VARIASI WAKTU PERENDAMAN DALAM SIMULATED BODY FLUID PADA KOMPOSI HIDROKSIAPATIT-GELATIN SEBAGAI KANDIDAT BONE GRAFT SKRIPSI RIZKA RAMADHANIA AINUNNISA PROGRAM STUDI S1 TEKNOBIOMEDIK DEPARTEMEN FISIKA FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS AIRLANGGA 2013
VARIASI WAKTU PERENDAMAN DALAM SIMULATED BODY FLUID PADA KOMPOSIT HIDROKSIAPATIT-GELATIN SEBAGAI KANDIDAT BONE GRAFT SKRIPSI Sebagai Salah Satu Syarat untuk Memperoleh Gelar Sarjana Teknik Bidang Teknobiomedik Pada Fakultas Sains Dan Teknologi Universitas Airlangga Oleh : RIZKA RAMADHANIA AINUNNISA NIM.080917047 Tanggal Lulus : 31 Juli 2013 Disetujui oleh : Pembimbing I Pembimbing II Dyah Hikmawati, S.Si., M.Si NIP. 19691128 199403 2 001 Drs. Siswanto, M.Si NIP. 19640305222 19893 1 003
LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI Judul : Variasi Waktu Perendaman Dalam Simulated Body Fluid Pada Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Sebagai Kandidat Bone Graft Penyusun : Rizka Ramadhania Ainunnisa NIM : 080917047 Pembimbing I : Dyah Hikmawati, S.Si., M.Si Pembimbing II : Drs. Siswanto, M.Si Tanggal Seminar : 31 Juli 2013 Disetujui Oleh : Pembimbing I Pembimbing II Dyah Hikmawati, S.Si., M.Si NIP. 19691128 199403 2 001 Drs. Siswanto, M.Si NIP. 19640305222 19893 1 003 Mengetahui, Ketua Departemen Fisika Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga Ketua Prodi S1 Teknobiomedik Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga Drs. Siswanto, M.Si NIP. 19640305222 19893 1 003 Dr. Retna Apsari, M.Si. NIP. 19680626 199303 2 003 6
PEDOMAN PENGGUNAAN SKRIPSI Skripsi ini tidak dipublikasikan, namun tersedia di perpustakaan dalam lingkungan Universitas Airlangga, diperkenankan untuk dipakai sebagai referensi kepustakaan, tetapi pengutipan harus seijin penyusun dan harus menyebutkan sumbernya sesuai dengan kebiasaan ilmiah. Dokumen skripsi ini merupakan hak milik Universitas Airlangga
Rizka Ramadhania Ainunnisa, 2013, Variasi Waktu Perendaman Dalam Simulated Body Fluid Pada Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Sebagai Kandidat Bone Graft. Skripsi di bawah bimbingan Dyah Hikmawati, S.Si. M,Si. Dan Drs. Siswanto, M.Si., Program Studi S1 Teknobiomedik, Departemen Fisika, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga, Surabaya. Abstrak Telah dilakukan penelitian pengaruh waktu perendaman dalam Simulated Body Fluid (SBF) pada komposit hidroksiapatit-gelatin dengan komposisi perbandingan 30:100 dengan tujuan menginduksi pertumbuhan inti apatit pada pertumbuhan hidroksiapatit alami tulang. Metode yang digunakan adalah metode freeze drying dengan suhu -50 o C selama 24 jam dan crosslinked glutaraldehid 0,5%. Hasil sintesis direndam dalam SBF dengan dengan variasi waktu perendaman 0, 1, 7 dan 15 hari, kemudian dilakukan freeze drying. Hasil karakterisasi FTIR menunjukkan munculnya gugus fungsi PO 4 3-, CO 3 2- sebagai gugus penyusun hidroksiapatit dan NH sebagai gugus penyusun gelatin. Hasil karakterisasi XRD terjadi peningkatan kristalinitas dengan semakin lama waktu perendaman yaitu 89,75% dan hasil analisis SEM EDX menunjukkan penigkatan rasio Ca/P sebesar 1,59 pada sampel perendaman 15 hari karena terbentuknya kristal apatit. Hasil analisis SEM dan MTT Assay menunjukkan ukuran pori antara 170,3µm-212,5µm dan seluruh sampel tidak toksik sehingga berpotensi sebagai kandidat bone graft. Kata kunci : Hidroksiapatit, Gelatin, frezze drying, glutaraldehid, SBF, bone graft
Rizka Ramadhania Ainunnisa, 2013, Variation Time of Soaking in Simulated Body Fluid in Composite Hydroxyapatite-Gelatin as A Candidate of Bone Graft. A Thesis under the guidance of Dyah Hikmawati, S.Si. M, Si. And Drs. Siswanto, M.Si. Biomedical Egineering, Physics Department, Faculty of Science and Technology, Airlangga University.Surabaya. Abstract Research has done on the influence of time soaking in Simulated Body Fluid (SBF) on hydroxyapatite-gelatin composite with the composition ratio 30: 100, with the intention of inducing the growth of apatite on core natural hydroxyapatite bone growth. The method used is freeze drying with a temperature 50 o C for 24 hours and crosslinked glutaraldehyde 0.5%. The result of the synthesis are soaked in SBF with time variation 0, 1, 7 and 15 days, then do freeze drying. The result of characterization FTIR show an appearance of a cluster of function PO 4 3-, CO 3 2 as a cluster of constituent hydroxyapatite and NH as a cluster of constituent gelatin. The result of characterization XRD show an increase in crystallinity with the longer soaking i.e. 89,75% and SEM EDX analysis shows the increase ratio of Ca/P amounted to 1.59 on samples of submersion 15 days since the formation of apatite crystals. Analysis SEM and MTT Assay shows the size of the pores between 170,3µm-212,5µm and the samples are not toxic, potentially as a candidate for bone graft. Keywords : Hydroxyapatite, Gelatin, frezze drying, glutaraldehid, SBF, bone graft
KATA PENGANTAR Puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala limpahan rahmat, karunia, dan hidayah-nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi yang berjudul Variasi Waktu Perendaman Dalam Simulated Body Fluid Pada Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Sebagai Kandidat Bone Graft. Skripsi ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Teknik (S.T.) pada Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga. Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih atas segala bantuan yang diberikan oleh berbagai pihak sehingga penulisan skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, kritik dan saran yang bersifat membangun sangat penulis harapkan. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi semua pihak yang membaca. Surabaya, Juli 2013 Penulis, Rizka Ramadhania A.
UCAPAN TERIMA KASIH Alhamdulillah, puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala limpahan rahmat, karunia, dan hidayah-nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi ini dengan baik. Penulis menyadari bahwa dalam penyusunan skripsi ini tak lepas dari bantuan dan dukungan dari banyak pihak. Penulis menyampaikan terimakasih kepada : 1. Kedua orang tua tercinta, Bapak Abdus Sjakur dan Ibu Anik Yusmiarti ; adikadik tercinta, Abdillah Ibnu Firdaus, Arham Izza Syani dan Irham Izza Syani serta yang selalu mendoakan, memberi kasih sayang, motivasi, semangat dan perhatian setiap saat. 2. Ibu Dyah Hikmawati, S.Si., M.Si., dan Bapak Drs. Siswanto, M.Si., selaku dosen pembimbing I dan II yang senantiasa mencurahkan segenap ilmu, waktu, dan tenaga untuk memberikan bimbingan, arahan, masukan yang sangat berharga. 3. Bapak Adri Supardi, M.Sc. dan Bapak DR. Moh.Yasin, M.Si selaku dosen penguji I dan II atas segala saran dan masukkan untuk perbaikan penulisan skripsi ini. 4. Ibu Retna Apsari, M.Si. selaku Ketua Program Studi S1 Teknobiomedik,. Ibu Dyah Hikmawati, S.Si., selaku dosen wali, serta dosen-dosen Program Studi S1 Teknobiomedik yang telah memberikan dukungan dan semangat selama penulisan skripsi ini.
5. Teman-teman Teknobiomedik angkatan 2009, khususnya biomaterial lovers, Shinta Fitrianingtyas dan Faiq Nadiatul M.A. yang selalu memberikan dukungan dan semangat dalam pengerjaan skripsi. 6. Sahabat Rainbow, Eni, Rohana, Ulfatun, U ul, Paula, Wisnu dan Nico yang mengisi hari-hari dengan keceriaan dalam pengerjaan proposal sampai skripsi ini terselesaikan. 7. Indah Sari R, Ayu Marina H. dan I.P.Putra atas nasihat, doa dan semangat dalam pengerjaan skripsi. 8. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
DAFTAR ISI LEMBAR JUDUL......... LEMBAR PESETUJUAN..... LEMBAR PENGESAHAN.......... PEDOMAN PENGGUNAAN SKRIPSI....... ABSTRAK......... ABSTRAC......... KATA PENGANTAR......... UCAPAN TERIMA KASIH...... DAFTAR ISI......... DAFTAR GAMBAR........... DAFTAR TABEL........ DAFTAR LAMPIRAN...... BAB I PENDAHULUAN........... 1.1 Latar Belakang Masalah.......... 1.2 Rumusan Masalah....... 1.3 Batasan Masalah..... 1.4 Tujuan Penelitian....... 1.5 Manfaat Penelitian.... BAB II TINJAUAN PUSTAKA.......... 2.1 Tulang......... 2.1.1 Komponen Selular Tulang...... 2.1.2 Bone Graft......... 2.2 Komposit... 2.2.1 Hidroksiapatit...... 2.2.2 Gelatin.......... 2.2.3 Komposit Hidroksiapatit-Gelatin......... 2.3 Simulated Body Fluid (SBF).... 2.4 Metode Freeze Drying...... 2.5 Karakterisasi......... Halaman i ii iii iv v vi vii viii x xii xiv xv 1 1 4 4 4 5 6 6 6 8 9 9 11 12 12 14 15
2.5.1 Fourier Transform Infra Red (FTIR)... 2.5.2 X-ray Diffraction.......... 2.5.3 Scanning Electron Microscope (SEM )......... 2.5.4 Uji MTT Assay........... BAB III METODE PENELITIAN..... 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian... 3.2 Bahan dan Alat Penelitian..... 3.2.1 Bahan-bahan Penelitian... 3.2.2 Alat-alat Penelitian....... 3.2.3 Diagram Alir Penelitian..... 3.3 Prosedur Penelitian 3.3.1 Pembuatan Komposit Hidroksiapatit-Gelatin... 3.3.2 Proses Teknik SBF Immersion... 3.4 Karakterisasi dan Analisis Data... 3.4.1 Uji XRD... 3.4.2 Uji FTIR (Fourier Transform Infra Red)... 3.4.3 Uji SEM..... 3.4.4 Uji Sitoksisitas dengan MTT Assay... BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN.... 4.1. Hasil Sintesis Komposit...... 4.2. Hasil Karakterisasi......... 4.2.1 Karakterisasi Gugus Fungsi dengan Uji FTIR...... 4.2.2 Karakterisasi Kristalinitas dengan Uji XRD...... 4.2.3 Karakterisasi Morfologi dengan Uji SEM...... 4.2.4 Karakterisasi Sitotoksisitas dengan Uji MTT Assay... 4.3. Pembahasan......... BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.... DAFTAR PUSTAKA........ LAMPIRAN.... 15 17 19 20 22 23 23 23 23 24 24 24 26 27 27 28 28 29 31 31 32 33 37 41 44 46 48 49 52
DAFTAR GAMBAR Nomor Judul Gambar Halaman 2.1 Struktur Kimia Gelatin 11 2.2 Skema FTIR 17 2.3 Contoh Hasil FTIR Komposit Hidroksiapatit-gelatin 17 2.4 Proses Terjadinya difraksi oleh kisi kristal 18 2.5 2.6 2.7 Contoh Hasil XRD Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Skema SEM Proses MTT Assay 19 22 25 3.1 Diagram alir penelitian 24 3.2 Perendaman Komposit dalam glutaraldehiod 0,5% 27 3.3 SBF pada PH 7,4 Sebagai Media Perendaman 28 3.4 FTIR Bruker Tensor 27 29 3.5 SEM 30 3.6 Elisa reader 32 4.1 Komposit Hidroksiaptit-Gelatin 33 4.2 Hasil Pengujian FTIR dari Gelatin 34 4.3 Hasil Pengujian FTIR dari Hidroksiapatit 35 4.4 Hasil Pengujian FTIR Komposit Sebelum Perendaman 35 4.5 Hasil Pengujian FTIR Komposit Setelah Perendaman 1 Hari 4.6 Hasil Pengujian FTIR Komposit Setelah Perendaman 7 Hari 36 37
4.7 Hasil Pengujian FTIR Komposit Setelah Perendaman 15 Hari 4.8 Kurva XRD Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Sebelum Perendaman 4.9 Kurva XRD Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah 1 Hari Perendaman 4.10 Kurva XRD Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah 7 Hari Perendaman 4.11 Kurva XRD Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah 15 Hari Perendaman 38 38 38 38 39 4.12 Gabungan Kurva XRD Komposit Hidroksiapatit-Gelatin 41 4.13 Hasil Pengujian SEM Komposit Hidroksiapatit-Gelatin 43 4.14 Ukuran Pori Komposit Hidroksiapatit-Gelatin dengan Variasi Waktu Perendaman 43 4.15 Hasil Analisis SEM EDX Rasio Ca/P Komposit Hidroksiapatit-Gelatin dengan Waktu Perendaman
DAFTAR TABEL Nomor Judul Tabel Halaman 2.1 Kandungan unsur mineral dalam tulang 7 2.2 Perbandingan struktur dan komposisi kimia dari HA, 10 enamel, dentin dan tulang 2.3 Komposisi ion-ion dalam blood plasma dan SBF 13 3.1 Senyawa Pembuatan SBF 26 4.1 Bilangan gelombang dari gugus fungsi yang terdapat pada keempat sampel 4.2 Hasil identifikasi gugus CO 3 2- dan PO 4 3-4.3 Derajat Kristalinitas Komposit Hidroksiapatit-Gelatin dengan Variasi Perendaman dalam SBF 36 37 40 4.4 Fraksi Volume HA pada Komposit Hidroksiapatit-Gelatin 41 4.5 Hasil pengukuran diameter pori komposit Hidroksiapatit- Gelatin dengan variasi waktu perendaman SBF 4.6 Hasil analisis EDX Rasio Ca/P komposit hidroksiapatitgelatin dengan variasi waktu perendaman 43 43 4.7 Persentase sel fibroblas dengan MTT assay 45
DAFTAR LAMPIRAN No. Judul Lampiran Halaman 1 Hasil Pengujian FTIR Sampel Gelatin 2 Hasil Pengujian FTIR Hidroksiapatit 3 Hasil Pengujian FTIR Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Sebelum Perendaman 4 Hasil Pengujian FTIR Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah Perendaman 1 Hari 5 Hasil Pengujian FTIR Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah Perendaman 7 Hari 6 Hasil Pengujian FTIR Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah Perendaman 15 Hari 7 Hasil Search Match Hidroksiapatit Sampel Komposit Hidroksiapatit- Gelatin sebelum Perendaman 8. Hasil Search Match Hidroksiapatit Sampel Komposit Hidroksiapatit- Gelatin Setelah Perendaman 1 Hari 9. Hasil Search Match Hidroksiapatit Sampel Komposit Hidroksiapatit- Gelatin Setelah Perendaman 7 Hari 10. Hasil Search Match Hidroksiapatit Sampel Komposit Hidroksiapatit- Gelatin Setelah Perendaman 15 Hari 11. Perhitungan Derajat Kristalinitas 12. Hasil SEM EDX Sampel Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Sebelum Perendaman 13. Hasil SEM EDX Sampel Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah Perendaman 1 Hari 14. Hasil SEM EDX Sampel Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah Perendaman 7 Hari 15. Hasil SEM EDX Sampel Komposit Hidroksiapatit-Gelatin Setelah Perendaman 15 Hari
16. Hasil uji MTT Assay