UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK DAN ANALISIS FITOKIMIA EKSTRAK DAUN KAPUR (HARMSIOPANAX ACULEATUS HAMRS)

Transkripsi

1 KO : Rachel Turalely dkk. UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK DAN ANALISIS FITOKIMIA EKSTRAK DAUN KAPUR (HARMSIOPANAX ACULEATUS HAMRS) Rachel Turalely 1,, Ruslin Hadanu 1, dan Ferymon Mahulete 2 1 Program Studi Pendidikan Kimia FKIP Universitas Pattimura 2 Program Studi Pendidikan Biologi FKIP Universitas Pattimura ache q3a@yahoo.com Disajikan Nop 2012 ABSTRAK Tanaman kapur (Harmsiopanax aculeatus, Harms) merupakan salah satu tanaman obat di Maluku yang digunakan untuk mengobati malaria. Bagian tanaman yang digunakan dalam pengobatan adalah pucuk muda daun kapur yang dipakai dengan cara perasan daun tersebut diteteskan pada mata penderita. Secara in vivo, ekstrak metanol daun kapur terbukti aktif menghambat Plasmodium berghei (ED 50 = 16,16 kg/mgbb) penyebab malaria. Namun aktivitas aktivitas sitotoksik terhadap sel vero (sel normal) maupun fitokimia dalam ekstrak. Penelitian ini secara umum bertujuan untuk mengekstraksi daun kapur menggunakan pelarut n-heksan, etil asetat, metanol; menguji aktivitas sitotoksik dan fitokimia ekstrak daun kapur. Hasil ekstraksi 1 kg serbuk daun kapur secara maserasi bertingkat berturut-turut menggunakan pelarut n-heksan, etil asetat dan metanol. diperoleh ekstrak heksan 0,7%, ekstrak etil asetat 0,97% dan ekstrak metanol 9,12%. Hasil uji aktivitas sitotoksik sel vero menggunakan colorimetry assay MTT dan absorbansi sel hidup dianalisis menggunakan analisis probit diperoleh IC 50 ekstrak heksan, etil asetat dan metanol berturut-turut adalah 667,74; 262,99 dan 2388,69 µg/ml. Berdasarkan hasil uji sitotoksik, ekstrak metanol daun kapur memiliki aktivitas yang besar dengan menunjukkan sitotoksitas yang rendah terhadap sel vero (sel normal). Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak heksan mengandung senyawa metabolit sekunder steroid, ekstrak etil asetat mengandung senyawa metabolit sekunder fenolik, steroid dan flavanoid sedangkan ekstrak metanol mengandung senyawa metabolit sekunder fenolik, steroid, saponin dan flavanoid. Kata Kunci: Aktivitas sitotoksik, sel vero, IC 50, fitokimia. I. PENDAHULUAN Malaria merupakan salah satu penyakit infeksi yang menyerang manusia yang disebabkan oleh Plasmodium. Plasmodium yang banyak ditemukan di Indonesia adalah P. falciparum, P. malariae, P. vivax dan P. ovale. Di antara keempat Plasmodium tersebut, yang paling banyak menyebabkan kesakitan dan kematian adalah Plasmodium falciparum karena dapat menyebabkan komplikasi yang berat. [1] Saat ini malaria menjadi fokus perhatian dunia karena angka kesakitan dan kematian yang disebabkan oleh parasit Plasmodium sangat tinggi. Beberapa penelitian telah melaporkan bahwa tingkat penderita malaria di dunia mencapai juta orang [2] dengan tingkat kematian 2-3 juta orang/tahun. [3] Berdasarkan data World Health Organization (WHO) tahun 2009 dan Global Malaria Action Plan 3,3 milyar orang (setengah populasi manusia) hidup di daerah dengan transmisi malaria dan tiga puluh lima negara (30 di sub-saharan afrika dan 5 di Asia) memiliki tingkat kematian yang disebabkan oleh malaria sebanyak 98%. Pada tahun 2008 malaria diperkirakan mencapai juta gejala klinis dengan tingkat kematian sebanyak orang. [4] Akibat tingkat kesakitan dan kematian yang sangat tinggi, maka telah mendorong berbagai upaya pencegahan maupun pengobatan dalam memberantas penyakit diantaranya dengan cara kontrol vektor, penggunaan obat antimalaria, penggunaan kelambu dan sarana anti nyamuk lainnya. Upaya-upaya ini telah memberikan hasil yang positif dalam membatasi meluasnya penyakit ini, tetapi eradikasi malaria masih jauh dari harapan. Salah satu kendala dalam memberantas malaria adalah adanya resistensi obat malaria terhadap Plasmodium terutama resistensi Plasmodium falciparum terhadap klorokuin yang merupakan obat lini pertama. [1] Adanya resistensi Plasmodium terhadap obat antimalaria, telah mendorong upaya pencarian dan pengembangan obat antimalaria baru terutama dari ba-

2 1059: Rachel Turalely dkk. KO-99 han alam. Di Indonesia, beberapa tanaman obat yang telah digunakan sebagai antimalaria yaitu buah makasar (Brucea javanica (L.) Merr.), daun pepaya (Carica papaya Linn.), akar pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack.), daun mahoni (Swietenia mahagoni Jacq.), daun mimba (Azadirachta indica Juss.), kulit batang pule (Alstonea scolaris), meniran (Phyllanthus niruri L.), [5] daun asam gelugur (Garcinia atroviridis Griff Tanders), [6] Anuma (Artemisia annua), brotowali (Tinospora crispa), johar (Cassia siamea), sambiloto (Andrographis paniculata), ki pahit (Picrasma javanica), pauh kijang (Irvingia malayana Oliv ex. A.Benn), [7] temu mangga (Curcuma mangga Val.), [8] daun sungkai (Peronema canescens, [9] daun kembang bulan (Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray). [10] Bagian tanaman obat yang digunakan sebagai antimalaria dapat berupa daun, batang, maupun akar. Beberapa tanaman obat Indonesia yang pernah dilaporkan memiliki aktivitas antiplasmodium secara in vivo yaitu ekstrak etanol daun mimba (ED 50 = 1,27 mg/kgbb), [11] ekstrak metanol akar pasak bumi (ED sub 50 = 11,20 mg/kgbb), brotowali (ED 50 = 97,04 mg/kgbb), [12] meniran (ED sub 50 = 9,1 mg/kgbb), mahoni (ED sub50 = 199,87 mg/kgbb),, [5] ekstrak air daun sungkai (ED sub 50 = 87,79 mg/kgbb) [9] dan daun pauh kijang (ED sub50 = 36,95 mg/kgbb). [7] Tanaman kapur (Harmsiopanax aculeatus Harms) merupakan tanaman obat malaria yang telah digunakan secara tradisional oleh masyarakat Maluku untuk mengobati malaria. Tanaman ini digunakan dengan cara meneteskan perasan daun kapur yang masih muda ke mata penderita malaria 1 tetes/hari selama 3 hari. Cara pengobatan ini memiliki keunikan dibandingkan dengan cara pengobatan menggunakan obat malaria yang selama ini digunakan yaitu dengan cara penggunaan oral maupun injeksi. Berdasarkan hasil penelitian sebelumnya ekstrak metanol daun kapur memiliki aktivitas sebagai antimalaria secara in vivo dengan nilai ED sub 50 16,16 kg/mgbb. Selain itu, fraksi larut kloroform ekstrak metanol (FG 8 ) memiliki aktivitas penghambatan polimerisasi hem yang lebih besar dengan IC 50 18,22 µg/ml dibandingkan dengan klorokuin yang memiliki IC ,98 µg/ml. [13] Penelitian ini menunjukkan bahwa daun kapur memiliki aktivitas yang besar dalam menghambat Plasmodium, sehingga sangat potensial dikembangkan untuk mencari obat antimalaria baru dalam mengatasi resistensi terhadap Plasmodium. Untuk mendapatkan senyawa aktif yang bersifat antiplasmodium dari daun kapur, perlu dilakukan beberapa tahap pengujian aktivitas antara lain uji praklinis maupun klinis. Uji praklinis dapat dilakukan dengan cara in vitro maupun in vivo. Sedangkan klinis dapat diujikan ke manusia. Penelitian sebelumnya telah dilakukan uji praklinis ekstrak heksan, etil asetat dan metanol daun kapur secara in vivo menggunakan mencit Swiss yang diinfeksi P. berghei, namun secara in vitro aktivitas ekstrak daun kapur paling aktif belum pernah dilaporkan. Demikian pula fitokimia ekstrak daun kapur pun belum pernah dilaporkan. Aktivitas sitotoksik ekstrak ekstrak daun kapur dilakukan untuk mengetahui berapa besar aktivitas toksisitasnya terhadap sel normal yaitu sel vero sehingga dapat menentukan tingkat keamanan penggunaaan ekstrak daun kapur sebagai obat dari bahan alam. Analisis fitokimia ekstrak daun kapur perlu dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dalam daun kapur yang dapat dijadikan sebagai data awal pencarian senyawa aktif antimalaria. II. METODOLOGI A. Bahan dan Alat Bahan utama yang digunakan untuk ekstraksi: metanol, n-heksan, etil asetat berderajat analisis. Uji aktivitas sitotoksik: sel vero, Media M199, FBS, PBS, Fungison, tripsin, Penisilin-streptomycin, senyawa MTT, SDS 10%. Untuk uji fitokimia: pereksi dragendorf, Liebermann-Burcahard, FeCl 3, 5%KOH alkoholis, etanol absolut, plat TLC GF 254, serbuk Zn, HCl. Alat utama yang digunakan: Grainder, shaker, Evaporator, Lamminary Air Flow, Inkubator, Sentrifuge, Autoclave, neraca analitik, freeze dryer. B. Cara Kerja B-1. Pembuatan Simplisia dan Ekstraksi Bahan tanaman yang diambil adalah daun segar yang masih muda dari tanaman kapur (H. aculeatus) yang telah dibersihkan dikeringkan dengan cara diangin-anginkan kemudian dipanaskan di oven pada suhu 40 C. Simplisia daun kapur kemudian dibuat serbuk menggunakan grainder. Sebanyak 1 kg serbuk daun kapur diekstraksi dengan teknik maserasi bertingkat, berturut-turut menggunakan pelarut n-heksan, etil asetat dan metanol. Maserasi menggunakan pelarut n-heksan dan etil asetat dilakukan selama 1 24 jam sedangkan maserasi menggunakan pelarut metanol dilakukan selama 2 24 jam. Pengadukan pada tahap maserasi ini dilakukan menggunakan shaker. Setelah itu dilakukan penyaringan terhadap tiap campuran maserat dan selanjutnya pelarut dalam tiap filtrat yang diperoleh dari tiap campuran maserat tersebut, dievaporasi menggunakan rotary evaporator. sehingga diperoleh ekstrak pekat yaitu ekstrak heksan, etil asetat dan ekstrak metanol. Tiap ekstrak pekat tersebut kemudian dikeringkan lagi menggunakan hairdryer dengan tetap mengontrol suhu pemanasan pada 40 C. Setiap pengeringan menggunakan hairdyer selanjutnya dilakukan penimbangan berat sehingga diperoleh ekstrak konstan tiap ekstrak. Perhitungan rendamen tiap ekstrak menggunakan rumus:

3 KO-100 Berat ekstrak yang diperoleh Berat serbuk daun kapur yang digunakan 100% B-2. Uji Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Daun Kapur (Harmsiopanax aculeatus Harms) Sifat sitotoksik ekstrak daun kapur diujikan pada sel vero. Sel dikultur pada kondisi yang sama dengan kultur P. falciparum secara in vitro kecuali 5% human serum digantikan dengan 5% fetal bovine serum. Sel vero dikultur menggunakan media M 199 yang telah ditambahkan 10% FBS, 2% penisilin-streptomisin dan 0,5-1% fungison. Sel vero diambil dari nitrogen cair, dihangatkan pada suhu 37 C sampai cair. Suspensi sel yang telah cair dimasukkan ke dalam conical tube dan dicuci dengan medium komplit M 199. Suspensi sel kemudian dipindahkan ke dalam flask kultur dan diinkubasikan dalam inkubator 37 C, 5% CO 2. Pertumbuhan sel diamati setiap hari dengan mikroskop inverted sampai sel hampir memenuhi dinding dasar flask. Panen sel vero dilakukan setelah sel hampir memenuhi dinding flask. Sel dicuci dengan PBS dan ditambahkan dengan tripsin 0,25% agar sel terlepas dari dinding flask. Suspensi sel dibuat dengan menambahkan medium komplit, setelah itu jumlah sel dihitung dengan haemocytometer. Untuk menentukan toksisitas ekstrak secara in vitro dilakukan dengan metode yang dilakukan oleh Tada et al.(1986). Sel dimasukkan ke dalam microplate 96-well dengan kepadatan sel/well dalam 100µl. Kemudian medium kultur yang mengandung ekstrak untuk tiap variasi konsentrasi ditambahkan. Konsentrasi akhir bahan uji yang digunakan adalah 62,5; 125; 250; 500 dan 1000 µg/ml untuk ekstrak metanol dan ekstrak etil asetat sedangkan konsentrasi akhir ekstrak heksan adalah 125; 250; 500 dan 1000 µg/ml. Kultur sel dan ekstrak kemudian diinkubasi selama 24 jam dalam inkubator pada suhu 37 C, 5% CO 2 sama seperti periode kontak P.falciparum. Pertumbuhan sel diamati menggunakan MTT yang selanjutnya dibandingkan dengan kultur kultur (tanpa ekstrak sebagai bahan uji). Medium dibuang setelah massa inkubasi berakhir kemudian ditambahkan kembali 100 µl medium komplet dan 10 µl larutan MTT dan diinkubasi kembali selama 4 jam dalam inkubator pada suhu 37 C, 5% CO 2. Selanjutnya 100 µl SDS 10% dalam HCl 0,01 M ditambahkan untuk melarutkan formazan yang terbentuk dan dinkubasi overnigth pada suhu kamar. Hasil pengujian dibaca dengan Elisa Reader pada panjang gelombang 595 nm. IC 50 dihitung menggunakan analisis regresi probit pada SPSS. B-3. Analisis Fitokimia Tiap ekstrak daun kapur (ekstrak heksan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol) ditotolkan pada plat 1059: Rachel Turalely dkk. TLC (Thin Layer Chromatography). Ekstrak heksan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol yang telah dielusi mengunakan kloroform etil asetat (90:10) kemudian disemprot menggunelisaakan pereaksi semprot Dragendrof (untuk pengujian alkaloid), Liebermann- Burchard (untuk pengujian steroid), KOH (untuk pengujian antrakuinon), FeCl 3 digunakan untuk pengujian fenolik. Perubahan warna pada spot dilihat pada sinar tampak dan UV 365 nm dan dibandingkan dengan lempeng KLT standar. (Wagner et al., 1984). Uji saponin dilakukan dengan mengocok ekstrak dalam air panas. Timbulnya busa menunjukkan adanya saponin. Pengujian flavanoid dilakukan dengan cara ekstrak dilarutkan dalam HCl 2N dan diberi serbuk Zn. Adanya flavanoid ditunjukkan melalui perubahan warna oranye ketika dikocok. III. HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi 1 kg serbuk daun kapur secara maserasi bertingkat menggunakan pelarut n-heksan (non polar), etil asetat (semi polar) dan metanol (polar) diperoleh: rendamen ekstrak heksan 0,7%, ekstrak etil asetat 0,97% dan ekstrak metanol 9,12% seperti yang diperlihatkan dalam TABEL 1. Berdasarkan hasil ekstraksi yang diperoleh seperti diperlihatkan pada TABEL 1, rendamen ekstrak metanol lebih banyak dibandingkan dengan ekstrak heksan maupun ekstrak etil asetat. Hal ini menunjukkan bahwa komponen senyawa polar lebih banyak dalam daun kapur dibandingkan dengan komponen senyawa non polar maupun semipolar. Hal ini sejalan dengan hasil penelitian [13] yang menunjukkan bahwa komponen senyawa polar dalam ekstrak metanol lebih banyak dibandingkan dengan komponen senyawa dalam ekstrak heksan dan ekstrak etil asetat. Pengeringan terhadap ekstrak metanol daun kapur dilanjutkan menggunakan freeze dryer (pengering beku) bertujuan untuk mencegah pertumbuhan jamur yang dapat merusak ekstrak. Hal ini diperkuat dengan pernyataan Sumaryono (1996), bahwa pengeringan ekstrak kental dari bahan alam menggunakan alat freeze dryer, lebih aman terhadap terjadinya degradasi senyawa aktif. Penggunaan freeze dryer untuk mengeringkan ekstrak metanol telah dilakukan dan hasil menunjukkan bahwa pada suhu kurang dari 20 C, ekstrak metanol membeku namun ketika dibiarkan pada suhu kamar (pm30 C) ekstrak metanol mencair. Hal ini diduga bahwa ada sebagaian senyawa yang terdapat pada ekstrak metanol bersifat higroskopis. Sehingga pada suhu kamar, ekstrak metanol dapat mencair. Uji aktivitas sitotoksik pada penelitian ini dilakukan untuk mengetahui toksisitas bahan uji (ekstrak daun kapur) pada sel normal. Sel normal yang dipakai dalam penelitian ini adalah sel vero. Sel vero merupakan

4 1059: Rachel Turalely dkk. KO-101 TABEL 1: Hasil ekstraksi serbuk daun kapur Jenis Ekstrak Warna ekstrak Tekstur Berat ekstrak (g) Rendamen (% b/b) Ekstrak heksan Hijau kehitaman Pasta 7,40 0,7% Ekstrak etil asetat Hijau kehitaman Pasta 9,73 0,97% Ekstrak metanol coklat Kehitaman Gel 91,23 9,12% sel yang berasal dari sel epitel ginjal dari Monyet Hijau Afrika (Cercopithecus aethiops). Sel ini pertama kali ditemukan pada tanggal 27 Maret 1962, oleh Yasumura dan Kawakita dari Universitas Chiba di Chiba, Jepang. [14] Metode yang dipakai adalah metode MTT assay yang merupakan pengembangan metode Tada et al., 1986 dengan cara menghitung absorbansi sel hidup menggunakan colorimetric assay MTT. Metode ini merupakan metode kalorimetrik. Pereaksi MTT yang digunakan merupakan garam tetrazolium yang dapat dipecah menjadi kristal formazan oleh sistem suksinat tetrazolium reduktase yang terdapat dalam jalur respirasi sel pada mitokondria yang aktif pada sel yang masih hidup. Kristal formazan ini memberi warna ungu yang dapat dibaca absorbansinya dengan menggunakan ELISA Reader [15] seperti diperlihatkan pada GAMBAR 1. Jumlah formazan yang terbentuk sebanding dengan jumlah sel hidup yang ada dalam kultur. Semakin banyak sel yang hidup akan memberikan warna larutan dalam sumuran lebih biru-ungu. Penambahan SDS10% dalam HCl 0,01 M bertujuan untuk menghentikan reaksi enzimatik dan melarutkan formazan sehingga terbaca pada Elisa Reader. Uji sitotoksik digunakan untuk menentukan parameter nilai IC 50. Nilai IC 50 menunjukkan nilai konsentrasi yang meng- hasilkan hambatan proliferasi sel sebesar 50% dan menunjukkan potensi ketoksikan suatu senyawa terhadap sel. Nilai ini merupakan patokan untuk melakukan uji pengamatan kinetika sel. [16] Nilai IC 50 dapat menunjukkan potensi suatu senyawa sebagai sitotoksik. Semakin besar harga IC 50 maka senyawa tersebut semakin tidak toksik. [17] Akhir dari uji sitotoksisitas dapat memberikan informasi % sel yang mampu bertahan hidup. Hasil analisis probit menunjukkan nilai IC 50 tiap ekstrak daun kapur seperti diperlihatkan pada TABEL 2. Berdasarkan TABEL 2, persentase kematian sel vero akibat pemberian ekstrak heksan daun kapur semakin besar dengan bertambahnya konsentrasi bahan uji selama inkubasi 24 jam. Pada konsentrasi 125 µg/ml ekstrak heksan belum memberi efek membunuh sel vero. Hasil itu menunjukkan bahwa pada konsentrasi tersebut belum menunjukkan adanya efek toksik pada sel normal. Sedangkan pada konsentrasi 250 µg/ml baru memperlihatkan efek membunuh sel vero yang berarti bahwa pada konsentrasi tersebut telah memperlihatkan efek membunuh sel normal. IC 50 ekstrak heksan adalah 667,74 µg/ml dan pada konsentrasi 1000 µg/ml menunjukkan efek membunuh hampir mendekati 100%. TABEL 2: Persentase kematian sel vero pada pemberian ekstrak heksan daun kapur (H. aculeatus) pada inkubasi 24 jam serta nilai IC 50 Ekstrak Konsentrasi (µg/ml) Persentasi Kematian Sel Vero IC 50 (µg/ml) Heksan 125-3,90 ± 6, ,84 ± 3, ,25 ± 5, ,44 ± 0,82 667,74 Metanol 62,5 10,14 ± 6, ,68 ± 0, ,46 ± 2, ,26 ± 1, ,92 ± 1, ,69 GAMBAR 1: Pembentukan formazan (warna ungu)setelah pemberian MTT (Sumber: dokumentasi pribadi) 62,5 9,61 ± 7, ,27 ± 6,17 Etil Asetat ,95 ± 6, ,78 ± 0, ,87 ± 0,18 (%) inkubasi 24 jam ± Standard Deviation 262,99

5 KO-102 Berbeda dengan ekstrak metanol. Efek membunuh sel normal oleh ekstrak metanol mulai ditunjukkan pada konsentrasi 62,5 µg/ml. Namun pada konsentrasi 1000 µg/ml, efek membunuh sel sebanyak 50% belum diperlihatkan. Efek membunuh sel normal oleh ekstrak metanol sebanyak 50% (IC 50 ) ditunjukkan pada konsentrasi 2388,69 µg/ml. Sedangkan ekstrak etil asetat mulai menunjukkan efek sitotoksik terhadap sel vero pada konsentrasi 62,5 µg/ml sebesar 9,61% dan penghambatan 50% (IC 50 ) terdapat pada konsentrasi 262,99 µg/ml. Pada konsentrasi 1000 µg/ml, efek sitotoksik ekstrak etil asetat mendekati 100% yaitu sebesar 6,44%. Berdasarkan, nilai IC 50 ketiga ekstrak tersebut, ekstrak heksan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol daun kapur pada inkubasi 24 jam dikategorikan mempunyai efek sitotoksik rendah (low cytotoxicity) (Jenett- Siems et al., 1999 dalam [9] karena memiliki nilai IC 50 >30 µg/ml. Meskipun demikian, ekstrak metanol daun kapur memiliki aktivitas sitotoksik lebih baik dibandingkan dengan ekstrak heksan maupun ekstrak etil asetat. Hal ini dibuktikan berdasarkan nilai IC 50 ekstrak metanol yang lebih besar yaitu 2388,69 µg/ml. Meskipun ketiga ekstrak ini mempunyai efek sitotoksik yang rendah terhadap sel normal, namun sifat selektifitasnya terhadap aktivitas antiplasmodium secara in vitro belum diketahui sehingga perlu dilakukan uji aktivitas antiplasmodium in vitro. Analisis fitokimia ekstrak daun kapur dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak daun kapur. Data ini dijadikan acuan studi awal untuk mencari dan menemukan lead compound (senyawa penuntun/senyawa aktif) yang akan dipakai sebagai antimalaria. Hasil uji fitokimia ekstrak daun kapur dilakukan menggunakan berbagai pereaksi kimia seperti diperlihatkan pada TABEL 3. Hasil analisis fitokimia ekstrak daun kapur menunjukkan bahwa ekstrak heksan mengandung senyawa metabolit sekunder steroid, ekstrak etil asetat mengandung senyawa metabolit sekunder fenolik, steroid dan flavanoid sedangkan ekstrak metanol mengandung senyawa metabolit sekunder fenolik, steroid, saponin dan flavanoid. IV. KESIMPULAN Berdasarkan hasil yang diperoleh, maka dapat disimpulkan bahwa: a. 1 kg serbuk kering daun kapur diperoleh: rendamen ekstrak heksan 0,7%, ekstrak etil asetat 0,97% dan ekstrak metanol 9,12%. b. IC 50 ekstrak heksan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol daun kapur berturut-turut adalah 667,74; 262,99 dan 2388,69 µg/ml. Ekstrak metanol memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel vero (normal) 1059: Rachel Turalely dkk. TABEL 3: Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Daun Kapur (H.aculeatus) Jenis Pereaksi Golongan Senyawa Hasil Uji Fitokimia EH EEA EM Dragendorf Alkaloid FeCl 3 1% Fenolik (polifenol) 5%KOH Antrakuinon Alkoholis Lieberman- Burchard Steroid Air hangat Saponin (ekstrak dipanaskan dan dikocok) 2ml HCl Flavanoid N, 2 ml ekstrak dan serbuk Zn, campuran dikocok Keterangan: EH = ekstrak heksan, EEA = ekstrak etil asetat dan EM = ekstrak metanol lebih baik dibandingkan ektrak heksan dan ekstrak etil asetat. c. Ekstrak heksan mengandung senyawa metabolit sekunder steroid, ekstrak etil asetat mengandung senyawa metaboli sekunder fenolik, steroid dan flavanoid sedangkan ekstrak metanol mengandung senyawa metabolit sekunder fenolik, steroid, saponin dan flavanoid. DAFTAR PUSTAKA [1] Harijanto, P.N., MALARIA. Epidemiologi, Patogenesis, Manifestasi Klinik, & Penanganan. 36, 152, 153. EGC, Jakarta. [2] Chowdurry, K., Bagasra. O., An edible vaccine for malaria using transgenic tomatoes of varying sizes, shapes and colors to carry different antigen. Medical Hypotheses. 68 (1): [3] Dua, V.K., Ojha, V.P., Roy, R., Joshi, B.C.,Valecha, N., Usha-Devi, C., Bhatnagar, M.C., Sharma, V.P., Subbarao, S.K., 2004, Anti-malarial activity of some xanthones isolated from the roots of Andrographis paniculata, J. Ethnopharm, 95: [4] Center for Disease Control and Prevention, Malaria. 2010, Available from: [diakses 31 Mei 2010]. [5] Mustofa, Sholikah, E.N., Wahyuono, S., 2007, In vitro and In vivo Antiplasmodial Activity and Cytotoxity of Extracts of Phyllanthus niruri L. Herbs

6 1059: Rachel Turalely dkk. KO-103 Traditionally Used to Treat Malaria In Indonesia, J. Trop Med Public Health. 38(4): 609? 615. [6] Nur Cholis, I., 2009, Aktivitas Antiplasmodium Fraksi Semipolar Ekstrak Etanol Rimpang Temu Mangga (Curcuma mangga Val.) terhadap Plasmodium berghei Secara In Vivo. Skripsi. Surakarta: Universitas Muhamadiyah Surakarta. [7] Suwandi, J. F., Aktivitas Antiplasmodium Ekstrak Daun Sungkai (Peronema canescens): Kajian aktivitas antiplasmodium in vitro dan in vivo, aktivitas penghambatan polimerisasi hem dan aktivitas sitotoksik terhadap sel vero. Tesis. Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada. [8] Syarif, R. A., 2007, Aktivitas Antiplasmodium Fraksi Larut Eter Ekstrak Metanol Daun Kembang Bulan (Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray) Pada Plasmodium falciparum secara In vitro, Tesis, Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada. [9] Muhtadi, 2008, Pemisahan Fraksi dan Senyawa- Senyawa yang Berkhasiat Antiplasmodium dari Ekstrak Metanol Kulit Kayu Mimba (Azadirachta indica Juss), Jurnal Penelitian sains dan Teknologi, Vol 9 (2): [10] Qomariah, N Aktivitas Antiplasmodial In Vitro Dan In Vivo Ekstrak Air Eurycoma Longifolia Jack, Tinospora Tuberculata Beumee, Swietenia Mahagoni Jacq Dan Azadirachta Indica A. Juss. Indo Scienc & Technol, Available from: searchkatalog. [diakses: 20 Juni 2011]. [11] Praptiwi, Chairul, 2008, Pengaruh Pemberian Ekstrak Pauh Kijang (Irvingia malayana Olive ex A. Benn) Terhadap Tingkat Penurunan Parasitemia pada Mencit yang Diinfeksi Plasmodium berghei, J. Biodiversitas, 9(2) : [12] Turalely, 2011, Fraksi Antiplasmodium Paling Aktif dari Daun Kapur (Harmsiopanax aculeatus Harms) dan Identifikasi Beberapa Kandungan Senyawa Menggunakan GC-MS, Tesis, Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada. [13] Wagner, H., Bladt, S., Zgainski, E. M., 1984, Plant Drug Analysis, Translated by A. Scott, Spinger- Verlag Berlin Heidelberg. German. [14] Sheets, Rebecca History and Characterization of the Vero Cell Line. The vaccines and related biological products advisory committe. Available from: /dockets /ac /oo /acgod /3616bla.pdf, 5 Agustus 2012 [15] Pamilih, H., 2009, Uji Sitotoksik Ekstrak Etil Asetat Herba Bandotan (Ageratum conyzoides l.) Terhadap Sel Kanker payudara (T47D) dan Profil Kromatografi Lapis Tipis, Skripsi, Universitas Muhamadiyah Surakarta. [16] Meiyanto,E., Sismindari, Kusnandar L.C., Moordiani, 2003, Efek Anti Proliferatif Ekstrak Etanol Daun dan Kulit Batang Tanaman Cangkring (Erythrina fusca Lour) terhadap Sel HeLa, MFI, 14, [17] Melannisa, R., 2004, Pengaruh PGV-1 Pada Sel Kanker Payudara Yang Diinduksi 17β-Estradiol: Kajian Antiproliferasi, Pemacuan Apoptosis dan Antiangiogenesis, Tesis, Sekolah Pascasarjana, UGM, Yogyakarta