LAMPIRAN
Lampiran 1. Contoh perhitungan serat pangan, SD, dan RSD Total serat pangan (TDF) pada kacang kedelai metode AOAC TDF, % = [(bobot residu P A B) / (bobot sampel - Kadar Lemak - Kadar air)] x 0 Bobot residu = rata-rata bobot residu (g) untuk sepuluh ulangan sampel; P dan A = bobot (g) dari masing-masing protein dan abu yang ditentukan dari kedua ulangan sampel, dan bobot sampel = rata-rata bobot sampel (g) yang diambil. Kadar lemak dan air ialah masing-masing jumlah lemak dan air yang dihilangkan pada saat persiapan sampel. TDF, % = [(bobot residu P A B) / (bobot sampel + Kadar Lemak + Kadar air)] x 0 = [(0.5947 0.0001 0.043 0.0034) / (1.006-0.0131-0.014)] x 0 = 59.4 SD = x i x n 1 = (59.37 59.4) + + (59.4 59.4) 1 SD = 0. RSD analisis = SD x 0% = 0. 0% = 0.17% 59.4 RSD = (. ) = (..) = 1.08 36
Lampiran 3. dan F untuk TDF kacang kedelai metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.1 + ( 1)0.3 + = 0.71 59.4 35. 0.71 1 + 1 = 75.97 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 4. Keputusan H0 ditolak 5. Kesimpulan : rataan TDF kacang kedelai metode AOAC berbeda nyata dengan rataan TDF kacang kedelai metode Asp 43
Lampiran 4. dan F untuk TDF kacang tanah metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.07 + ( 1)0.04 + = 0.71 1.49 1. 0.71 1 + 1 = 0.85 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 5. Kesimpulan : rataan TDF kacang tanah metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan TDF kacang tanah metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.07 = 3.06 s 0.04 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 5.351 5. Kesimpulan : SD TDF kacang tanah metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD TDF kacang tanah metode Asp 44
Lampiran 5. dan F untuk TDF oat metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.1 + ( 1)0.1 + = 0.71 13.64 11.84 0.71 1 + 1 = 5.661 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 4. Keputusan H0 ditolak 5. Kesimpulan : rataan TDF oat metode AOAC berbeda nyata dengan rataan TDF oat metode Asp 45
Lampiran 6. dan F untuk TDF wortel metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.09 + ( 1)0.1 + = 0.7 3.69 4.30 0.7 1 + 1 = 1.887 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 5. Kesimpulan : rataan TDF wortel metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan TDF wortel metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.09 = 0.44 s 0.1 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 5.351 5. Kesimpulan : SD TDF wortel metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD TDF wortel metode Asp 46
Lampiran 7. dan F untuk IDF kacang kedelai metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.3 + ( 1)0.5 + = 0.73 59.4 35. 0.73 1 + 1 = 83.36 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 4. Keputusan H0 ditolak 5. Kesimpulan : rataan IDF kacang kedelai metode AOAC berbeda nyata dengan rataan IDF kacang kedelai metode Asp 47
Lampiran 8. dan F untuk IDF kacang tanah metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.0 + ( 1)0.03 + = 0.73 11.48 11.9 0.71 1 + 1 = 0.601 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 5. Kesimpulan : rataan IDF kacang tanah metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan IDF kacang tanah metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.0 = 0.44 s 0.03 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 5.351 5. Kesimpulan : SD TDF kacang kedelai metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD TDF kacang kedelai metode Asp 48
Lampiran 9. dan F untuk IDF oat metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.03 + ( 1)0.07 + = 0.71 8.46 7.8 0.71 1 + 1 = 3.71 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 4. Keputusan H0 ditolak 5. Kesimpulan : rataan IDF oat metode AOAC berbeda nyata dengan rataan IDF oat metode Asp 49
Lampiran. dan F untuk IDF wortel metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0. + ( 1)0.13 + = 0.71 9.19 9.50 0.71 1 + 1 = 0.971 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 5. Kesimpulan : rataan IDF wortel metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan IDF wortel metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0. = 9.00 s 0.13 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 5.351 4. Keputusan H0 ditolak 5. Kesimpulan : SD IDF wortel metode AOAC berbeda nyata dengan SD IDF wortel metode Asp 50
Lampiran 11. dan F untuk SDF kacang kedelai metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.0 + ( 1)0.04 + = 0.71 1.31 4.36 0.71 1 + 1 = 9.46 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 4. Keputusan H0 ditolak 5. Kesimpulan : rataan SDF kacang kedelai metode AOAC berbeda nyata dengan rataan SDF kacang kedelai metode Asp 51
Lampiran 1. dan F untuk SDF kacang tanah metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.06 + ( 1)0.03 + = 0.71 0.88 0.93 0.71 1 + 1 = 0.158 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 5. Kesimpulan : rataan SDF kacang tanah metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan SDF kacang tanah metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.06 = 4.00 s 0.03 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 5.351 5. Kesimpulan : SD SDF kacang tanah metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD SDF kacang tanah metode Asp 5
Lampiran 13. dan F untuk SDF oat metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.9 + ( 1)0.03 + = 0.74.59.03 0.74 1 + 1 = 1.701 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 5. Kesimpulan : rataan SDF oat metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan SDF oat metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s s = 0.9 = 93.44 0.03 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 5.351 4. Keputusan H0 ditolak 5. Kesimpulan : SD SDF oat metode AOAC berbeda nyata dengan SD SDF oat metode Asp 53
Lampiran 14. dan F untuk SDF wortel metode AOAC dan metode Asp H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.05 + ( 1)0.16 + = 0.71 13.87 14.61 3.1 1 + 1 =.334 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 3.169 dan -3.169 5. Kesimpulan : rataan SDF wortel metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan SDF wortel metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.05 = 0. s 0.16 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 5.351 5. Kesimpulan : SD SDF wortel metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD SDF wortel metode Asp 54
Lampiran 15. dan F untuk ruggenness test TDF kacang kedelai (78%) dan metode Asp (95%) H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.0 + ( 1)0.0 + = 0.95 35.1 35. 0.95 1 + 1 = 0.136 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 9.95 dan -9.95 5. Kesimpulan : rataan TDF kacang kedelai (78%) metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan TDF wortel metode Asp (95%) Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.0 = 0.01 s 0.3 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 405. 851 5. Kesimpulan : SD SDF wortel metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD SDF oat metode Asp 55
Lampiran 16. dan F untuk ruggenness test TDF kacang tanah (78%) metode Asp (95%) H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.1 + ( 1)0.04 + = 0.95 1. 35. 0.95 1 + 1 = 0.07 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 9.95 dan -9.95 5. Kesimpulan : rataan TDF kacang tanah (78%) metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan SDF wortel metode Asp (95%) Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.1 = 9.00 s 0.04 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 405. 851 5. Kesimpulan : SD TDF kacang tanah (78%) metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD TDF oat metode Asp (95%) 56
Lampiran 17. dan F untuk ruggenness test TDF oat (78%) metode Asp (95%) H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.03 + ( 1)0.1 + = 0.95 11.75 11.84 0.95 1 + 1 = 0.1 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 9.95 dan -9.95 5. Kesimpulan : rataan TDF oat (78%) metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan SDF wortel metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.03 = 0.09 s 0.1 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 405. 851 5. Kesimpulan : SD TDF oat (78%) metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD TDF oat metode Asp (95%) 57
Lampiran 18. dan F untuk ruggenness test TDF wortel (78%) metode Asp (95%) H0 : µ 1 = µ Hi : µ 1 µ. Hipotesis uji = uji t sp 1 n x x + 1 n sp = (n 1)s + (n 1)s n + n sp = ( 1)0.04 + ( 1)0.1 + = 0.95 4.00 4.30 0.95 1 + 1 = 0.406 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau > -t α/ (v) t tabel = 9.95 dan -9.95 5. Kesimpulan : rataan TDF wortel (78%) metode AOAC tidak berbeda nyata dengan rataan SDF wortel metode Asp Uji F H0 : s 1 = s Hi : s 1 s. Hipotesis uji = uji F F hitung = s = 0.04 = 0.04 s 0.1 H0 diterima bila F hitung < F α (v1, v) F tabel = 405. 851 5. Kesimpulan : SD TDF wortel (78%) metode AOAC tidak berbeda nyata dengan SD metode Asp (95%) 58
Lampiran 19. Data serat pangan sampel dengan metode AOAC dan Asp Sampel Ulangan AOAC TDF (%) IDF (%) SDF (%) TDF (%) Asp IDF (%) Kacang Kedelai 1 59.37 57.47 1.7 35.6 30.43 4.37 SDF (%) 59.59 57.74 1.30 35.61 30.48 4.39 3 59.34 57.6 1.34 35.7 30.36 4.35 4 59.43 57.84 1.3 35.47 30.05 4.44 5 59.43 57.47 1.9 35.53 30.61 4.8 6 59.55 57.51 1.3 35.81 30.6 4.33 7 59.54 57.31 1.31 35.69 30.08 4.34 8 59.39 57.71 1.3 35.07 30.8 4.36 9 59.63 58.11 1.9 35.65 30.75 4.38 59.4 57.69 1.30 35. 30.43 4.38 Rata-rata 59.4 57.65 1.31 35. 30.43 4.36 Standar Deviasi 0. 0.3 0.0 0.3 0.5 0.04 RSD 0.17 0.39 1.55 0.66 0.84 0.9 RSD R 1.08 1.09 1.9 1.17 1.0 1.60 Sampel Ulangan AOAC TDF (%) IDF (%) SDF (%) TDF (%) Asp IDF (%) Kacang Tanah 1 1.57 11.48 0.90 1. 11.3 0.94 SDF (%) 1.3 11.49 0.94 1.18 11.7 0.87 3 1.55 11.48 0.8 1. 11.6 0.94 4 1.55 11.49 0.81 1.0 11.9 0.93 5 1.56 11.43 0.9 1. 11.8 0.94 6 1.48 11.49 0.88 1.7 11.34 0.96 7 1.49 11.50 0.8 1.1 11.31 0.90 8 1.47 11.51 0.94 1.15 11.9 0.96 9 1.49 11.49 0.8 1.9 11.30 0.89 1.46 11.47 0.95 1.0 11.7 0.94 Rata-rata 1.49 11.48 0.88 1. 11.9 0.93 Standar Deviasi 0.07 0.0 0.06 0.04 0.03 0.03 RSD 0.58 0.18 6.50 0.33 0. 3.37 RSD R 1.37 1.39.04 1.37 1.39.0 59
Sampel Ulangan AOAC TDF (%) IDF (%) SDF (%) TDF (%) Asp IDF (%) Oat 1 13.60 8.48.67 11.91 7.19.03 SDF (%) 13.67 8.43.71 11.84 7.34.09 3 13.77 8.46.66 11.88 7.18.04 4 13.50 8.51.69 11.84 7.6.00 5 13.53 8.45.68 11.77 7.36.01 6 13.71 8.46.66 11.6 7.34.01 7 13.68 8.47 1.77 11.95 7.7.01 8 13.53 8.48.69 11.94 7.34.07 9 13.80 8.46.7 11.87 7.8.0 13.63 8.41.67 11.8 7..05 Rata-rata 13.64 8.46.59 11.84 7.8.03 Standar Deviasi 0. 0.03 0.9 0. 0.07 0.03 RSD 0.74 0.34 11.11 0.81 0.93 1.45 RSD R 1.35 1.45 1.73 1.38 1.48 1.80 Sampel Ulangan AOAC TDF (%) IDF (%) SDF (%) TDF (%) Asp IDF (%) SDF (%) Wortel 1 3.59 9.08 13.88 4.37 9.65 14.73 3.76 9.04 13.90 4.15 9.51 14.67 3 3.68 9.31 13.9 4.43 9.4 14.48 4 3.80 9.09 13.96 4.35 9.5 14.30 5 3.79 9.0 13.88 3.99 9.40 14.81 6 3.68 9.3 13.85 4.4 9.63 14.69 7 3.67 9.7 13.83 4.44 9.5 14.77 8 3.56 9.31 13.76 4.7 9.51 14.64 9 3.65 9.6 13.87 4.05 9.65 14.60 3.77 9. 13.86 4.3 9.38 14.45 Rata-rata 3.69 9.19 13.87 4.30 9.50 14.61 Standar Deviasi 0.08 0. 0.05 0.1 0.13 0.16 RSD 0.35 0.91 0.39 0.8 0.90 1.09 RSD R 1.4 1.43 1.35 1.4 1.43 1.34 60
Lampiran 0. Data serat pangan ruggedness test Parameter Ulangan Kacang Kedelai Kacang Tanah Oat Wortel TDF (%) 1 35. 1.1 11.73 3.97 35.14 1.9 11.77 4.03 Rata-rata 35.1 1.0 11.75 4.00 Standar Deviasi 0.0 0.1 0.03 0.04 RSD 0.07 1.00 0.5 0.15 RSD R 1.17 1.37 1.38 1.4 61
Lampiran 1. Instruksi kerja analisis total serat pangan metode enzimatik gravimetri 1. Metode Rujukan 1.1 Analisis TDF (Asp, 001). Peralatan.1 Persiapan Sampel.1.1 Blender.1. Ayakan 40 dan 50 mesh. Analisis..1 Alat-alat gelas.. Neraca analitik..3 Mortar dan alu..4 Desikator..5 Crucible dengan celite (porositas no., Pyrex No. 3940, ASTM 40-60 µm, fritted, Gooch Type )..6 Pompa vakum..7 Tanur..8 Waterbath Shaker..9 ph meter.. Alat destilasi 3. Persiapan Sampel 3.1 Sampel Kering 3.1.1 Sampel kering dapat langsung diblender dan diayak hingga berukuran 40-50 mesh 3. Sampel Basah 3..1 Dikeringkan dengan oven pada suhu 5 o C selama 5 jam, kemudian diblender dan diayak hingga berukuran 40-50 mesh 3.3 Sampel Tinggi Lemak (> %) 3.3.1 Dicampurkan dalam 5 ml petroleum eter/0 g sampel selama satu jam sebanyak tiga kali ulangan 3.3. Dikeringkan dengan oven pada suhu 5 o C selama 5 jam, kemudian diblender dan diayak hingga berukuran 40-50 mesh 4. Analisis 4.1 Analisis dilakukan sebanyak dua ulangan (duplo) dan satu sampel blangko 4. Timbang sebanyak 1 g sampel (W), dengan keakuratan hingga 0.1 mg, dalam gelas piala 400 ml 4.3 Tambahkan 5 ml 0.1 M buffer fosfat ph 6.0 4.4 Tambahkan 0.1 ml larutan termamyl dan tutup gelas piala dengan alufo 4.5 Letakkan dalam waterbath shaker pada suhu 99 o C selama 15 menit, goyangkan secara perlahan setiap 5 menit 6
4.6 Tambahkan 0 ml akuades, dinginkan hingga mencapai suhu ruang, kemudian tepatkan nilai ph hingga mencapai ph 1.5 dengan menambahkan HCl 4 M 4.7 Tambahkan 0 mg pepsin, letakkan dalam waterbath shaker pada suhu 40 o C selama 60 menit dengan agitasi kontinyu 4.8 Tambahkan 0 ml akuades, kemudian tepatkan nilai ph hingga mencapai ph 6.8 dengan menambahkan NaOH 4.9 Tambahkan 0 mg pankreatin, letakkan dalam waterbath shaker pada suhu 40 o C selama 60 menit dengan agitasi kontinyu 4. Tepatkan nilai ph hingga mencapai ph 4.5 dengan menambahkan HCl 4 M 4.11 Tambahkan 80 ml etanol 95% yang telah dipanaskan sebelumnya hingga suhunya 60 o C (volume diukur setelah pemanasan) 4.1 Inkubasi pada suhu kamar selama 60 menit agar terbentuk endapan 4.13 Saring endapan menggunakan crucible yang telah diketahui bobot keringnya (W cru ) 4.14 Cuci residu dengan x ml akuades, x ml etanol 95%, dan x ml aseton 4.15 Keringkan pada suhu 5 o C hingga berat tetap (sekitar 1 jam), dinginkan dalam desikator dan ditimbang (W res ) 4.16 Satu ulangan sampel diletakkan dalam tanur 55 o C selama minimal 5 jam, didinginkan dalam desikator, dan ditimbang (W abu ) 4.17 Satu ulangan sampel dihitung kadar protein menggunakan metode Kjeldahl (W pro ) 4.18 Sampel blanko digunakan untuk mengetahui berat kontaminan yang berasal dari reagen dan enzim (W b ) 5. Perhitungan Kadar Serat Pangan Rumus : TDF (%) = [(W res W pro W abu W b ) / W] x 0 W = Bobot sampel (g) W res W pro W abu W b = Bobot residu (g) = Bobot protein dalam residu (g) = Bobot abu dalam residu (g) = Blanko (g) Satuan akhir kadar serat pangan = % 63
Lampiran. Instruksi kerja analisis serat pangan tidak larut dan larut metode enzimatik gravimetri 1. Metode Rujukan 1.1 Analisis IDF dan SDF (Asp, 001). Peralatan.1 Persiapan Sampel.1.1 Blender.1. Ayakan 40 dan 50 mesh. Analisis..1 Alat-alat gelas.. Neraca analitik..3 Mortar dan alu..4 Desikator..5 Crucible dengan celite (porositas no., Pyrex No. 3940, ASTM 40-60 µm, fritted, Gooch Type )..6 Pompa vakum..7 Tanur..8 Waterbath Shaker..9 ph meter.. Alat destilasi 3. Persiapan Sampel 3.1 Sampel Kering 3.1.1 Sampel kering dapat langsung diblender dan diayak hingga berukuran 40-50 mesh 3. Sampel Basah 3..1 Dikeringkan dengan oven pada suhu 5 o C selama 5 jam, kemudian diblender dan diayak hingga berukuran 40-50 mesh 3.3 Sampel Tinggi Lemak (> %) 3.3.1 Dicampurkan dalam 5 ml petroleum eter/0 g sampel selama satu jam sebanyak tiga kali ulangan 3.3. Dikeringkan dengan oven pada suhu 5 o C selama 5 jam, kemudian diblender dan diayak hingga berukuran 40-50 mesh 4. Analisis 4.1 Analisis dilakukan sebanyak dua ulangan (duplo) untuk IDF dan duplo untuk SDF, serta satu sampel blangko 4. Timbang sebanyak 1 g sampel (W), dengan keakuratan hingga 0.1 mg, dalam gelas piala 400 ml 4.3 Tambahkan 5 ml 0.1 M buffer fosfat ph 6.0 4.4 Tambahkan 0.1 ml larutan termamyl dan tutup gelas piala dengan alufo 4.5 Letakkan dalam waterbath shaker pada suhu 99 o C selama 15 menit, goyangkan secara perlahan setiap 5 menit 64
4.6 Tambahkan 0 ml akuades, dinginkan hingga mencapai suhu ruang, kemudian tepatkan nilai ph hingga mencapai ph 1.5 dengan menambahkan HCl 4 M 4.7 Tambahkan 0 mg pepsin, letakkan dalam waterbath shaker pada suhu 40 o C selama 60 menit dengan agitasi kontinyu 4.8 Tambahkan 0 ml akuades, kemudian tepatkan nilai ph hingga mencapai ph 6.8 dengan menambahkan NaOH 4.9 Tambahkan 0 mg pankreatin, letakkan dalam waterbath shaker pada suhu 40 o C selama 60 menit dengan agitasi kontinyu 4. Tepatkan nilai ph hingga mencapai ph 4.5 dengan menambahkan HCl 4 M 4.11 Saring endapan menggunakan crucible yang telah diketahui bobot keringnya (W cru ), tampung dan pisahkan larutan (SDF), sementara endapan yang diperoleh dilanjutkan ke tahap 4.14 sebagai residu IDF 4.1 Tambahkan 80 ml etanol 95% yang telah dipanaskan sebelumnya hingga suhunya 60 o C (volume diukur setelah pemanasan) ke dalam larutan (SDF) 4.13 Inkubasi pada suhu kamar selama 60 menit agar terbentuk endapan SDF dan dilanjutkan ke tahap 4.14 sebagai residu SDF 4.14 Cuci residu dengan x ml akuades, x ml etanol 95%, dan x ml aseton 4.15 Keringkan pada suhu 5 o C hingga berat tetap (sekitar 1 jam), dinginkan dalam desikator dan ditimbang (W res ) 4.16 Satu ulangan sampel diletakkan dalam tanur 55 o C selama minimal 5 jam, didinginkan dalam desikator, dan ditimbang (W abu ) 4.17 Satu ulangan sampel dihitung kadar protein menggunakan metode Kjeldahl (W pro ) 4.18 Sampel blanko digunakan untuk mengetahui berat kontaminan yang berasal dari reagen dan enzim (W b ) 5. Perhitungan Kadar Serat Pangan Rumus : IDF (%) dan SDF (%) = [(W res W pro W abu W b ) / W] x 0 W = Bobot sampel (g) W res W pro W abu W b = Bobot residu (g) = Bobot protein dalam residu (g) = Bobot abu dalam residu (g) = Blanko (g) Satuan akhir kadar serat pangan = % 65