SKRIPSI BADI BAKRAH PASSAMULA STUDI INAKTIVASI PENGAWET KLOROBUTANOL 0,5% b/v PADA SEDIAAN INJEKSI DIFENHIDRAMIN HCl DOSIS GANDA DENGAN METODE PENGENCERAN PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2013
ii
iii
RINGKASAN STUDI INAKTIVASI PENGAWET KLOROBUTANOL 0,5% b/v PADA SEDIAAN INJEKSI DIFENHIDRAMIN HCl DOSIS GANDA DENGAN METODE PENGENCERAN Sediaan injeksi dibagi menjadi dua yaitu dosis tunggal dan dosis ganda. Sediaan dosis ganda dipersyaratkan steril selama 28 hari sejak penusukan pertama. Dimana dalam penggunaanya rentan terkontaminasi adanya mikroba karena penggunaanya yang berulang-ulang maka perlu dilakukan uji sterilitas pada sediaan. Sterilitas pada sediaan injeksi sangat penting karena cairan tersebut langsung berhubungan dengan cairan dan jaringan tubuh yang merupakan tempat infeksi yang dapat terjadi dengan mudah. Salah satu usaha yang dapat dilakukan untuk menjaga sterilitas sediaan dosis ganda dengan penambahan pengawet. Oleh karena itu, sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah sediaan injeksi difenhidramin dosis ganda bervolume kecil (15 ml) dengan penambahan zat pengawet klorobutanol 0,5% b/v. Menurut Suplemen 1 Farmakope Indonesia edisi IV, bahwa jika bahan uji mempunyai aktivitas antimikroba, lakukan uji setelah dinetralisasi dengan bahan penetral yang sesuai atau dengan cara mengencerkan dalam sejumlah media yang cukup. Tujuan dilakukannya penelitian ini yaitu untuk mengetahui tingkat pengenceran yang dibutuhkan untuk menginaktivasi pengawet klorobutanol 0,5% b/v yang dijadikan pedoman untuk melakukan uji sterilitas sediaan dosis ganda yang memenuhi persyaratan. Uji ini dilakukan dengan suatu metode yakni pengenceran sediaan dalam sejumlah media yang cukup dengan berbagai perbandingan. Untuk menghilangkan pengaruh daya antibakteri dan antifungi yang ditambahkan pada sediaan, dilakukan pengenceran sediaan dengan aqua pro injeksi dengan perbandingan 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, dilakukan replikasi sebanyak 3 kali kemudian diamati selama 14 hari. Kemudian dilanjutkan dengan dilakukan uji sterilitas sampel sebanyak 7 vial dan diamati selama 14 hari. Sebelum dilakukan pengujian inaktivasi dan pengujian sterilitas, dilakukan kontrol lingkungan Laminar Air Flow. Kontrol lingkungan yang dilakukan meliputi kontrol lingkungan Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) sebelum dan saat pengujian dengan menggunakan nutrien broth agar, untuk mengontrol kondisi LAFC secara umum diantaranya filter udara, serta cabinet memenuhi persyaratan kondisi aseptis untuk meyakinkan bahwa kondisi ruangan tidak terkontaminasi. Untuk kontrol pembanding digunakan media Thioglikolat dengan bakteri Pseudomonas aeruginosa dan media Kasamino dengan jamur Candida albicans untuk uji fertilitas, sedangkan untuk uji sterilitas digunakan media Thioglikolat dan media Kasamino tanpa penambahan bakteri. Hasil penelitian yang diperoleh adalah uji inaktivasi pengawet klorobutanol 0,5% b/v pada sediaan injeksi difenhidramin HCl dosis ganda didapatkan tingkat perbandingan untuk media thioglikolat 1:4 dan kasamino 1:4 serta untuk uji sterilitas didapatkan hasil bahwa sediaan steril. ii
KATA PENGANTAR Segala puji bagi Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan karunia atas seluruh hambanya. Akhirnya skripsi ini dapat terselesaikan dengan sebaikbaiknya. Sholawat serta salam semoga senantiasa tercurah kepada rasulullah SAW, kesejahteraan semoga terlimpah kepada keluarga, sahabat serta orangorang beriman. Dengan terselesainya skripsi yang berjudul STUDI INAKTIVASI PENGAWET KLOROBUTANOL 0,5% b/v PADA SEDIAAN INJEKSI DIFENHIDRAMIN HCl DOSIS GANDA DENGAN METODE PENGENCERAN ini, perkenankanlah saya mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada : 1. Drs. Sugiayartono, MS., Apt sebagai Pembimbing I dan Drs. Arina Swastika Maulita, S.Farm, Apt. sebagai Pembimbing II yang dengan tulus ikhlas dan penuh kesabaran, membimbing dan selalu meluangkan waktu maupun dorongan moral memberi arahan-arahan terbaik kepada saya sehingga skripsi ini dapat diselesaikan. 2. Drs. H. Achmad Inoni, Apt dan Enggrid Juni Astuti, S. Farm, Apt. sebagai Tim Penguji yang memberikan saran, masukan, dan kritik yang membangun terhadap skripsi yang telah saya kerjakan. 3. Tri Lestari Handayani, M.Kep., Sp. Mat., selaku Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang. 4. Dra. Uswatun Chasanah, Apt., selaku Ketua Program Studi Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang. 5. Sovia Aprina Basuki, M.Si.,Apt selaku kepala laboratorium program studi farmasi terima kasih atas bimbingan dan saran yang telah beliau berikan. 6. Ika Ratna Hidayati, S.farm., Apt sebagai Dosen Wali yang telah memberikan bimbingan dan nasehat. 7. Seluruh staf pengajar Program Studi Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang yang telah mendidik dan mengajarkan ilmu pengetahuan selama saya mengikuti program sarjana. ii
8. Para laboran Laboratorium Formulasi sedian steril, Laboratorium Kimia, Laboratorium Sediaan farmasi, Laboratorium biomedik Terpadu II: Mbak Susi, Mas ferdi, Mbak Fat yang banyak membantu saya. 9. Ayahandaku Burhan dan Almarhum ibuku Marsiyah tercinta. Terimakasih banyak atas kasih sayang, kesabaran, keikhlasan, nasehat, dukungan moral maupun materi dan do a yang telah diberikan. Semoga kalian diberikan kebehagiaan oleh Allah SWT. 10. Keluaga besarku Ibu Syamsiah dan Alm. Bapak Khairuddin AK, Bibi Hendun, Om Muhklis, Om Lim, Om Taufik, Ari Tarmizi, Ismi Aprilia, Uci Khairiah dan Nenekku tercita. Terimakasih banyak atas kasih sayang, kesabaran, keikhlasan, nasehat, dukungan moral maupun materi dan do a yang telah diberikan. 11. Teman-teman skripsi Steril: Bro hendra, Dude Rhima, Mak Citra, Dude Sulis, Rizka, Amina pinkpink, Kiki. Terimakasih banyak atas semangat, kerjasama, saran, kritik, dan masukannya. Kalian keluarga kecilku. 12. Sahabat-sahabatku Imank, Fahri, Charlie, Novan, Davi, Gunawan, Khair, Eka, Pute, Aisyah. Terimakasih telah menjadi keluarga baru yang menemani dan membantu belajar, memberi semangat dan dukungan. 13. Sahabat-sahabat kost mertojoyo blok L nomor 1 : Benga (Adit), Abol (Anugrah), Koek (Ary), Ije (Jemny), Omar, Ori, Bang Zul, Razky, Ardi, Uki. Terima kasih atas dukungan serta doa yang kalian berikan. 14. Teman-teman angkatan 2009 Farmasi UMM terimakasih atas persahabatan kita selama 4 tahun ini. Semoga kita tetap dekat seperti keluarga. 15. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu-persatu, terimaksih atas dukungan, semangat, dan doa yang diberikan dalam penyelesaian skripsi ini Akhir kata, semoga Allah S.W.T. membalas kebaikan Bapak, Ibu, dan Saudara sekalian. Semoga skripsi ini dapat memberikan sumbangan bagi perkembangan ilmu pengetahuan dalam bidang kefarmasian bagi kita semua. Amin. Malang, Juni 2013 Badi Bakrah Passamula iii
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i LEMBAR PENGESAHAN... ii LEMBAR PENGUJIAN... iii KATA PENGANTAR... iv RINGKASAN... vi ABSTRAK...... vii DAFTAR ISI... ix DAFTAR TABEL... xii DAFTAR GAMBAR... xiii DAFTAR LAMPIRAN... xiv BAB I PENDAHULUAN... 1 1.1 Latar Belakang... 3 1.2 Rumusan Masalah... 3 1.3 Tujuan Penelitian... 3 1.4 Manfaat Penelitian... 3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA... 5 2.1 Tinjauan Tentang Sediaan Injeksi... 5 2.1.1 Definisi Sediaan Injeksi... 5 2.1.2 Cara Pemberian Obat Parenteral... 5 2.1.3 Karekteristik khusus dan Persyaratan Sediaan Injeksi... 8 2.1.4 Keuntungan dan Kelemahanpemberian Obat Secara Parenteral... 8 2.1.5 Peryaratan Sediaan Parenteral... 10 2.1.6 Wadah Sediaan Injeksi. 10 2.2 Tinjauan Difenhidramin HCl... 11 2.2.1 Tinjauan Sifat Fisiko Kimia Difenhidramin HCl... 11 2.2.2 Tinjauan Farmakologi Difenhidramin HCl... 12 2.3 Tinjauan Pengawet... 14 2.4 Tinjauan Pembawa (Water for injection)... 17 2.5 Tinjauan Tentang Sterilisasi... 17 ii
2.5.1 Definisi Sterilisasi... 17 2.5.2 Alasan Melakukan Sterilisasi... 17 2.5.3 Metode Sterilisasi Uap (Lembap Panas)... 18 2.5.4 Teknik Aceptik... 18 2.6 Tinjauan Tentang Mikrobiologi... 20 2.6.1 Jenis Mikroorganisme yang Umum Terdapat Sebagai Kontaminan... 20 2.6.2 Faktor faktor yang Mempengaruhi Pertumbuhan Mikroorganisme... 22 2.6.3 Bahan Penghambat Pertumbuhan... 25 2.6.4 Sumber-Sumber Kontaminasi Mikroorganisme... 25 2.6.5 Mikroorganisme Percobaan... 26 2.7 Tinjauan Tentang Uji Inaktivasi Pengawet... 28 2.8 Tinjauan Tentang Uji Sterilitas... 28 2.8.1 Media untuk Uji Sterilitas... 28 2.8.2 Pengambilan Sampel untuk Uji Sterilitas... 31 2.8.3 Prosedur Umum... 31 2.8.4 Metode Uji Sterilisasi... 33 2.8.5 Kontrol/Uji Kesesuaian dalam Uji Sterilitas... 34 2.8.6 Pengamatan dan Penafsiran Hasil Uji.. 35 BAB III KERANGKA KONSEPTUAL... 37 3.1 Uraian Kerangka Konseptual... 37 3.2 Skema Kerangka Konseptual... 39 BAB IV METODOLOGI PENELITIAN... 40 4.1 Desain Penelitian... 40 4.2 Bahan dan Alat yang Digunakan... 40 4.2.1 Bahan... 40 4.2.2 Alat... 40 4.3 Prosedur Penelitian... 41 4.3.1 Sterilisasi Alat. 41 4.3.2 Penyiapan Laminar Air Flow Cabinet (LAFC)... 43 4.3.3 Kontrol lingkungan Laminar Air Flow..... 43 iii
4.3.4 Formulasi... 43 4.3.5 Penyiapan Media.. 44 4.3.6 Uji Fertilitas Media(control positif)..... 45 4.3.7 Uji Sterilitas Media (control negative). 45 4.3.8 Uji Inaktivasi Pengawet... 45 4.3.9 Uji Sterilitas Sampel.. 47 BAB V HASIL PENELITIAN... 49 5.1 Hasil Uji Efektivitas Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) Sebelum dan Saat Digunakan... 50 5.2 Hasil Uji Fertilitas Media (Kontrol Positif)... 52 5.3 Hasil Uji Sterilitas Media (Kontrol Negatif)... 52 5.4 Hasil Pemeriksaan Pendahuluan (Pemeriksaan Fisik Sediaan)... 53 5.5 Hasil Uji Inaktivasi Pengawet Klorobutanol... 53 5.6 Hasil Uji Sterilitas Sampel... 58 BAB VI PEMBAHASAN... 59 BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN... 64 7.1 Kesimpulan... 64 7.2 Saran... 64 DAFTAR PUSTAKA... 65 LAMPIRAN... 67 iv
DAFTAR PUSTAKA Agoes, G., 2009. Sediaan Farmasi Steril. Seri Farmasi Industri 4, Bandung: ITB, hal 13-16. Ansel, H.C., 2005. Pengantar Sediaan Farmasi (Penerjemah Farida Ibrahim). Edisi keempat. Jakarta : Penerbit Universitas Indonesia, hal 399, 404-405, 411-418, 423, 426, 433. Badan Pengawas Obat dan Makanan., 2006. Pedoman Cara Pembuatan Obat yang Baik, Jakarta :Badan POM, hal : 126 129. Buchanan, EC., Schneider PJ., 2010. Peracikan Sediaan Steril, edisi 2. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC, hal. 17 18, 260. Denyer, P.S., Rosamund, M.B., 2007.Guide to Microbiological Control in Pharmaceutical and Medical Devices. 2 nd Edition. New York : CRC Press, pp : 92 95. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.,1979. Farmakope Indonesia, edisi III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI, hal. 889. Departemen Kesehatan Republik Indonesia., 1995. Farmakope Indonesia, edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI, hal xiviii, 330-331. Departemen Kesehatan Republik Indonesia., 2009. Suplemen 1 Farmakope Indonesia, edisi IV. Jakarta: Departemen kesehatan RI, hal 1512 1519. Gunawan SG.,2007. Farmakologi Dan Terapi, edisi 5(Cetak ulang dengan perbaikan, 2008). Jakarta: Departemen Farmakologi dan Terapeutik FK-UI, hal 273 281. Gunn s dan Cooper, 1975., 1975. Dispensing For Pharmaceutical Student.Twelfth Edition. Pitman Medical, pp : 300 549. Hadioetomo, R.S., 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta : PT Gramedia Pustaka Utama, hal 102 140. Jawetz, E., Melnick J.L, Adelberg E.A., 2005.Review of Medical Microbiology, 14 th edition. Lange Medical Publications, Los Altos-California, pp 284-425. Katzung, Betram.G., 1998. Farmakologi Dasar dan Klinik, edisi VI. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC, hal : 271 65
66 Lachman. L, Lieberman H.A, Kanig. J.L.,1994. Teori dan Praktek Farmasi Industri. Edisi ketiga. Jakarta: Universitas Indonesia Press, hal 1292. Lukas, S., 2006. Formulasi Steril. Yogyakarta: Andi Yogyakarta, hal 25, 30, 37. Notoatmodjo, S, Dr., 2005. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta: Rineka Cipta, hal. 156. Pratiwi Sylvia T., 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Erlangga, hal. 2. Rowe C Raymond, dkk., 2009. Handbook of Pharmaceutical Excipients, sixth edition. London: Pharmaceutical Press, pp. 56 58. Staf Pengajar Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia., 1993. Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran, edisi revisi, Jakarta :Binarupa Aksara Sweetman, SC., 2009. Martindale, Thirty-sixth edition. London: Pharmaceutical Press. pp: 577-578. Tim Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya., 2003. Bakteriologi Medik. Malang: Bayumedia Publishing. hal 12-13, 31 34. Turco, S., 1979. Sterile Dosage Forms.2 nd Edition.Philadelphia : LEA & FEBIGER, hal 11. Voight, R., 1995. Buku Ajar Teknologi Farmasi. Edisi V. Yogyakarta :Gadjah Mada University Press, hal 764-769.
DAFTAR TABEL Tabel Halaman II.1 Klarifikasi Ruangan Bersih... 19 II.2 Perlengkapan dan Kandungan Kuman dari Manusia... 19 II.3 Volume Pengambilan Sampel... 31 II.4 Jumlah Volume Bahan dan Media untuk Bahan Cair... 32 II.5 Jumlah Minimum Bahan yang di Uji Sesuai dengan Jumlah Bahan dalam Bets..... 33 II. 6 Jalur Mikroba Uji yang Sesuai untuk Penggunaan Uji Fertilitas dan Uji Validasi... 35 V.I Hasil Uji Efektivas Laminar Air Flow Sebelum dan Saat Pengujian Inaktivasi... 50 V.2 Hasil Uji Efektivas Laminar Air Flow Sebelum dan Saat PengujianSterilitas... 50 V.3 Hasil Uji Fertilitas Media (Kontrol Positif)... 52 V.4 Hasil Uji Sterilitas Media (Kontrol Negatif)... 53 V.5 Hasil Pemeriksaan Pendahuluan... 53 V.6 Hasil Pengamatan Uji Inaktivasi Sampel Sediaan Difenhidramin HCl dengan Pengawet Klorobutanol 0,5% b/v Setelah Dilakukan Pengenceran pada Media Thioglikolat... 55 V.7 Hasil Pengamatan Uji Inaktivasi Sampel Sediaan Difenhidramin HCl dengan Pengawet Klorobutanol 0,5% b/v Setelah Dilakukan Pengenceran pada Media Kasamino... 56 V.8 Hasil Uji Sterilitas Sampel... 58 ii
DAFTAR GAMBAR Gambar Halaman 2.1 Struktur Kimia Difenhidramin HCl... 11 2.2 Struktur Kimia Klorobutanol... 14 2.3 Kurva Fase Pertumbuhan Mikroorganisme... 21 3.1 Skema Kerangka Konseptual... 39 4.1 Skema Kerangka Operasional... 48 5.1 Letak Media Agar pada Laminar Air Flow Cabinet Sebelum Digunakan... 51 5.2 Letak Media Agar pada Laminar Air Flow Cabinet Saat Digunakan... 51 iii
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran Halaman 1 Daftar Riwayat Hidup... 67 2 Surat Pernyataan Bebas Plagiasi... 68 3 Sertifikat Klorobutanol... 69 4 Sertifikat Difenhidramin Hidroklorida... 70 5 Laporan Hasil Uji Isolat Jamur Candida albicans... 71 6 Laporan Hasil Uji Isolat Bakteri Pseudomonas aeruginosa... 72 7 Perhitungan Bahan Sediaan Injeksi Difenhidramin HCl Dosis Ganda dengan Pengawet Klorobutanol 0.5 % b/v... 73 8 Foto Hasil Uji Fertilitas dan Uji Sterilitas Media... 74 9 Foto Jumlah Koloni Bakteri dan Jamur yang Ditambahkan pada Media yang Digunakan Sebagai Kontrol Positif... 75 10 Foto hasil Pemeriksaan Pendahuluan (Pemeriksaan Fisik Sediaan)... 76 11 Foto Hasil Kontrol LAFC Sebelum Digunakan... 77 12 Foto Hasil Kontrol LAFC Saat Digunakan... 78 13 Foto Hasil Uji Inaktivasi Klorobutanol 0,5% b/v... 80 14 Foto Hasil Uji sterilitas sediaan difenhidramin HCl Dosis Ganda Pengujian Sterilitas... 84 15 Foto Alat dan Bahan yang Digunakan... 86 iv