www.thalassemia.org www.thalassemia.org www.medimagazin.com.tr

YTI/POPTI

Thalassemia Kelainan herediter Mutasi gen penyandi rantai globin (Galanello, 2012) Autosomal Resesif (Galanello, 2012) Reduksi atau tidak adanya sintesis rantai globin (Hoffbrand et al., 2006) Kromosom 16 Kromosom 11 Gen HBA Gen HBB α-thalassemia β-thalassemia (Galanello & Origa, 2010)

Kelainan bawaan lahir Dapat dicegah dan dikontrol Thalassemia di Indonesia Strategi Global WHO Setiap tahun ada penyandang baru Pembawa sifat 3-10 % Asymptomatic

Strategi global World Health Organization Skrining Pembawa Sifat Thalassemia Analisis Hematologi Analisis Molekular PCR-SSCP Sekuensing

RUMUSAN MASALAH 1. Bagaimana profil elektroforegram individu terduga pembawa sifat β-thalassemia? 2. Bagaimana perbandingan antara hasil uji hematologis dengan hasil PCR-SSCP pada individu terduga pembawa sifat β-thalassemia? 3. Apakah hasil deteksi mutasi dengan PCR-SSCP dapat dikonfirmasi dengan sekuensing DNA? TUJUAN 1. Mendeskripsikan profil elektroforegram individu terduga pembawa sifat β-thalassemia. 2. Membandingkan hasil uji hematologis dengan hasil PCR-SSCP pada individu terduga pembawa sifat β-thalassemia. 3. Melakukan konfirmasi hasil PCR-SSCP dengan sekuensing DNA.

1. Memberikan dukungan terhadap data uji hematologis terkait penentuan status pembawa sifat β- thalassemia. 2. Memberikan informasi letak mutasi gen HBB pada pembawa sifat β-thalassemia. 3. Memberikan rekomendasi untuk dilakukannya identifikasi jenis mutasi berdasarkan letak mutasi yang telah diketahui dengan metode PCR-SSCP.

Skrining Thalassemia Profil Hematologis [CBC, Indeks Korpuskular, Analisis Hb, Gambaran darah tepi, HPLC] Analisis hasil uji hematologi Suspect carrier β-thalassemia Confirmatory test

Confirmatory test Analisis subjek penelitian berdasarkan kriteria inklusi dan eksklusi Isolasi dan amplifikasi 4 daerah Gen HBB Analisis PCR-SSCP Konfirmasi salah hasil PCR-SSCP dengan sekuensing DNA

Lokasi penempelan primer (Gupta & Argawal, 2003)

Parameter Carrier Alfa Carrier Beta Carrier HbE Hematologi Rutin Hemoglobin Rendah Rendah Rendah Eritrosit Tinggi/Normal Tinggi/Normal Tinggi/Normal Nilai-nilai MC MCV Rendah Rendah Rendah MCH Rendah Rendah Rendah Gambaran darah tepi Eritrosit Bukan Normositik, Normokromik Bukan Normositik, Normokromik Bukan Normositik, Normokromik Analisa Hb HbA 2 Dalam kisaran normal 3,6 < x < 13 > 13 Badan Inklusi HbH Ada/Tidak ada Tidak ada Tidak ada

Skrining Thalassemia 47 (2012) + 49 (2013) = 96 peserta skrining 18 terduga pembawa sifat α-thalassemia 21 terduga pembawa sifat β-thalassemia 29 terduga pembawa sifat HbE

Rekapitulasi ada/tidaknya mutasi Keterangan: Daerah: daerah pada gen HBB yang dilekati primer K1-K2: Kontrol P1-P21: Individu terduga β-thalassemia berdasarkan uji hemtologi Rekapitulasi: Tidak termutasi pada empat daerah pada gen HBB : 5 individu Termutasi pada satu daerah pada gen HBB : 9 individu Termutasi pada dua daerah pada gen HBB : 8 individu Termutasi pada tiga daerah pada gen HBB : 1 individu Termutasi pada empat daerah pada gen HBB : 0 individu

Perbandingan Uji Hematologis dan PCR-SSCP TIDAK TERKONFIRMASI K2 P1 P2 P11 P12

Hasil Sekuensing DNA Daerah I P16 Perbandingan sekuen daerah I gen HBB pada alel wild type (a) dan heterozigot (b)

Diagram silsilah

Simpulan 1. Individu dengan status pembawa sifat β-thalassemia berdasarkan uji hematologi menunjukkan pola elektroferogram berbeda dengan individu normal, kecuali pada subjek penelitian P1, P2, P11 dan P12. 2. Individu dengan status pembawa sifat β-thalassemia berdasarkan uji hematologi dapat dikonfirmasi dengan metode polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) kecuali individu K2, P1, P2, P11 dan P12. 3. Individu dengan status pembawa sifat β-thalassemia berdasarkan uji PCR-SSCP dapat dikonfirmasi dengan menggunakan sekuensing DNA.

Saran 1. Parameter gambaran darah tepi perlu diperhatikan dalam penentuan status pembawa sifat β- thalassemia. 2. Perlu dilakukan PCR-SSCP pada daerah lain di gen HBB pada subjek penelitian yang belum diketahui letak mutasinya. 3. Perlu dilakukan skrining thalassemia bagi kerabat dekat subjek penelitian yang telah diketahui status pembawa sifat β-thalassemia sehingga dapat disusun diagram silsilah dengan lengkap.

Anonymous. 2010. Pencegahan Thalassemia (Hasil Kajian HTA Tahun 2009). Dirjen Bina Pelayanan Medik, Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Ansari, SH. & Shamsi, TS. 2010. Thalassemia Prevention Programme. Karachi: National Institute of Blood Disease and Bone Marrow Transplantation. Calzolari, R., McMorrow, T., Yannoutsos, N., Langeveld, A., Grosveld, F. 1999. Deletion of a Region that is a Candidate for the Difference between the Deletion Forms of Hereditary Persistence of Fetal Hemoglobin and δβthalassemia Affets β-globin Gene but not γ-globin Gene Expression. European Molecular Biology Organization 18(4): 949 958. Galanello, R. & Origa, R. 2010. Beta Thalassemia. Orphanet Journal of Rare Diseases. 5 (1): 1-15. Galanello, R. 2012. Recent Advances in the Molecular Understanding of Non-Transfusion-Dependent Thalassemia. Blood Rev. 26S: S7-S11. Gupta, A. & Agarwal, S. 2003. Efficiency and Cost Effectiveness: PAGE-SSCP versus MDE and Phast gels for Identification of Unknown β-thalassaemia Mutations. J Clin Pathol: Mol. Pathol, 56: 237-239. Hoffbrand, A.V., Pettit, J.E., Moss, P.A.H. 2006. Essential Haematology Fifth Edition. Massachusetts: Blackwell Science, Inc. Konstantinos KV., Panadiotis, P., Antonios, VT., Agelos, P., Argiris, NV. 2007. PCR-SSCP: A Method fot the Molecular Analysis for Genetic Diseases. Mol biotechnol 38: 155-163. Lanni, F. 2002. Heterogenitas Molekular Gena Globin-β di Indonesia: Kaitannya dengan Pola Penyebaran Thalassemia-β serta Afinitas Genetik antar Populasi di Indonesia. Disertasi, tidak diterbitkan. UGM. Yogyakarta. Martini, FH., Timmons, MJ., Tallitsch, RR. 2012. Human Anatomy Seventh Edition. London: Benjamin Cummings. McPherson, M.J. & Møller, S.G. 2006. PCR: The Basics. 2 nd edition. Taylor & Francis Group. New York, pp: 9-29. Nakajima, E., Matsumoto, T., Yamada, R., Kawakami, K., Takeda, K., Ohnishi, A., Komatsu, M. 1996. Technical Note: Use of A PCR-Single Strand Conformation Polymorphism (PCR-SSCP) for Detection of a Point Mutation in the Swine Ryanodine Receptor (RYR1) Gene. Journal of Animal Science. 74: 2904-2906. Nussbaum, Robert L., McInnes, RR, Willard, HF. 2001. Thompson & Thompson Genetics in Medicine Sixth Edition. Philadelphia: W.B. Saunders Company. Piomelli, Sergio & Yachnin, Stanley. 1985. Current Topics in Hematology Volume 5. New York: Alan R. Liss, Inc. Raut, AA., Kumar, A., Kala, SN., Chhokar, V., Rana, N., Beniwal, V., Jaglan, S., Samuchiwal, S.K., Singh, J.K., Mishra, A.. 2012. Identification of Novel Single Nucleotide Polymorphisms in the DGAT1 Gene of Buffaloes by PCR-SSCP. Genetics and Molecular Biology, 35(3): 610-613. Weatherall, David. 2001. Thalassaemias. Encyclopedia of Life Sciences. Diakses 30 Maret 2013. Weatherall, D.J. & Clegg, J.B. 2001. Inherited Haemoglobin Disorders: An Increasing Global Health Problem. Public Health Reviews. Bulletin of the World Health Organization 79: 704 712. http://www.ironhealthalliance.com/disease-states/thalassemia.jsp http://www.pathophys.org/thalassemia/