Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Daun Tumbuhan Akar Kaik-Kaik Uncaria cordata (Lour.) Merr terhadap Artemia salina Leach

Transkripsi

1 Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Daun Tumbuhan Akar Kaik-Kaik Uncaria cordata (Lour.) Merr terhadap Artemia salina Leach (Cytotoxic Activity of Akar Kaik Kaik Extract (Uncaria cordata Lour.) Merr of Artemia salina Leach) Noveri Rahmawati 1, Rahayu Utami; dan Azwendah Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau *Corresponding ABSTRAK Penelitian yang telah dilakukan adalah uji sitotoksik ekstrak daun tumbuhan akar kaik kaik (Uncaria cordata Lour.) Merr. terhadap Artemia salina Leach. Uji sitotoksik dilakukan terhadap ekstrak n-heksan, etil asetat dan metanol dari daun U. cordata Lour. Tiap ekstrak dilakukan uji sitotoksik dengan metode Brine Shrimp Lethality Test menggunakan Artemia salina Leach, dengan berbagai konsentrasi. Data LC50 berupa jumlah Artemia yang mati setelah perlakuan 24 jam. Nilai LC50 ekstrak n-heksan adalah 7,46 µg/ml, ekstrak etil asetat 6,66 µg/ml dan ekstrak metanol 7,83 µg/ml. Semua ekstrak bersifat toksik terhadap Artemia salina Leach namun ekstrak etil asetat mempunyai efek toksik yang paling besar. Kata Kunci: BSLT, sitotoksik, Uncaria cordata Lour. Merr PENDAHULUAN Kekayaan flora yang dimiliki oleh Indonesia berpotensi untuk dikembangkan dalam pencarian obat baru. Diduga dari sekitar jenis flora yang ada di dalam hutan tropis Indonesia sekitar spesies telah diketahui berkhasiat obat, dari jumlah tersebut tercatat 283 spesies merupakan tumbuhan obat penting bagi industri obat tradisional. (Kusuma dan Zaky, 2005). Salah satu tumbuhan obat yang digunakan masyarakat di beberapa negara tropis ialah tumbuhan genus Uncaria. Beberapa penelitian terdahulu yang dilakukan terhadap genus Uncaria diantaranya Uncaria gambir dilaporkan memiliki aktivitas sitotoksik yang sangat kuat terhadap larva Artemia salina Leach menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan LC5026,30 µg/ml dari fraksi etil asetat (Suminiati, 2013). Penelitian lainnya yang dilakukan oleh (Bacher, 2005) dengan metode MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolium bromid) terhadap Uncaria tomentosa menyatakan bahwa kandungan kimia dari Uncaria tomentosa yaitu pteoropodin dan uncarin F mampu menghambat poliferasi sel leukemia limfoblastik akut. Penelitian terhadap Uncaria perrottetii juga telah dilakukan (Vital dan Rivera, 2009) dengan menggunakan metode TUNEL menunjukkan hasil bahwa ekstrak Uncaria perrottetii mampu mengurangi jumlah parasit dan menunjukkan terjadinya perubahan apoptosis pada kit deteksi kematian sel. 324

2 Tumbuhan genus Uncaria yang ditemukan di Indonesia khususnya di hutan Larangan Adat Desa Rumbio Kabupaten Kampar Riau adalah Uncaria cordata (Lour.) Merr. penelitian yang telah dilakukan (Ahmad et al, 2011 ) terhadap Uncaria cordata yang menguji efek antioksidan dan antidiabetes dari berbagai genus Uncaria yang tumbuh di Malaysia menunjukkan hasil bahwa Uncaria cordata memiliki nilai IC50 sebesar 200 µg/ml dan persen inhibisi α-glukosidase yaitu 96,7%. Berdasarkan data diatas maka perlu dilakukan uji aktivitas sitotoksik dari ekstrak Uncaria cordata (Lour.) Merr dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah botol berwarna gelap, erlemeyer, seperangkat alat rotary evaporator, seperangkat alat destilasi, corong, tisu, spatel, timbangan analitik, aluminium foil, rak dan tabung reaksi, pipet mikro, plat tetes, pipet tetes, beker glass, gelas ukur, kapas,wadah akuarium, aerator, lampu dan vial uji. Bahan-bahan yang digunakan adalah daun Uncaria cordata (Lour.) Merr., kloroform 2 N, kloroform amoniak 0,05 N, reagen Mayer, FeCl3 1%, logam Mg, HCl pekat, asam asetat anhidrat, H2SO4 pekat, n-heksana, etil asetat, metanol, silika gel, air laut, larva Artemia salina Leach dan dimetilsulfoksida (DMSO). Prosedur Penelitian Pembuatan Ekstrak Daun segar tumbuhan akar kaik-kaik Uncaria cordata (Lour.) Merr.Sebanyak 5 kg diambil dari Hutan Larangan Adat Desa Rumbio Kabupaten Kampar Provinsi Riau. Sampel yang diperoleh dilanjutkan dengan pembuatan simplisia dimulai dengan sortasi basah, pencucian, pengeringan,perajangan, dan sortasi kering. Sampel segar daun akar kaik-kaik Uncaria cordata (Lour.) Merr. dilakukan uji pendahuluan fitokimia. Dari simplisia kering yang diperoleh sebanyak 2,1 kg diambil sebanyak 1,1 kg untuk diekstraksi dengan metoda maserasi bertingkat menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat dan meetanol. Hasil maserat kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental n-heksana, etil asetat dan metanol, kemudian masing-masing ekstrak dilakukan uji fitokimia dan dilakukan uji sitotoksik. Skrining Fitokimia Ekstrak Uji pendahuluan kandungan metabolit sekunder dilakukan terhadap ekstrak n- heksana, etil asetat dan metanol daun Uncaria cordata (Lour.) Merr. Pada masing-masing ekstrak ditambahkan masing-masing 5 ml air suling dan kloroform sama banyak lalu dikocok kuat dan dibiarkan beberapa saat sampai terbentuk dua lapis. Larutan air digunakan untuk uji senyawa flavonoid, fenolik dan saponin. Sedangkan lapisan kloroform digunakan untuk uji senyawa terpenoid dan steroid. Sedangkan untuk uji alkaloid memiliki prosedur tersendiri. a. Uji Flavonoid Beberapa tetes lapisan air pada plat tetes ditambah 1-2 butir logam magnesium dan beberapa tetes asam klorida pekat. Terjadinya warna jingga, merah muda sampai merah menandakan adanya senyawa flavonoid. 325

3 b. Uji Fenolik Beberapa tetes lapisan air pada plat tetes ditambah 1 2 tetes larutan besi(iii) klorida 1%. Bila terbentuk warna biru/ungu, berarti terdapat senyawa fenolik. c. Uji Saponin Lapisan air dalam tabung reaksi dikocok. Apabila terbentuk busa yang bertahan selama 5 menit, berarti positif adanya saponin. d. Uji Terpenoid dan Steroid Lapisan kloroform disaring melalui pipet yang berisi norit. Hasil saringan di pipet 2 3 tetes dan dibiarkan mengering pada plat tetes. Setelah kering ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard (2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat). Terbentuknya warna merah berarti positif adanya terpenoid dan warna hijau-biru berarti positif adanya steroid. e. Uji Alkaloid Ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Uncaria cordata (Lour.) Merr diambil secukupnya ditambahkan 10 ml kloroform, kemudian tambahkan 10 ml larutan kloroform amoniak 0,05 M dikocok, kemudian diambil secukupnya dimasukkan kedalam tabung reaksi tambahkan 1 ml asam sulfat 2 N kocok selama 2 menit, biarkan hingga terbentuk dua lipisan. Lapisan asam diambil kemudian ditambahkan pereaksi Mayer hasil positif untuk alkaloid jika terjadi endapan putih. Uji Aktivitas Sitotoksik Terhadap Ekstrak n- Heksana, Etil Asetat dan Metanol Dengan Metoda BSLT a. Persiapan larva Artemia salina Wadah disiapkan terlebih dahulu untuk penetasan larva udang, yang kemudian diberi sekat dan sebagian ditutup dengan menggunakan alumunium foil.wadah yang sudah siap, diisi dengan air laut yang sudah disaring. Kemudian kista udang dimasukkan pada bagian wadah yang ditutup dengan alumunium foil dan diletakkan dibawah pencahayaan lampu, biarkan hingga 48 jam. b. Pembuatan konsentrasi sampel uji Siapkan vial uji yang telah dikalibrasi sebanyak 5mL. Ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol ditimbang masing-masing sebanyak 20 mg, kemudian masing-masing ekstrak dilarutkan dengan 2 ml pelarut yang melarutkannya, sehingga diperoleh larutan induk µg/ml. dari larutan induk dipipet sebanyak 0,5 ml dan ditambah pelarut hingga 5 ml kedalam vial yang sebelumnya telah dikalibrasi sehingga diperoleh larutan dengan kosentrasi 1000 µg/ml. larutan dengan kosentrasi 1000µg/mL dipipet sebanyak 0,5 ml ke dalam 4 vial berbeda, dimana larutan uji di 3 vial diuapkan dan 1 vial lainnya ditambah dengan pelarut hingga 5 ml sehingga diperoleh larutan uji dengan kosentrasi 100 µg/ml. Perlakuan yang sama dilakukan hingga didapatkan larutan uji dengan kosentrasi 1 µg/ml. c. Uji sitotoksik terhadap larva Artemia salina Masing-masing vial berisi sampel uji yang telah diuapkan ditambahkan kedalamnya dimetil sulfoskida sebanyak 50 µg/ml, lalu larva udang sebanyak 10 ekor dimasukkan dan ditambah air laut hingga 5 ml.pengamatan dilakukan setelah 24 jam dengan menghitung jumlah larva yang mati. HASIL DAN DISKUSI Hasil Ekstraksi Daun Uncaria cordata (Lour.) Merr yang dipergunakan sebanyak 5 kg dan diperoleh simplisia kering sebanyak 2,1 kg dengan persen rendemen 42%. Untuk proses ekstraksi 326

4 dipergunakan 1,1 kg simplisia kering. Proses ekstraksi dilakukan dengan metoda maserasi bertingkat yaitu proses penyarian sederhana dengan jalan merendam sampel menggunakan pelarut berdasarkan tingkat kepolarannya. Maserasi dimulai menggunakan pelarut yang bersifat non polar terlebih dahulu dan dilanjutkan dengan pelarut yang bersifat semi polar dan polar. Pelarut akan menembus dinding sel dan masuk kedalam rongga sel yang mengandung zat aktif atau senyawa metabolit sekunder, zat aktif akan larut karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam dan di luar sel sehingga larutan yang pekat akan didesak keluar, dan terjadi secara berulang. sehingga terjadi keseimbangan konstentrasi antara larutan diluar dan didalam sel (Anonim, 1986). Ekstrak n-heksan yang diperoleh sebanyak 15,87 gram dengan persen rendemen 1,442%, berat ekstrak etil asetat 63,13 gram dengan persen rendemen 5,739%, dan metanol 103,99 gram dengan persen rendemen 9,453%. Gambar 1. Daun dan Bunga Uncaria cordata (Lour). Merr Hasil Skrining Fitokimia Setelah didapat ekstrak kental n- heksana, etil asetat dan metanol dilakukan uji fitokimia. Diperoleh hasil ekstrak n-heksana positif steroid, ekstrak etil asetat positif terpenoid dan ekstrak metanol positif flavoniod, fenolik, terpenoid dan saponin. Pada beberapa literatur diketahui bahwa beberapa Genus Uncaria memiliki kandungan alkaloid, akan tetepi setelah dilakukan skrining fitokima pada Uncaria cordata yang menjadi sampel pada penelitian ini menunjukkan hasil bahwa tumbuhan ini negatif alkaloid, hal ini disebabkan karena perbedaan tempat tumbuh, perubahan iklim dan suhu dapat menyebabkan bervariasinya kandungan senyawa yang terdapat dalam suatu tumbuhan (Collegate and Molyneux, 1993). Hasil Uji Sitotoksik Ekstrak Pada pengujian ini menggunakan larva udang Artemia salina Leach sebagai hewan ujinya. Larva ini digunakan sebagai hewan uji karena dianggap sama pertumbuhannya dengan pertumbuhan sel pada tubuh manusia. Larva uji dapat digunakan setelah 48 jam dari waktu penetasan (Collegate dan Molyneux, 1993). Hasil uji aktivitas sitotoksik terhadap ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol dari daun Uncaria cordata (lour.) Merr terhadap larva Artemia Salina Leach didapatkan LC50 ekstrak n-heksana sebesar 7,46 µg/ml, ekstrak etil asetat sebesar 6,66 µg/ml, dan ekstrak 327

5 metanol sebesar 7,83 µg/ml.. Ekstrak ini dapat dikategorikan memiliki aktivitas sitotoksik yang sangat kuat, karena suatu senyawa dikatakan bersifat sitotoksik jika nilai LC50 kecil dari 30 µg/ml (Meyer et al, 1982). Aktivitas sitotoksik yang sangat kuat pada ekstrak ini diduga karena adanya senyawa golongan terpenoid didalamnya. Hal ini didukung oleh beberapa penelitian dimana golongan senyawa terpenoid dari Uncaria rhynchphylla mampu menghambat phospolipase Cγ1(PLCγ1) dengan IC50 berkisar antara 9,5 44,6 µm (Andre et al,2013).penelitian lainnya yang telah dilakukan (Sun et al,2012) menyatakan bahwa senyawa golongan triterpenoid dari Uncaria macrophylla yang di uji terhadap dua sel kanker yaitu MCF-7 dan HepG2 dengan metode MTT menunjukkan hasil bahwa senyawa ini memiliki nilai IC50 78,2 µg/ml dan 73,9 µg/ml (Sun et al,2012). Tabel 1. Hasil Pengamatan Perhitungan LC50 Ekstrak n-heksana Uncaria cordata (Lour.) Merr Kosentrasi (µg/ml) Jumlah Jumlah larva yang mati Persen Nilai larva uji Ratarata kematian probit ,833 83,3 5, ,466 46,6 4, ,266 26,6 4, LC50 = 7,76 µg/ml Log kosentrasi Tabel 2. Hasil Pengamatan dan Perhitungan LC50 Ekstrak Etil Asetat Uncaria cordata (Lour.) Merr Kosentrasi (µg/ml) Jumlah larva uji Jumlah larva yang mati Persen kematian Nilai probit Log kosentrasi Ratarata ,9 90 6, ,533 53,3 5, ,266 26,6 4, LC50 = 6,60 µg/ml Tabel 3. Hasil Pengamatan dan Perhitungan LC50 Ekstrak Metanol Uncaria cordata (Lour.) Merr Kosentrasi (µg/ml) Jumlah larva uji Jumlah larva yang mati Persen kematian Nilai probit Log kosentrasi Ratarata ,866 86,6 6, ,666 66,6 5, ,133 13,3 3,887 0 LC50 = 7,41 µg/ml KESIMPULAN Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol menunjukkan aktivitas sitotoksik yang sangat kuat. 328

6 DAFTAR PUSTAKA Ahmad, R., Hashim, H.M., Noor, Z.M., Ismail, N.H., Salim, F., Lajis, N.H., Shaari, K., 2011, Antioxidant and Antidiabetic Potential of Malaysian Uncaria, Research Journal of Medicinal Plant, Hal 1-9 Andre, N., Wang, X., He, Y., Pan, G., kojo, A., Liu, Y., 2013, A Review of the Occurrence of Non-Alkaloid Constituent in Uncaria Species and Their Structure- Activity Relationship, American Journal of Biomedical and life Sciences, Vol 1, No. 4, Hal Anonim, 1986, Sediaan Galenik, Cetakan Pertama, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta Bacher, N., Tiefenthaler, M., Sturm, S., Stuppner, H., Ausserlechner, M. J., Kofler, R., dan Konwalinka, G., 2005, Oxindole alkaloids from Uncaria tomentosa induce apoptosis in proliferating, G0/G1- arrested and bcl-2-expressing acute lymphoblastic leukemia cells, British Journal of Hematology, Vol 123, Hal Collegate, S.M., and R.J., Molyneux., 1993, Bioactive Natural Product Detection, Isolation and Structural Determination, CRG, Boca Raton, Ann Arbor, London, 14-23, Kusuma, F.Rdan Zaky, B.M., 2005, Tumbuhan Liar Berkhasiat Obat. AgroMedia Pustaka, Jakarta Meyer, B.N.,Feerigni, N,R., Putnam, J.E., Jacobson, L,B., Nicholas, D,E., dan McLaughlin, J, L., 1982, Brine Shrimp: A convenient. General Bioasssay For Active Plant constituens,plant Medical, Vol 45, Hal Suminiati, 2013, Skrining Aktivitas Antioksidan dan Sitotoksik dari Ekstrak dan Fraksi Daun Gambir (Uncaria gambir) ( Hunter) Roxb, Skripsi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru Sun, G., Zhang, X., Xu, X., Yang, J., Zhong, M., dan Yuan, J., 2012 A New Triterpen From Uncaria macrophylla andits Antitumor Activity, Molecules, Vol 17 Hal