Pemastian Mutu Produk Steril di Industri Farmasi. Marlia Singgih Wibowo, PhD. School of Pharmacy Institut Teknologi Bandung

Transkripsi

1 Pemastian Mutu Produk Steril di Industri Farmasi Marlia Singgih Wibowo, PhD. School of Pharmacy Institut Teknologi Bandung

2 PENDAHULUAN USP General Chapters : berisi chapterchapter tentang berbagai metode analisis (Tests dan Assays) yang resmi (Official tests and assays) dan informasi penting yang berkaitan dengan metode-metode analisis terkait Produk obat atau bahan baku, eksipien yang termasuk dalam cakupan Farmakope harus memenuhi persyaratan dalam farmakope Chapter/ bab dengan nomor diatas 1000 merupakan informasi yang tidak memuat standard ataupun spesifikasi

3 Bahan/Produk Steril Bahan baku obat, Bulk, (non-complex Active Drug Substances, Biotechnology-derived Drug Substances, dietary supplement Ingredients) Produk Obat, Vaksin(non-complex active drug, biotechnology-derived drug products, Bloodblood products, Gene and Cell Therapy products, Dietary supplement products) Compounding Sterile Preparations Bahan eksipien obat Alat (devices), containers, Alat kesehatan (medical divices)

4 Jenis analisis yang utama untuk produk steril (USP 30 Chart 10 page 25) Endotoxin Limits : <85> Bacterial Endotoxins test Sterility Tests : <71> Sterility tests dan <1208> Sterility testing-validation of Isolator Systems Aseptic processing : <1116> Microbiological Evaluation of Clean Rooms and Other Controlled Environments, <1208>, <1211> Sterilization and Sterility Assurance of Compendial Articles

5 Filtration : <1211> Assembly : <1116>, <1207> Sterile product Packaging-Integrity Evaluation BFS : <1116> FFS : <1116> SFS : <1116> Others : <1072> Desinfectans and Antiseptics, <1112> Application of Water Activity Determination to Non-sterile Pharmaceutical Products, <1116>, <1117> Microbiological Best Laboratory Practices <1223> Validation of Alternative Microbiological Methods

6 Preparasi sediaan steril di RS atau health centre lain Mulai 1 Januari 2004 USP menetapkan bab <797>Pharmaceutical Compounding: Sterile Preparations Di published pertama kali pada USP 27 dan NF 22 tahun 2004 sampai saat ini Bab <797> berisi tentang prosedur, persyaratan dan penetapan standar2 yang dapat diterapkan pada seluruh aktivitas pembuatan produk steril

7 Penetapan tingkat risiko(risk-level Determination) pada pembuatan produk steril Low-risk Medium Risk High Risk

8 Pemastian Mutu produk steril Bahan baku, intermediate, produk akhir Production process : teknik aseptik, sterilisasi akhir Equipments Quality Control Environment : monitoring, validasi Personnel : skill, training Documentation : kelengkapan, arsip Sales : monitoring, evaluasi

9 QA Program Monitoring Evaluating Correcting Improving Maintaining

10 Fokus pembahasan Uji Sterilitas Uji Endotoksin

11 UJI STERILITAS

12 Pembuatan produk farmasi steril

13 Tujuan uji sterilitas: Untuk menetapkan apakah bahan farmakope yang harus steril memenuhi syarat berkenaan dengan uji sterilitas seperti yang tertera pada masing-masing monografi

14 Suatu produk dikatakan STERIL Bila memenuhi persyaratan dalam uji sterilitas Kemungkinan hasil positif dapat terjadi karena teknik yang salah atau kontaminasi lingkungan pada waktu pengujian.

15 Mikroba yang Digunakan: (1) Bacillus subtilis (ATCC No. 6633) (2) Candida albicans (ATCC No ) (3) Bacteroides vulgatus (ATCC No. 8482)

16 Ketentuan hasil: Jika terdapat kontaminasi mikroba dengan menggunakan prosedur farmakope, maka ditentukan bahwa bahan tersebut tidak memenuhi syarat. Jika terdapat kegagalan menunjukkan adanya kontaminasi mikroba dengan menggunakan prosedur dalam farmakope, maka ditentukan bahwa bahan tersebut memenuhi syarat.

17 Media yang digunakan : Media yang digunakan mempunyai sifat merangsang pertumbuhan bagi mikroba yaitu: Fluid Thioglycolate Medium (FTM) dan / atau Alternative Thioglycolate Medium (ATM) Soybean-Casein Digest Medium (SCDM) Cairan Pengencer dan pembilas : Cairan A Cairan D = Cairan A + 1mL polisorbat 80/L Cairan K

18 Cairan A 1 gram jaringan hewan yg telah diuraikan oleh enzim pepsin, dilarutkan dlm air smp 1 liter, saring atau sentrifuga, ph diatur 7,1 Jika akan digunakan untuk uji sediaan yang mengandung senyawa gol.penisilin/sefalosporin (beta laktam), maka media tsb harus ditambahkan enzim penisilinase utk proses inaktivasi

19 Cairan D Adalah 1 L Cairan A + 1 ml Tween 80 Digunakan bila sediaan mengandung lesitin, atau minyak Atau utk uji peralatan steril dengan menggunakan penyaring membran

20 Cairan K Cairan yang mengandung Jaringan hewan yg telah diuraikan oleh enzim lambung (peptic digest), beef extract, dan Tween 80 Semua cairan pembilas harus disterilkan dengan otoklaf

21 Penambahan penisilinase Untuk sediaan mengandung pengawet antimikroba golongan penisilin Tetapkan jumlah penisilinase yang diperlukan dengan menggunakan sediaan penisilinase yang sebelumnya telah diuji daya penginaktif penisilin atau sefalosporin atau tetapkan jumlah penisilinase yang diperlukan dengan menambahkannya ke dalam tabung FTM dan sejumlah antibiotik dalam spesimen uji 1. Inokulasi media dengan 1 ml pengenceran (1 : 1000) biakan 18 jam-24 jam Staphylococcus aureus (ATCC 29737) dalam FTM. 2. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 30 o 35 o

22 Uji Fertilitas Tujuan? Untuk memastikan bahwa media yang digunakan dapat menumbuhkan mikroba uji sampai waktu 7 hari Dilakukan sebelum uji sterilitas thp sampel

23 Uji Fertilitas Media Mikroba Uji Suhu ( o C) Inkubasi Kondisi Fluid Tioglikolat Medium Tioglikolat alternative (1) Bacillus subtilis (ATCC 6633) (2) Candida albicans (ATCC10321) (3) Bacteroides vulgatus (ATCC8482) (1) Bacteroides vulgatus (ATCC8482) Aerobik Anaerobik Soybean casein digest (1) Bacillus subtilis (ATCC 6633) (2) Candida albicans (ATCC No ) Aerobik

24 METODE UJI STERILITAS INOKULASI LANGSUNG KE DALAM MEDIA UJI TEKNIK PENYARINGAN MEMBRAN

25 Hal yang perlu dilakukan sebelum Prosedur Inokulasi langsung: Uji Aktivitas Bakteriostatik dan Fungistatik Jika pertumbuhan mikroba uji dalam campuran media bahan secara visual sebanding dengan pertumbuhan dalam tabung kontrol, gunakan jumlah bahan dan media seperti yang tertera pada Tabel jumlah untuk bahan cair dalam pemilihan spesimen uji dan masa inkubasi Penetapan perbandingan bahan dan media yang tidak merugikan pertumbuhan mikroba uji

26 Jumlah untuk bahan cair Volume minimum tiap media Isi wadah (ml) Volume minimum diambil dari wadah untuk tiap media Digunakan untuk inokulasi langsung ke volume yang diambil dari tiap wadah (ml) Digunakan untuk membrane atau setengah bagian membrane yang mewakili volume total dari jumlah wadah yang sesuai (ml) Jumlah wadah per media Kurang dari 10 1mL, atau seluruh isi jika kurang dari 1mL (40 jika volume tiap wadah tidak cukup untuk kedua media) 10 sampai kurang dari sampai kurang dari sampai kurang dari 100 dimaksudkan untuk pemberian intravena 5mL mL Seluruh isi sampai 500 Seluruh isi Di atas mL

27 Ketentuan Penambahan atau pengurangan dalam menentukan perbandingan bahan dan media Jika sejumlah tertentu bahan dalam 250mL media masih mempunyai daya bakteriostatik atau fungistatik, kurangi jumlah bahan hingga diperoleh jumlah maksimum yang tidak menghambat pertumbuhan uji dalam 250mL media. Untuk cairan dan suspensi yang jumlahnya kurang dari 1mL, perbesar jumlah media hingga cukup untuk mengencerkan dan mencegah hambatan pertumbuhan. Untuk bahan padat yang tidak segera larut atau dapat terdispersi, jika jumlahnya kurang dari 50mg, perbesar jumlah media hingga cukup untuk mengencerkan untuk mencegah hambatan pertumbuhan.

28 PROSEDUR UJI INOKULASI LANGSUNG KE DALAM MEDIA UJI Untuk: Cairan Salep dan minyak yang tidak larut dalam isopropil miristat Zat padat Kapas murni, perban, pembalut, benang bedah dan bahan sejenisnya Alat kesehatan steril Alat suntik kosong atau terisi steril

29 Prinsip pengujian: Bahan uji Bahan uji + media Inkubasi minimal 14 hari dengan pengamatan pada hari ke 3,4,atau 5, hari ke 7 atau 8, dan pada hari terakhir pengujian. Catatan: Perlakuan awal berbeda untuk masing-masing produk farmasi dan kesehatan. Bahan uji merupakan larutan yang pada produk farmasi dan kesehatan kecuali yang berbentuk cairan digunakan untuk membilas atau mendispersi produk tersebut.

30 Perlakuan awal untuk berbagai sediaan Cairan 1. Pindahkan cairan dari wadah uji menggunakan pipet atau jarum suntik steril. 2. Secara aseptik inokulasikan sejumlah tertentu bahan dari tiap wadah uji ke dalam tabung media. 3. Campur cairan dengan media tanpa aerasi berlebihan. Salep dan minyak yang tidak larut dalam isopropil miristat Pilih 20 wadah yang mewakili, dibagi atas 2 kelompok terdiri dari 10 wadah, dan diperlakukan tiap kelompok sebagai berikut: 1. Secara aseptik pindahkan 100mg dari tiap wadah dari 10 wadah ke dalam labu berisi 100mL pembawa air steril yang dapat mendispersi homogen bahan uji dalam seluruh campuran cairan. 2. Campur 10mL alikot dari campuran cairan yang diperoleh dengan 80mL tiap media.

31 Zat padat Ambil sejumlah tertentu produk dalam bentuk padat kering (atau yang sudah dibuat larutan atau suspensi dalam cairan pengencer steril) tidak kurang dari 300mg tiap wadah atau seluruh isi wadah jika tiap isi kurang dari 300mg. Inokulasikan ke dalam masing-masing tidak kurang dari 40mL FTM dan SCDM. Kapas murni, perban, pembalut, benang bedah dan bahan sejenisnya Dari setiap kemasan, ambil secara aseptik 2 bagian atau lebih masing-masing 100 sampai 500mg dari bagian paling dalam. Secara aseptik pindahkan bagian bahan uji ini ke dalam sejumlah tertentu wadah media yang sesuai dan inkubasi. Alat kesehatan steril Untuk alat yang bentuk dan ukurannya memungkinkan dicelupkan keseluruhan ke dalam tidak lebih dari 1000mL media, uji alat utuh menggunakan media yang sesuai.

32 Untuk alat yang mempunyai pipa/saluran berlubang 1. seperti alat transfusi atau infus atau yang ukurannya menyebabkan pencelupan tidak dapat dilakukan dan hanya saluran cairannya yang harus steril, Bilas lumen masing-masing dengan sejumlah FTM dan SCDM hingga diperoleh kembali tidak kurang dari 15mL setiap media. 2. Inkubasi dengan tidak kurang dari 100mL masing-masing media.

33 Prosedur untuk: Alat suntik kosong atau terisi steril Uji dilakukan sama seperti uji untuk produk steril dalam ampul atau vial. Cara inokulasi langsung dapat dilakukan jika penetapan bakteriostatik dan fungistatik telah menunjukkan aktivitas yang tidak merugikan dalam kondisi pengujian.

34 UJI STERILITAS DENGAN TEKNIK PENYARINGAN MEMBRAN

35 Kegunaan uji sterilitas dengan teknik penyaringan membran Berguna untuk cairan dan serbuk yang dapat larut yang bersifat bakteriostatik atau fungistatik, untuk memisahkan mikroba kontaminan dari penghambat pertumbuhan. Berguna untuk bahan seperti minyak, salep atau krem yang dapat melarut ke dalam larutan pengencer bukan bakteriostatik atau bukan fungistatik. Berguna untuk uji sterilitas permukaan atau lumen kritis alat-alat kesehatan.

36 Prosedur awal: Buat perbandingan yang sama menggunakan sejumlah tertentu bahan uji dan cairan pengencer dan pembilas yang sesuai. Bilas membran 3 kali, tiap kali dengan 100mL cairan pengencer dan pembilas. Pertumbuhan mikroba uji dari membran yang digunakan untuk menyaring bahan diikuti cairan pengencer dan pembilas yang telah diinokulasi secara visual sebanding dengan pertumbuhan dari membran yang hanya digunakan untuk menyaring cairan pengencer dan pembilas yang telah diinokulasi.

37 UJI MENGGUNAKAN PENYARINGAN MEMBRAN Untuk: Cairan yang dapat bercampur dengan pembawa air Cairan yang tidak bercampur dengan pembawa air (kurang dari 100mL per wadah) Zat padat yang dapat disaring Salep dan minyak yang larut dalam Isopropil Miristat Zat padat yang tak dapat disaring Alat kesehatan Peralatan: porositas 0,45µm, diameter ±47mm, kecepatan penyaringan 55mL-75mL/mnt pada tekanan 70cmHg.

38 Penafsiran Hasil Uji Sterilitas Tahap I Amati adanya pertumbuhan mikroba seperti kekeruhan dan / atau pertumbuhan pada permukaan pada isi semua wadah dalam interval waktu tertentu dan pada akhir periode inkubasi. Jika tidak terjadi pertumbuhan, maka bahan uji memenuhi syarat. Tahap II Jumlah spesimen yang diuji minimal 2 kali jumlah tahap I. Jika tidak ditemukan pertumbuhan mikroba, bahan yang diuji memenuhi syarat. Jika ditemukan pertumbuhan mikroba, bahan yang diuji tidak memenuhi syarat.

39 UJI ENDOTOKSIN

40 Pendahuluan Produk farmasi parenteral Produk-produk farmasi parenteral harus steril karena pemberian langsung ke sistem sirkulasi pembuluh darah. Salah satu tahap : Sterilisasi Produk parenteral terkadang terkontaminasi oleh ENDOTOKSIN

41 Bagaimana produk parenteral dapat terkontaminasi endotoksin? Pada proses sterilisasi produk parenteral (menggunakan panas), bakteri gram negatif yang mungkin ada dalam produk, akan mati dan lisis terjadi, endotoksin akan terlepas dan tetap tinggal di dalam produk Sifatnya stabil terhadap panas (heat-stable)

42 Endotoksin dan Pirogen Endotoksin adalah toksin yang dihasilkan oleh bakteri gram negatif Pirogen adalah senyawa yang menyebabkan kenaikan suhu tubuh akibat penggunaan produk farmasi yang diberikan secara intravena Semua endotoksin bersifat pirogen, tetapi tidak semua senyawa pirogen itu merupakan endotoksin Endotoksin bakteri terdiri dari Lipopolisakarida (LPS), umumnya terikat pada protein dan fosfolipid. LPS ini menyusun membran luar bakteri gram negatif.

43 Struktur LPS Contoh : LPS dari Salmonella terdiri dari bagian Lipid A yang hidrofob yang terikat pada suatu daerah inti yang mengandung molekul KDO (2-keto-3-deoksioktonat)

44 Struktur LPS Salmonella Mannose-Abequose Rantai samping Rhamnose Galactose n Glucose-N-acetylglucosamine Galactose Glucose-Galactose Inti polisakarida Heptulose Heptulose-P-P-Ethanolamine KDO KDO-KDO-P-Ethanolamine P-GlcN-GlcN-P Lipid A

45 Efek endotoksin bagi tubuh demam aktivasi sistem sitokin rusaknya sel-sel endotelial permeabilitas pembuluh darah berubah sehingga menyebabkan turunnya tekanan darah dll.

46 Perkembangan regulasi tentang uji pirogen Bacterial endotoxin test (BET) merupakan salah satu uji yang penting terhadap produk parenteral dan alat kesehatan 1912 : uji pirogen dilakukan dengan metode kelinci (Rabbit test) Digunakan dalam USP XII pada tahun 1942 sampai 40 tahun kemudian 1980 : metode baru diterapkan yaitu Limulus amoebocyte lysate (LAL) test

47 LAL-test The Limulus Amebocyte Lysate (LAL) test adalah uji in vitro untuk deteksi dan analisis kuantitatif endotoksin bakteri. LAL diperoleh dari ekstrak cair amebosit Horseshoes crab (Limulus polyphemus atau Tachypleus tridentatus) Metode analisis LAL yang dilakukan mencakup teknik gel-clot dan turbidimetri kinetik dan kromogenik (kolorimetri)

48 Mengapa LAL test? Limulus amebocyte lysate (LAL) test adalah metode alternatif terhadap rabbit pyrogen test yang difokuskan pada deteksi senyawa pirogen dalam produk, untuk menghindari penggunaan hewan/binatang dalam percobaan Metode lebih akurat

49 Limulus amebocyte lysate Lisat diperoleh dari amubosit kepiting landam kuda (Limulus polyphemus atau Tachypleus tridentatus Penggunaan LAL untuk deteksi endotoksin berawal dari pengamatan Bang (1956) bahwa infeksi bakteri gram negatif pada Limulus polyphemus menyebabkan koagulasi intravaskular yang parah. Th 1964, Levin and Bang kemudian menunjukkan bahwa penggumpalan itu merupakan hasil reaksi antara endotoksin dan protein yang dapat menggumpal dalam amubosit.

50 Solum (1970, 1973) dan Young (1972), melakukan pemurnian dan karaterisasi protein yang dapat bergumpal dari reaksi LAL dan menunjukkan bahwa reaksi dengan endotoksin merupakan reaksi enzimatik.

51 Reaksi pembentukan gel (clot) spontan antara endotoksin (LPS) bakteri dan protein dalam amebosit.

52 Limulus polyphemus (horseshoe crab)

53 Horseshoe crab African Wolf Spider

54 Pembentukan gel padat pada titik akhir reaksi sebagai hasil reaksi antara LAL dan endotoksin. Reagen LAL + larutan uji dalam tabung reaksi dengan volume yang sama. Inkubasi 37 C±2 C selama 60 menit±1 menit. Reaksi (+) : gel stabil dan melekat pada dasar tabung bila dibalikkan 180º. Reaksi (-) : gel kental, terlepas dari dasar tabung bila dibalikkan 180º.

55 Alat Tabung reaksi, pipet ukur, pengocok vorteks, oven, inkubator. Alat-alat gelas dibuat bebas pirogen : oven 200ºC selama 4 jam.

56 REAGEN LAL ekstrak amebosit dalam kepiting landam kuda, Limulus polyphemus (Atlantic horseshoe crab)

57 REAGEN TAL Tachypleus Amebocyte Lysate (TAL): ekstraksi Amebocyte Tachypleus tridentatus (Japanese horseshoe crab atau Chinese horseshoe crab)

58 Bahan : Reagen TAL 0,125 EU/ml, Control Standar Endotoksin (CSE) 10 EU/ml, Reagent Water (RW), Sampel : Aqua pro injeksi.

59 Tahapan Sebelum Uji LAL terhadap sampel Uji konfirmasi kepekaan lisat Optimasi kondisi percobaan Verifikasi atau Validasi metode (*sesuai keperluan di Laboratorium uji) Uji terhadap sampel

60 Untuk mengecek kepekaan/sensitivitas reagen TAL, apakah sesuai dengan yang tercantum pada label. Dibuat 4 seri pengenceran (2λ; λ; 0,5λ dan 0,25λ) dari CSE dalam 4 replikasi dan kontrol negatif (RW) Persyaratan : Kadar rata-rata geometrik titik akhir harus 0,5λ dan 2,0λ.

61 Penyiapan Larutan CSE Penyiapan Kontrol Negatif (LRW) Penyiapan Kontrol Positif (CSE) Penyiapan Sampel 1. Sampel 2. Sampel Tercemar Penyiapan Kontrol Sediaan Positif (Sampel + CSE) Penambahan Reagen LAL Inkubasi 37ºC±1ºC, 60 menit±2 menit

62 1,0 ml RW 0,2ml 0,2ml 0,1ml 0,1ml 1,0ml 0,5ml 1,8 ml RW 1,0 ml RW 1,5 ml RW 1,4 ml RW 1,5 ml RW 3,1 ml RW 8 λ = 1 EU/ml 4 λ = 0,5EU/ml 2λ = 0,25 EU/ml λ = 0,125 EU/ml 0,5 λ = 0,0625 EU/ml 0,25 λ = 0,03125 EU/ml CSE 10 EU/ml (10/0,125 x λ = 80 λ)

63 Pengenceran Maksimum yang Absah (PMA=MVD) PMA = Batas kadar endotoksin Kepekaan (λ) 0,25 EU/ml 0,125 EU/ml = 2 Jadi, sampel ini hanya dapat diencerkan maksimal 1: 2

64 Optimasi kondisi dilakukan dengan melakukan variasikan suhu dan atau waktu inkubasi.

65 Parameter analisis yang harus dipertimbangkan dalam validasi metode Parameter Performa Analitik Kualitatif (ID) Perhitungan Kembali Kategori I Perhitungan Kembali Kategori III Kuantitatif Batas Tes Perhitunga n Kembali Kategori III Akurasi tidak ya ya * * Presisi Tidak ya ya tidak ya Spesifisitas ya ya ya ya * Batas Deteksi ya tidak tidak ya * BatasiKuantit asu Tidak tidak ya tidak * Linearitas tidak ya ya tidak * Rentang Tidak Ya ya tidak * Ketangguhan ya ya ya ya ya * mungkin dibutuhkan, bergantung pada sifat tes yang spesifik

66 Contoh

67 LAL Reagent Sensitivitas : 0,125 EU/ml Lot No. : Y4661L Exp. Date : Kemasan : 5,2 ml CSE Potency : 500 NG/Vial (2,5 ml) Lot No. : EM Exp. Date : Kemasan : 2,5 ml

68 Hasil Uji Konfirmasi Kepekaan (λ) Repli kasi K (-) RW CSE 2λ λ 0,5λ 0,25λ E (EU/ml) Log E ,0625-1, ,125-0, ,125-0, ,125-0,903 Jumlah -3, 913 Perhitungan Rata- Rata Geometrik kadar Titik Akhir GM = antilog Σe/f Σe = jumlah logaritma kadar titik akhir dari seri pengenceran yang digunakan f = jumlah replikasi GM = antilog -3,913/4 = 0,105 EU/ml Persyaratan : Kadar rata-rata geometrik titik akhir harus 0,5λ dan 2,0λ. ( 0,0625EU/ml dan 0,25EU/ml) Kesimpulan : Memenuhi syarat

69 Hasil Pengujian dengan LAL Re pli kas i K (-) RW Kontrol Positif Kontrol Pengujian 1 2λ λ 0,5λ 0,25 λ Sediaan Positif Sampel Neat 1:2 1:4 1:8 1: Pengujian Pengujian

70 Hasil Pengujian dengan TAL Rep li kasi K (-) RW Pengujian 1 Kontrol Positif Kontrol Sediaan Positif Sampel 2λ λ 0,5λ 0,25λ Neat 1:2 1:4 1: Pengujian Pengujian Pengujian

71 Pengujian dengan Toksinometer Alat Teknik Kinetik-Turbidimetri Endotoxin mengaktifkan enzim pada LAL menghasilkan gelatinasi coagulin dalam LAL, sehingga meningkatkan turbiditas sampel Perubahan transitans selama kurun waktu tertentu diukur (kinetik) utk mengukur waktu gelatinasi dari awal smp akhir reaksi. Gelation time (waktu gelatinasi) secara langsung berhubungan dengan jumlah endotoksin dalam sampel

72 Hasil Pengujian Pengenceran Run Time (Menit) Tg Mean Tg Kurva Baku ¼λ 48,2 47,4 ½λ 43,2 43,4 λ 35,0 35,0 2λ 29,0 29,2 47,80 43,30 35,00 29,10 Persamaan : Log (Tg) = -0,2400 Log (C) + 1,326 r = -0,9909 Persyaratan nilai r -0,980 (USP 30 : 112)

73 Hasil Pengujian Pen guji an 1 26,0 25,8 2 25,0 25,0 Sampel uji diicemari dengan endotoksin : - Sampel neat = 0,4761 EU/ml - Sampel 1 : 2 = ½ x 0,4761 EU/ml = 0,2381 T [ ] Ratarata T 0,4258 0,4382 0,3931 0,3931 Sampel Neat 1:2 Ratarata [ ] % recov ery 25,9 0, ,73 30,6 31,8 25,0 0, ,57 28,4 29,6 T [ ] Ratarata T 0,2154 0,1848 0,2560 0,2227 Ratarata [ ] % recove ry 31,2 0, ,04 29,0 0, ,50 Persyaratan % recovery metode turbidimetri adalah 50% - 200% (USP 30 : 113)

74 Terima kasih