EVALUASI UJI ELISA DENGAN CRUDE ANTIGENCYSTICERCUSTAENIA SAGINATAISOLAT LOKAL PADA SERUM LAPANGAN SAPI BALI

Transkripsi

1 TESIS EVALUASI UJI ELISA DENGAN CRUDE ANTIGENCYSTICERCUSTAENIA SAGINATAISOLAT LOKAL PADA SERUM LAPANGAN SAPI BALI PRATIWI DEVI GM PROGRAM PASCASARJANA UNIVERSITAS UDAYANA DENPASAR 2013 i

2 TESIS EVALUASI UJI ELISA DENGAN CRUDE ANTIGENCYSTICERCUSTAENIA SAGINATA ISOLAT LOKAL PADA SERUM LAPANGAN SAPI BALI PRATIWI DEVI GM PROGRAM MAGISTER PROGRAM STUDI KEDOKTERAN HEWAN PROGRAM PASCASARJANA UNIVERSITAS UDAYANA DENPASAR 2013 i

3 EVALUASI UJI ELISA DENGAN CRUDE ANTIGENCYSTICERCUS TAENIA SAGINATAISOLAT LOKAL PADA SERUM LAPANGAN SAPI BALI Tesis untuk Memperoleh Gelar Magister pada Program Magister, Program Studi Ilmu Kedokteran Hewan Program Pascasarjana Universitas Udayana PRATIWI DEVI GM NIM PROGRAM MAGISTER PROGRAM STUDI ILMU KEDOKTERAN HEWAN PROGRAM PASCASARJANA UNIVERSITAS UDAYANA DENPASAR 2013 ii

4 Lembar pengesahan TANGGAL.. TESIS INI TELAH DISETUJUI Pembimbing I, Pembimbing II, Prof. Dr. drh. I Made Damriyasa, MSProf.Dr.Nyoman Sadra Dharmawan,MS NIP NIP Mengetahui Ketua Program StudiKedokteran Hewan Program Pascasarjana Universitas Udayana Direktur Program Pascasarjana Universitas Udayana Prof.Dr.drh. I Ketut Puja, M.Kes Prof. Dr.dr. A.A. Raka Sudewi, Sp.S (K) NIP NIP iii

5 Tesis Ini Telah Diuji pada Tanggal. Panitia Penguji Tesis Berdasarkan SK Rektor Universitas Udayana, No 3437/a/UN.14.4/HK/2013, Tanggal 21 Desember 2013 Ketua : Prof. Dr. drh. I Made Damriyasa, MS. Anggota : 1. Prof. Dr.drh. Nyoman Sadra Dharmawan,MS. 2. Dr.drh. Nyoman Adi Suratma, MP. 3. Prof.Dr.drh. I Ketut Berata, M.Si. 4. Prof. Dr.drh. I Ketut Puja, M.Kes. iv

6 SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT Saya yang bertanda tangan di bawah ini: Nama : Pratiwi Devi GM NIM : Program Studi : Ilmu Kedokteran Hewan Judul Tesis/Disertasi :Evaluasi uji ELISA dengan crude antigencysticercustaenia saginataisolat lokal pada serum lapangan sapi bali. Dengan ini menyatakan bahwa karya ilmiah Tesis/Disertasi * ini bebas plagiat. Apabila di kemudian hari terbukti plagiat dalam karya ilmiah ini, maka saya bersedia menerima sanksi sesuai peraturan Mendiknas RI No.17 Tahun 2010 dan peraturan Perundang-undangan yang berlaku. Denpasar, 21 Desember 2013 Yang membuat pernyataan *Coret yang tidak perlu Pratiwi Devi GM v

7 DAFTAR RIWAYAT HIDUP Penulis lahir di Bandar pasir Mandogepada tanggal 23 Juli Penulis merupakan anak kedua dari lima bersaudara, putri dari pasangan Bapak Alm. A.Ginting, S.Pd. dan ibu A.br. Tampubolon, S.Pd.Penulis memulai jenjang pendidikan Sekolah Dasar pada tahun 1995 di SDN Bandar pasir Mandoge (Kelas 1 SD), kemudian pada tahun di SDN Bandar pasir Mandoge (kelas 2 hingga 6 SD), Tamat Sekolah Menengah Pertama tahun 2004 dari SMP Swasta Methodist-2 Kisaran dan Pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMAN-2 Tebing Tinggi tamat pada tahun Selanjutnyapenulis menempuh pendidikan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana, menyelesaikan pendidikan Sarjana Kedokteran Hewan (SKH) tahun 2011 dan menyelesaikan Pendidikan Profesi Kedokteran Hewan tahun Pada tahun 2011 penulis menempuh Pendidikan Program Magister Program Studi S2 Kedokteran Hewan Program Pascasarjana Universitas Udayana. vi

8 UCAPAN TERIMA KASIH Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, karena dengan kehendak dan kasih-nya, tesis dengan judul EVALUASI UJI ELISA DENGAN CRUDE ANTIGENCYSTICERCUS TAENIA SAGINATA ISOLAT LOKAL PADA SERUM LAPANGAN SAPI BALI dapat diselesaikan. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada Prof. Dr. drh. I Made Damriyasa, MS selaku pembimbing I yang telah membagi pengetahuan dan banyak memberi masukan kepada penulis; Prof. Dr.drh.Nyoman Sadra Dharmawan,MS selaku pembimbing II yang telah dengan sabar memberikan arahan, masukan, dukungan serta dorongan bagi penulis untuk menyelesaikan tulisan ini; Prof. Dr. dr. A.A. Raka Sudewi. Sp.S (K) selaku Direktur Program Pascasarjana, Universitas Udayana atas segala fasilitas yang diberikan selama penulis menempuh pendidikan di Program Studi Magister Ilmu Kedokteran Hewan Universitas Udayana; Prof. Dr. drh. I Ketut Puja, M.Kesselaku Ketua Program Studi Magister Ilmu Kedokteran Hewan Universitas Udayana yang telah memberikan fasilitas selama penulis menempuh pendidikan di Program Studi Magister Ilmu Kedokteran Hewan Universitas Udayana, serta meluangkan waktu sebagai penguji dan memberikan masukan demi menyempurnakan tulisan ini; Dr.drh. Nyoman Adi Suratma, MP dan Prof. Dr.drh. I Ketut Berata, M.Si yang telah meluangkan waktu untuk menguji tesis ini dan memberikan banyak masukan untuk menyempurnakannya. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada drh. I Wayan Masa Tenaya, M.Phil,Ph.D. yang telah banyak meluangkan waktu, memberikan masukan dan arahan kepada penulis, terutama dalam pemeriksaan sampel di laboratorium. Kepada para dosen di Laboratorium Parasitologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Udayana, penulis ucapkan terima kasih atas masukan dan bimbingannya.penulis juga mengucapkan terima kasih kepada ayahanda Alm. A. Ginting, S.Pd. yang terkasih. Terima kasih sudah membesarkan, membimbing, memberi nasehat, mendoakan, mencurahkan kasih sayang yang tiada henti; ibunda A. br Tampubolon, S.Pd. yang saya banggakan, vii

9 terimakasih telah menjadi ibu terhebat. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada abang Jimmi Ricardo GM, adek Sonia Sinalsal GM, Rehjorena Ivana GM dan H. Rahmadhan Samuel GM yang telah memberikan motivasi dan dukungan guna terselesaikannya studi di Program Magister, Program Studi Kedokteran Hewan, Universitas Udayana. Penulis menyadari adanya kekurangan dalam penulisan tesis ini.namun dengan adanya bimbingan, saran, serta dorongan dari semua pihak, maka tulisan ini dapat diselesaikan.akhirnya penulis mengucapkan selamat membaca, semoga tulisan ini bermanfaat dan dapat memberikan informasi bagi berbagai pihak.segala saran dan kritik guna perbaikan tulisan di masa depan, sangat penulis harapkan. Denpasar, 21 Desember 2013 Penulis viii

10 ABSTRAK EVALUASI UJI ELISA DENGAN CRUDE ANTIGENCYSTICERCUS TAENIA SAGINATAISOLAT LOKAL PADA SERUM LAPANGAN SAPI BALI Tujuan penelitianini adalah untuk mengevaluasi uji ELISA dengan crude antigenisolat lokal menggunakan serum lapangan di Bali serta untuk mengetahui kejadian sistiserkosis Taenia saginata di Bali. Sampel serum diperoleh dari sapisapi yang dipotong di Rumah Potong Hewan (RPH) dan sapi yang dipelihara peternak. Hasil pemeriksaan menunjukkan 237 (87,7%) terdeteksi antibodi Cystisercus T.saginata. Selanjutnya, sebanyak 90 (33,33%) dari 270 sapi bali yang diambil serumnya, juga diambil fesesnya untuk pemeriksaan telur cacing. Hasil pemeriksaan feses menunjukkan sebanyak 80 (88,9%) terinfeksi trematoda dan 14 (15,5%) terinfeksi campuran trematoda dan nematoda. Dengan membandingkan hasil serologi ELISA dan hasil pemeriksaan feses pada 90 sampel menggunakan pendekatan Uji Sensitifitas dan Spesifisitas atau Tabel 2 x 2, hasil penelitian ini menunjukkan adanya reaksi silang (cross reaction) antara Cysticercus T. saginata dan cacing trematoda. Dengan demikian, masih diperlukan upaya-upaya pemurnian antigen Cysticercus T. saginata isolat lokal yang dipakai, agar uji lebih sensitif dan spesifik hanya untuk Cysticercus T. saginata. Kata Kunci: Sapi bali, ELISA, crude antigenisolat lokal, Cysticercus T. saginata ix

11 ABSTRACT ELISA EVALUATION WITH TAENIA SAGINATA CYSTICERCUS CRUDE ANTIGEN (LOCAL ISOLATE)OF FIELD SERUM BALI CATTLE The purpose of this study was to evaluate the ELISA test with crude antigen local isolate using field serum in Bali as well as to determine the incidence ofcysticercosis T. saginata in Bali. Serum s sample obtained from bali cattles that slaughtered at the abattoir and bali cattle that are raised by farmer at the field. The result of sera examination showed that 237 (87,7%) detected antibodies of Cystisercus T. saginata. Furthermore, as many as 90 (33,33%) of the 270 bali cattle, their feces were also taken for examination of worm eggs. Results of stool examination showed 80 (88,9%) infected with trematodes and 14 (15,5%) infected with a mixture of trematodes and nematodes. By comparing the results of ELISA serology and the resultsof stool examination on 90 samples using the test of sensitivity and specificity approach or Table 2 x 2, the results of this study showed a cross-reaction between Cysticercus T. saginata and trematode. Further efforts are still needed for purification of CysticercusT. saginatalocalantigen isolates for more sensitive and specific just to Cysticercus T. saginata. Keywords: Bali cattle, ELISA, crude antigen local isolate, Cysticercus T. saginata. x

12 RINGKASAN EVALUASI UJI ELISA DENGAN CRUDE ANTIGENCYSTICERCUSTAENIA SAGINATAISOLAT LOKAL PADA SERUM LAPANGAN SAPI BALI Sampai saat ini data mengenai kejadian sistiserkosis pada sapi bali di Bali belum pernah dilaporkan. Hal ini disebabkan karena diagnosis sistiserkosis pada hewan hidup memiliki sensitifitas yang rendah.diagnosis sistiserkosis biasanya dilakukan dengan carapost mortem, yakni dengan pemeriksaan kesehatan daging. Dengan telah dikembangkannya metode pemeriksaan Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) menggunakan antigen isolat lokal oleh Lubis et al. (2013), penelitian ini dibuat untuk mengevaluasi uji ELISA tersebut, menggunakan serum lapangan di Bali. Mengingat uji serologi ini baru diperkenalkan, perlu dilakukan evaluasi terhadap sensitifitas dan spesifisitasnya dengan membandingkan hasil uji serologi dan hasil pemeriksaan feses. Sampel serum diperoleh dari sapi baliyang dipotong di dan dari sapi bali yang dipelihara peternak di lapangan. Pemeriksaan serum dilakukan dengan uji ELISA menggunakan antigen isolat lokal CysticercusT. saginatadari hasil penelitian sebelumnya.feses diperiksa dengan metode apung dan sedimen. Evaluasi antigen yang digunakan dalam uji ELISA ini dilakukan dengan cara membandingkan hasil uji serologi dan hasil pemeriksaan feses dengan menerapkan uji sensitifitas dan spesifisitas menggunakan Tabel 2 x 2. Dari 270 sampel serum yang diperiksa, 237 (87,7%) terdeteksi antibodi Cystisercus T.saginata. Sebanyak 90 (33,3%) dari 270 sapi bali yang diambil serumnya untuk uji ELISA, juga diambil fesesnya untuk pemeriksaan telur cacing. Dari uji sedimentasi dan uji apung yang dilakukan, ditemukan telur cacing trematoda sebanyak 80 (88,9%) sampel; telur nematoda pada 1 (1,1%) sampel; dan campuran antara telur trematoda dan nematoda pada 14 (15,5%) sampel. Dengan membandingkan hasil serologi ELISA dan hasil pemeriksaan feses pada 90 sampel menggunakan pendekatan Uji Sensitifitas dan Spesifisitas atau Tabel 2 x 2, diketahui adanya reaksi silang (cross reaction) antara Cysticercus T. saginata dan cacing trematoda. Hasil penelitian ini menyimpulkan bahwa uji serologi ELISA dengan antigen isolat lokal yang dipakai mendeteksi antibodi Cysticercus T. saginata pada sapi bali, masih memberikan reaksi silang dengan cacing trematoda. Oleh karena itu, ke depan masih diperlukan upaya-upaya pemurnian antigen isolat lokal tersebut, agar lebih sensitif dan spesifik hanya untuk Cysticercus T. saginata. xi

13 DAFTAR ISI xii Halaman SAMPUL DALAM... i PRASYARAT GELAR... ii LEMBAR PENGESAHAN... iii PENETAPAN PANITIA PENGUJI... iv SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT... v DAFTAR RIWAYAT HIDUP... vi UCAPAN TERIMA KASIH... vii ABSTRAK... ix ABSTRACT... x RINGKASAN... xi DAFTAR ISI... xii DAFTAR TABEL... xiv DAFTAR GAMBAR... xv DAFTAR LAMPIRAN... xvi BAB I PENDAHULUAN Latar Belakang Rumusan Masalah Tujuan Penelitian Manfaat Penelitian... 3 BAB IIKAJIAN PUSTAKA Sapi Bali T. saginata Prevalensi T. saginata... 8 BAB III KERANGKA BERPIKIR DAN KONSEP PENELITIAN Kerangka Berpikir Konsep Penelitian BAB IV METODE PENELITIAN Rancangan Penelitian Lokasi dan Waktu Penelitian Ruang Lingkup Penelitian Bahan Penelitian Instrumen Penelitian Prosedur Penelitian Pemilihan dan Pengambilan Sampel Pemeriksaan Serologi Pemeriksaan Feses Pemeriksaan Konsentrasi Pengendapan Pemeriksaan Konsentrasi Pengapungan Analisis Data

14 BAB V HASIL PENELITIAN Uji Serologi Pemeriksaan Feses BAB VI PEMBAHASAN BAB VII SIMPULAN DAN SARAN DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN xiii

15 DAFTAR TABEL Halaman 5.1 Hasil Uji ELISA Serum Sapi bali di Bali terhadap Antibodi CysticercusT. saginata Sensitifitas dan Sfesifisitas Uji ELISA dengan Infeksi Trematoda Sensitifitas dan Sfesifisitas Uji ELISA dengan Infeksi Nematoda Sensitifitas dan Sfesifisitas Uji ELISA dengan Infeksi campuran Trematodadan Nematoda xiv

16 DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar Siklus Hidup T. saginata... 6 Gambar Konsep Penelitian xv

17 DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Data Hasil Uji ELISA Lampiran 2. Data Hasil Pemeriksaan Feses Lampiran 3. Hasil Pemeriksaan Feses di Mikroskop Pembesaran Objektif 40 x Lampiran 4. Alat dan Bahan Penelitian xvi

18 BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Penyakit hewan yang dapat menular ke manusia masih merupakan masalah besar di hampir semua negara baik pada negara berkembang maupun negara maju.penyakit ini dikenal dengan zoonosis.zoonosis dapat ditularkan dari hewan ke manusia melalui beberapa cara, baik secara langsung ataupun tidak langsung. Secara langsung kontak antara hewan dengan manusia, secara tidak langsung misalnya melalui hewan perantara. Salah satu zoonosis yang dapat ditularkan melalui pangan adalah infeksi Taenia saginata (Suharsono, 2002; Nichlos dan Smith, 2003). Cacing T. saginata berparasit pada usus manusia, sementara bentuk larvanya yang dikenal dengan Cysticercus T. saginata menginfeksi otot-otot sapi.manusia terinfeksi taeniasis bila mengkonsumsi daging sapi yang tidak dimasak atau kurang matang yang mengandung sistiserkosis T. saginata. Sebaliknya sapi akan terinfeksi sistiserkosis bila menelan telur atau proglotid T. saginata yang dikeluarkan melalui feses manusia (Dharmawan et al., 2012). Kasus sistiserkosis pada sapi di Provinsi Bali belum pernah dilaporkan oleh instansi resmi pemeriksaan daging maupun peneliti.itu tidak berarti bahwa kasus tidak ada karena kasus taeniasis pada manusia masih sering dilaporkan. Menurut Wandra et al., (2007) kasus taeniasis dilaporkan di empat kabupaten di Bali (Gianyar, Badung, Denpasar, Karangasem) sejak tahun Dari 540 orang yang disurvei, prevalensi taeniasis T. saginata berkisar antara 1,1%-27,5%. Prevalensi taeniasis T. saginata meningkat secara cepat di Gianyar, tahun 2002 (25,6%) dan tahun 2005 (23,8%), dibandingkan dengan survei sebelumnya pada tahun 1977 (2,1%) dan 1999 (1,3%) (Simanjuntak et al., 1997; Sutisna et al., 2000) sedangkan hasil survei yang dilakukan di Bali pada tahun menemukan 80 kasus taeniasis T. saginata dari 660 orang yang diperiksa (Wandra et al., 2011). 1

19 2 Tingginya kasus taeniasis di Bali diduga karena masih banyak ditemukan keluarga yang gemar mengkonsumsi daging sapi mentah berupa lawar.lawar merupakan makanan khas Bali yang dibuat dari daging babi atau daging sapi mentah yang dicampur bumbu, sayuran dan parutan kelapa. Di sisi lain, ternak terinfeksi saat memakan rumput yang tercemar telur cacing yang terkandung dalam kotoran manusia. Sampai saat ini data mengenai kejadian sistiserkosis pada sapi bali di Bali belum pernah dilaporkan. Hal ini disebabkan karena diagnosis sistiserkosis pada hewan hidup memiliki sensitifitas yang rendah. Saat ini biasanya diagnosis sistiserkosis dilakukan dengan cara post mortem yakni dengan melakukan pemeriksaan kesehatan daging dengan menemukan parasit. Dengan adanya metode pemeriksaan Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) menggunakan antigen isolat lokal yang dikembangkan oleh Lubis et al. (2013), penelitian ini dibuat untuk mengevaluasi uji ELISA tersebut dengan menggunakan serum lapangan di Bali. Uji serologi terhadap kejadian sistiserkosis T. saginata pada sapi bali di Bali merupakan penelitian yang pertama kali dilakukan, karena itu dilakukan juga evaluasi terhadap sensitifitas dan spesifisitas uji dengan membandingkan hasil uji serologi dan hasil pemeriksaan feses. 1.2 Rumusan Masalah Berdasarkan uraian latar belakang penelitian ini maka permasalahan yang diangkat adalah; a. apakah uji ELISA dengan antigen isolat lokal tersebut dapat diterapkan/ cukup valid? b. dengan menggunakan metode yang dikembangkan tersebut, berapa prevalensi sistiserkosis T. saginata pada sapi bali di Bali?

20 3 1.3 Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah untuk: a. mengevaluasi uji ELISA yang dikembangkan oleh Lubis et al. (2013). b. mengetahui kejadian sistiserkosis T. saginata di Bali. 1.4 Manfaat Penelitian Manfaat penelitian ini adalah untuk memberikan sumbangan ilmu tentang potensi antigen isolat lokal Cysticercus T. saginata yang dipakai uji ELISA dan sekaligus mengetahui kejadian sistiserkosis pada sapi bali di Bali.

21 BAB II KAJIAN PUSTAKA 2.1Sapi Bali Sapi bali berasal dari banteng (Bibos banteng) yang telah didomestikasi berabad-abad lalu. Sapi bali termasuk Famili Bovidae, Genus Bos dan Subgenus Bibovine (Hardjosubroto dan Astuti, 1993). Sapi bali merupakan kekayaan plasma nutfah Indonesia yang perlu dipertahankan kelestariannya (Wiryosuhanto, 1996). Tempat dimulainya domestikasi sapi bali masih terdapat perbedaan pendapat, dimana Meijer (1962) berpendapat proses domestikasi terjadi di Jawa, namun Payne dan Rollinson (1973) menduga bahwa asal mula sapi bali adalah dari Pulau Bali mengingat tempat ini merupakan pusat distribusi sapi bali di Indonesia. Nozawa (1979) menduga gen asli sapi bali berasal dari Pulau Bali yang kemudian menyebar luas ke daerah Asia Tenggara, dengan kata lain bahwa pusat gen sapi bali adalah di Pulau Bali. Sapi bali memiliki beberapa keunggulan yaitu: (1) tingkat kesuburan sangat tinggi, (2) merupakan sapi pekerja yang baik dan efisien, (3) dapat memanfaatkan hijauan yang kurang bergizi, (4) persentase karkas tinggi, (5) daging rendah lemak subkutan, (6) heterosis positif tinggi pada persilangan (Pane, 1990). Menurut Wiliamson dan Payne (1993), ciri-ciri fisik sapi bali adalah berukuran sedang, berdada dalam dengan kaki yang bagus. Warna bulu merah bata dan coklat tua.bibir, kaki, ekor berwarna hitam, kaki berwarna putih dari lutut ke bawah (white stocking), ditemukan warna putih di bawah paha dan bagian oval putih yang amat jelas pada bagian pantat.pada punggung ditemukan garis hitam di sepanjang garis punggung yang disebut garis belut.pada waktu lahir, baik jantan maupun betina berwarna merah bata dengan bagian warna terang yang khas pada bagian belakang kaki.warna bulu menjadi coklat tua sampai hitam pada saat mencapai dewasa dan jantan lebih gelap daripada betina.warna hitam menghilang dan warna bulu merah bata kembali lagi jika sapi jantan dikebiri.bulu pendek, halus dan licin.kulit berpigmen dan halus.kepala lebar dan pendek dengan puncak kepala yang datar, telinga berukuran sedang dan berdiri. Sapi bali jantan 4

22 5 maupun betina mempunyai tanduk, yang berbeda dalam ukuran dan bentuknya dan ada beberapa variasi tipe tanduk pada kedua jenis kelamin tersebut. Panjang tanduk sapi jantan biasanya cm, bentuk tanduk yang ideal pada sapi jantan disebut bentuk tanduk silak conglok yaitu jalannya pertumbuhan tanduk mulamula dari dasar sedikit keluar (tumbuh ke arah samping), lalu membengkok ke atas dan kemudian pada ujungnya membengkok sedikit ke arah luar. Pada sapi betina, bentuk tanduk yang ideal disebut manggul gangsa yaitu jalannya pertumbuhan tanduk satu garis dengan dahi mengarah ke atas dan pada ujungnya sedikit mengarah ke belakang dan kemudian melengkung ke bawah lagi mengarah ke kepala (ke dalam). 2.2 T. saginata Taenia saginata merupakan cacing pita pada sapi.manusia berperan sebagai hospes definitif sedangkan sapi maupun kerbau berperan sebagai hospes perantara (Wandra et al., 2006).Skoleks T. saginata berbentuk segiempat, dengan garis tengah 1-2 milimeter, dan mempunyai 4 alat isap (sucker).tidak ada rostelum maupun kait pada skoleks. Leher T. saginata berbentuk sempit memanjang, dengan lebar sekitar 0,5 milimeter. Ruas-ruas tidak jelas dan di dalamnya tidak terlihat struktur (Handojo dan Margono, 2008).Segmen T. saginata dapat mencapai 2000 buah. Segmen mature mempunyai ukuran panjang 3-4 kali ukuran lebar. Segmen gravid paling ujung berukuran 0,5 cm x 2 cm. Lubang genital terletak di dekat ujung posterior segmen. Uterus pada segmen gravid uterus berbentuk batang memanjang di pertengahan segmen, mempunyai cabang di setiap sisi segmen.segmen gravid dilepaskan satu demi satu, dan tiap segmen gravid dapat bergerak sendiri di luar anus.segmen gravid T. saginata lebih cenderung untuk bergerak dibandingkan dengan segmen gravid cacing pita babi (CFSPH, 2005). Fase larva dari T. saginata disebut Cysticercus bovis.cysticercus bovis terdapat di dalam tubuh hospes perantara (sapi) terdiri dari kantong tipis yang dindingnya mengandung skoleks dan rongga ditengahnya berisi sedikit cairan jernih (Iskandar, 2005).Penyakit parasitik yang disebabkan oleh Cysticercusdisebut

23 6 Sistiserkosis.Sistiserkosis ditandai dengan adanya kista pada otot skeletal dari hospes.kista juga sering dijumpai pada otot masseter, jantung dan diafragma.kista Cysticercus bovis berukuran 6-9 mm, diameternya sekitar 5 mm ketika sudah berkembang sempurna (Pustekkom, 2005). Gambar Siklus hidup T. saginata Sumber: CDC, Center for Disease Control and Prevention, Department of Health and Human Services ( Dalam usus manusia terdapat proglotid gravidyang mengandung banyak telur Bila telur atau proglotid gravid yang keluar termakan sapi, akan berkembang menjadi larva onkosfer. Larva onkofter menembus usus dan masuk kedalam pembuluh darah atau pembuluh limpa, kemudian sampai ke otot lurik dan membentuk kista Cysticercus bovis. Manusia akan tertular cacing ini apabila memakan daging sapi mentah atau setengah matang. Dinding Cysticercus bovisakan dicerna di lambung sedangkan larva dengan skoleks menempel pada

24 7 usus manusia. Kemudian larva akan tumbuh membentuk proglotid yang dapat menghasilkan telur. Proglotid dewasa akan keluar bersama feses, kemudian termakan oleh sapi. Selanjutnya proglotid gravid dalam usus sapi akan menetas menjadi larva onkosfer. Setelah itu larva akan tumbuh dan berkembang mengikuti siklus hidup seperti Gambar diatas (CDC, 2011). Diagnosis sistiserkosis dilakukan dengan cara post mortem yakni dengan melakukan pemeriksaan kesehatan daging dengan menemukan parasit. Selain itu metode diagnosa yang dipakai untuk mendiagnosa sistiserkosis adalah palpasi. Diagnosa sistiserkosis dengan cara palpasi pada hewan telah dilaporkan sangat spesifik, tetapi sensitifitasnya rendah terutama pada hewan dengan infeksi sedang (Gonzales et al., 2001). Oleh sebab itu dikembangkan metode diagnosa yang mudah dan dapat dipercaya, salah satu metode yang dikembangkan adalah uji imunodiagnostik ELISA. Menurut da Silva et al. (2000) uji ELISA terhadap kasus neurocysticerkosis pada manusia memiliki tingkat sensitifitas 95%, sementara Pinto et al. (2000) mengatakan bahwa diagnosis sistiserkosis pada babi dengan menggunakan uji ELISA menggunakan sampel antigen cairan vesikel memiliki tingkat sensitifitas % dan spesifisitas 97,5-100%. Husain et al.(2001) menggunakan ekstrak membrane cysticercus fasciolaris untuk imunodiagnostik neurocysticercosis, tes ini memiliki sensitifitas secara keseluruhan 93,54% dan spesifisitas 84,2% dengan nilai prediksi positif 93,54% dan nilai prediksi negatif 84,2%. Das et al. (2002) mengatakan bahwa ELISA memiliki tingkat sensitifitas yang baik terhadap diagnostik neurocysticercosis. Dari uraian diatas dapat dikatakan bahwa ELISA merupakan uji yang paling banyak digunakan dan teknik ini umumnya memberi hasil yang baik. Menurut Ito et al. (2002) bahkan dewasa ini, telah umum diketahui bahwa laporan tentang epidemiologi kejadian sistiserkosis di beberapa negara, datanya diperoleh dari pemeriksaan serologis. Sistiserkosis pada hewan dapat ditekan dengan cara mengobati induk semang definitif yang menderita Taeniasis. Selain itu, untuk mencegah terjadinya infeksi T. saginata, sapi dikandangkan sehingga kontak langsung antara sapi dengan feses manusia dapat diminimalisir. Pengobatan Taeniasis pada hewan bisa dilakukan dengan pemberian obat cacing praziquantel, epsiprantel, mebendazole,

25 8 febantel dan fenbendazole.demikian juga untuk pengobatan taeniasis pada manusia, pemberian obat cacing praziquantel, niclosamide, buclosamide atau mebendazole dapat membunuh cacing dewasa dalam usus (OIE, 2005). 2.3 Prevalensi T. saginata Taenia saginata merupakan penyakit parasitik zoonosis di seluruh dunia dengan perkiraan sekitar 50 juta kasus infeksi (Wanzala et al., 2003).Selanjutnya Wanzala (2003) melaporkan bahwa orang meninggal akibat infeksi T. saginata. Endemitas taeniasis dan sistiserkosis di suatu wilayah dipengaruhi oleh adanya beberapa faktor yaitu: (1) pembuangan kotoran manusia yang tidak memenuhi syarat kesehatan, misalnya kebiasaan buang air besar disembarang tempat sehingga telur taenia menyebar melalui air, lalat dan mobilitas manusia; (2) pemeliharaan sapi dan babi yang tidak dikandangkan, sehingga memungkinkan sapi dan babi memakan feses manusia; (3) hygiene-sanitasi individu yang rendah, misalkan kebiasaan tidak membersihkan tangan sebelum makan; dan (4) kebiasaan tertentu sehubungan dengan makanan, misalnya hidangan yang mengandung daging sapi atau daging babi mentah ( Batero, 1989). Infeksi T. saginata ditemukan di Afrika, Timur Tengah dan beberapa bagian dari Eropa.Infeksi jarang terjadi di negara-negara seperti Amerika Serikat, Kanada dan Australia (J, Howell dan Brown G, 2008).Prevalensi infeksi T. saginata berbeda disetiap negara, dengan prevalensi tertinggi terdapat di Asia Tengah, sekitar Asia Timur, Afrika Tengah, dan Afrika Timur (lebih dari 10%). Daerah dengan prevalensi infeksi 0,1% hingga 10% seperti negara pada daerah Asia Tenggara seperti Thailand, India, Vietnam, dan Filipina. Daerah dengan prevalensi rendah (sekitar 1% penderita) seperti beberapa negara di Asia Tenggara, Eropa, serta Amerika Tengah dan Selatan (Sheikh, et al., 2008; Del Brutto, 2005).

26 9 Tiga provinsi di Indonesia yang merupakan daerah endemis taeniosis/sistiserkosis adalah Bali (T. solium) dan (T. saginata), Sumatera Utara (T. asiantica), dan Papua (T. solium). Survei yang dilakukan di Bali pada empat desa diempat kecamatan (Kecamatan Gianyar, Badung, Denpasar, Karangasem) pada tahun , tingkat prevalensi taeniosis T. saginata 1,1%-27,5%. Tingkat prevalensi taeniosis T. saginata meningkat secara cepat di Gianyar, tahun 2002 (25,6%) dan tahun 2005 (23,8%), dibandingkan dengan survey sebelumnya pada tahun 1977(2,1%) dan tahun 1999 (1,3%) (Wandra et al., 2006, Dharmawan et al., 2009). Pada penelitian yang dilakukan Sutisna tahun 2000 di Br. Pamesan, Desa Ketewel, Gianyar (penduduk sebanyak 765 orang), dari 156 feses yang diperiksa 2 mengandung Taenia (Prevalensi1,3%). Kedua kasus tersebut ternyata disebabkan oleh T. saginata. Dari 115 serum yang diperiksa, 6 menunjukkan seropositif (5,2%). Kasus tersebut terdiri dari 3 laki-laki dan 3 perempuan, berumur tahun.di samping kelompok penelitian, 13 orang mengeluh mengeluarkan proglotida juga diperiksa, dan ternyata mengandung infeksi Taenia, terdiri dari T. saginata dan T. solium.dua diantaranya menunjukkan hasil seropositif, seorang terinfeksi T. solium dan yang lainnya T. saginata.hal tersebut menunjukkan bahwa taeniosis dan sistiserkosis memang endemis pada penduduk Pulau Bali (Sutisna et al.,2000). Kasus sistiserkosis pada sapi ditemukan hampir diseluruh dunia, dengan kategori prevalensi rendah di negara maju, moderat di negara-negara Asia selatan, dan tinggi di negara-negara sedang berkembang dan di Sub Sahara Afrika (Taresa et. al., 2011; Dharmawan et. al., 2012).Data kejadian sistiserkosis karena Cystiserkus T. saginata di beberapa negara kebanyakan diambil dari laporanlaporan pemeriksaan kesehatan daging (Dharmawan, 1995).Sementara untuk kasus Cystiserkus T. saginata di Bali belum pernah secara resmi dilaporkan.

27 BAB III KERANGKA BERPIKIR DAN KONSEP PENELITIAN 3.1 Kerangka Berpikir Sistiserkosis dan taeniasis selain merupakan masalah kesehatan masyarakat, juga menyebabkan kerugian ekonomi yang cukup tinggi.sistiserkosis dapat menurunkan nilai jual daging karena daging yang terinfeksi harus dimusnahkan (Flisser et al., 2006).Seperti yang dilaporkan angka prevalensi penyakit ini tersebar diberbagai wilayah Indonesia dengan tingkat prevalensi yang bervariasi. Namun data tentang prevalensi sistiserkosis T. saginata pada sapi bali di Bali sampai saat ini belum tersedia. Upaya penanggulangan sistiserkosis dan taeniasis sebenarnya tidak sulit, namun di Indonesia penyakit ini masih terabaikan.salah satu metode penanggulangan yang efisien terhadap sistiserkosis dan taeniasis adalah dengan memutus rantai daur hidup parasit tersebut.manusia terinfeksi taeniasis bila mengkonsumsi daging sapi yang tidak dimasak atau kurang matang yang mengandung sisitiserkosis T. saginata. Sebaliknya, sapi akan terinfeksi sistiserkosis bila menelan telur atau proglotid T. saginata yang dikeluarkan melalui feses manusia (Dharmawan et al., 2012). Kendalanya sampai saat ini adalah kurangnya data tentang keberadaan sistiserkosis tersebut pada sapi bali di Bali. Ketiadaan informasi ini, disebabkan karena kurangnya perhatian terhadap pemeriksaan kesehatan daging baik di RPH maupun di tempat-tempat pemotongan sapi tradisional.selain itu, teknik diagnostik yang digunakan untuk mendeteksi sistiserkosis pada hewan lebih banyak menggunakan uji-uji yang dilakukan post mortem. Hal ini juga menyebabkan upaya untuk mengetahui prevalensi kejadian sistiserkosis pada sapibali di Bali tidak optimal. Dengan adanya teknik diagnostik yang dipermudah, misalnya dengan menggunakan antigen isolat lokal yang 10

28 11 dikembangkan Lubis et al. (2013), dapat di deteksi keberadaan antibodi Cysticercus T. saginata. Akan tetapi, dari beberapa laporan tentang pengembangan uji diagnostik serologi untuk sistiserkosis dan taeniasis, diketahui bahwa uji serologi sering kali belum optimal, karena hasil yang diperoleh masih menunjukkan reaksi silang (cross reaction) dengan parasit lain. Kumar dan Tadesse (2011) melaporkan bahwa uji serologi dengan menggunakan crude antigen yang dipakai untuk mendeteksi antibodi cysticercus/taenia sering bermasalah dari segi spesifisitasnya, terutama bila diterapkan pada ternak yang terpapar oleh parasit lain yang mengakibatkan timbulnya reaksi silang. Hal yang sama juga dilaporkan oleh Ito (2013), yang menyatakan bahwa dari hasil penelitian dan pengamatannya menemukan bahwa penggunaan crude antigen untuk uji serologi terhadap infeksi cestoda, sering memberi hasil positif palsu (false positives). Tingginya persentase kejadian sistiserkosis pada sapi yang ditunjukkan dari hasil pemeriksaan serologi, oleh Kandil et al. (2012) dilaporkan juga dapat disebabkan oleh adanya reaksi silang dengan parasit lain. Sementara itu, Oliveira et al. (2007) secara spesifik melaporkan bahwa penggunaan antigen Cysticercus T. saginata untuk uji serologi, memperlihatkan reaksi silang antara infeksi Taenia sp, Hymenolepis nana dan infeksi Echinococcus granulosus.hal ini kemungkinan disebabkan oleh adanya variasi dari antigenic epitopes masing-masing spesies.reaksi silang yang terjadi di antara Taenia sp. dan Hymenolepis sp. sangat terkait dengan hubungan filogenetiknya, kedua sepesies cacing pita tersebut berasal dari Family Taeneiidae (Oliveire et al., 2007). Saat ini, ELISA sebagai uji serologi telah digunakan secara ekstensif dan universal untuk diagnosis sistiserkosis, dan tidak jarang memiliki nilai sensistifitas dan spesifisitas yang tinggi (dari 90% sampai 100%), tergantung dari antigen spesifik yang digunakan (Cai et al., 2006).

29 Konsep Penelitian Berdasarkan kerangka berpikir di atas yang dilandasi kepustakaan dan dasar teori, maka dapat disusun kerangka konsep sebagai berikut. Sapi bali dan daerah endemis Daerah endemis Serum Feses ELISA, antigen isolat lokal Pemeriksaan feses, sedimentasi dan pengapungan Hasil uji serologi, Prevalensi Hasil pemeriksaan telur cacing Evaluasi Antigen uji ELISA Uji sensitifitas dan spesifisitas hasil uji serologi dan pemeriksaan feses Gambar 3.2.1: Konsep Penelitian

30 BAB IV METODE PENELITIAN 4.1 Rancangan Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian obervasional untuk mengevaluasi uji ELISA dengan crude antigen isolat lokal menggunakan serum sapi lapangan di Bali dan untuk mengetahui prevalensi sistiserkosis T. saginata di Bali. Oleh karena uji serologi dengan menggunakan antigen isolat lokal ini baru pertama kali diterapkan di lapangan, evaluasi sensitifitas dan spesifisitas uji dilakukan dengan membandingkan hasil uji serologi dan hasil pemeriksaan feses. Angka prevalensi ditetapkan menggunakan point prevalence-rate. 4.2 Lokasi dan waktu penelitian Pengambilan sampel serum sapi bali dan pengambilan sampel feses di lapangan dilakukan di beberapa daerah di Bali (Gianyar, Karangasem,, Badung, dan Klungkung) secara purposive. Sampel serum juga diambil pada sapi-sapi yang dipotong di Rumah Potong Hewan Pesanggaran.Penelitian laboratorium dikerjakaan di Laboratorium Balai Besar Veteriner Denpasar dan Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana Denpasar.Penelitian dilakukan pada bulan Mei September Ruang Lingkup Penelitian Ruang lingkup dari penelitian ini adalah evaluasi uji ELISA dengan crude antigen isolat lokal menggunakan serum lapangan di Bali dan penetapan prevalensi sistisserkosis T. saginata pada sapi bali di Bali. Sampel serum sapi bali diperoleh dari beberapa daerah dan dari sapi-sapi yang disembelih di dan di daerah endemis taeniasisis-sistiserkosis. Teknik diagnostik dengan uji ELISAmenggunakan antigen lokal berupa crude antigencysticercust. saginata hasil penelitian sebelumnya.untuk mengevaluasi uji serologis dilakukan perbandingan hasil pemeriksaan ELISA dan hasil pemeriksaan feses. 13

31 Bahan Penelitian Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: antigen Cysticercus T. saginata, konjugat (IgG-Peroxidase antibody produced in rabbit(sigma), substrat ABTS mengandung 2,2 azino-di-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) hydrogen peroxydase (BIORAD), skim milk 5%, serum sapi bali, feses sapi bali, PBS, PBS-Tween, Larutan stopper (oxalic acid), coating buffer (0,1M larutan karbonat ph 9,6), Alkohol 70 %, aquadest, formalin dan NaCl. 4.5 Instrumen Penelitian Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: spuit, stiker kertas, tabung sentrifuge, sentrifugator, inkubator (37ºC), komputer, ELISA reader (mikroplate reader Bio-Rad model 550), ELISA washer (Imunowash Biorad model 1575), shaker (Tirtex), multichannel pippet, tip, plate ELISA, kulkas 4 o C, magnetic stirrer, rak shaker, gelas beker, saringan teh, objek gelas, gelas penutup, mikroskop, tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet Pasteur. 4.6 Prosedur Penelitian Pemilihan dan pengambilan sampel Target populasi dalam penelitian ini adalah sapi bali yang dipotong di dan daerah endemis. Dipilihnya sapi bali yang dipotong di rumah potong hewan karena daging sapi tersebut sangat potensial dalam penularan zoonosis tersebut ke manusia, sedangkan sampel daerah endemis dipilih untuk pencegahan/pemutusan siklus hidup T. saginata. Sampel yang diambil berupa darah sapi bali dan beberapa sampel feses. Sampel darah yang diperoleh disentrifius untuk memperoleh serum. Serum yang didapat disimpan pada suhu - 20 o C sampai akan digunakan. Sesuai dengan Thrusfield (2007) penentuan jumlah sampel dilakukan dengan rumus: n=1,96 2 P exp (1-P exp), d 2

32 15 Dimana n = Jumlah sampel P exp = Prevalensi yang diperkirakan d = Selang kepercayaan Diketahui, P exp = 20% d = 0,5 n = 1,96 2 x 0, 2 (1-0,2) 0,25 = 246 sampel Pemeriksaan Serologi Deteksi antibodi terhadap Cysticercus T. saginata serum sapi bali yang diperoleh dari peternak maupun rumah potong hewan dilakukan dengan uji ELISA. Tahapan pemeriksaan antibodi dengan uji ELISA dilakukan dengan mempersiapkan 96-well polystyrene ELISA plates dilapisi dengan crude antigen, kemudian diinkubasi selama 15 jam pada suhu 4 o C dengan konsentrasi sesuai dengan hasil titrasi antigen. Setelah inkubasi dicuci 3 kali dengan PBS-0,5 yang mengandung 0,1% Tween 20 (PBS-0,5 Tween). Sampel serum diencerkan PBS- 0,5 Tween sesuai dengan hasil titrasi sampel kemudian diinkubasikan selama 1 jam pada temperatur kamar. Setelah inkubasi dicuci lagi sebanyak 3 kali dengan PBS-0,5 Tween. Selanjutnya ditambahkan konjugat dengan pengenceran sesuai dengan hasil titrasi. Setelah dilakukan pencucian 3 kali dengan PBS-0,5 Tween maka dilakukan penambahan substrat yang mengandung o-phenylenediamine dihydrochloride (Sigma) dan 0,0012% hydrogen peroxydase. Reaksi dihentikan dengan penambahan asam sulfat 0,5 M setelah inkubasi pada ruang gelap selama 15 menit. Optical density kemudian dibaca pada ELISA-reader pada 490 nm. Dari hasil pembacaan tersebut kemudian ditentukan index OD (OD sampel-od Kontrol negatif: OD Kontrol positif OD Kontrol negatif).

33 Pemeriksaan feses Pemeriksaan konsentrasi pengendapan (sedimentasi) Feses sebesar biji kemiri (± 3 gram) dimasukkan kedalam gelas beker, kemudian ditambahkan aquades sampai konsentrasi kira-kira 10%.Larutan kemudian diaduk sampai homogen.lalu disaring memakai saringan teh untuk menghilangkan bagian yang berukuran besar.hasil saringan masukkan kedalam tabung sentrifuge sampai volume ¾.Sentrifuge dengan kecepatan 1500 rpm selama 2-3 menit.kemudian tabung sentrifuge dikeluarkan dari sentrifugator, sepernatan dibuang lalu sedimen yg ada didasar tabung diaduk sampai homogen. Bahan tersebut dibuat preparat dan dilakukan pemeriksaan menggunakan mikroskop pembesaran objektif 40 x Pemeriksaan Konsentrasi Pengapungan Feses sebesar biji kemiri (± 3 gram) dimasukkan kedalam gelas beker, kemudian ditambahkan aquades sampai konsentrasi kira-kira 10%.Larutan kemudian diaduk sampai homogen, lalu disaring memakai saringan teh untuk menghilangkan bagian yang berukuran besar.hasil saringan kemudian dimasukkan kedalam tabung sentrifuge sampai volume ¾.Sentrifuge dengan kecepatan 1500 rpm selama 2-3 menit. Tabung sentrifuge dikeluarkan dari sentrifugator, sepernatan dibuang kemudian ditambahkan larutan pengapung NaCl jenuh ¾ volume, diaduk hingga homogen. Tabung dimasukkan kembali kedalam sentrifugator dan selanjutnya ditaruh pada rak tabung reaksi dengan posisi tegak lurus. Tetesi tabung reaksi dengan larutan NaCl jenuh dengan menggunakan pipet Pasteur secara perlahan sampai permukaan cairan cembung (penambahan cairan pengapung tidak boleh sampai tumpah). Ditunggu 1-2 menit, ambil gelas penutup kemudian disentuhkan pada permukaan cairan pengapung dan setelah itu ditempelkan diatas gelas obyek. Diperiksa dengan menggunakan mikroskop pembesaran objektif 40 x.

34 Analisa data Data pemeriksaan serologi berupa nilai optical density (OD) dari serum yang dinyatakan positif dicatat, lalu ditabulasi dalam bentuk tabel sesuai asal sampel. Penetapan angka prevalensi dilakukan sesuai dengan metode point prevalence rate dengan membagi jumlah sampel positif dengan jumlah sampel yang diperiksa, dikalikan 100% (Thrusfield, 2007).Untuk evaluasi antigen yang digunakan dalam uji ELISA, hasil uji serologi dan hasil pemeriksaan feses dianalissis dengan uji sensitifitas dan spesifisitas menggunakan Tabel 2 x 2 (Thrusfield, 2007).

35 BAB V HASIL PENELITIAN 5.1 Uji Serologi Untuk mengevaluasi uji ELISA dengan crude antigen isolat lokal telah diperiksa 270 sampel serum sapi yang berasal dari beberapa kabupaten. Serum tersebut diperoleh dari sapi-sapi bali yang dipelihara oleh peternak di Kabupaten Gianyar, Karangasem,, Badung, dan Klungkung, dengan jumlah berturut-turut: 10 (3,7%), 30 (11,1%), 52 (19,3%), 30 (11,1%), dan 25 (9,3%). Selain itu, sampel serum juga diperoleh dari sapi bali yang disembelih di Rumah Potong Hewan (RPH) Pesanggaran sebanyak 123 (45,5%). Dari hasil uji ELISA yang dilakukan terhadap semua serum, ditemukan 237 (87,7%) terdeteksi antibodi Cystisercus T. saginata. Uji ELISA dinyatakan positif, bila hasil pembacaan menunjukkan nilai yang sama atau di atas Selengkapnya data hasil uji ELISA dapat dilihat pada Tabel 5.1 berikut. Tabel 5.1 Hasil Uji ELISA Serum Sapi Bali di Bali Terhadap Antibodi Cysticercus T. saginata Jumlah Hasil Pemeriksaan ELISA Asal Sampel Sampel Positif (%) Negatif (%) Gianyar Karangasem ,3 5 16, ,3 4 7,7 Badung Klungkung , ,1 Total , ,3 18

36 19 Dari Tabel 5.1, diketahui bahwa 237 (87,7%) serum postif terdeteksi antibodi Cysticercus T. saginata dan 33 (12,3%) negatif. Berdasarkan hasil tersebut, dapat dinyatakan bahwa prevalensi kejadian sistiserkosis T. saginata pada sapi bali di Bali sebesar 87,7%. 5.2 Pemeriksaan Feses Sebanyak 90 (33,3%) dari 270 sapi bali yang diambil serumnya untuk uji ELISA, juga diambil fesesnya untuk pemeriksaan telur cacing. Sampel feses ini diambil bersamaan saat pengambilan sampel serum sapi-sapi tersebut di lapangan.sampel feses tersebut berasal dari Kabupaten Gianyar, Karangasem dan. Dari uji sedimentasi dan uji apung yang dilakukan, ditemukan telur cacing sebagai berikut: 1) hanya telur trematoda pada 80 (88,9%) sampel; hanya telur nematoda pada 1 (1,1%) sampel; dan campuran antara telur trematoda dan nematoda pada 14 (15,5%) sampel. Data lengkap hasil pemeriksaan feses dapat dilihat pada Lampiran 2. Dengan membandingkan hasil serologi ELISA dan hasil pemeriksaan feses pada 90 sampel menggunakan pendekatan Uji Sensitifitas dan Spesifisitas atau Tabel 2 x 2 (Thrusfield, 2007), diketahui bahwa kemungkinan cacing dari golongan trematoda mempunyai kecenderungan mengaburkan tingginya prevalensi sistiserkosis yang diperoleh.hal ini terlihat dari hasil sensitifitas dan spesifisitas uji serologi (uji diagnostik ELISA) bila dipasangkan dengan hasil pemeriksaan feses. Secara lengkap hasil pendekatan dari masing-masing Tabel 2 x 2 tersebut, dapat dilihat pada Tabel 5.2, Tabel 5.3, dan Tabel 5.4. Dengan berasumsi bahwa antigen yang digunakan pada uji ELISA juga mendeteksi adanya antibodi cacing lainnya, maka hasil penelitian ini menunjukkan adanya reaksi silang (cross reaction) antara Cysticercus T. saginata dan cacing trematoda.

37 20 Tabel 5.2 Sensitifitas dan Sfesifisitas Uji ELISA dengan Infeksi Trematoda Hasil Uji ELISA Positif Trematoda Negatif Trematoda Total Positif Negatif Total Sensitifitas: 80/(80+0) = 80/80 = 1 (100%) Sfesifisitas: 9/(1+9) = 9/10 = 0,9 (90%) Tabel 5.3 Sensitifitas dan Sfesifisitas Uji ELISA dengan Infeksi Nematoda Hasil Uji ELISA Positif Nematoda Negatif Nematoda Total Positif Negatif Total Sensitifitas: 15/(15+0) = 15/15 = 1 (100%) Sfesifisitas: 9/(66+9) = 9/75 = 0,12 (12%)

38 21 Tabel 5.4 Sensitifitas dan Sfesifisitas Uji ELISA dengan Infeksi Campuran Trematoda dan Nematoda Hasil Uji Positif Trematoda Negatif Trematoda Total ELISA dan Nematoda dan Nematoda Positif Negatif Total Sensitifitas: 14/(14+0) = 14/14 = 1 (100%) Sfesifisitas: 9/(67+9) = 9/76 = 0,11 (11%)

39 BAB VI PEMBAHASAN Dari hasil evaluasi uji ELISA dengan crude antigen isolat lokal menggunakan serum lapangan di Bali, diketahui bahwa seroprevalensi sistiserkosis T. saginata pada sapi bali di Bali sebesar 87,7%. Secara rinci kejadiannya dapat dilihat pada Tabel 5.1. Pada Tabel 5.1. tersebut dapat diketahui bahwa 237 (87,7%) serum postif terdeteksi antibodi Cysticercus T. saginata dan 33 (12,3%) negatif. Tingginya angka prevalensi ini bisa dikaitkan dengan tinggi kejadian taeniasis pada penduduk di Bali. Menurut Wandra et al. (2007) dari hasil penelitian kejadian taeniasis pada masyarakat di empat kabupaten di Bali, yaitu Gianyar, Badung, Denpasar dan Karangasem, pada kurun waktu , diketahui di antara 540 orang yang diperiksa, prevalensi taeniasis akibat T. saginata berkisar antara 1,1% (di Badung dan di Karangasem) sampai 27,5% (di Gianyar). Prevalensi kejadian ini dilaporkan meningkat secara drastis di Gianyar, menjadi 25,6% (pada 2002) dan 23,8% (pada 2005), dibandingkan dengan penelitian sebelumnya 2,1 % (pada tahun1977) dan 1,3% (pada tahun 1999) (Simanjuntaket al, 1997; Sutisnaetal,2000; Wandra et al., 2007). Tingginya kejadian ini diduga karena meningkatnya jumlah keluarga yang mengkonsumsi daging mentah berupa lawar sapi (Wandra et al., 2006; 2007). Wandra et al (2013) kembali melaporkan hasil penelitiannya yang dilakukan pada , di sembilan kabupaten (Gianyar, Badung, Denpasar, Bangli, Tabanan,, Klungkung, Buleleng dan Karangasem). Dari hasil penelitian tersebut diketahui bahwa 123 (8,24%) dari 1492 orang yang diperiksa terinfeksi cacing T. saginata. Pemeriksaan dilakukan dengan metode kuesioner, pemeriksaan feses (Kato-Katz), serologi (ELISA) dan analisis mitochondria DNA.Infeksi taeniasis T. saginata tersebut ditemukan di empat kabupaten yaitu Gianyar (107 kasus), Badung (1 kasus), Denpasar (14 kasus) dan Karangasem (1 kasus). Pada 22

40 23 penelitian yang kami lakukan, prevalensi kejadian sistiserkosis T. saginata pada sapi bali di Gianyar, Badung, dan Karangasem berturut-turut adalah 100%; 90% dan 83,3%. Prevalensi sistiserkosis T. saginata pada sapi bali ini sangat tinggi bila dibandingkan dengan laporan kejadian yang sama di negara-negara lain. Garedaghi et al. (2011) yang melakukan penelitian di Rumah Potong Hewan Meshkinshahr, Iran pada September 2010 Agustus 2011, melaporkan dari 500 ekor sapi yang diperiksa secara acak dengan pemeriksaan kesehatan daging menemukan 15 (3%) terinfeksi Cysticercus T. saginata. Kandil et al. (2012) yang melakukan penelitian dengan mengamati sapi-sapi yang dipotong di Rumah Potong Hewan El-Basateen, Kairo secara serologi dan pemeriksaan kesehatan daging, melaporkan bahwa prevalensi sistiserkosis T. saginata berturut-turut adalah 29,3% dan 4%. Kumar dan Tadesse (2011) melaporkan prevalensi Bovine cysticercosis (sistiserkosis T. saginata) di wilayah Ethiopia bervariasi, dengan kisaran 2,2% sampai 26,25%. Angka ini dinilai masih rendah dari perkiraan, karena metode yang digunakan hanya mengandalkan hasil pemeriksaan kesehatan daging.di samping itu, perkiraan tadi juga diperkuat dari kebiasaan penduduk Ethopia yang sangat gemar mengkonsumsi daging sapi mentah, rendahnya tingkat penggunaan jamban, rendahnya sanitasi lingkungan, dan terbatasnya ketersediaan taenicides (Kumar dan Tadesse, 2011). Sementara itu, menurut Taeresa et al. (2011) yang melakukan penelitian cross sectional mulai Oktober 2010 hingga Maret 2011 di Kota Jimma Ethiophia, melaporkan bahwa dari 520 karkas yang diamati dengan cara pemeriksaan kesehatan daging, menemukan 19 (3,65%) terinfeksi sistiserkus. Pada penelitian yang kami lakukan, dari 270 sapi bali yang serumnya diuji ELISA, 90 (33,3%) diantaranya dilakukan pemeriksaan feses. Hasil pemeriksaan menunjukkan infeksi trematoda yang cukup tinggi. Sebanyak 80 (88,9%) terinfeksi trematoda dan 14 (15,5%) terinfeksi campuran trematoda dan nematoda. Dengan berasumsi bahwa antigen untuk uji ELISA yang dipakai juga

41 24 menimbulkan antibodi terhadap infeksi cacing lain, maka hasil penelitian ini menunjukkan adanya reaksi silang (cross reaction) antara Cysticercus T. saginata dan cacing trematoda. Menurut Dharmawan (2009) uji serologi untuk deteksi sistiserkosis memiliki kendala dalam hal terjadinya reaksi silang dengan parasit lain, seperti dengan kista hydatida, Multiceps multiceps, Taenia spp. dan Schistosoma spp. El-Moghazy dan Abdel-Rahman (2012), menyatakan bahwa reaksi silang tidak hanya terjadi pada spesies dalam satu filum, seperti antara T. solium, Hymenolepis nana, dan Echinococcus granulosus; tetapi juga dapat diperluas pada infeksi cacing dari filum yang berbeda, seperti pada infeksi Fasciola gigantica, T. spiralis, dan E. granulosus (El-Moghazy dan Abdel- Rahman, 2012). Pada studi yang dilakukan dalam rangka pengembangan dan evaluasi uji serologi terhadap Cysticercus bovis, Kabede (2004) melaporkan uji ELISA untuk deteksi C. bovis pada sapi menunjukkan reaksi silang dengan cacing lain. Dinyatakan bahwa lewat pemeriksaan feses yang dilakukan dengan teknik apung dan sedimentasi, sapi yang diamati terinfeksi trematoda (Fasciola sp. dan Parmphistomum sp.).pendapat seperti ini sebelumnya telah dinyatakan Lightowlers (1990), yang melaporkan bahwa penggunaan antigen cestoda pada uji serologi untuk deteksi cacing pita pada ruminansia, memperlihatkan reaksi silang antara Taenia spp. dan Fasciola hepatica.ridwan (2008) yang juga melakukan evaluasi terhadap crude antigencysticercus bovis yang digunakan untuk mendiagnosis Cysticercosis bovis pada sapi, melaporkan antigen ini memberi reaksi silang, diantaranya dengan Fasciola gigantica. Dengan demikian, crude antigen yang digunakan dalam penelitian ini sudah bersifat antigenik, namun masih dikenali oleh parasit lain yang bukan menjadi sasaran. Dengan kata lain, protein yang digunakan sebagai antigen dalam uji ELISA ini masih perlu dimurnikan, sehingga spesifik dan hanya dikenal oleh Cysticercus T. saginata saja.berdasarkan pengalaman, penggunaan crude antigencysticercus T. saginata memiliki kelemahan, karena saat ekstraksi

42 25 kemungkinan protein pada daging juga terikut, hal ini dapat mengakibatkan terjadinya positif palsu.white (1997) menyatakan bahwa uji serologi dengan menggunakan antigen yang tidak terfraksi dapat menyebabkan terjadinya positif dan negatif palsu.beberapa peneliti yang membandingkan penggunaan ekstrak kista, cairan kista dan ekstrak cacing pita sebagai antigen uji ELISA, menyimpulkan bahwa antigen yang berasal dari cairan kista memberi hasil yang paling baik (Dharmawan, 2009).

43 BAB VII SIMPULAN DAN SARAN 1. Uji ELISA dengan crude antigen isolat lokal yang digunakan untuk mendeteksi antibodi Cysticercus T. saginata pada sapi bali, menunjukkan adanya reaksi silang (crossreaction) antara Cysticercus T. saginatadengan cacing trematoda. 2. Dengan menggunakan crude antigen isolat lokal tersebut, diketahui prevalensi Cysticercus T. saginata pada sapi bali di Baliadalah 87,7%. 3. Diperlukan upaya-upaya pemurnian crude antigenisolat lokal agar lebih sensitif dan spesifik, hanya mendeteksi Cysticercus T. saginata. 26