ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BIJI PINANG Skripsi Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai Derajat Sarjana S-1 Oleh FITRI ARYANTI 1108010091 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO PURWOKERTO 2015 i
ii
iii
PERNYATAAN Yang bertandatangan dibawah ini, saya : Nama : FITRI ARYANTI NIM : 1108010091 Program Studi : Farmasi Fakultas / Universitas : Farmasi/Universitas Muhammadiyah Purwokerto Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi ini adalah hasil dari proses penelitian saya yang telah dilakukan sesuai dengan prosedur penelitian yang benar dengan arahan dari dosen pembimbing dan bukan hasil penjiplakan dari karya orang lain atau terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan orang lain kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka. Demikian pernyataan ini, dan apabila kelak di kemudian hari terbukti ada unsur penjiplakan, maka saya bersedia mempertanggungjawabkan sesuai dengan ketentuan yang berlaku. Purwokerto, Agustus 2015 Yang menyatakan, FITRI ARYANTI iv
INTISARI FITRI ARYANTI. Isolasi dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Pinang. Dibawah bimbingan ASMIYENTI DJALIASRIN DJALIL dan RETNO WAHYUNINGRUM. Latar Belakang : Ekstrak Etanol Biji Pinang memperlihatkan aktivitas antioksidan yaitu IC 50 sebesar 0,409 mg/ml yang lebih besar dibandingkan vitamin C sebagai kontrol positif dengan nilai IC 50 sebesar 0,964 mg/ml. Berdasarkan landasan tersebut membuktikan bahwa ekstrak biji pinang berpotensi sebagai antioksidan tetapi belum ada penelitian yang mengisolasi kandungan kimia dari berbagai macam fraksi pada ekstrak biji pinang. Oleh karena itu perlu dilakukan isolasi kandungan kimia dari beberapa fraksi dan uji aktifitas antioksidan pada ekstrak dan berbagai fraksi biji pinang. Tujuan Penelitian : Tujuan dari penelitian ini adalah mengisolasi kandungan kimia dari fraksi dan menguji aktivitas antioksidan ekstrak dan fraksi biji pinang. Metode Penelitian : Penelitian ini dilakukan dengan radikal DPPH untuk ekstrak metanol, fraksi metanol-air, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, fraksi metanol biji pinang dan untuk mengisolasi kandungan kimia dari fraksi metanol menggunakan Kromatografi Lapis Tipis, Kromatografi Lapis Tipis Preparatif dan Spektrofotometri UV-Vis. Hasil : IC 50 pada fraksi metanol adalah yang paling kecil dibandingkan dengan fraksi metanol-air, fraksi etilasetat dan fraksi n-heksan yaitu 20,738 ppm karena senyawa aktif biji pinang tertarik pada fraksi metanol sehingga aktivitas antioksidannya paling besar. Hasil isolasi menggunakan metode KLT dan KLT Preparatif adalah 84,6 mg yang kemudian diuji aktivitas antioksidan dengan IC 50 sebesar 22396,3 ppm. Kesimpulan : aktivitas antioksidan fraksi metanol lebih baik dibandingkan fraksi metanol-air, fraksi etilasetat dan fraksi n-heksan. Fraksi metanol telah diisolasi yang membuktikan senyawa aktif sebagai antioksidan. Kata kunci : antioksidan, ekstrak metanol biji pinang, fraksi metanol v
ABSTRACK FITRI Aryanti. Isolation and Antioxidant Activity Test of areca seed extract. Under the supervisor of ASMIYENTI DJALIASRIN DJALIL and RETNO WAHYUNINGRUM. Background: The Extract of areca seed ethanol showed that the antioxidant activity IC 50 of 0.409 mg / ml was greater than vitamin c as a positive control with IC 50 value of 0.964 mg / ml. Based on these premises proves that areca seed extract has potential as an antioxidant yet there was no further research that isolate the chemical constituents of the various factions in the areca seed extracts. Therefore it was necessary to isolate chemical constituents of some fractions and antioxidant activity test of the extracts and various fractions of areca seed. Objective: The objective of this study was to isolate the chemical constituents of the fractions and tested the extracts of antioxidant activity and fractions of areca seed. Methods of the research: The study was carried out by radical DPPH for the methanol extract, fraction of methanol-water, the fraction of n-hexane, fraction of ethyl acetate, methanol fraction areca seed and to isolate the chemical constituents of the methanol fraction using Thin Layer Chromatography, preparative thin layer chromatography and spectrophotometry UV -Vis. Results: the result revealed that methanol fraction with IC 50 is the smallest fraction (20.738 ppm) compared by the methanol-water fractions, fractions ethyl acetate and n-hexane fraction. It was because of the active compounds of areca nut adsorbed into methanol fraction. Therefore, those fractions have the greatest antioxidant activity. The method of isolation was using 84.6 mg TLC and TLC Preparative then it tested by the antioxidant activity with IC 50 of 22396.3 ppm. Conclusion: The antioxidant activity of the methanol fraction was better than the methanol-water fractions, fractions ethyl acetate and n-hexane fraction. The Methanol fraction that had been isolated proved the active compounds as antioxidants. Keywords: antioxidants, methanol extract of areca seed, methanol fraction. vi
PERSEMBAHAN Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah memberikan petunjuk dan kemudahan, sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik dan lancar. Skripsi ini penulis persembahkan untuk: Orangtuaku yang selalu memberikan dukungan serta doa yang selalu mengiringi hidupku dalam menempuh segala hal. Kakak-kakakku, adikku dan keponakanku yang selalu memberikan semangat dan motivasi untukku. Emon, Lele, Aminah, Icon, Devi, Mas Enggi, Anya, Ghelsa, kelompok praktikum RA, Bu woro, Pak mamat dan teman-teman seangkatan yang telah membantu dan selalu memberikan dukungan untukku. Kedua pembimbing yang selalu membimbing dan memberi nasehat dengan sabar selama ini Mba viji, Pindut, Ira, Helmi, Mba Santi, Mba devi,dan teman-teman kos yang menemani dan menghibur vii
MOTTO Dibalik kesulitan ada Kemudahan sesudahnya Teruslah berfikir positif, karena dengan itu dapat menutupi segala hal-hal negatif dan segala ketakutan yang menghampiri diri Dimana ada kemauan, disitu pasti ada jalan menuju kebaikan Lakukan semuanya dengan penuh kesabaran agar hasilnya tidak sia-sia. viii
PRAKATA Dengan mengucap Alhamdulillahi Robil allamin, dan segala puji syukur senantiasa peneliti panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat, hidayah dan inayahnya, sehingga peneliti dapat menyusun dan menyelesaikan skripsi ini. Sholawat dan salam senantiasa tercurahkan kepada Nabi Besar Muhammad SAW berserta keluarga dan sahabatnya. Penyelesaian skripsi ini tidak terlepas dari bantuan dan dukungan dari berbagai pihak yang telah memberikan bantuan yang sangat berarti bagi peneliti, baik secara moral maupun materi. Untuk itu, peneliti mengucapkan terima kasih kepada : 1. Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, SH, M.H Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto. 2. Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto. 3. Dr. Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M.Si. Ketua Bidang Kemahasiswaan Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto dan Dosen Pembimbing I yang telah membimbing, memotivasi dan mendukung terlaksananya ujian skripsi dan memberikan kesempatan hingga peneliti selesai studi. 4. Retno Wahyuningrum,S.Farm., M.Si., Apt. Dosen Pembimbing II yang selalu sabar membimbing dan mengarahkan dalam penyusunan skripsi. 5. Semua pihak yang telah membantu hingga terselesaikannya skripsi ini. Semoga semua bimbingan, dorongan dan bantuan yang telah diberikan kepada peneliti mendapatkan pahala dari Allah SWT. Teriring harapan semoga skripsi ini dapat bermanfaat khususnya bagi peneliti dan pembaca. Purwokerto, Agustus 2014 Peneliti ix
RIWAYAT HIDUP Nama : Fitri Aryanti NIM / Angkatan : 1108010091 / 2011 Tempat / Tanggal Lahir : Cilacap, 12 April 1992 Jenis Kelamin : Perempuan Agama : Islam Alamat : Jln.Jaga desa no.68 Pahonjean, Majenang, Cilacap Riwayat Pendidikan: 1. Perguruan Tinggi :Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto (Angkatan 2011) 2. SMA / Tahun Lulus : SMK Farmasi Majenang / Tahun 2010 3. SMP / Tahun Lulus : SMP Negeri 2 Majenang / Tahun 2007 4. SD / Tahun Lulus : SD Negeri 1 Pahonjean / Tahun 2004 x
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL....i HALAMAN PERSETUJUAN... ii HALAMAN PENGESAHAN... iii HALAMAN PERNYATAAN... iv INTISARI... v ABSTRACT... vi HALAMAN PERSEMBAHAN... vii MOTTO... viii PRAKATA... ix RIWAYAT HIDUP... x DAFTAR ISI... xi DAFTAR GAMBAR... xiii DAFTAR LAMPIRAN... xiv BAB I PENDAHULUAN..... 1 A. Latar Belakang Masalah..... 1 B. Perumusan Masalah..... 2 C. Tujuan Penelitian..... 2 D. Manfaat Penelitian..... 2 BAB II TINJAUAN PUSTAKA..... 3 A. Tinjauan buah pinang..... 3 B. Antioksidan dan Radikal Bebas..... 4 C. Ekstraksi..... 6 D. Fraksinasi dan Isolasi Ekstrak..... 7 E. Kromatografi Lapis Tipis..... 8 F. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif..... 9 G. Uji Antioksidan 1,1 DPPH........ 10 H. Spektrofotometri Ultraviolet-Visible... 11 BAB III METODOLOGI PENELITIAN... 12 A. Jenis dan Rancangan Penelitian... 12 xi
B. Variabel Penelitian... 12 1. Variabel Bebas... 12 2. Variabel Tergantung... 12 3. Variabel Terkendali... 12 C. Definisi Variabel Operasional... 12 D. Waktu dan tempat Penelitian... 13 E. Alat dan Bahan... 13 F. Prosedur Penelitian... 14 1. Pengumpulan dan Penyiapan Sampel... 14 2. Determinasi Bahan... 14 3. Maserasi Biji Pinang... 14 4. Fraksinasi... 14 5. Uji Aktivitas Antioksidan... 15 6. Identifikasi senyawa dengan KLT... 18 7. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif... 18 8. Uji Aktivitas Antioksidan isolat dengan Spektrofotometri Uvvis... 19 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN... 20 A. Determinasi Tanaman... 20 B. Penyiapan Bahan... 20 C. Pembuatan Ekstrak Biji Pinang... 21 D. Fraksinasi Ekstrak Biji Pinang... 22 E. Uji aktivitas Antioksidan... 23 F. Identifikasi senyawa menggunakan KLT... 28 G. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif... 30 H. Uji Aktivitas antioksidan Isolat... 30 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN... 32 DAFTAR PUSTAKA... 33 LAMPIRAN... 35 xii
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Buah Pinang... 3 Gambar 2. Ektrak Kering biji pinang... 22 Gambar 3. Scanning (λ maks) larutan DPPH... 23 Gambar 4. Prinsip penangkapan H oleh DPPH... 24 Gambar 5. Kurva hubungan antara konsentrasi dengan %penghambatan ekstrak metanol...... 25 Gambar 6. Kurva hubungan antara konsentrasi dengan %penghambatan fraksi metanol...... 25 Gambar 7. Kurva hubungan antara konsentrasi dengan %penghambatan fraksi metanol-air...... 26 Gambar 8. Kurva hubungan antara konsentrasi dengan %penghambatan fraksi n- heksan...... 26 Gambar 9. Kurva hubungan antara konsentrasi dengan %penghambatan fraksi etilasetat...... 27 Gambar 10. Kurva hubungan antara konsentrasi dengan %penghambatan vitamin C...... 27 Gambar 11. Lempeng KLT setelah disemprot H 2 SO 4, NaNO 2, FeCl 3... 29 Gambar 12. Hasil pengukuran λ maks isolat... 23 xiii
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Surat determinasi... 35 Lampiran 2. Perhitungan rendemen ekstrak biji pinang... 36 Lampiran 3. Tahapan Fraksinasi... 37 Lampiran 4. Perhitungan Uji daya tangkap radikal bebas (%penghambatan), IC 50 dan IC 20 dengan radikal DPPH... 38 Lampiran 5. Perhitungan Standar Deviasi (SD) untuk IC 50 dan IC 20... 57 xiv