TERHADAP PRODUKSI INHIBITOR PROTEASE YANG DIHASILKAN OLEH

Transkripsi

1 PENGARUH VARIASI DAN NaCl TERHADAP PRUKSI INHIBITOR PROTEASE YANG DIHASILKAN OLEH Acinetobacter baumanii (BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS Plakortis nigra) Tati Nurhayati 1), Maggy T. Suhartono ), Desniar 1), Rini Suwardinni 3) Abstrak Mengingat semakin jelasnya keterlibatan dalam penyebab penyakit, maka diperlukan suatu senyawa untuk menghambat aktivitas enzim tersebut, yaitu inhibitor. Senyawa tersebut dapat dihasilkan oleh makro dan mikroorganisme laut. Untuk memproduksi inhibitor diperlukan suatu kondisi produksi yang tepat, termasuk NaCl dan media. Oleh karena itu tujuan penelitian ini adalah menentukan konsentrasi NaCl dan yang tepat dalam media untuk menghasilkan inhibitor dengan aktivitas tertinggi. Metode yang digunakan untuk mencapai tujuan tersebut adalah dengan menumbuhkan Acinetobacter baumanii dalam media marine broth+glukosa,5 %(w/v) dengan melakukan variasi NaCl ( %, %, dan %(w/v)) dan juga (,7, dan ). Berdasarkan hasil penelitian didapatkan bahwa konsentrasi NaCl yang tepat untuk produksi maksimum adalah %(w/v) dan media dengan waktu inkubasi - jam. Aktivitas tertinggi yang dihasilkan adalah 1,-1,93 U/ml. Kata kunci: Acinetobacter baumanii, inhibitor PENDAHULUAN Bakteri patogen dalam menjalankan aksinya menggunakan beberapa cara, yang dikenal dengan istilah faktor virulensi, diantaranya dengan mensekresikan ke dalam inangnya. Mengingat pentingnya dalam mekanisme terjadinya penyakit, maka dalam dasarwarsa terakhir ini perhatian terhadap sebagai target senyawa obat bagi penyakit asal bakteri, virus, bahkan penyakit degeneratif meningkat pesat (Suhartono, ). Saat ini obat-obatan yang beberapa diantaranya mempunyai mekanisme inhibitor telah tersedia di pasaran, seperti elafin, antileuko, inhibitor serum ayam, serta inhibitor alkalin dari Streptomyces sp. Beraneka ragam makhluk hidup dapat menjadi sumber inhibitor, termasuk dari makro dan mikroorganisme yang hidup di laut. Spons merupakan salah satu makroorganisme laut yang potensial sebagai penghasil komponen bioaktif, termasuk inhibitor enzim seperti Irchinia sp. sebagai penghasil inhibitor HIV reverse transkriptase (Loya et al., 1997), Xetospongia exigua sebagai penghasil inhibitor tirosin kinase, juga Theonella sp. sebagai penghasil inhibitor 1) Staf Pengajar pada Departemen Teknologi Hasil Perairan, FPIK, IPB ) Guru Besar pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fateta, IPB 3) Alumni Departemen Teknologi Hasil Perikanan, FPIK, IPB 5

2 serin (Nakao et al., 199 diacu dalam Mayer dan Lehmann ). Begitu pula dengan mikroorganisme yang berasosiasi dengan spons. Hal ini disebabkan karena terdapat hubungan simbiotik antara spons dan mikroorganisme, mengingat spons merupakan hewan yang memakan makanan dengan cara menyaring makanan (filter feeder) (Lee et al., 1). Flowers et al. (199) melaporkan bahwa simbion spons Oscillatoria spongeliae mengandung senyawa diketopiperazin yang juga dihasilkan oleh inangnya, yaitu Dysidea herbacea. Hasil penelitian yang diperoleh Nurhayati dan Suhartono () menunjukkan bahwa bakteri yang berasosiasi dengan spons Plakortis nigra yaitu Acinetobacter baumanii menghasilkan inhibitor Escherichia coli. Spons tersebut juga menghasilkan inhibitor yang sama (Nurhayati et al., ). Selanjutnya Nurhayati et al. () melaporkan bahwa spons Jaspis stellifera dan juga simbionnya menghasilkan inhibitor Staphylococcus aureus. Imada et al. (195) melaporkan bahwa produksi inhibitor dari Alteromonas sp. ditentukan oleh kondisi medianya, termasuk konsentrasi NaCl dan medium. Inhibitor tersebut dihasilkan paling baik pada konsentrasi NaCl 3,5 %(w/v) dengan medium. Konsentrasi polipepton terbaik untuk produksi inhibitor tersebut adalah, %(w/v). Desniar et al. () melaporkan bahwa konsentrasi pepton dan yeast ekstrak berpengaruh terhadap produksi inhibitor E. coli yang dihasilkan oleh A. baumanii. Kombinasi pepton dan yeast ekstrak masing-masing sebesar,5 %(w/v) menghasilkan inhibitor dengan aktivitas tertinggi. Setelah diketahui kombinasi pepton dan yeast ekstrak terbaik untuk produksi inhibitor, maka kondisi media produksi, seperti dan konsentrasi NaCl merupakan parameter penting untuk diteliti. Dengan demikian diharapkan akan didapatkan media dan kondisi produksi yang tepat untuk produksi inhibitor E. coli. Oleh karena itu tujuan penelitian ini adalah mendapatkan kondisi dan konsentrasi NaCl terbaik guna meningkatkan produksi inhibitor dari A. baumanii. 57

3 METOLOGI Bahan dan Alat Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini meliputi E. coli sebagai sumber yang diperoleh dari Rumah Sakit Pusat Pertamina Jakarta dan A. baumanii yang diperoleh dari koleksi pribadi. Bahan-bahan untuk media produksi meliputi media untuk produksi, yaitu Luria Bertani (tripton (oxoid), yeast ekstrak (oxoid), NaCl (merck)) dan media produksi inhibitor, yaitu marine broth (pepton spesial (oxoid), yeast ekstrak, NaCl, trace element, glukosa (merck)). Alat-alat yang digunakan meliputi waterbath shaker, spektrofotometer (Pharmacia LKB, Novasvec ), otoklaf (Tommy), mikropipet, inkubator, oven, sentrifugasi (Tommy). Metode Penelitian Penentuan waktu propagasi A.baumanii Isolat bakteri laut ditumbuhkan pada media marine broth (MB) steril 15 ml dengan konsentrasi NaCl yang berbeda yaitu %, % dan %(w/v), kemudian diinkubasi dalam waterbath shaker pada suhu 3 o C, kecepatan agitasi 15 rpm. Setiap jam sekali dilakukan pengukuran optical density () sampai fase kematian menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang nm. Selanjutnya dilakukan penentuan waktu propagasi bakteri laut dengan media, 7, dan dengan komposisi NaCl yang terbaik. Nilai pada panjang gelombang nm tersebut diplotkan terhadap waktu untuk mengetahui waktu propagasi, yaitu perkembangbiakan bakteri yang tepat untuk dipindahkan pada media produksi. Produksi inhibitor dari A. baumanii Produksi inhibitor diawali dengan menumbuhkan bakteri pada media MB hingga mencapai waktu propagasi. Sebanyak %(v/v) inokulum dipindahkan ke dalam media produksi MB yang ditambah glukosa,5 %(w/v) dan diinkubasi pada suhu 3 o C dengan kecepatan agitasi 1 rpm selama 5 jam dengan waktu pengamatan setiap jam. Parameter yang diamati meliputi (Apriyantono et al., 199),, aktivitas inhibitor (Anson 193 yang diacu dalam Imada et al., 195 yang dimodifikasi Nurhayati dan Suhartono, ), konsentrasi protein (metode Bradford) (Hammond dan Kruger, 19) dan aktivitas ( Bergmeyer et al., 19). Sebagai substrat untuk menentukan 5

4 aktivitas inhibitor digunakan dari E. coli yang diproduksi menurut Baehaki (). Pengukuran aktivitas inhibitor dari A. baumannii. Prosedur pengukuran aktivitas inhibitor adalah sebagai berikut (Anson 193 diacu dalam Imada et al., 195 yang dimodifikasi Nurhayati dan Suhartono, ): campuran yang terdiri atas,5 ml dari E. coli dan,5 ml larutan inhibitor dari A. baumanii dipre-inkubasi pada 3 o C selama 1 menit. Sebanyak 1 ml kasein hammerstein %(w/v) dalam bufer TrisCl 5 mm, ditambahkan kedalamnya dan diinkubasi 1 menit pada suhu 3 o C. Setelah diinkubasi, ml asam trikloroasetat (TCA) 5 % (w/v) ditambahkan untuk menghentikan reaksi enzim. Campuran diinkubasi kembali selama menit pada suhu 3 o C. Setelah selesai inkubasi, larutan disaring dengan kertas saring. Filtrat yang dihasilkan ditambahkan larutan Bradford. Kemudian diukur absorbansinya pada panjang gelombang 595 nm. Persentase nilai penghambatan dihitung menggunakan rumus: % penghambatan = 1 (I s I b ) x 1 % (E s E b ) Keterangan: I s = absorbansi inhibitor sampel I b = absorbansi inhibitor blanko E s = absorbansi enzim sampel E b = absorbansi enzim blanko Satu unit aktivitas inhibitor adalah banyaknya inhibitor yang diperlukan untuk menghambat aktivitas enzim sebesar 5 %. Perlakuan Produksi inhibitor dari A. baumanii menggunakan media MB dengan perlakuan konsentrasi NaCl %, % dan %(w/v) sehingga didapatkan konsentrasi NaCl terbaik berdasarkan nilai penghambatan tertinggi dari hasil pengukuran aktivitas inhibitor. Selanjutnya dilakukan produksi inhibitor dengan perlakuan, 7 dan pada konsentrasi NaCl terbaik. Analisis Data Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif menggunakan grafik hubungan antara waktu pengamatan dengan semua parameter yang diamati. 59

5 HASIL DAN PEMBAHASAN Penentuan Waktu Propagasi A. baumanii Waktu propagasi merupakan waktu perkembangbiakan bakteri yang tepat untuk dipindahkan ke media produksi. Waktu propagasi biasa terjadi pada fase logaritmik yang ditandai oleh pertumbuhan bakteri yang seimbang, yaitu sel membelah dengan laju konstan. Waktu propagasi dilakukan untuk mempersingkat fase adaptasi pada waktu fermentasi (Mangunwidjaja, 199). Penentuan waktu propagasi dengan perlakuan NaCl dan dapat dilihat pada Gambar ,5,5 nilai absorbansi 1,5 1, w aktu inkubasi (jam) NaCl % NaCl % NaCl % 1,5 1, Waktu inkubasi (jam) 7 (A) (B) Gambar 1. Penentuan waktu propagasi A. baumanii dengan perlakuan (A) NaCl %, % dan %(w/v) dan (B),7, Gambar 1(A) memperlihatkan pengaruh konsentrasi NaCl pada medium terhadap waktu propagasi A. baumanii. Berdasarkan Gambar 1(A) dapat ditentukan waktu propagasi pada medium yang mengandung NaCl %, %, dan %(w/v) berturut-turut adalah 3 jam (=,53), jam (=,19), dan jam (=,9). Hasil ini menunjukkan bahwa konsentrasi NaCl menentukan kecepatan pembelahan sel bakteri. Konsentrasi NaCl %(w/v) menunjukkan jumlah yang tepat untuk mempercepat pembelahan sel bakteri yang ditandai oleh waktu propagasi yang lebih singkat dan nilai yang lebih tinggi dibandingkan dengan konsentrasi NaCl % dan %(w/v). Waktu propagasi yang cepat dipengaruhi oleh lingkungan dan keadaan inokulum (Fardiaz 199). Acinetobacter baumanii merupakan bakteri laut yang berasosiasi dengan spons P. nigra, dengan konsentrasi NaCl air laut (habitat asli) bakteri tersebut sebesar %(w/v)

6 (Nurhayati dan Suhartono, ). Imada et al. (195) melaporkan bahwa Alteromonas sp. yang diisolasi dari sedimen laut mempunyai pertumbuhan paling cepat pada konsentrasi NaCl 3,5 %(w/v) sesuai dengan habitat aslinya. Gambar 1(B) menunjukkan pengaruh medium terhadap waktu propagasi A. baumanii. Berdasarkan Gambar 1(B) dapat ditentukan waktu propagasi untuk A. baumanii dengan medium adalah jam dengan nilai,9. Waktu propagasi yang sama dicapai ketika bakteri tersebut ditumbuhkan pada medium dengan 7, namun mempunyai nilai yang lebih rendah, yaitu 1,5. Ketika medium dinaikkan menjadi, waktu propagasi yang dicapai lebih singkat, yaitu 3 jam dengan nilai,9. Hasil ini menunjukkan bahwa juga merupakan faktor lingkungan yang mempengaruhi pertumbuhan sel bakteri. Sebagaimana yang dinyatakan oleh Fardiaz (199) bahwa faktor lingkungan sangat mempengaruhi pertumbuhan sel bakteri. Jika dibandingkan dengan air laut asal bakteri A. baumnaii, yaitu 7,, maka dapat disimpulkan bahwa bakteri tersebut tumbuh baik pada yang sama dengan air laut habitat asli bakteri tersebut. Acinetobacter baumanii dapat tumbuh baik pada 7- (Bouvet dan Grimont, 19). Merujuk kepada dua parameter di atas, disimpulkan bahwa dan NaCl mempengaruhi waktu propagasi. Waktu propagasi terpendek dicapai ketika A. baumanii ditumbuhkan pada konsentrasi NaCl %(w/v) dan, yang merupakan kondisi yang sama dengan habitat asli bakteri tersebut. Produksi Inhibitor Protease dari A. baumanii Inhibitor merupakan senyawa yang diproduksi dengan baik pada media fermentasi dalam kondisi yang ekstrim, yaitu pada saat semua nutrisi yang terkandung dalam media fermentasi tersebut sudah berkurang. Nilai,, kadar protein, aktivitas inhibitor, dan aktivitas dari A. baumanii yang ditumbuhkan pada media MB+glukosa,5 %(w/v) dengan variasi NaCl %, %, dan %(w/v) selama inkubasi disajikan pada Gambar. Gambar (A) memperlihatkan bahwa A. baumanii yang ditumbuhkan dalam media MB+glukosa,5 %(w/v) dengan konsentrasi NaCl %(w/v), memproduksi inhibitor setelah inkubasi selama 1 jam sampai 3 jam. Nilai penghambatan tertinggi terjadi setelah bakteri tersebut diinkubasi selama 1

7 NaCl % NaCl % jam dengan nilai aktivitas sebesar 1,1 unit/ml dan konsentrasi protein,11 mg/ml. Pada kondisi tersebut inhibitor diproduksi pada fase logaritmik Jam unit/ml Jam unit/ml (A) (B) N a C l % O D J a m p H [p ro te in ] u n it/m l p ro te as e (C) Gambar. Produksi inhibitor,,, protein dan dalam media yang mengandung NaCl % (A), NaCl % (B) dan NaCl %(w/v) (C) dari bakteri A. baumannii Gambar (B) memperlihatkan bahwa A. baumanii yang ditumbuhkan dalam media MB+glukosa,5 %(w/v) dengan konsentrasi NaCl %(w/v), memproduksi inhibitor setelah inkubasi selama 1 jam sampai 3 jam. Nilai penghambatan tertinggi terjadi setelah bakteri tersebut diinkubasi selama jam dengan nilai aktivitas sebesar 1,93 unit/ml dan konsentrasi protein,11 mg/ml. Pada kondisi tersebut inhibitor diproduksi pada fase logaritmik.

8 Gambar (C) memperlihatkan bahwa A. baumanii yang ditumbuhkan dalam media MB+glukosa,5 %(w/v) dengan konsentrasi NaCl %(w/v), memproduksi inhibitor setelah inkubasi selama 1 jam sampai 5 jam. Nilai penghambatan tertinggi terjadi setelah bakteri tersebut diinkubasi selama jam dengan nilai aktivitas sebesar 1,9 unit/ml dan konsentrasi protein,1 mg/ml. Pada kondisi tersebut inhibitor diproduksi pada fase logaritmik sampai fase stasioner. Berdasarkan Gambar dapat dilihat bahwa terjadi peningkatan konsentrasi protein pada media tumbuh A. baumanii yang mengandung NaCl ( %, % dan % w/v) seiring dengan peningkatan. Dalam hal ini, diduga bahwa inhibitor merupakan protein. Bila ditinjau dari parameter peningkatan nilai, maka berdasarkan Gambar dapat dilihat bahwa tertinggi pada A. baumanii yang ditumbuhkan dalam media baik yang mengandung NaCl %, %, maupun %(w/v) terjadi setelah bakteri tersebut diinkubasi jam. Namun terdapat perbedaan nilai, dengan nilai tertinggi dicapai ketika bakteri tersebut ditumbuhkan dalam media yang mengandung NaCl %(w/v) yaitu sebesar,5 (Gambar (B)). Ini berarti bahwa kondisi NaCl terbaik untuk pertumbuhannya adalah yang sesuai dengan kondisi NaCl habitat asli bakteri tersebut. Konsentrasi NaCl yang berbeda ( %, % dan %w/v) pada médium produksi ternyata berpengaruh terhadap titik awal diproduksinya inhibitor seperti dapat dilihat pada Gambar. Titik awal diproduksi inhibitor pada médium yang mengandung NaCl % dan %(w/v) sama, yaitu setelah A. baumanii diinkubasi selama 1 jam (Gambar (A) dan (B)). Ketika NaCl dalam médium ditingkatkan menjadi %(w/v) inhibitor dihasilkan dengan titik awal produksi yang lebih singkat yaitu setelah inkubasi jam (Gambar (C)). Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa bakteri A. baumannii membutuhkan NaCl yang tepat dalam produksi inhibitor. Imada et al. (195) menyatakan bahwa inhibitor dari bakteri laut Alteromonas sp. dihasilkan dengan aktivitas yang tinggi pada konsentrasi NaCl 3,5 %(w/v). Secara umum, peningkatan konsentrasi NaCl % sampai %(w/v) dalam medium produksi A. baumanii tidak menyebabkan perubahan yang berarti 3

9 selama inkubasi, yaitu sekitar 7-,5. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa inhibitor yang diproduksi pada A. baumannii terjadi pada netral. Imada et al. (195) menyatakan bahwa inhibitor yang berasal dari Alteromonas sp. yang disebut marinosatin diproduksi pada -7. Selama produksi inhibitor (Gambar A-C), ternyata A. baumanii juga menghasilkan, namun aktivitasnya sangat rendah dan cenderung konstan, yaitu berkisar,1-, U/ml. Berdasarkan pengukuran aktivitas inhibitor yang dihasilkan A. baumanii terhadap E. coli dalam media dengan konsentrasi NaCl %, % dan %(w/v) dipilih nilai penghambatan tertinggi untuk masing-masing perlakuan yaitu sebesar 1,1 unit/ml, 1,93 unit/ml dan 1,9 unit/ml (Gambar 3). Setelah diketahui nilai penghambatan tertinggi dari ketiga perlakuan tersebut dipilih nilai penghambatan terbaik yaitu NaCl % (w/v) dengan nilai penghambatannya sebesar 1,93 unit/ml. Penghambatan tertinggi NaCl % NaCl % NaCl % Perlakuan Gambar 3. Aktivitas inhibitor tertinggi yang dihasilkan oleh A. baumanii yang ditumbuhkan pada media yang mengandung NaCl %, %, dan %(w/v) Nilai,, protein, aktivitas inhibitor, dan aktivitas dari A. baumanii yang ditumbuhkan pada media MB+glukosa,5 %(w/v) dengan variasi,7, dan selama inkubasi disajikan pada Gambar. Gambar (A) memperlihatkan bahwa A. baumanii yang ditumbuhkan pada media dengan memproduksi inhibitor setelah diinkubasi jam sampai 3 jam. Inhibitor dengan aktivitas penghambatan tertinggi terjadi setelah bakteri tersebut diinkubasi selama jam ke-1 dengan nilai aktivitas sebesar

10 1,5 unit/ml, konsentrasi protein,17 mg/ml. Inhibitor dihasilkan pada fase logaritmik. Acinetobacter baumanii yang ditumbuhkan pada media produksi dengan 7, menghasilkan inhibitor selama inkubasi 1 sampai jam (Gambar (B)). Inhibitor dengan nilai penghambatan tertinggi terjadi setelah diinkubasi jam dengan aktivitas sebesar 1, unit/ml, konsentrasi protein,15 mg/ml dan jam ke- dengan aktivitas sebesar 1,5 unit/ml, konsentrasi protein,11 mg/ml. Adanya dua puncak aktivitas ini diperkirakan karena adanya kerja metabolit yang berbeda. Pada aktivitas metabolit yang pertama meningkatnya penghambatan seiring dengan peningkatan kadar protein, sedangkan metabolit yang kedua aktivitasnya berkorelasi dengan penurunan kadar protein (Sabana, ). Inhibitor diproduksi pada fase logaritmik Jam Protein unit/ml (A) Jam Protein unit/ml (B) p H Gambar p H J a m O D P ro te in u n it/m l (C) p ro te a s e Produksi inhibitor,,, protein dan dalam media dengan (A), 7 (B) dan (C) dari bakteri A. baumannii. 5

11 Acinetobacter baumanii yang ditumbuhkan pada media produksi dengan menghasilkan inhibitor selama inkubasi jam sampai jam (Gambar (C)). Aktivitas inhibitor dengan penghambatan tertinggi terjadi setelah diinkubasi jam dengan aktivitas sebesar 1, unit/ml, konsentrasi protein,15 mg/ml. Produksi inhibitor terjadi pada fase logaritmik. Berdasarkan Gambar dapat dilihat bahwa terjadi peningkatan konsentrasi protein pada media tumbuh A. baumanii dengan - seiring dengan peningkatan. Ini berarti dapat diduga bahwa inhibitor merupakan protein. Secara umum, produksi inhibitor memperlihatkan bahwa peningkatan (, 7 dan ) medium produksi berpengaruh terhadap nilai maksimum. Pada medium nilai maksimum yang dicapai adalah,19 setelah A. baumanii diinkubasi selama jam (Gambar (A)). Bila medium dinaikkan menjadi 7, maka nilai maksimum yang dicapai mengalami sedikit penurunan menjadi,153 setelah bakteri tersebut diinkubasi jam (Gambar (B)). Nilai maksimum yang dicapai apabila medium dinaikkan menjadi adalah,5 setelah diinkubasi jam (Gambar (C)). Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa A. baumanii akan tumbuh lebih baik pada. Bouvet dan Grimont (19) menyatakan bahwa A. baumanii tumbuh pada kisaran 7-. Peningkatan medium dari sampai menyebabkan perubahan pada titik awal diproduksinya inhibitor. Titik awal produksi inhibitor oleh A. baumanii pada media produksi dengan 7 adalah setelah diinkubasi selama 1 jam (Gambar (B)), sedangkan bila bakteri tersebut ditumbuhkan pada media dengan dan, inhibitor sama-sama diproduksi setelah diinkubasi jam (Gambar (A) dan (C)). Peningkatan sampai tidak menyebabkan perubahan yang berarti selama inkubasi (Gambar ), yaitu berkisar -. Hal ini diduga karena inhibitor A. baumannii diproduksi pada -. Selama produksi inhibitor (Gambar ), ternyata A. baumanii juga menghasilkan, namun aktivitasnya sangat rendah dan cenderung konstan, yaitu berkisar,9-,1 U/ml.

12 Berdasarkan pengukuran aktivitas inhibitor yang diproduksi A. baumanii diketahui bahwa inhibitor yang dihasilkan selama inkubasi pada, 7 dan masing-masing mempunyai penghambatan tertinggi yaitu sebesar 1,9 unit/ml, 1, unit/ml dan 1, unit/ml (Gambar 5). Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa merupakan yang tepat untuk menghasilkan inhibitor dengan aktivitas yang tinggi dibandingkan dengan dan 7. 3 Penghambatan tertinggi Perlakuan Gambar 5. Aktivitas inhibitor tertinggi yang dihasilkan oleh A. baumanii yang ditumbuhkan pada media dengan - KESIMPULAN Produksi inhibitor ditentukan oleh konsentrasi NaCl dan media produksi. Acinetobacter baumanii menghasilkan inhibitor dengan aktivitas tertinggi setelah ditumbuhkan selama jam pada media yang mengandung NaCl %(w/v), dengan aktivitas sebesar 1,93 U/ml dan konsentrasi protein,11 mg/ml. merupakan yang tepat bagi A. baumanii untuk menghasilkan inhibitor dengan aktivitas tertinggi sebesar 1, U/ml dan konsentrasi protein,15 mg/ml dengan waktu produksi selama jam.inhibitor dihasilkan pada fase logaritmik. Pada kondisi NaCl dan yang tepat untuk produksi inhibitor, ternyata diimbangi oleh densitas sel dan konsentrasi protein yang tinggi. Selama waktu inkubasi ternyata tidak terjadi perubahan yang nyata, serta aktivitas yang rendah. 7

13 DAFTAR PUSTAKA Apriyantono A, Fardiaz D, Puspita NL, Budiyanto S Petunjuk Laboratorium Analisis Pangan. Bogor: PAU Pangan dan Gizi, IPB. Baehaki A.. Karakteristik beberapa bakteri patogen. [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, IPB. Bergmeyer HV, Grassl M, Walter HE. 19. Methods of Ezymatic Analysis, Volume 5. Amsterdam: Verlag chemie, Weinheim.. Bouvet PJM, Grimont PAD. 19. Taxonomy of genus Acinetobacter with the recognition of Acinetobacter baumanii sp. noc., Acinetobacter johnsonii sp. nov., Acinetobacter haemolyticus sp. nov., and Acinetobacter junii sp. nov., and emended description of Acinetobacter calcoaceticus and Acinetobacter lwoffii. Int J Syst Bacteriol 3: -. Desniar, Nurhayati T, Suhartono MT, Isa EM.. Modifikasi media marine broth pada produksi inhibitor dari bakteri Acinetobacter baumanii yang hidup bersimbiosis dengan sponge Plakortis nigra. Buletin THP IX(1):7-7. Fardiaz S Mikrobiologi Pangan I. Bogor: PAU Pangan dan Gizi. Institut Pertanian Bogor.. Flowers AE, Garson MJ, Webb RI, Dumdei EJ, Charan RD Cellular origin of chlorinated diketopiperazines in the dictyoceratid sponge Dysidea herbacea (Keller). Cell Tissue Res 9: Hammond JBW, Kruger J. 19. The bradford method for protein quantitation. Di dalam Walker JM, editor. New Protein Technique. Clifton, New Jersey: Humana Press. Imada C, Taga N, Maeda M Cultivation conditions for subtilisin inhibitorproducing bacterium and general properties of the inhibitor marinostatin. Bull Jap Soc Sci Fish. 51 (5) : 5-1. Lee YK, Lee JH, Lee HK. 1. Microbial symbiosis in marine sponges. The J Microbiol 39:5-. Loya S, Rudi A, Kashman Y, Hizi A Mode of inhibition of HIV reverse transcriptase by -hexaprenyl-hydroquinone, a novel general inhibitor of RNA-and DNA-directed DNA polymerases. Biochem J 3: Mangunwidjaja D Teknologi Bioproses. Jakarta:Penebar Swadaya. Mayer AMS and Lehmann VKB.. Marine pharmacology. The Pharmacol :-9. Nurhayati T, Suhartono MT.. Pemilahan dan Karakteristik Inhibitor Protease dari Mikroba laut pada Bunga Karang (Sponge) Kepulauan Seribu. Bogor : LPPM, IPB. Nurhayati T, Suhartono MT, Suptijah P, Febrian I.. Screening inhibitor dari sponge, Kepulauan Seribu. Buletin THP VII(): 7-3.

14 Nurhayati T, Suhartono MT, Nuraida L, Poerwanto SB.. Karakterisasi awal inhibitor dari bakteri yang berasosiasi dengan spons asal Pulau Panggang, Kepulauan Seribu. J Hayati 13():5-. Sabana A.. Screening dan Karakteristik Bakteri Laut Penghasil Inhibitor Protease pada Sponge dari Kepulauan Seribu, Jakarta. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB. Suhartono MT.. Pemahaman karakteristik biokimiawi enzim dalam mendukung industri berbasis bioteknologi. [Orasi Ilmiah]. Bogor: IPB. 9