LAMPIRAN Lampiran A. Alur Kerja Ekstraksi Daun Tumbuhan Sampel Daun Tumbuhan dicuci dikeringanginkan dipotong-potong dihaluskan Serbuk ditimbang dimasukkan ke dalam botol steril dimaserasi selama + 3 hari dengan pelarut metanol dan diaduk Maserat disaring diulang 5 kali Filtrat dirotavapor pada suhu 40 0 C Residu Ekstrak Kental dibuat konsentrasi 60, 45, 30, dan 15% dilarutkan dalam DMSO Larutan Ekstrak dipipet sebanyak 10µl diteteskan pada cakram kosong dibiarkan + 1jam
Cakram yang mengandung ekstrak Lampiran B. Alur Kerja Pembuatan Suspensi Bakteri Uji dan Pembuatan Media Uji a. Pembuatan Suspensi Bakteri Uji Biakan Uji diambil sebanyak 1-2 ose dimasukkan ke dalam tabung berisi NaCl fisiologis 0,9% dihomogenkan dengan vortex dibandingkan kekeruhan dengan McFarland 0,5 standar yang setara dengan 10 8 CFU/ml Suspensi Biakan b. Pembuatan Media Uji Media MHA dan PDA dituang ke dalam cawan petri steril dibiarkan memadat diusapkan suspensi biakan dengan kapas lidi steril dibiarkan selama + 1 jam
Media Uji Lampiran C. Pengujian Ekstrak Tumbuhan Media Uji uji diletakkan cakram yang mengandung ekstrak tumbuhan diletakkan cakram pembanding dinkubasi pada suhu 37 0 C selama 24 jam diamati dan diukur zona bening di sekitar cakram Hasil
Lampiran D. Cara Kerja Pembuatan Larutan NaCl Fisiologis 0,9% dan Suspensi McFarland 0,5 a. Pembuatan Larutan NaCl Fisiologis 0,9% Sebanyak 9 gr NaCl ditimbang lalu dilarutkan dalam 1 liter akuades steril. Selanjutnya larutan dihomogenkan dan ditutup dengan kapas dan aluminium foil dan disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 0 C tekanan 2 bar selama 15 menit. b. Pembuatan Suspensi McFarland 0,5 Sebanyak 0,5 ml larutan barium klorida 0,048 M (BaCl 2 2H 2 O 1,175 %) dicampurkan dengan 9,5 ml larutan asam sulfat 0,18 M (H 2 SO 4 1% b/v) dalam labu takar dan dihomogenkan. Suspensi ini digunakan sebagai larutan standar pembanding kekeruhan suspensi bakteri uji.
Lampiran E. Data Pengamatan Diameter Zona hambat (mm) Ekstrak Metanol Daun P. guajava daging-buah putih Data Pengamatan Diameter Zona hambat Ekstrak Metanol Daun P. guajava daging-buah putih Perlakuan Ulangan Total Rataan 1 2 3 K1S1 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K1S2 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K1S3 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K1S4 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K1S5 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K2S1 6,10 5,60 5,80 17,50 5,83 K2S2 7,30 6,20 7,10 20,60 6,87 K2S3 9,10 11,40 7,10 27,60 9,20 K2S4 10,20 6,20 6,60 23,00 7,67 K2S5 7,00 6,10 6,30 19,40 6,47 K3S1 6,90 5,70 6,70 19,30 6,43 K3S2 6,10 7,20 8,20 21,50 7,17 K3S3 11,90 11,10 8,20 31,20 10,40 K3S4 10,60 8,10 7,70 26,40 8,80 K3S5 6,70 6,00 6,60 19,30 6,43 K4S1 8,30 6,40 6,20 20,90 6,97 K4S2 6,70 10,10 10,10 26,90 8,97 K4S3 11,10 10,10 9,90 31,10 10,37 K4S4 10,40 10,00 10,70 31,10 10,37 K4S5 10,30 8,40 9,30 28,00 9,33 K5S1 10,10 8,70 10,00 28,80 9,60 K5S2 10,80 15,40 11,40 37,60 12,53 K5S3 15,10 14,00 14,10 43,20 14,40 K5S4 12,00 12,10 12,60 36,70 12,23 K5S5 11,80 8,40 8,10 28,30 9,43
Lampiran F. Tabel Data Dwikasta Diameter Zona Hambat (mm) dan Daftar Ragam Ekstrak Metanol Daun P. guajava daging-buah Putih. Sidik Dwikasta Diameter Zona hambat (mm) ) Ekstrak Metanol Daun P. guajava dagingbuah putih K.S S1 S2 S3 S4 S5 Total K1 15,00 15,00 15,00 15,00 15,00 75,00 K2 17,50 20,60 27,60 23,00 19,40 108,10 K3 19,30 21,50 31,20 26,40 19,30 117,70 K4 20,90 26,90 31,10 31,10 28,00 138,00 K5 28,80 37,60 43,20 36,70 28,30 174,60 Total 101,50 121,60 148,10 132,20 110,00 Daftar Sidik Ragam Diameter Zona hambat (mm) Ekstrak Metanol Daun P. guajava daging-buah putih SK DB JK KT FH FT 5% FT 1% Perlakuan 24 495,35 20,63 34,96 ** 1,74 2,18 K 4 362,74 90,60 153,55 ** 2,56 3,72 S 4 89,82 22,45 38,05 ** 2,56 3,72 K x S 16 42,79 2,67 4,52 ** 1,85 2,3 Galat 50 29,67 0,59 Total 74 1019,37 16,54 Keterangan: tn: Tidak berbeda nyata *: Berbeda nyata **: Berbeda sangat nyata
Lampiran G. Data Pengamatan Diameter Zona hambat (mm) Ekstrak Metanol Daun P. guajava daging-buah merah Data Pengamatan Diameter Zona hambat (mm) Ekstrak Metanol Daun P. guajava daging-buah merah Perlakuan Ulangan Total Rataan 1 2 3 K1S1 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K1S2 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K1S3 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K1S4 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K1S5 5,00 5,00 5,00 15,00 5,00 K2S1 5,40 5,00 5,00 15,40 5,13 K2S2 6,10 6,10 5,90 18,10 6,03 K2S3 9,80 8,10 9,50 27,40 9,13 K2S4 9,60 7,40 8,20 25,20 8,40 K2S5 6,60 5,00 11,00 22,60 7,53 K3S1 6,70 11,60 11,60 29,90 9,97 K3S2 7,40 6,20 6,30 19,90 6,63 K3S3 11,90 10,20 11,30 32,40 10,80 K3S4 7,50 8,70 8,10 24,30 8,10 K3S5 8,90 5,00 6,90 20,80 6,93 K4S1 9,95 7,90 7,10 24,95 8,31 K4S2 9,00 8,90 8,60 26,50 8,83 K4S3 13,30 11,20 12,20 36,70 12,23 K4S4 11,90 14,60 12,50 39,00 13,00 K4S5 7,00 5,00 11,00 22,00 7,33 K5S1 11,44 8,75 9,30 29,45 9,81 K5S2 13,20 11,10 11,20 35,50 11,83
K5S3 16,70 12,50 14,90 44,10 14,70 K5S4 13,10 17,20 13,10 43,40 14,47 K5S5 9,10 5,00 9,50 23,60 7,87 Lampiran H. Tabel Dwikasta Diameter Zona Hambat (mm) dan Daftar Sidik Ragam Diameter Zona hambat (mm) Ekstrak Metanol Daun P. guajava daging-buah merah Dwikasta Diameter Zona hambat (mm) ) Ekstrak Metanol Daun P. guajava dagingbuah merah K.S S1 S2 S3 S4 S5 Total K1 15,00 15,00 15,00 15,00 15,00 75,00 K2 15,40 18,10 27,40 25,20 22,60 108,70 K3 29,90 19,90 32,40 24,30 20,80 127,30 K4 24,95 26,50 36,70 39,00 22,00 149,15 K5 29,45 35,50 44,10 43,40 23,60 176,05 Total 114,70 115,00 155,60 146,90 104,00 Daftar Sidik Ragam Diameter Zona hambat (mm) Ekstrak Metanol Daun P. guajava daging-buah merah SK DB JK KT FH FT 5% FT 1% Perlakuan 24 649,58 27,06 35,84 ** 1,74 2,18 K 4 395,58 98,89 128,42 ** 2,56 3,72 S 4 135,86 33,96 44,10 ** 2,56 3,70 K x S 16 118,04 7,37 9,57 ** 1,85 2,30 Galat 50 38,59 0,77 Total 74 1337,65 168,05
Keterangan: tn: Tidak berbeda nyata *: Berbeda nyata **: Berbeda sangat nyata Lampiran I. Diameter Zona Hambat Antibiotik Pembanding Terhadap Bakteri Uji Tabel Diameter Zona Hambat Antibiotik Pembanding Terhadap Bakteri Uji Antibiotik Diameter Zona Hambat (mm) E. coli S. aureus S. dysenteriae B. subtilis S. marcescens Penisilin 12,51 11,20 13,50 11,60 9,45 Kloramfenikol 11,23 6,40 12,70 13,10 7,18