SKRIPSI ANNISA LUTFIANA WIBOWOO

Transkripsi

1 SKRIPSI ANNISA LUTFIANA WIBOWOO EFEKTIVITAS PENGAWET BENZIL ALKOHOL 1,5% v/v PADA SEDIAAN INJEKSI DIFENHIDRAMIN HIDROKLORIDA DOSIS GANDA (Terhadap Bakteri Escherichia coli) PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2016

2 Lembar Pengesahan ii

3 iii

4 KATA PENGANTAR Puji syukur Alhamdulillah penulis panjatkan kehadirat Allah SWT karena berkat rahmat dan karunia-nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul EFEKTIVITAS PENGAWET BENZIL ALKOHOL 1,5 % v/v PADA SEDIAAN INJEKSI DIFENHIDRAMIN HIDROKLORIDA DOSIS GANDA (Terhadap Bakteri Escherichia coli) untuk memenuhi salah satu persyaratan akademik dalam menyelesaikan Program Sarjana Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang. Sholawat beserta salam semoga senantiasa tercurahkan kepada Nabi Muhammad SAW, amin. Dalam penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan, bimbingan serta dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu penulis menyampaikan rasa terima kasih yang sebesar-besarnya kepada: 1. Bapak Yoyok Bekti P, M.kep, Sp.Kom, selaku Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang 2. Ibu Nailis Syifa,S.Farm,M.Sc,Apt selaku ketua program studi Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang. 3. Bapak Drs. Sugiyartono,MS., Apt sebagai pembimbing I dan Ibu Dian Ermawati, M.Farm.,Apt sebagai pembimbing II yang tulus ikhlas meluangkan waktunya untuk membimbing dengan sabar dan memberikan arahan terbaik kepada saya sehingga tugas akhir ini dapat diselesaikan dengan baik. 4. Bapak Drs. H. Achmad Inoni, Apt dan Ibu Arina Swastika M., S.Farm.,Apt sebagai penguji yang telah memberikan saran, masukan, dan kritik yang membangun terhadap skripsi yang telah saya kerjakan. 5. Ibu Sendi Lia Yunita.S.Farm.,Apt selaku Sekprodi dan biro skripsi jurusan farmasi, terimakasih telah membantu untuk persyaratan selama seminar proposal dan seminar hasil, sehingga dapat berjalan dengan lancar. 6. Seluruh staf pengajar program studi Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang yang telah mendidik, mengajar dan memberikan ilmu pengetahuan selama saya menjalani program studi sarjana. 7. Staf laboran Laboratorium Teknologi Farmasi Sediaan Steril Mbak Susi, Mas Ferdi, dan laboratorium Biomedik Fakultas kedokteran Pak Joko yang telah membantu saya dalam melaksanakan penelitian dengan lancar. 8. Kepada bpk komandanku Supran Prabowo dan Bunda Persitku Astutik terimakasih selalu memberikan motivasi serta dukungan baik berupa materi dan do a tiada henti. Orang tua yang telah mendidik dan selalu memberikan kasih sayang yang tak pernah berujung, selalu menjadi panutan untuk putrinya, dan iv

5 untuk saudaraku terimakasih atas dukungannya selama ini buat dek Widya Nurul Fadila dan Kartika Novita sari, aku sayang kalian. 9. Untuk teman farmasi angkatan 2011 seperjuangan khususnya kelas E terimakasih atas kerjasama serta dukungannya tetap kompak sakoplek. 10. Teman-teman satu perjuangan skripsi steril Richa, Mbak Mega, dan Dewi (dedew). Terimakasih untuk kerjasamanya dan berjuang bersama-sama untuk menyelesaikan penelitian skripsi hingga akhir. 11. Sahabat-sahabat tercinta Rini Rahma (elung), Richa Elfira (bebeb), Inggar (momo), Rahil Bunga (neng dindud), Aini Zakiya h (neng aintul), Amelia Indri (Mbak Bro), Suka duka bersama kalian, terimakasih kalian telah menjadi sahabat saya yang terbaik, tetap selalu jaga silaturahmi kita aku sayang kalian. 12. Untuk teman-temanku kkn 29 Pagak Malang, teman suka duka selama kkn semoga tetap menjaga silaturahmi dengan baik, aku sayang kalian. Akhir kata, Semoga Allah SWT membalas kebaikan Bapak, Ibu, dan saudara sekalian. Semoga skripsi ini dapat memberikan sumbangan bagi perkembangan ilmu pengetahuan dan kita semua. Amin. Terimakasih. Malang, 6 Februari 2016 Annisa Lutfiana Wibowo v

6 RINGKASAN EFEKTIVITAS PENGAWET BENZIL ALKOHOL 1,5% v/v PADA SEDIAAN INJEKSI DIFENHIDRAMIN HIDROKLORIDA DOSIS GANDA (Terhadap Bakteri Escherichia coli) Sediaan injeksi merupakan sediaan steril berupa larutan, emulsi, suspensi atau serbuk yang harus dilarutkan atau disuspensikan sebelum digunakan secara parenteral, salah satu wadah yang biasa digunakan yaitu dosis ganda dimana pemakaian berulang sangat rentan terkontaminasi bakteri, sehingga dapat menyebabkan sediaan tidak lagi memberikan efek farmakologi. Untuk meminimalkan kontaminasi mikroba dan untuk menjaga kesterilan dari sediaan diperlukan penambahan pengawet. Dalam penelitian ini menggunakan Benzil alkohol adalah salah satu pengawet yang bisa digunakan untuk sediaan dosis ganda ( multiple dose) dengan kadar 1,5% v/v. Benzil alkohol digunakan untuk sediaan optalmik atau parenteral sebagai pengawet antimikroba sampai dengan konsentrasi (1% -2%). Benzil alkohol bersifat bakteriostatik dan digunakan sebagai pengawet antimikroba melawan bakteri, jamur, kapang dan khamir. Aktivitas antimikroba benzil alkohol optimum terjadi pada ph dibawah 5, aktivitas sedikit ditunjukkan diatas ph 8. Pengawet benzil alkohol banyak digunakan dalam formulasi farmasi terutama pada sediaan injeksi, benzil alkohol bekerja dengan cara merusak mikroorganisme, terhadap toksisitas primernya, artinya diarahkan kembali pada kerja racun sel, yang dikembangkan pada dinding sel atau juga pada bagian dalam sel. Kadar toksik dalam benzil alkohol yaitu diatas 2%, Dimana pada suatu penelitian menunjukkan konsentrasi pada kadar 3% atau lebih besar benzil alkohol menyebabkan efek samping mengiritasi pada kulit. Sedangkan pada percobaan konsentrasi 0,65% benzil alkohol tidak menghasilkan iritasi pada kulit. Sehingga apabila kadar meningkat lebih dari 2% maka akan terjadi toksisitas sedangkan untuk kadar menurun dibawah 2% tidak menimbulkan toksisitas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas pengawet benzil alkohol terhadap sediaan difenhidramin hidroklorida terhadap bakteri uji Escherichia coli. Setiap tahap pengerjaan dilakukan secara aseptis yaitu dengan melakukan kontrol lingkungan terlebih dahulu dengan cara menguapkan tablet formaldehid dan melakukan uji kontrol lingkungan LAFC ( Laminar Air Flow Cabinet) dengan menggunakan media Nutrien Agar. Tahapan pengujian ini meliputi pembuatan sediaan, pembuatan kontrol uji, uji inaktivasi pengawet, uji sterilitas, dan tahap yang terakhir adalah uji efektivitas. Sebelum dilakukan uji sterilisasi yaitu melakukan uji inaktivasi dengan melakukan pengenceran dari beberapa tingkat dengan menggunakan Aqua Pro Injeksi steril dengan bertujuan untuk menghilangkan pengaruh pengawet yang terkandung pada sampel, media uji yang digunakan thioglikolat cair dan media kasamino menunjukkan hasil bahwa pada pengenceran 1:1 telah terjadi kekeruhan yang sama dengan kontrol positif. Sehingga dapat dikatakan berhasil, kemudian dapat dilanjutkan untuk uji sterilitas dengan menggunakan media thioglikolat ditambahkan bakteri Bacillus subtilis dan media kasamino ditambahkan jamur Candida albicans. Setelah dilakukan uji sterilitas dengan perbandingan 1:1 yang didapatkan hasil pada hasil uji inaktivasi pengawet, Hasil uji sterilitas sediaan injeksi difenhidramin HCl menunjukkan hasil Negatif yang artinya tidak ada kekeruhan maupun pertumbuhan mikroorganisme pada sediaan injeksi difenhidramin hidroklorida, yang berarti pada pembuatan sediaan injeksi dilakukan secara aseptis dan vi

7 steril. Kemudian dilakukan uji efektivitas, Pada uji efektivitas menggunakan standart McFarland yang digunakan sebagai pengendalian kepadatan suspensi bakteri yang digunakan untuk identifikasi dan uji kerentanan bakteri, untuk menentukan perkiraan konsentrasi sel pada suspensi atau larutan. Hasil perkiraan konsentrasi dalam rentang satuan cfu/ml. Metode standart McFarland dilakukan dengan metode visual dengan pembuatan menggunakan H2SO4 1% dan Bacl 1%. Masukkan kedalam tabung reaksi H2SO4 1% sebanyak 3 ml dan Bacl 1% sebanyak 3 ml kemudian kocok dan tutup rapat tabung reaksi, sesuai dengan ketetapan standart McFarland sebagai uji pembanding untuk membuat suspensi bakteri E.coli. Didapatkan hasil 10 8 cfu/ml dengan absorban 0,1. Inokulasikan masing-masing sampel dengan suspensi mikroba uji dengan menggunakan perbandingan 0,025 ml inokulum setara dengan 5 ml sampel. Setelah itu diambil 1 µl dengan menggunakan Loop Calibrated Transfer dan diratakan ke media agar. Kemudian diamati pada hari penyimpanan ke 0, 7, 14, dan 28 penelitian ini menggunakan 3 sampel sediaan injeksi dengan perlakuan yang sama. Hasil uji pengawet benzil alkohol pada sediaan difenhidramin hidroklorida tidak menunjukkan adanya pertumbuhan mikroba, kemungkinan bakteri mati karena dua hal yaitu karena bahan aktif difenhidramin hcl atau kemungkinan karena pengawet benzil alkohol. Kemudian dilakukan uji perbandingan yaitu dengan membuat sediaan difenhidramin hidroklorida tanpa bahan pengawet benzil alkohol di ruangan steril LAFC. Setelah itu dioleskan kedalam media cawan agar, dan diinkubasi selama 24 jam. Hasil penelitian terdapat pertumbuhan mikroorganisme pada media cawan sebar. Kemudian dilakukan perbandingan dengan hasil uji efektivitas sediaan yang menggunakan pengawet. Pada tabel terjadi penurunan logaritma dari log 1.0, maka dari data tabel diatas memenuhi syarat kriteria mikroorganisme dimana sediaan injeksi difenhidramin hidroklorida masuk dalam kategori 1 yang menjelaskan bahwa tidak kurang dari log 1.0 reduksi dari perhitungan awal pada hari ke 7, tidak kurang dari log 3.0 pada hari ke 14 dan tidak ada peningkatan pada hari ke 14 sampai hari ke 28. Sehingga dapat disimpulkan pada uji efektivitas bakteri mati hingga 100% dikarenakan pengawet benzil alkohol pada konsentrasi 1,5% v/v yang ditambahkan pada sediaan difenhidramin hidroklorida efektif digunakan. vii

8 DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i LEMBAR PENGESAHAN... ii LEMBAR PENGUJIAN... iii KATA PENGANTAR... iv RINGKASAN... vi ABSTRAK... viii DAFTAR ISI... x DAFTAR TABEL... xv DAFTAR GAMBAR... xvi DAFTAR LAMPIRAN...xvii DAFTAR SINGKATAN...xviii BAB I PENDAHULUAN Latar Belakang Masalah Rumusan Masalah Tujuan Penelitian Manfaat Penelitian... 5 BAB II TINJAUAN PUSTAKA Tinjauan Tentang Sediaan Injeksi Definisi Sediaan Injeksi Persyaratan Sediaan Injeksi Keuntungan dan Kelemahan Sediaan Injeksi Tinjauan Wadah dan Penutup Sediaan Dosis Ganda Persyaratan Penggunaan Vial Tinjauan tentang Sterilisasi Definisi Sterilisasi Sterilisasi Uap (Lembap Panas/Autoklaf) Sterilisasi Panas Kering Sterilisasi dengan Penyaringan Sterilisasi Gas Sterilisasi dengan Radiasi Pengionan viii

9 2.2.7 Tinjauan tentang Uji Sterilisasi Prosedur Umum Cara Membuka Wadah Pemilihan Spimen Uji dan Masa Inkubasi Metode Uji Sterilitas Prosedur Uji Inokulasi Langsung Penyaringan Membran Media Uji Sterilitas Pengambilan Sampel untuk Uji Sterilisasi Kontrol dalam Uji Sterilisasi Uji Fertilitas Media (Kontrol Positif) Kontrol Sterilitas Media (Kontrol Negatif) Penafsiran Hasil Uji Sterilitas Tinjauan Difenhidramin Hidroklorida Tinjauan Sifat Fisiko Kimia Difenhidramin Hidroklorida Farmakologi Difenhidramin Hidroklorida Tinjauan Efektivitas Bahan Pengawet Definisi Pengawet Tipe Pengawet Mekanisme Kerja Pengawet Tinjauan Pengawet Benzil Alkohol Identifikasi Benzil Alkohol Organoleptik ph Benzil Alkohol Konsentrasi Penghambat Minimum (MICs) Benzil alkohol Mekanisme Kerja Pengawet Benzil Alkohol Stabilitas dan Kondisi Penyimpanan Inkompatibilitas Toksisitas ix

10 2.7 Tinjauan tentang Mikrobiologi Faktor yang mempengaruhi Pertumbuhan Mikroorganisme Sumber-Sumber Kontaminasi Mikroorganisme Teknik Aseptik Mikroorganisme Uji Tinjauan Uji Efektivitas Pengawet Mikroba Kriteria Efektivitas Antimikroba Mikroba Uji Media Pembuatan Inokula Prosedur Metode Perhitungan Mikroba BAB III KERANGKA KONSEPTUAL Uraian Kerangka Konseptual Skema Kerangka Konseptual BAB IV METODE PENELITIAN Desain Penelitian Lokasi Penelitian Waktu Penelitian Sterilisasi Ruangan Pembuatan Sediaan Alat dan Bahan Alat Bahan Prosedur Pembuatan Sediaan Formulasi Prosedur Kerja Prosedur Penelitian Sterilisasi Alat Penyiapan Unit Laminar Air Flow Cabinet dan Memasukkan Semua Bahan dan Alat x

11 4.7.3 Kontrol Lingkungan diluar Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) Kontrol Ruangan Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) Uji Sterilitas Sediaan Injeksi Difenhidramin Hidroklorida Penyiapan Media Media Thioglycollate Media Kasamino Uji Fertilitas Media (Kontrol Positif) Uji Sterilitas Media (Kontrol Negatif) Uji Sterilitas Sediaan Injeksi Difenhidramin HCl Pemeriksaan Pendahuluan Perlakuan Pembukaan segel kemasan Inaktivasi Pengawet Inokulasi Sampel Uji Efektivitas Kontrol Lingkungan di luar dan di dalam LAFC Inokulasi Bakteri Uji Efektivitas Perlakuan Pembuatan Standar Serapan McFarland (E.coli) Cara Penggunaan Alat Colony Counter (Alat menghitung jumlah koloni mikroba) Skema Kerangka Operasional BAB V HASIL PENELITIAN Hasil Uji Kontrol diluar Lingkungan LAFC Hasil Uji Kontrol didalam LAFC sebelum pada Pembuatan Sediaan Hasil Kontrol LAFC pada saat pembuatan sediaan Hasil Uji Kontrol LAFC pada saat Inaktivasi Pengawet Hasil Uji Inaktivasi Pengawet Media Thioglikolat Hasil Uji Inaktivasi Pengawet Media Kasamino Hasil Uji kontrol didalam LAFC sebelum uji Sterilitas Sediaan xi

12 5.8. Hasil Uji kontrol diluar LAFC sebelum uji Sterilitas Sediaan Hasil Uji Kontrol LAFC pada saat Uji Sterilitas Hasil Uji Kontrol LAFC pada saat Uji Efektivitas Hasil Uji Fertilitas Media tioglikolat dan kasamino Kontrol Positif Hasil Uji Media Sterilitas tioglikolat dan kasamino Kontrol Negatif Hasil Uji Media Sterilitas tioglikolat dan kasamino Hasil Jumlah Awal Rata-Rata Mikroba Uji dalam cfu (Colony Counter) per ml Hasil Uji Efektivitas Pengawet Benzil Alkohol 1,5% pada Penyimpanan hari ke-0 sampai hari ke BAB VI PEMBAHASAN BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN xii

13 DAFTAR TABEL Tabel Halaman II.1 Jumlah Volume dan Media untuk Bahan Cair (Depkes RI, 1995) II.2 Jumlah Minimum yang digunakan untuk Tiap Media (Depkes RI, 2009) II.3 Jumlah Minimum Bahan yang Diuji sesuai dengan Jumlah Bahan Dalam Bets (Depkes RI, 2009) II.4 Volume Pengambilan Sampel (Depkes RI, 2009) II.5 Pengawet yang sering digunakan dalam Preparat Farmasi dalam sediaan Parenteral (Lukas, 2006) II.6 Konsentrasi Penghambat Minimum (MICs) Benzil Alkohol (Rowe et al, 2009) II.7 Klasifikasi Ruangan Bersih (Akers, 2005) II.8 Perlengkapan Kuman dan Kandungan Kuman dari Manusia (Voight, 1995) II.9 Kriteria Mikroba yang Diuji (Anonim, 2008) II.10 Kondisi Kultur Preparasi Inokula (Anonim, 2008) IV.1 Volume Pengambilan Sampel Uji V.1 Hasil Uji Kontrol diluar LAFC V.3 Hasil Uji kontrol pada saat pembuatan sediaan di LAFC V.4 Hasil Uji kontrol pada saat uji inaktivasi di LAFC V.5 Tabel Hasil Uji inaktivasi media thioglikolat V.6 Hasil Uji inaktivasi pengawet benzil alkohol media kasamino V.7 Hasil Uji kontrol didalam LAFC sebelum uji sterilitas V.8 Hasil Uji kontrol di luar LAFC sebelum uji sterilitas V.9 Hasil Uji kontrol LAFC saat uji sterilitas V.10 Hasil Uji Kontrol pada saat Uji Efektivitas V.11 Hasil Fertilitas media tioglikolat (kontrol positif) V.12 Hasil uji sterilitas thioglikolat dan kasamino kontrol negatif V.13 Hasil Uji sterilitas perbandingan 1:1 media tioglikolat dan kasamino V.14 Hasil Jumlah rata-rata awal mikroba V.15 Hasil Uji Efektivitas pengawet benzil alkohol... xiii

14 DAFTAR GAMBAR Gambar Halaman 2.1 Struktur Difenhidramin Hidroklorida (Depkes RI, 1995 & Sweetman, 2009) Struktur Benzil Alkohol (Rowe et al, 2009) Mikroskopik Candida albicans berbentuk bulat, lonjong, bulat lonjong (Jawetz, 2005) Mikroskopik Bacillus subtilis berbentuk batang (tebal maupun tipis), rantai maupun tunggal (Jawetz, 2005) Mikroskopik Escherichia coli pada pewarnaan gram bakteri berbentuk batang pendek (Jawetz, 2005) Struktur tubuh bakteri Escherichia coli (Jawetz, 2005) Letak Media Agar dalam Laminar air flow Cabinet (LAFC) Letak Media Agar dalam Laminar air flow Cabinet (LAFC) saat Uji Sterilitas Peletakan cawan petri di Luar LAFC sebelum Pengujian Peletakan cawan petri di dalam LAFC sebelum Pengujian Peletakan cawan petri didalam LAFC saat Pengujian xiv

15 DAFTAR LAMPIRAN Lampiran Halaman 1. Daftar Riwayat Hidup Surat Anti-Plagiasi Perhitungan Bahan Perhitungan Jumlah Inokulan Sertifikat Bahan Aktif Difenhidramin Hidroklorida Sertifikat Pengawet Benzil Alkohol Sertifikat Bakteri Escherichia coli Sertifikat Bakteri Bacillus subtilis Sertifikat Jamur Candida albicans Skema Kerja Pembuatan Sediaan Injeksi Skema Uji Fertilitas kontrol positif dan Uji sterilitas Kontrol negatif Skema Kerja Uji Inaktivasi Pengawet Skema Kerja Uji Sterilitas Sediaan Skema Kerja Pembuatan Bakteri (Escherichia coli) Skema Kerja Uji Efektivitas Pengawet Gambar Alat dan Bahan Gambar Hasil Uji Kontrol Ruang LAFC pada Pembuatan Sediaan, Uji Fertilitas Kontrol positif dan sterilitas kontrol negative, Uji Inaktivasi Pengawet Gambar Hasil Uji Kontrol Ruang LAFC pada Uji Sterilitas Sediaan Gambar Hasil Uji Kontrol Ruang LAFC pada Uji Efektivitas Pengawet Gambar Hasil Sediaan Injeksi Difenhidramin HCl dan Hasil ph Gambar Hasil Uji Fertilitas dan Uji Sterilitas Media Gambar Hasil Uji Inaktivasi Pengawet Thioglikolat dan kasamino Gambar Hasil Uji Sterilitas Sediaan Gambar Hasil Jumlah Mikroba Standar 0,5 McFarland (E.coli) Gambar Hasil Jumlah Mikroba Awal Gambar Hasil Uji Efektivitas Pengawet Hasil Perbandingan Sediaan Injeksi Difenhidramin HCl tanpa Menggunakan Pengawet Benzil Alkohol xv

16 APD API ATP ATCC BPOM RI cfu CNS Depkes RI E.Coli EPEC ETEC EIEC EHEC EAEC FDA HCL HEPA HPMC ISPE IV LAFC MICs MPN NA NaCl ph TSA TBUD UV USP WHO DAFTAR SINGKATAN : Alat Pelindung Diri : Aqua Pro Injection : Adenosin Trifosfat : American Type Culture Collection : Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia : Colony Forming Unit : Central Neuro System : Departemen Kesehatan Republik Indonesia : Escherichia coli : Enteropatogenik Escherichia coli : Enterotoksigenik Escherichia coli : Enteroinvansif Escherichia coli : Enterohemoragik Escherichia coli : Enteroagregatif Escherichia coli : Food And Drug Administration : Hidroklorida : High Efficiency Particulate Air : Hydroxypropylmethylcellulose : International Society of Pharmaceutical Engineering : Intravena : Laminar Air Flow Cabinet : Minimum Inhibitory Concentration : Most Probable Number : Nutrient Agar : Natrium Chloride : Potential of Hydrogen : Trypticase Soy Agar : Terlalu Banyak Untuk Dihitung : Ultraviolet : United States of Pharmacopoeia : World Health Organization xvi

17 DAFTAR PUSTAKA Agoes, Goeswin Pengembangan Sediaan Farmasi Steril. Seri Farmasi Industri 4, Bandung : ITB hal Akers, M.J., Parenteral Preparations. Remington S Pharmaceutical The Science and Practice in Pharmacy Edition. Pennsylvania : Lippincott Williams & Wilkins. Halaman : 815 Ansel, H.C., Pengantar Sediaan Farmasi (Penerjemah Farida Ibrahim). Edisi ke-4, Jakarta : Penerbit Universitas Indonesia, hal , , 423, 426, 433. Anonim United State Pharmacopoeia. Edisi ke-32, Rockville : USP Convention, Inc. Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Pedoman Cara Pembuatan Obat yang Baik. Jakarta : Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, pp: Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Pedoman Cara Pembuatan Obat yang Baik. Jilid ke-2, Jakarta : Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Buchanan, E.C. dan Shneider, P.J., Peracikan Sediaan Steril Edisi 2. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC, hal Cloutz, Microbial Limit and Bioburden Tests. Second Edition : CRC. Hal: Debaun, Barbara,RN,CLC., Transmission of Infections with Multi-dose Vials. Volume 3: Hal: 1 Departemen Kesehatan Republik Indonesia Farmakope Indonesia. Edisi: ke-3, Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia Departemen Kesehatan Republik Indonesia Farmakope Indonesia. Edisi: ke-4, Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia Departemen Kesehatan Republik Indonesia Dir.Jen. Pengawasan Obat dan Makanan. Departemen Kesehatan Republik Indonesia Pedoman Dasar Dispensing Sediaan Steril. Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia Departemen Kesehatan Republik Indonesia Farmakope Indonesia. Edisi ke-5, Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia xvii

18 Departemen Farmakologi dan Terapeutik FK-UI Farmakologi dan Terapi, edisi 5 (Cetak ulang dengan perbaikan, 2008). Jakarta : Departemen Farmakologi dan Terapeutik FK-UI, hal Dolan, S.A. at., AJIC Special Article APIC Position Paper: Safe Injections, Infution, and Vial Practices in Health Care. Washington DC, pp: Denyer, P.S., Rosamund, M.B., Guide to Microbiological Control in Pharmaceutical and Medical Devices. Second Editions. New York : CRC Press, pp: Goldman, E., Green, L.H., Practical Handbook of Microbiology. Edisi ke-2, Boca Raton : CRC Press Taylor & Francis Group Gunn s and Cooper, Dispensing for Pharmaceutical Student. Twelfth Edition. Pitman Medical, pp: Hadioetomo, R.S., Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta : PT Gramedia Pustaka Utama, hal Hugo, W.B., Russel, A.D., Pharmaceutical Microbiology. Edisi ke-6, Oxford : Blackwell Science Jawetz, E., Melnick J.L, Adelberg E.A., Review of Medical Microbiology, Lange Medical Publications, Los Altos-California, pp Katzung, Betram.G., Farmakologi Dasar dan Klinik, edisi VI. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC, hal: 271. Kumar, Surinder, Textbook of Microbiology. Edisi ke-1, New Delhi : Jaypee Brothers Medical Publishers. Lachman. L. et al., Teori dan Praktek Farmasi Industri. Edisi ke-3. UI- PRESS : Penerbit Universitas Indonesia, hal : Lukas, Stefanus, Formulasi Steril. Yogyakarta : Penerbit C.V Andi Publisher Lukas, Stefanus, Formulasi Steril. Yogyakarta : Penerbit C.V Andi Publisher Lynne, S. Garcia, Preparation of routine Media and Reagents Used in Antimicrobial Susceptibility Testing. Clinicil Microbiology Procedures Handbook. Edisi ke-3, Washington DC : ASM Press. Chapter 5.14 Nair B; Int J Toxicol 20, NLM (National Library of Medicine), concentration toxic of Benzyl alcohol, Bethesda (Maryland) 20894, USA (United State of America), suppl 3 :23-50 (2014). xviii

19 Notoatmodjo, S.Dr., Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta: Rineka Cipta, hal.156 Nuraeni, K, Y.Wibisono dan idrial Mikrobiologi Pangan dan Pengolahan. Politenik dan Pertanian Negeri Jember. Jember. Pratiwi, Sylvia T., Mikrobiologi Farmasi. Jakarta : Penerbit Erlangga, hal , Rowe, C. Raymond, dkk Handbook of Pharmaceutical Excipients. Edisi ke-6, London : Pharmaceutical Press Sweetman, S.C Martindale Thirty-Sixth Edition. London : Pharmaceutical Press. Voight, R Buku Ajar Teknologi Farmasi. Edisi kelima. Yogyakarta : Gadjah Mada University Press. xix