radang prostat, nyeri sendi, dan diabetes melitus (Feri Manoi, 007) pembuktiannya dilakukan secara empiris. Studi kimia dan farmakologis terhadap tanaman tersebut masih terbatas, sehingga aktivitas biologis senyawaan ada dalam tanaman tersebut perlu diketahui. Daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) diduga memiliki Pengujian pendahuluan aktivitas antikanker ini dapat dilakukan menentukan toksisitas metabolit sekunder terkandung dalam daun sirih merah. Metode dapat digunakan dalam penentuan toksisitas ini adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSL T) larva udang Artemia salina Leach. Tujuan Penelitian Penelitian ini diarahkan untuk mengetahui toksisitas metabolit sekunder dari daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) sebagai pengujian pendahuluan antikanker menggunakan metode Brine Shrimp WARTA AKAB, No 1, JULl 009 3

2 Lethality Test (BSL T) larva udang Artemia salina Leach. BAHAN DAN METODE PENELITIAN Bahan Bahan digunakan dalam penelitian ini meliputi bahan uji dan bahan kimia. Bahan uji digunakan dalam penelitian ini adalah daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) kering dikumpulkan dari tanaman hasil budidaya di daerah Ciapus Bogor. Bahan kimia digunakan adalah metanol, etil asetat, n-heksana, asam sulfat pekat, asam klorida %, asam klorida pekat, larutan feriklorida, anhidrida asam asetat, asam asetat glasial, kloroform, pereaksi Dragendorff, pereaksi Mayer, telur udang Artemia salina Leach, DMSO, air laut, dan akuades. Peralatan Peralatan digunakan dalam penelitian ini adalah neraca analitik, rotary shaker, rotary evaporator, oven, peralatan gelas, incubator, lampu UV, dan kotak sekat berlubang. Metode Penelitian ini dilakukan dalam beberapa tahap. Tahap awal dilakukan 4 UJl determinasi tanaman bertujuan untuk mendapatkan spesies dari tanaman digunakan dalam penelitian. Tahap kedua dilakukan pembuatan oleoresin metode maserasi menggunakan pelarut n-hekasan, etil asetat, dan metanol. Tahap ketiga dilakukan uji fitokimia dan pengujian toksisitas dari daun sirih merah menggunakan metode Brine Shrimp LethaZity Test (BSL T) larva udang Artemia salina Leach. Uii Determinasi Uji determinasi tumbuhan sirih merah dilakukan di Herbarium Bogoriense, bidang Botani Pusat Penelitian Biologi-LIPI. si si dilakukan teknik maserasi (perendaman) menggunakan beberapa pelarut organik. Sejumlah 300 gram daun sirih merah kering telah halus.direndam dalam pelarut organik (n-heksana) sampai terendam selama tiga hari, kemudian disaring. Filtrat diperoleh diuapkan kembali hingga kering. Hasil diperoleh merupakan dari n-heksana. Residu dari perendaman pertama seluruhnya direndam kembali WART A AKAB, No 1, JULI 009

3 dalam etil asetat selama tiga hari, dan disaring. Filtrat diuapkan dan diperoleh dalam tiap lubang vial berturut-turut menjadi: 10; 5; dan 1 etil perendaman kembali etil dalam asetat. asetat direndam metanol hari untuk memperoleh Residu selama tiga sebanyak ug/ml.. Untuk dilakukan sampai hasil berwama ditambah semua senyawa dapat kali sehingga pengulangan. Sebagai kontrol dipakai 100 ul, air laut berisi dan diharapkan setiap tiga metanol. Maserasi dilakukan berulang bening 100 ul ekor larva udang 100 ul. air laut. Setelah dibiarkan selama 4 jam, udang terlarut di dalam pelarutnya. masih hidup dan sudah mati Uii Fitokimia dihitung jumlahnya. Pada tahap identifikasi terpenoid, nu alkaloid, alkaloid poliuranida sterol basa, (pectin, Data dilakukan dan flavonoid, mucilage, gum), dianalisis hasil pengujian menggunakan (Colegate, metode 1993) perhitungan jumlah Sam berdasarkan larva mati glikosida steroid, glukosida, dan tanin. dan Brine Shrimp Lethalitv Test (BSL T) kematian atau mortalitas (%) diperoleh Larutan uji n- BSLT masih hidup. membandingkan Tingkat antara jumlah heksana, etil asetat, dan metanol dari mati dibagi jumlah total daun sirih merah dilarutkan dalam larva. air laut. Konsentrasi larutan uji pada uji penentuan pertama mengkonversi tabel probit. Plotting data antara probit log adalah: 000, 00, dan 0 ug/ml., sedangkan uji setelah pengenceran larutan adalah 0, 10, Nilai dan ug/ml.. Sampel nonpolar bersifat garis regresi: DMSO pengujian kurang kurang larut lebih ditambahkan 10 ul. diperoleh melalui probit, yaitu prosen kematian akan diperoleh persamaan y Pada LC50 = a + bx Keterangan y = telah diencerkan, setelah 48 jam 100 ul. air laut berisi ekor larva udang dimasuk.kan ke lubang vial uji, kemudian dimasukkan pula 50 (menyatakan larva udang mengalami kematian sejumlah 50% setelah masa inkubasi 4jam). a = slope b = interscp x == mcnyatakan larutan menyebabkan kematian terhadap 50% larva larutan WARTA AKAB, No 1, JULl009 5

4 HASIL Uji Determinasi DAN PEMBAHASAN Hasil determinasi tanaman digunakan dalam penelitian ini dilakukan di Herbarium Bogoriense, bidang Botani Pusat Penelitian Biologi- LIPI adalah jenis sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav). Uji Fitokima Proses si dilakukan secara maserasi terhadap daun sirih merah menggunakan pelarut heksana, etil asetat, dan metanol kemudian diuapkan evaporator menghasilkan pekat. Uji fitokimia terhadap heksana, etil asetat, dan metanol daun sirih merah tersaji pada Tabel 1. Tabel 1 Hasil Uji Fitokimia Heksana, Etil Asetat, dan Metanol dari Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) No Parameter Pengamatan Etil Hek.sana Asetat Metanol I Alkaloid ++ + Tanin + 3 Saponin +.~ 4 Gula + th Pereduksi, Flavonoid 6 Glukosida Fenclik 8 Glikosida + Steroid 9 Sterol - Triteruenoid Tabel 1 menunjukan bahwa pada heksana kesembilan parameter uji tidak teridentifikasi; pada etil asetat teridentifikasi adanya alkaloid, gula pereduksi, dan adanya ikatan glikosida; sedangkan pada metanol teridentifikasi adanya alkaloid, tanin, saponin, gula pereduksi, dan diduga suatu glikosida steroid. Brine Shrimp Lethality Test (BSL T) Larva Udang Artemia salina Leach Uji BSL T larva udang Artemia salina Leach dilakukan terhadap heksana, etil asetat, dan metanol dari daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav). Larva udang digunakan sebanyak 10 ekor pada setiap uji dan percobaan dilakukan secara triplo. Rata-rata hasil pengujian tersaji pada Tabe1. Tabel Rata-rata Hasil Uji BSL T Heksana, Etil Asetat, dan Metanol dari Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) _. Jumlah Kosentrasi Jumlah % Sampel Larva (ppm) Larva Mati Kematian Hidup ,00 Heksana ,00 IQ 8 6,67 Etil loo 1\ 19 36,67 Asetat ,00 Metanol , , ) ,00 Blanko Air Laut 0 ) WARTA AKAB, No 1, JULI 009

5 bahwa tersebut. Nilai LCso dari ketiga ketiga mempunyai efek toksik daun sirih merah tersaji pada terhadap Tabel 4. Tingkat Tabel menunjukan larva udang Artemia salina Leach. Untuk mengetahui toksisitas tertinggi dari tanaman ditunjukkan besarnya LCso dari ketiga oleh metanol daun maka LCso sirih dilakukan merah analisis perhitungan tersebut, probit. probit Data hasil tersebut sekunder 3 Data Hasil Perhitungan Probit Efek Toksik Heksana, Etil Asetat, clan Metanol dari Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) Kosentrasi Sampel (ppm) 10 Konsentrasi 0 1 0, ,00 4, ,00 3 8,93 6,6i , ,67 4, ,00 3 8, ,00 1 5, ,67 5, ,00 3 8,93 Metanol diperoleh dihasilkan persamaan heksana: Y = dihasilkan predator. Mekanisme diri terse but kemungkinan cara melindungi organ target maupun menghambat pembelahan sel terkena kuman bioaktif (metabolit semakin potensial terse but untuk pengobatan sekunder), maka senyawa kimia digunakan karena dalam memiliki atau 3, maka akan kemampuan melindungi Juga gans untuk tinggi (Culter and Culter, 000). 4,465 X - 4,486,,456, metanol: adalah probit dan X adalah akan terhadap diri tanaman diri Y = 1,965 X -,66 dalam hal ini Y masing-masing pertahanan pertahanan log. kemampuan mekanisme etil asetat: Y =,7 X-I dan berkaitan data dari Tabel patogen. Semakin rendah senyawa -- Berdasarkan f-- Etil Asetat heksana tanaman pertahanan Nilai Probit Log % Kematian Heksana LCso 133,0 ppm. Toksisitas metabolit disajikan pada Tabel 3. Tabel 16,15 ppm, dan terendah oleh Dengan menggunakan persamaan LCso tersebut Tabel 4 Nilai LCso Heksana, Etil Asetat, dan Metanol dari Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) Sampel LC (ppm) Heksana Etil Asetat 36,41 Metanol 16,15 ketiga WART A AKAB, No 1, lull 009 7

6 SIMPULAN Hasil pengujian telah dilakukan memberi petunjuk. bahwa metanol dari daun sirih merah mempunyai sifat toksisitas terkuat LCso 16,15 ppm. Structural Determination. CRC Press. Boca Raton: 44, Cutler, Stephen J, and Horace Cutler, 000, Biologically Active Natural Products: Pharmaceuticals, CRC Press LLC, Boca Raton, USA: I- n, 17-, 73-9 Feri Manoi, Agustus 007, Warta Puslitbangbun Vo!.I3 No., Bogor DAFT AR PUST AKA Ayo, R.G., Audu, O.T., and Amupitan, J.O., 007, Physico-Chemical Characterization and Cytotoxicity Stidies of Seed Extracts of Khaya senegalensis (Desr.) A.Juss., African Journal of Biotechnology Vol. 6 (7), pp Bambang Sudewo, 005, Basmi Penyakit Sirih Merah, PT. Agro Media Pustaka, Jakarta Cassady, John M., and Dourus, Jhon D., 1980, Anticancer Agents Based on Natural Product Models. Academic Press, New York: xiii pp Ciulei, 1., 1984, Methodology for Analysis of Vegetable Drugs, Chemical Industries Branch Division - Industrial Operation UNINDO, Bucharest - Romania : Colegate, Steven M., and Russel. J., Melyneux, 1993, Bioactive Natural Products, Detection, Isolation, and 8 Fujimoto, Y. and M. Satoh, 1986, Studies var aureum II. Synthesis and Cytotoxic Activity of Trihydrocytetralones, Chem. Pharm, Bull, 34: Fujimoto, Y., S. Usui, M. Makino and M. Sumatra, 1996, Phluroglucinols from Baeckea Frutescens, Phytochemistry, 41 : Heyne, K Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid III Yayasan Sarana Wana Jaya, Jakarta : Lisdawati, V. 00, Bioasai Antikanker in Vitro Sel Leukemia dan Isolasi serta Penentuan Struktur Molekul Senyawa Kimia dari Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl.), Tesis Program Pascasarjana, FMIP A, Universitas Indonesia, Depok. Me, Laughlin, J. Loren, Ching J. Chang and David L. Smith, 1991, Studies in Natural Prod, Chemistry: Atta-ur-Rahman, (Ed) vol. IX, Elsevier Science PUB.B.V., USA: WARTA AKAB, No 1, lull 009

7 Meyer, H.N. et ai, 198, Brine Shrimp Lethality Test : Med. Plant Research, Vol. 45, Hipokrates Verlag Gm brl, Amsterdam: Rapisarda A., Ragusa S., and De Pasquale A., 1993, Brine Shrimp Bio-Assay of the Leaves of Some Cordia Species, Pharmaco- Biological Departement University of Messina, Italy. Sirojudin, TB., 005, Analisis Komposisi dan Fitokimia Tanaman Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl), Laporan PKL D3, Akademi Kimia Analisis Bogor. Soediro, 1., 1995, Organisme Bahari sebagai Sumber Bahan Bioaktif, Proceeding Unesco Seminar on Chemistry of Natural Product of Indonesian Plants, Depok, 1-5 WART A AKAB, No 1, JULI 009 9