IDENTIFIKASI DAN UJI STABILITAS ZAT WARNA KUNING DARI EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN SALAM (Syzygium polyanthum) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

Transkripsi

1 ISSN Azhar et al.; Identifikasi Pharmacoscript, Volume 1, No. 2, Februari 2019, IDENTIFIKASI DAN UJI STABILITAS ZAT WARNA KUNING DARI EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN SALAM (Syzygium polyanthum) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS Hasna Yerina Azhar, Diana Sri Zustika, Hendy Suhendy Prodi S1 Farmasi, STIKes Bakti Tunas Husada, Tasikmalaya hyerinaazhar@gmail.com ABSTRAK Daun salam (syzygium polyanthum) mengandung warna kuning sebagai pewarna alami. Penelitian ini dilakukan untuk identifikasi zat warna kuning dan mengetahui stabilitas zat warna kuning terhadap ph dan suhu pada daun salam. Metode ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi bertingkat menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat, methanol. Uji senyawa zat warna kuning dilakukan dengan Kromatografi Lapis Tipis secara kualitatif, fraksinasi dilakukan dengan metode Kromatografi Cair Vakum, pemurnian fraksi dilakukan dengan metode KLT Preparatif, dan uji kemurnian dengan metode KLT 2 Dimensi, identifikasi dan uji stabilitas dilakukan dengan spektrofotometri Uv-Vis. Hasil ekstraksi daun salam dari pelarut n-heksana diperoleh rendemen sebesar 1,326%, pelarut etil asetat 3,5946%, dan pelarut methanol 3,0871%. Hasil identifikasi zat warna kuning terdapat pada ekstraks etil asetat. Isolate diduga mengandung zat warna karotenoid pada panjang gelombang nm. Isolate stabil pada ph 8 dan 9 dan stabil pada suhu 40 0 C. Kata kunci : Daun salam(syzygium polyanthum), isolasi, uji stabilitas, zat warna. ABSTRACT Bay leaves (syzygium polyanthum) contain yellow as a natural dye. This research was conducted to identify the yellow substance and to know the stability of the yellow substance to the ph and temperature of the bay leaf. The extraction method was carried out using multilevel maceration method using n-hexane, ethyl acetate, methanol. Yellow color compound test was carried out qualitatively by Thin Layer Chromatography, fractionation was carried out by Vacuum Liquid Chromatography method, fraction purification was carried out using Preparative TLC method, and purity test using 2 Dimension TLC method, identification and stability test were carried out by Uv-Vis spectrophotometry. The extraction of bay leaves from n-hexane was obtained by yield of 1.326%, ethyl acetate solvent %, and methanol solvent %. The results of identification of a yellow substance are found in the extraction of ethyl acetate. Isolates are thought to contain carotenoid dyestuffs at a wavelength of nm. Isolate is stable at ph 8 and 9 and is stable at 40 0 C. Key word : bay leaf (Syzygium polyanthum), isolation, stability test, dyestuff.

2 PENDAHULUAN Dalam kehidupan manusia tumbuhan merupakan hal yang penting karena dapat dimanfaatkan untuk berbagai kebutuhan seperti sebagai bahan pangan, papan, obat-obatan, ataupun zat warna. Pewarna pada suatu produk ditambahkan untuk menambah daya tarik konsumen terhadap produk tersebut, akan tetapi banyak oknum-oknum yang tidak bertanggung jawab menambahkan pewarna berbahaya pada produk tersebut, seperti Rhodamin B. Sebagaimana penelitian yang telah dilakukan oleh Giovani (2017) ditemukan penggunaan Rhodamin B dalam jajanan pasar. Berdasarkan hal tersebut maka perlu dicari alternatif pewarna alami yang tidak berbahaya. Untuk beberapa tanaman yang sudah di teliti sebagai pewarna alami diantaranya ekstraks kembang sepatu (Siregar, 2011), ekstraksi dan uji stabilitas zat warna daun jambu biji (Pardede, 2014), pemanfaatan kulit buah naga sebagai pewarna alami makanan pengganti pewarna sintetis (Handayani, 2012). Salah satu jenis tanaman obat yang potensial adalah salam yang kerap hadir di dapur sebagai penambah aroma sedap pada masakan. Daun salam mengandung saponin, triterpenoid, flavonoid, polifenol, alkaloid, tanin dan minyak atsiri yang terdiri dari sesquiterpen, lakton dan fenol. Selain itu, daun salam juga mengandung selenium, vitamin A, vitamin C, dan vitamin E yang berfungsi sebagai antioksidan.(kuswara, 2015). Berdasarkan latar belakang diatas, pada daun salam mengandung flavonoid, salah satu fungsi flavonoid yaitu sebagai pigmen warna. Maka dari itu peneliti tertarik untuk melakukan identifikasi dan pengujian stabilitas warna alami dari daun salam. METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Alat Alat yang digunakan untuk penelitian ini adalah maserator, alat gelas, rotary evaporator, blender, timbangaan analitik (metter toledo), penangas air, pipet tetes, oven, tabung reaksi, stopwach, mikro pipet, spatula, motir, stamper, cawan uap, penjepit kayu, chamber, plat silika gel GF 254, kuvet, spektrofotometer UV-Vis (Genesys 10), alat KCV, tanur, krus, objek glass, mikroskop, botol timbang, desikator, tabung reaksi, Mister Bellen, rak tabung reaksi, kertas saring, vial, kertas saring Whattman, alat sentrifugasi (sentrifugator H-C-12), tabung sentrifugasi, vortex. Bahan Bahan yang digunakan untuk penelitian ini adalah n- Heksana, etil asetat, metanol, etanol 96%, toluene, aquadest, silika gel G60, asam asetat, amonia, kloroform, asam klorida 2N, pereaksi Mayer, pereaksi Dragedorff, pereaksi Libermann burchard, serbuk Magnesium, amil alkohol, pereaks besi III klorida (FeCl3), gelatin 1%, vanilin 10%, asam sulfat pekat, eter, KOH 5%, NaoH 2M, asam fosfat, natrium fosfat, asam hidroklorida, natrium hidroksida. Sampel Penelitian Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah daun salam (Syzygium polyanthum) yang diperoleh dari Desa Gunung asih 2, Kecamatan Cikoneng, Kabupaten Ciamis, Jawa Barat. Prosedur Penelitian Determinasi Tanaman Determinasi dilakukan di laboratorium Biologi FMIPA UNPAD Bandung, Jawa Barat. Determinasi ini dilakukan untuk memastikan identitas tanaman salam yang digunakan untuk penelitian. 22

3 Pengolahan Sampel Pengolahan sampel terdiri dari sortasi basah pencucian, perajangan, dan pengeringan dengan oven 50 0 C. serta dilakukan penggilingan sampai menjadi serbuk. Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Karakterisasi Simplisia terdiri dari pemeriksaan makroskopik dan mikroskopik simplisia, skrining fitokimia, penetapan kadar air, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu tidak larut asam, penetapan kadar abu larut air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut etanol, dan susut pengeringan. Skrining Fitokimia Skrining fitokimia dilakukan terhadap simplisia, dan ekstrak daun salam (Syzygium polyanthum). Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder pada sampel yang meliputi uji alkaloid, flavonoid, tannin dan polipenol, saponi, steroid dan triterpenoid, serta mono dan seskuiterpenoid. Ekstraksi dan Pemekatan Serbuk simplisia daun salam sebanyak 500 gram diekstraksi dengan metode maserasi bertingkat dengan pelarut n-heksana, etil asetat, dan metanol. Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam maserator. Kemudian ditambahkan dengan pelarut n-heksana sampai simplisia terendam, dan diaduk rata kemudian maserator ditutup selama 3x24 jam. Setiap 24 jam sekali dilakukan penggantian pelarut sambil diaduk sesekali. Dilanjutkan dengan penggantian pelarut etil asetat dan methanol dengan pengerjaan yang sama. Ekstrak cair yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental (Rahman, et al., 2017). Pemantauan Ekstrak dengan KLT Pemantauan ekstrak dilakukan dengan menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT). Ekstrak cair yang sudah dipekatkan kemudian diperiksa dengan menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan fase diam silika gel GF 254. Dan fase gerak n-heksan-etil asetat (8:2). Eluen dijenuhkan dalam chumber. Setelah lempeng KLT diaktifasi dan eluen sudah jenuh, ekstrak ditotolkan pada plat KLT yang sudah diberi tanda. Plat kemudian dielusi, dikeringkan dan diamati dibawah sinar tampak, disemprot dengan penampak bercak H 2 SO 4, diamati dibawah sinar UV 254 dan 366 nm. dihitung nilai Rf nya. Fraksinasi dengan KCV Fraksinasi dilakukan dengan metode kromatografi cair vakum dengan pelarut sistem gradien. Pemantauan Fraksi dengan KLT Pemantauan fraksi dilakukan dengan menggunakan kromatrografi lapis tipis (KLT). Fraksi kental kemudian diperiksa dengan menggunakan KLT dengan fase diam plat silika G F254 dan fase gerakn-heksan etil asetat (8:2). Pemurnian Fraksi dengan KLT Preparatif Fraksi yang diperolah dari hasil fraksinasi dilakukan pemurnian mengggunakan kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP). Fase diam yang digunakan adalah silika gel GF 254 berukuran 20 cm x 20 cm dan fase gerak yang digunakan adalah n-heksan-etil asetat (8:2). Fraksi ditotolkan memanjang membentuk pita. Pada lempeng plat kaca silika gel GF 254 yang telah diaktifasi terlebih dahulu dan dielusi dengan eluen yang sudah dijenuhkan dalam chumber. 23

4 Uji Pemurnian dengan KLT 2 Dimensi Uji kemurnian dilakukan dengan cara menotolkan noda pada plat KLT, kemudian dilakukan elusi dengan eluen pertama yaitu n- Heksana : etil asetat (8:2). Kemudian plat diputar 90 0 dan dilakukan elusi dengan eluen kedua yaitu n-heksana : etil asetat (7:3). Identifikasi dengan Spektrofotometri Uv- Vis Isolat diidetifikasi dengan menggunakan spektrofotometri UV Vis pada rentang nm. Untuk mengetahui panjang gelombang maksimum spektrum dan panjang gelombang yang diperoleh kemudian diamati dan disesuaikan dengan literatur. Uji Stabilitas Zat Warna Isolat Uji stabilitas terhadap ph Sebelum dilakukan uji stabilitas zat warna, terlebih dahulu dilakukan penentuan panjang gelombang. Pengujian stabilitas zat warna berujuan untuk mengetahui kestabilan apabila akan diaplikasikan sebagai pewarna. Pengujian kestabilan ini dilakukan terhadap ph dibagi kedalam 6 buah tabung reaksi masing-masing 10 ml dan di buat dengan tingkat keasaman yang berbeda, yaitu pada ph 4, 5, 6, 7, 8, 9 dan 10. Dilakukan pengukuran absorbansi menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada rentang panjang gelombang nm. Uji stabilitas terhadap suhu Pada pengujian stabilitas zat warna terhadap suhu tujuannya untuk mengetahui ketahanan zat terhadap pemanasan. Pengujian ini dilakukan dengan variasi suhu yang berbeda yaitu pada suhu 40 0, 50 0, 60 0, 70 0, 80 0, 90 0, Kemudian diukur serapan absorbasi pada panjang gelombang maksimun menggunakan metoda spektrofotometri UV-Vis. HASIL DAN PEMBAHASAN Karakterisasi Simplisia Daun Salam a Gambar 1. Makroskopik daun salam a. Simplisia segar daun salam, b. serbuk simplisia daun salam. Pemeriksaan makroskopis meliputi; bentuk, bau, rasa dan warna. Daun segar dan serbuk simplisia daun salam memiliki warna hijau, tidak berbau dan tidak berrasa. a b c Gambar 2. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik. (a).epidermis bawah dengan stomata tipe parasitik, (b) berkas pembuluh, (c) serabut sklerenkim. Pemeriksaan mikroskopis dilakukan dengan melihat fragmen khas pada daun salam (Syzygium polyanthum). Tabel 1. Hasil Pengujian Parameter Mutu Simplisia Daun Salam (Syzygium polyanthum). Parameter Hasil (%) Kadar air 5,3 Kadar sari larut air 17,05 Kadar sari larut etanol 28,35 Kadar abu total 33,29 Kadar abu tidak larut 0,65 asam Kadar abu larut air 1,80 Susut pengeringan 7,25 b 24

5 Skrining Fitokimia Hasil skrining fitokimia terhadap simplisia dan ekstrak etil asetat daun salam mengandung metabolit sekunder seperti yang tertera pada table 2. Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Golongan Senyawa Hasil Simplisia Ekstrak Alkaloid (-) (-) Flavonoid (+) (+) Tanin dan Polifenol (+) (+) Saponin (-) (-) Monoterpenoid dan (+) (+) Seskuiterpenoid Steroid dan Triterfenoid (+) (+) Keterangan (+) = Teridentifikasi (-) = Tidak teridentifikasi Ekstraksi Ekstraksi dilakukan terhadap simplisia daun salam dengan metode maserasi bertingkat untuk mencegah terjadinya kerusakan senyawa zat warna akibat adanya pemanasan. Ekstraksi dilakukan dengan pelarut n-heksana, etil asetat, methanol dengan masing masing diperoleh rendemen sebesar 1,326%, 3,5946%, 3,0871%. Pemantauan Ekstrak dengan KLT Pemantauan ekstrak dengan KLT bertujuan untuk mengetahui pola kromatogram dan untuk mengetahui bercak senyawa yang berwarna kuning yang terdapat didalam ekstrak daun salam. (a) (b) (c) (d) (a) (b) (c) (d) (a) (b) (c) (d) A B C Gambar 3. Kromatogram Lapis Tipis ekstrak (a) n-heksana, (b) etil asetat, (c) metanol. Hasil uji kualitatif pada ekstrak n- Heksana, etil asetat, dan methanol terdapat bercak berwarna kuning pada ekstrak etil asetat. Fraksinasi dengan KCV Gambar 4. Hasil fraksinasi Etil Asetat dengan KCV F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 Dari hasil Fraksinasi KCV diperoleh 11 fraksi. Fraksi yang berwarna kuning terdapat pada fraksi 6,7,8,9 dan

6 Pemantauan Fraksi dengan KLT F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 A F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 B Gambar 6. Kromatogram Lapis Tipis Preparatif subfraksi 6,7,8, dan 9. dilihat pada sinar tampak. Fase diam : plat kaca silica GF 254, fase gerak : n- heksan : etil asetat (8:2). Senyawa target = Uji Pemurnian dengan KLT 2 Dimensi Pemurnian dilakukan dengan KLT 2 dimensi, dimana hasil pengembangan pertama di dapat Rf 0,16. hasil pengembangan kedua Rf 0,23. isolat dikatakan murni apabila KLT 2 dimensi menunjukan 1 pola. F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 C Gambar 5. Kromatogram hasil KLT Fraksinasi (a) dilihat pada sinar tampak, (b) dilihat dibawah sinar UV ᵪ 254nm, (c) dilihat dibawah sinar UVᵪ 366 nm. = Senyawa target (a) (b) Gambar 7. Kromatogram Dua Dimensi isolate. (a) pengembangan ke 1, (b) pengembangan ke2. Identifikasi dengan Spektrofotometri Uv- Vis Pemurnian Fraksi dengan KLT Preparatif Hasil elusi pada subfraksi membentuk 7 pita dengan warna dominan kuning. Pada pita dari subfraksi dengan warna dominan kuning selanjutnya dikerok sehingga dihasilkan isolate. (a) 26

7 Dilihat dari kurva diatas dapat diketahui bahwa isolate zat warna stabil pada ph 8 dan 9, sedangkan pada ph 4,5,6,7 dan 10 isolat zat warna tidak stabil yang dapat terlihat dengan adanya perubahan nilai absorbansi. Uji stabilitas terhadap suhu (b) Gambar 8. Hasil Identifikasi menggunakan Spektrofotometri UV-vis Rentang nm. (a) Hasil Spektrofotometri Uv-Vis, (b) Pembanding. Menurut Agustini (2017), bahwa spectrum spektrofotometri UV-Vis karotenoid memiliki puncak utama dengan dua puncak lebih rendah pada kedua sisinya. Hal serupa ditunjukan oleh hasil penelitian (Gambar 8). Isolat tersebut diduga mengandung zat warna karotenoid. Uji Stabilitas Zat Warna Isolat Uji stabilitas terhadap ph Gambar 10. Kurva hasil pengujian Stabilitas Zat Warna terdahap Perubahan Suhu. Berdasarkan hasil diatas menunjukan bahwa isolate zat warna stabil pada suhu 40 0 C dan terlihat penurunan nilai absorbansi pada suhu 50 0,60 0,70 0,80 0,90 0 dan C. KESIMPULAN Berdasarkan hasil Identifikasi zat warna pada isolat daun salam (Syzygium polyanthum) menggunakan spektrofotometri UV-Vis menunjukan bahwa isolat zat warna tersebut diduga mengandung senyawa karotenoid. Senyawa ini stabil terhadap ph 8 dan 9, dan stabil pada suhu 40 0 C. Gambar 9. Kurva hasil pengujian Stabilitas Zat Warna terdahap Perubahan ph. 27

8 DAFTAR PUSTAKA Agustini, Sri Kemampuan Pigmen Karoten dan Xantofil Mikroalga Porphyridium crunetum Sebagai Antioksidan Pada Domba. Informatika Pertanian, Vol 26 No.1, Hal Handayani, Prima, dan Asri R Pemanfaatan Kulit Buah Naga Sebagai Pewarna Alami Makanan Pengganti Pewarna Sintetis. Jurnal Bahan Alam Terbarukan. Vol 1 (2). ISSN Hal Kuswara, Riko Uji Toksisitas Akut Infusa Daun Salam (Syzygium Polyanthum (Wight) Walp.) Terhadap Gambaran Histopatologi Hepar Tikus Galur Wistar. [Skripsi]. Kalimantan Barat : Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura Pontianak Pardede, Lasria. Endang K, Anto B Ekstraksi Dan Uji Stabilitas Zat Warna Daun Jambu Biji. Jurnal Biologi. Vol 3 (3). Hal Siregar, Yusraini D, dan Nurlaela Ekstraksi Dan Uji Stabilitas Zat Warna Alami Dari Bunga Kembang Sepatu (Hibiscus Rosa-Sinensis L) Dan Bunga Rosela (Hibiscus Sabdariffa L). Jurnal valensi Vol 2 (3). ISSN Hal Rahman A, Irham T, Edyson. (2017). Perbedaan total flavonoid antara metode maserasi dengan okletasi pada ekstrak daun ramania (Bouea macrophylla griff). J. Kedokteran Gigi Dentino: 1(1): 22 28